层析柱(色谱柱)填料介质的装载及洗脱操作规程
层析柱原理和使用方法
层析柱原理和使用方法
层析柱原理是一种常用的色谱技术，可以分离复杂混合物中的各个组分。
层析柱是一个长管状结构，内部填充有吸附剂或离子交换树脂等材料。
根据组分在填料中的亲和性差异，不同组分会以不同的速度通过填料，从而实现分离。
层析柱的使用方法如下：
1. 样品预处理：将混合物中的目标组分溶解或悬浮于合适的溶剂中，并进行必要的样品处理（如pH调整、过滤等）。
2. 建立实验条件：选择合适的填料材料、填料粒径和填充方法，并确定适当的溶剂体系和流动相条件。
3. 装填填料：将选择好的填料装入柱中。
填料的打包密度和均匀性对色谱分离效果有重要影响，因此要确保填料的均匀性和紧密度。
4. 平衡柱：用流动相预浸柱，使填料均匀吸附流动相，并达到平衡状态。
平衡时间根据填料种类和样品性质而定。
5. 注射样品：将样品以适当的体积注射到柱中，并控制注射速度和压力。
6. 运行分析：启动流动相，控制流动相速度和温度，使样品组分逐渐分离，并记录结果。
7. 数据分析：根据检测器的信号，对分离出的目标组分进行定性和定量分析。
层析柱的使用注意事项：
1. 填料选择：根据被分离组分的性质选择合适的填料。
2. 流动相选择：要确保流动相对目标组分具有足够的分离能力。
3. 注射量控制：注射量应根据柱容量和检测器灵敏度进行合理
控制。
4. 柱温控制：柱温对于某些温度敏感性样品的分离效果有重要影响，可以根据需要进行柱温控制。
5. 柱保养：正确使用和保养层析柱，避免杂质吸附和填料破碎等情况的发生。
6. 数据分析：及时记录和分析实验结果，确保实验数据的准确性和可靠性。
柱层析分离操作规程
柱层析分离操作规程柱层析分离（Column Chromatographic Separation）是一种基于差异吸附和分配的分离技术，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
柱层析分离操作规程的编制旨在确保操作过程的安全性、有效性和可重复性。
下面是柱层析分离操作规程的一般步骤：1. 实验准备：a. 确保实验室环境整洁、无杂物干扰。
检查仪器设备的运行状态，并进行必要的校准。
b. 准备所需试剂和溶剂，确保其纯度和质量符合要求。
准备充分的样品，并根据需要进行前处理。
c. 清洗柱子和配件，确保无残留样品。
2. 柱层析容器的装填：a. 选择合适的柱子和填料（如硅胶、活性炭、树脂等）。
b. 按照操作流程和填料的特性进行填料，确保填料均匀、紧密。
c. 配置层析缓冲液或溶剂，用于样品的吸附和洗脱。
3. 样品预处理：a. 根据需要，对样品进行预处理，如调整pH值、去除杂质等。
b. 将样品溶解于合适的溶剂中，确保样品溶解度适宜，并滤除悬浮物。
4. 柱层析操作：a. 将样品溶液小心地加入柱子顶部，避免溅出和溶剂浪费。
b. 控制流速和压力，使样品缓慢通过填料。
c. 观察样品的洗脱情况，根据需要适时收集洗脱液。
d. 若需要收集多个洗脱液组分，请采取适当的洗脱步骤和收集方法。
e. 监测洗脱液的浓度变化，根据需要调整洗脱缓冲液的浓度和pH值。
5. 柱层析后处理：a. 对收集的洗脱液进行检测分析，确定目标物质的纯度和得率。
b. 对柱层析装置进行清洗和维护，确保下次操作的质量和效果。
6. 结果分析和记录：a. 将实验结果记录在实验记录本中，包括所用试剂、溶剂、操作步骤、观察等数据。
b. 对实验结果进行分析，包括目标物质的纯度、得率、柱效等。
7. 安全注意事项：a. 柱层析操作涉及到有机溶剂和化学试剂，应穿戴个人防护用品，如手套、安全镜等。
b. 严格遵守实验室安全操作规范，确保实验过程安全无事故发生。
以上是柱层析分离操作规程的一般步骤，实际操作中，根据实验需求和柱层析装置的具体要求，可能会有所不同。
（完整word版）层析柱使用方法
（完整word版）层析柱使用方法层析柱使用方法层析柱使用方法柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。
这两项技术掌握与否，对于提高实验的效率至关重要。
常见的例子是：在柱层析时，由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀（没有填严实），使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花，导致分离效果不好。
更常见的例子是：层析柱虽然装得不错，但是由于淋洗剂选择不恰当，结果导致几十毫克产品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。
分离同样的东西，熟手可能只需要半个小时，而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。
由此可见，这两项技术掌握与否，对于提高工作效率，减轻工作量，减少有机溶剂的使用，从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。
柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。
而淋洗剂的选择则是通过TLC 确定。
这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
首先谈柱层析：1：装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱：是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂“走柱子”，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱：则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂“走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。
柱色谱法标准操作规程
柱色谱法标准操作规程柱色谱法是将固定相装在柱内，使样品随流动相沿一个方向移动而达到分离的方法。
（《中国药典》2010年版二部附录V C）附录收载的柱色谱法包括吸附柱色谱法和分配柱色谱法。
1 吸附柱色谱吸附柱色谱法是利用色谱柱内吸附剂对于样品中各组分的吸附能力的差异以达到分离目的的方法。
1.1 吸附剂常用的有：氧化铝、硅胶、聚酰胺、大孔吸附树脂等。
吸附剂的颗粒应尽可能大小均匀，除另有规定外，通常多采用直径为0.07～0.15mm的颗粒。
1.2 色谱柱色谱柱为内径均匀、下端缩口或具活塞的硬质玻璃管，下端通常用棉花或玻璃纤维塞住，以防止吸附剂流失。
1.3 吸附剂的填装1.3.1 干法将吸附剂均匀地一次加入至色谱柱中，振动管壁使其均匀下沉，打开色谱柱下端活塞，沿管壁缓缓加入洗脱剂；待柱内吸附剂全部湿润，且不再下沉为止，也可在色谱柱内加入适量的洗脱剂，旋开活塞，使洗脱剂缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。
装柱完毕，关闭下端活塞，操作过程中应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂。
1.3.2 湿法将吸附剂与洗脱剂混合均匀，采用搅拌除去其中气泡，打开下端活塞，缓缓倾入色谱柱中，然必要时，振动管壁使气泡排出，用洗脱剂将管壁的吸附剂洗下，使色谱柱面平整。
待平衡后，关闭下端活塞，操作过程中应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂。
1.4 供试品的加入1.4.1 干法加入法如供试品不易溶解于初始洗脱溶剂，可预先将供试品溶于易溶溶剂中，用少量吸附剂搅拌，采用加温或挥干方式除去溶剂，待干燥后，再将带有供试品的吸附剂加入至已装好的吸附剂上面，加入洗脱剂。
1.4.2 湿法加入法先将色谱柱中洗脱剂放至与吸附剂面相齐，关闭活塞；用少量初始洗脱溶剂使供试品溶解，沿色谱管壁缓缓加入供试品溶液，应注意勿使吸附剂翻起（亦可在吸附剂表面放入面积相当的滤纸），待供试品溶液完全转移至色谱管中后，打开下端活塞，使液面与柱面相齐，加入洗脱剂。
层析柱 操作规程
层析柱操作规程层析柱操作规程一、引言层析柱是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术，可以用于纯化混合物、分离样品中的化合物等。
为确保层析柱操作的准确性和安全性，制定本操作规程。
二、设备准备1. 确认所需使用的层析柱类型和规格。
2. 检查层析柱的外观是否完好，检查是否有裂纹或破损。
3. 选择合适的填料，并用洗净的溶剂将其均匀填充到层析柱中。
三、试样处理1. 准备待测样品，并将其溶解于适当的溶剂中。
2. 调整样品的pH值，以便于目标化合物的分离。
3. 使用过滤器过滤样品，以去除杂质。
四、操作步骤1. 将样品注入层析柱。
注意控制进样量，以避免柱内过载。
2. 使用一定流速的溶剂将样品通过层析柱。
可以使用手动或自动进样系统实现。
3. 观察溶剂前端和尾端的流动情况，确保它们在操作过程中维持稳定。
4. 根据需要，在柱体顶端加入适当的洗脱剂，以推动样品的分离。
5. 监测柱体顶端的洗脱溶液，以确定目标化合物的出现时间。
6. 收集洗脱溶液，直到目标化合物完全洗脱出来。
五、注意事项1. 在操作过程中，避免柱体受到剧烈震动或颠倒，以免损坏填料和柱体。
2. 在柱体运行时避免样品的进样保持过久，以防止填料变形或堵塞。
3. 柱体结束后，及时清洗柱体和填料，以便下一次使用。
4. 注意操作时的个人防护，避免接触或吸入有害溶液。
六、故障处理1. 如果柱体流速变慢或停止，请检查是否柱内有堵塞现象。
2. 如果柱体出现漏液或损坏，请及时更换或修复。
七、实验数据记录1. 记录样品的进样量和溶剂流速。
2. 监测洗脱溶液的UV/Vis或其他检测方法，记录目标化合物的出现时间和峰面积。
八、实验结束1. 按照操作规程清洗柱体和填料。
2. 关闭层析柱，保持其干燥和安全。
九、附录1. 填料的种类和性质。
2. 样品的名称和来源。
以上为层析柱操作规程，希望能对层析柱操作提供相应的参考和指导。
在操作过程中请务必严格按照规程操作，以确保实验的准确性和安全性。
层析柱干法装柱步骤
层析柱干法装柱步骤层析柱干法装柱，这事儿就像搭积木，得有个章法。
咱先得把层析柱给准备好。
这层析柱就好比是一个特殊的小房子，要装东西进去的。
得保证这个小房子干净又干燥，要是里面脏兮兮或者湿漉漉的，那后面装进去的东西可就“住”得不舒服了。
就像你自己的家，如果到处是灰尘和水，你能乐意吗？再来说说填料。
填料是这个柱子里的关键角色，就像是小房子里的家具。
把填料从容器里取出来的时候，动作要轻，可不能像个莽撞的大汉似的。
为啥呢？因为填料如果被弄得乱七八糟，它在柱子里就没法好好排列了。
这就好比你整理衣柜，要是把衣服都胡乱扔进去，找衣服的时候可就麻烦了。
现在开始往柱子里装填料。
把柱子一端封闭好，就像给小房子关上门，只留一个入口。
然后慢慢地把填料倒进去，这个过程要均匀，就像往杯子里倒水，要是一股脑儿全倒进去，水就会溅得到处都是。
填料倒的时候，得时不时晃一晃柱子，让填料在里面铺得更均匀。
这就像你铺床的时候，要把被子铺平展，要是有褶皱，睡起来就不得劲儿。
可不能心急，要是填料倒得太快或者不均匀，那柱子里就会有缝隙或者空洞，这可不行，就像房子的墙有了漏洞，那还怎么住人呢？填料倒得差不多的时候，要轻轻敲打柱子的管壁。
这就像是在给填料做按摩，让它们在柱子里更紧实。
不过敲打的力度得掌握好，不能太用力，不然就把填料给敲坏了。
这就好比你敲鸡蛋，太用力鸡蛋就破了，填料要是破了，那整个柱子的功能可就受影响了。
等填料装得差不多了，再把柱子顶端多余的填料弄平。
这就像是给房子的屋顶做最后的修整，要弄得平平整整的。
要是不平，那后面使用的时候就会有问题。
装完柱之后，可别忘了检查一下。
看看柱子里的填料是不是均匀，有没有什么地方看起来不太对劲。
这就像是做完一件手工品，得检查检查有没有瑕疵。
要是发现有问题，就得重新调整，总不能让一个有毛病的柱子就这么开始工作吧，那肯定会出乱子的。
干这个层析柱干法装柱啊，就得像照顾自己的小宝贝一样细心。
每个步骤都不能马虎，每个细节都很重要。
(完整版)柱层析的操作步骤和注意事项
柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝聚），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。
压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。
非凡是在轻易分解的样品的分离中适用。
压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。
柱子长了，相应的塔板数就高。
柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。
试想假如柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。
而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较轻易得到完全分离了。
当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。
假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm 的柱子）；假如相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm 的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
柱层析操作的基本流程
1.样品选择与预处理。
根据分离目的选择合适的样品，并进行必要
的预处理。
2.装柱。
选择合适的层析柱，如干法或湿法装柱。
在装柱前，柱子
应预先用适当的溶剂或缓冲液处理，以除去可能吸附的杂质，并确保内部没有气泡。
装柱时，应确保柱子均匀且无分层现象。
3.平衡。
用平衡液（通常是缓冲液）填充柱子，以确保柱子内部充
分平衡。
平衡液的体积一般为柱床体积的3到5倍，以保持平衡后柱床体积的稳定及基质充分平衡。
4.加样。
缓慢小心地将样品溶液加到固定相表面，尽量避免冲击基
质，以保持基质表面平坦。
加样量应尽量少，以减少对基质的干扰。
5.洗脱。
使用适当的洗脱液进行洗脱，以将样品组分从固定相上洗
脱下来。
洗脱液的流速和体积应根据分离目的和样品性质进行调整。
6.收集与鉴定。
收集不同馏分的样品，并进行进一步的分析和鉴定。
纯化工艺层析柱(XK)装填标准操作规程
II编制I 批准1.目的1.1.规范层析柱装填的标准操作流程。
2.范围2. 1. 适用于XXXXXXXX有限公司的XK16、XK26、XK50层析柱。
3.职责3.1.分管主任、操作人员对本规程实施负责，QA质控员负责监督检查。
4.设备与耗材5.5. 1. 实验准备：5. 1. 1.估算装柱的柱体积，然后乘以压缩因子1. 1计算需要取的沉降后的填料体积，取出填料装入烧杯中，将填料中的乙醇溶液用纯化水||编制I 批准/注射用水等体积置换三次。
5.1.2.将XK16/XK26/XK50层析柱的各部件淸洗干净，组装好后连接到层析系统，将柱前报警压力设置为0.45MPa，使用0. 4MPa的恒压模式进行保压测试，30min内压降小于0.05MPa、未出现明显漏液方可投入使用。
5.1.3.配制好对应体积的氯化钠、乙醇溶液。
5. 2. 实验步骤：5. 2. 1.保压测试结束后，确认层析柱下柱头膜内无气泡，若有气泡则取岀柱头，取下柱头膜，使用upFlou-lml/min的方式慢慢将液体填满柱头，然后将柱头膜安上，并再次确认该柱头有无气泡。
5. 2. 2.将装柱器安装到层析柱上，调好层析柱水平，确保层析柱竖直。
5. 2. 3.计算层析柱和装柱器的总体积，按该体积向填料中加入纯化水/ 注射用水（可以稍少一点，用润洗装填料烧杯的纯化水/注射用水补上），使填料混旋液的体积等于层析柱和装柱器的总体积。
5. 2. 4.将填料混旋液充分混合均匀，并小心倒入到层析柱中，润洗烧杯一并倒入层析柱中（注意液体不能溢出）。
5. 2. 5.轻轻将装柱器的盖子旋上，为保证装柱器内的气泡残留尽可能少, 在旋紧盖子前可以DownFlou-lml/min的方式，使液体充分填满装柱器，然后暂停系统，旋紧盖子。
5. 2.6.以DownFlow的方式进行恒流操作，各填料恒流的线性速度见下表。
当填料高度在lOniin内不发生变化时，说明恒流结束，准备恒压操作。
层析柱装柱流程范文
层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。
它在许多领域，包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。
层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程，决定着柱的分离性能和吸附能力。
下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。
填料的选择取决于分离目标和样品特性。
常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。
填料应具有一定的吸附能力，能够与目标物发生相互作用。
2.准备柱子将柱子清洗干净，并根据填料的尺寸调整柱子的高度。
柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱，具体选择取决于实验要求。
3.浸泡填料将填料放入容器中，加入合适的溶剂。
浸泡填料有助于去除可能存在的杂质，提高填料表面的活性。
可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间，一般需要几小时到几天。
4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。
烘干填料有助于去除残留的溶剂，使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。
5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。
填料的层高度应根据实验要求调整，一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中，以确保有效的分离效果。
6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子，将填料压缩和固定在柱子中。
压实的目的是增加填料的堆积密度，减少填料颗粒之间的间隙，提高分离效果。
压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。
7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗，以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。
洗涤的选择取决于填料和实验要求。
洗涤过程可以重复几次，直到柱子完全清洁。
8.储存柱子装填完成后，柱子可以进行包装或储存。
柱子应存放在阴凉干燥的地方，以保持填料的性能和活性。
层析操作-周炳
柱层析操作规程一．装柱将层析柱洗净、干燥，底部塞一小块脱脂棉，柱子大小根据样品量而定，装柱长度一般为柱高1/2-2/3，常用的柱子装填15cm即可。
硅胶粉用层析硅胶200-300目，较粗的分离可以用100-200目，较难分离的可以用300-400目。
硅胶粉的用量根据样品量而定，一般物质用30-70倍质量硅胶粉，较难分离物质用100倍质量硅胶粉。
1.干装法：将硅胶通过小漏斗倒入柱内，应不间断地形成一细流慢慢加入柱内，同时用橡皮槌轻轻敲打色谱柱，使装填均匀，有条件可以用油泵抽。
柱装填好后，打开下端活塞，从上端倒入洗脱剂冲柱，以排尽柱内空气，并保留一定液面。
2.湿装法：将硅胶加入适量最初使用的洗脱剂，超声搅拌，调成混悬液，打开柱子下端活塞，徐徐将混悬液倒入柱子，使洗脱剂慢慢流出，带动硅胶缓慢沉于柱的下端。
待加完吸附剂后，继续使洗脱剂流出，直到硅胶的沉降不再变动。
注意整个操作过程不要将气泡压入硅胶中，而且要始终保持吸附剂上端有溶剂，切勿流干。
将多余洗脱剂放出至上面保持有1cm高液面为止，关上活塞。
二．上样多采用干法上样（拌样法）：将样品用尽量少的易挥发溶剂溶解，加入样品约5倍量的硅胶（100-200目）拌匀，置空气中挥尽溶剂，或在旋转蒸发器里于适温下蒸干，研匀后均匀置于装好硅胶的柱顶，尽量使样品平整，并在柱顶放一块圆形滤纸，上端保留少量液体。
对于在溶剂中溶解度很大的样品可以采用湿法上样，即将样品溶液（尽量少）加入，直接吸附在硅胶粉上。
三．洗脱1.洗脱剂的选择，常用的有机溶剂极性：石油醚<环己烷<四氯化碳<苯<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水<乙酸。
洗脱剂多一般由一元或二元溶剂按一定的比例配比组成，通过不同的配比调节溶剂系统的极性，较复杂成分常用梯度洗脱。
应用最广的是二元体系，选择的溶剂通常是一种样品溶解度大的和一种样品溶解度小的，同等条件下尽量选择毒性较小的。
层析柱使用说明书
DN400
使
用
说
明
书
制作单位：***************有限公司
生产基地：****************路7号
公司电话：**************
公司传真：************
邮编：1000000
编制日期：二○一一年十二月
目录
一产品介绍……………………………………………….2
二产品特点……………………………………………….2
再生
0.5-3BV/h
3-4BV
酸碱再生，用乙醇、丙酮等溶剂淋洗
水洗
2-3BV/h
3-4BV
用大量水淋洗干净
注：以上参数供参考
五操作注意事项：
1．运输及贮存过程中应保持5-40℃环境中，避免过热过冷。注意不使树脂变干，以免孔结构发生变化。
2．树脂装填在吸附柱中使用，装填前应对设备管道进行清洗，以防有害物对树脂产生污染（如铁污染）。
二产品特点:
①合理的高径比，精密的进出口流体分布装置，保证层析柱装填效果和填料再生效果，为高效分离提供了保障。
②产品采用不锈钢材料，并进行内外抛光，耐腐蚀、使用寿命长、硬度高、运输安全，质量有保障。
③本设备确保无污染、效率高、操作方便等。
三技术参数
容积
450L
材质
SUS316L
设计压力
-0.1
设计温度
步骤流速流量备注填充装柱逆流洗柱水洗除去小粒子及破碎树脂前处理15bvh3bv用乙醇等进行预处理吸附14bvh根据吸附量应在吸附容量以下ph58温度低于50水洗23bvh051bv将吸附在树脂上的杂质洗出解吸053bvh23bv乙醇丙酮等的含水溶液溶出有效成分温度高有利于解吸再生053bvh34bv酸碱再生用乙醇丙酮等溶剂淋洗水洗23bvh34bv用大量水淋洗干净注
色谱柱的使用说明
色谱柱的使用说明:（1）色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特殊说明, 均为评价报告所示的流动相。
在使用前, 一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中, 如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下, 否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出, 堵塞色谱柱。
（2）流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯, 配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好, 尤其是含盐的流动相。
另外, 装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0, BDS C18适合于碱性化合物, PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时, 每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗, 并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品:样品也要尽可能清洁, 可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理, 要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时, 所有的溶剂和样品应严格脱水。
2.色谱柱的保存（1）反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相, 实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟, 洗掉色谱柱中的盐, 再用甲醇冲洗30分钟。
注意: 不能用纯水冲洗柱子, 应该在水中加入10%的甲醇, 防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存, 必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中, 正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中, 离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中, 并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3.色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品, 随着使用时间或进样次数的增加, 会出现色谱峰高降低, 峰宽加大或出现肩峰的现象, 一般来说可能是柱效下降。
色谱柱 操作规程
色谱柱操作规程色谱柱操作规程一、前言色谱技术是一种常用的物质分离和分析方法，它广泛应用于化学、生物、药物等各个领域中。
而色谱柱是色谱仪中的核心部件，它的正确操作和维护对于保证色谱仪的正常工作和分离效果具有重要意义。
本文将详细介绍色谱柱的操作规程，包括色谱柱装载、保养与维护、柱床效果评价等方面的内容。
二、色谱柱装载1. 准备工作a. 核对色谱柱和柱头的型号和规格是否与实验要求相符。
b. 检查色谱柱是否损坏，如有损坏应及时更换。
c. 检查柱头和柱床是否干净，如有污染应进行清洗。
2. 装载色谱柱a. 将色谱柱轴向对准色谱仪的柱座，适当加压使柱床与柱座牢固连接。
b. 使用合适的扳手或扳手套装紧柱母，使之完全密封，避免泄漏。
c. 连接色谱柱的进口和出口管路，确保连接紧密，不漏气。
三、色谱柱保养与维护1. 柱床校正a. 开始柱床校正前，应先将柱温箱升温至实验温度。
b. 使用校正溶液冲洗色谱柱，根据溶液反应曲线和标定方法进行柱床校正。
c. 记录校正结果，并进行后续分析前的柱床效果评价。
2. 清洗色谱柱a. 每次使用完色谱柱后，应进行彻底的清洗，避免发生样品交叉污染。
b. 使用合适的清洗液进行柱头和柱床的清洗，如甲醇、氯仿或醋酸乙酯等。
c. 经过清洗后，使用溶剂进行流程调整，以保证色谱柱在下一次使用时能够正常工作。
3. 柱床效果评价a. 柱床效果评价可通过柱效参数（如效应归一化高度、平衡时间等）进行衡量。
b. 柱床效果较差时，可考虑更换或重生柱床。
c. 定期对色谱柱进行柱床效果评价，发现问题及时解决，以确保色谱仪的正常运行。
四、色谱柱的储存1. 柱床保护a. 暂时不使用的色谱柱，应将柱床用干燥剂包裹起来，防止湿气对柱床的损害。
b. 长期不使用的色谱柱，应进行柱床保护和封存，可使用柱保护剂进行覆盖。
2. 色谱柱存放环境a. 色谱柱应存放在干燥、通风良好的环境中，避免受潮和高温。
b. 避免色谱柱受到冷热环境的影响，避免柱床受到热胀冷缩的损害。
全网最完整最权威的柱层析操作详解（含操作视频）
全⽹最完整最权威的柱层析操作详解（含操作视频）柱层析技术也称柱⾊谱技术。
⼀根柱⼦⾥先填充不溶性基质形成固定相，将混合样品加到柱⼦上后⽤特别的溶剂洗脱，溶剂组成流动相。
在样品从柱⼦上洗脱下来的过程中，根据混合物中各组分在固定向和流动相中的分配系数不同经过多次反复分配，将不同组分逐⼀分离。
根据填充基质和样品分配交换原理不同，离⼦交换层析，凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离混合物的经典层析技术。
柱层析分离净化的实验技巧和⽅法1、柱层析操作⽅法的选择⽬前 ,柱⾊谱分离的操作⽅式 ,主要包括常压分离、减压分离和加压分离 3种模式。
常压分离是最简单的分离模式⽅便、简单 ,但是洗脱时间长。
减压分离尽管能节省填料的使⽤量 ,但是由于⼤量的空⽓通过填料会使溶剂挥发 ,并且有时在柱⼦外⾯会有⽔汽凝结 ,以及有些易分解的化合物也难以得到 ,⽽且还必须同时使⽤⽔泵或真空泵抽⽓。
加压分离可以加快淋洗剂的流动速度 ,缩短样品的洗脱时间 ,是⼀种⽐较好的⽅法 ,与常压柱类似 ,只不过外加压⼒使淋洗液更快洗脱。
压⼒的提供可以是压缩空⽓ ,双连球或者⼩⽓泵等。
2、柱⼦规格的选择市场上有各种规格的柱层析分离柱。
柱⼦长了 ,相应的塔板数就⾼ ,分离就好。
⽬前市场上的柱⼦ ,其径⾼⽐⼀般在1: 5～10范围 ,在实际使⽤时 ,填料量⼀般是样品量的 30～40倍 ,具体的选择要根据样品的性质和含量进⾏具体分析。
如果所需组分和杂质的分离度较⼤ ,就可以减少填料量,使⽤内径相对较⼩的柱⼦ (如 2 cm × 20 cm的柱⼦ ) ;如果 Rf相差不到 0.1,就要加⼤柱⼦ ,增加填料量 ,⽐如⽤ 3 cm内径的柱⼦。
3、装柱柱层析⾊谱柱的填装主要有湿法和⼲法两种 ,湿法省事 ,⼀般⽤淋洗剂溶解样品 ,也可以⽤⼆氯甲烷、⼄酸⼄酯等 ,但溶剂越少越好 ,不然溶剂就成了淋洗剂了。
柱⼦底端的活塞⼀定不要涂润滑剂 ,否则会被淋洗剂带到淋洗液中 ,可以采⽤聚四氟⼄烯材料的阀门。
色谱柱填装操作规程
色谱柱填装操作规程色谱柱填装操作规程一、填装准备工作1. 准备所需填充料和色谱柱，确保填充料的纯度和质量。
2. 清洗色谱柱，确保表面光滑干净，无杂质。
3. 准备填充料溶液，确保溶解彻底，无明显悬浮物或沉淀。
4. 检查仪器设备是否完好，如压力计、进样器、检测器等。
二、填充操作步骤1. 将已清洗的色谱柱安装在色谱仪上，并将柱头封口。
2. 使用适当的装置将填充料溶液缓慢注入色谱柱，注入速度应适中，避免过快或过慢。
3. 注入填充料后，密封柱头并将其与仪器连接，确保连接紧密，并排除气泡。
4. 开启色谱仪，进行等温填充，温度应根据填充料的要求进行调整。
填充过程中，可以根据需要调整压力和流速调整。
5. 填充完毕后，关闭色谱仪，断开连接，将色谱柱取下。
三、填充后处理1. 对已填充的色谱柱进行压力测试和漏液测试，确保柱头密封良好，无渗漏。
2. 如果发现柱头有渗漏现象，应及时更换柱头或重新填充。
3. 将填充后的色谱柱存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和高温。
4. 定期检查填充的色谱柱，确保其性能稳定，如有发现异常应及时处理。
四、注意事项1. 在填充过程中，应避免杂质进入色谱柱，保持填充料的纯净度。
2. 填充时应避免过分挤压填充料，以免影响填充效果。
3. 填充料选择应根据分析对象和分析条件来确定，确保选择的填充料适用于所需分离。
4. 在填充过程中，应注意安全操作，避免对身体和仪器设备造成伤害。
五、填充效果验证1. 使用适当的样品进行填充效果验证，确保填充后的色谱柱能够达到预期的分离效果。
2. 在填充效果验证中，应注意样品的适用范围、浓度范围和检测方法等因素。
六、填充记录与报告1. 按操作规程进行详细记录，包括填充料的批号、填充参数、填充效果等。
2. 填充记录和填充效果报告应保存至相关部门或质量管理体系中。
通过以上填充操作规程的严格执行，可以确保色谱柱填装操作的安全和可靠，提高填充效果和分析结果的准确性，同时也能有效延长色谱柱的使用寿命。
层析柱使用标准操作方法
层析柱使用标准操作方法层析柱是一种分离和分析化合物的常用仪器，其操作方法一般包括以下几个步骤：1. 样品预处理：首先，将待测样品进行预处理，如样品溶解、稀释或提取等。
确保样品的浓度适合进行层析分离。
2. 选择合适的层析柱：根据待测物的性质和分离需求，选择合适的层析柱。
不同的层析柱具有不同的吸附材料和分离机制，因此，选择合适的层析柱对于成功的层析分离非常重要。
3. 装填样品：将预处理好的样品注入层析柱，一般通过注射器或其他装置进行。
注意，样品注入量应根据待测物浓度、柱子尺寸和分离需求合理确定。
4. 进行层析分离：根据选择的层析柱类型和设备的操作要求，进行层析分离。
可以通过重力层析、气相层析、高效层析等方式进行。
需要注意的是，层析分离的过程中需保证流速适中，以避免样品在柱子中滞留太久或过快通过，影响分离效果。
5. 收集分离物：将分离得到的组分收集起来，一般通过分数收集器或其他收集装置进行。
根据实验需求，可以选择不同的收集方式，如按时间间隔收集、按流量收集等。
6. 进行分析：收集到的分离物可以进行后续的分析和测定，如质谱分析、紫外可见光谱等。
根据需求，可以选择适宜的分析方法进行进一步的表征和确定。
7. 清洗层析柱：在层析分离结束后，需要仔细清洗层析柱以去除残留的样品和其他污染物。
不同的层析柱有不同的清洗方法，一般可以使用适当的洗涤剂和溶剂进行清洗。
需要注意的是，层析柱的操作方法可能因不同的仪器和实验要求而有所差异，因此，在使用层析柱前，应详细阅读仪器说明书，并按照说明书中的操作要求进行操作。
此外，操作过程中应注意安全，佩戴个人防护装备，避免化学品直接接触皮肤和眼睛。
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程介绍层析柱是一种常用于分离和纯化化合物的技术，其基本原理是利用化合物在不同介质中的亲和力差异而实现分离。
层析柱分为填充柱和装柱两种，本文将主要介绍装柱流程。
装柱前准备工作确定分离目标在装柱前，需要明确分离目标，以选择合适的载体和介质，如离子交换色谱柱、逆相色谱柱、凝胶过滤柱等。
准备层析柱和配件根据选择的层析柱类型，选购适当的层析柱、压力计、样品瓶、钝化剂等必要配件。
准备介质根据选择的柱类型和实验需求，选择合适的介质。
在使用新柱前，需要进行开柱处理，以去除杂质和预处理柱体。
装柱流程1. 柱体预处理将新柱体安装在装置中，流通适当的缓冲溶液经过柱体，洗涤不溶于溶液中的杂质和微生物。
2. 样品准备用适当的缓冲液将样品准备妥当，剔除其中的微粒和杂质。
3. 柱体装填将预处理后的柱体安装在柱体装填器上，逐层添加介质和样品，并用特殊方法将介质压实，尽可能减小柱体和样品的空隙。
4. 柱体检测装填完成后，用压力计检测柱体的漏气和密封情况，确保柱子健康并正常工作。
5. 样品装柱用希望分离的样品样品注入装好介质的分离柱，并应用压力调节器，并通过仪器程序使样品流过柱体。
在这个过程中，样品将在介质上进行分离。
6. 分离结果分析在对样品通过柱体后，将流出的溶液进行采集和处理，并用相应的分析方法对化合物进行测定。
后续处理1. 柱子的清理在完成实验后，需要将层析柱进行清洗以去除残留的样品和介质，防止柱体污染和结晶，降低柱子的使用寿命。
2. 柱子的储藏对于长期不使用的柱体，需要将柱子放置在特定的保护剂中，以保持干燥和清洁状态，防止介质变质或者柱子老化。
装柱流程是层析柱实验的重要步骤之一，其良好的实施关系到实验结果。
在实验前，需要仔细做好准备工作，掌握每一个环节的操作细节，并进行严格的柱子检测和后续处理工作。
色谱柱填料的装填
目录一、层析柱的装填1. 装填前的准备工作a. 装填的一般考虑b. 小颗粒的去除c. 缓冲液平衡d. 匀浆准备2. 装填步骤a. 恒流速/半恒压装填法b. 可供选择的装填方法3. 平衡与柱效评价二、层析柱的操作1. 柱层析a. 分子尺寸排阻层析（SEC）b. 离子交换层析（IEC）c. 疏水反应层析（HIC）d. 亲和层析（AFC）2. 填料的清洗. 填料的保存. 灭菌/热原的去除/防腐剂的清除/柱筛板11112234567778层析工艺树脂填料TOYOPEARL和TSK-GEL 5PW的装填指南8 891010关于TOYOPEARL和TSK-GEL 5PW的简介TOYOPEARL和TSK-GEL 5PW大孔树脂型填料应用于生物分子层析工艺，非常适合实验室和工业级大规模生产中球状蛋白、多肽、核酸以及其他生化衍生物的分离纯化。
这种树脂型填料为改性的聚甲基丙烯酸酯，由于醚及羟基的存在使其具有亲水性的表面，并且具有了更好的耐压性能、流动特性及pH稳定性。
一、层析柱的装填图1. 装填所需要的装置1. 装填前的准备工作a. TOYOPEARL和TSK-GEL 5PW装填的一般考虑TOYOPEARL的装填压力最好为0.5~3bar （7~45psi）；TSK-GEL 5PW的装填压力最好为3~10bar（45~140psi）。
尽管TOYOPEARL和TSK-GEL 5PW填料也可以通过重力沉降法进行装填，但这并不值得提倡。
TOYOPEARL的装填压力不应过高（<5bar），TSK-GEL 5PW的装填压力不应超过20 bar。
成功装填TOYOPEARL和TSK-GEL 5PW所需要的设备有（参照图1）：泵（HPLC或蠕动泵）、压力表、水平仪、玻璃/聚丙烯酸/PEEK或不锈钢层析柱、储槽（可选）等。
b. 小颗粒的去除（我们建议最好去除小颗粒）在匀浆后的胶体中所存在的小颗粒会阻塞筛板或烧结板，最终会导致整个柱子的压降增大。
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层析柱（色谱柱）填料介质的装载及洗脱操作规程
工业制备层析柱（色谱柱）的填料装载充填和洗脱操作的规范直接影响色谱分离纯化工艺过程的效率，迈思通公司经过多年的实践经验和该行业专家的指导，编写了关于《层析柱（色谱柱）吸附介质的充填及洗脱规程》的方法，供广大用户和科研者参考。
一、柱头安装是否合适及是否严密的检查
1、检查下柱头是否按图纸要求安装?（要求按图纸要求安装）
2、检查下柱头内，是否安装了防止吸附剂（例如硅胶）漏出的滤布（或滤网）。
3、所用滤布（滤网）的材质要求能耐所用溶剂的腐蚀，而且孔径很小，一般要求使用500目
以上孔径大小的滤布（网）。
4、下柱头安好，紧固后，从柱上端（开口）加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂（例如已
烷、石油醚、甲苯等），使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米，仔细观察下柱头是否漏溶剂。
如果漏，则必须坚固（或重装），直至不漏为止。
5、检查确实不漏后，放出柱内溶剂，准备装吸附剂（例如硅胶等）。
二、充填吸附剂
以充填（或称装填）硅胶为例，作如下说明：
1、干法装柱
①、取吸附剂（例如硅胶）记下硅胶的量，（等装完柱后，检查剩余硅胶量，就可以知道装入
柱中的硅胶量了）。
②、工作人员戴上口罩，准备好木槌，有人从柱上端倒入一定时的硅胶，柱下边有人用木槌敲
击柱外壁，振实硅胶；一边加硅胶，一边敲击柱；最好硅胶加到什么高度，就在此高度敲击；
且向上下移动敲击。
如此，直至硅胶装满时为止；再上下移动敲击一阵子；至硅胶上平面不再下沉，而且硅胶面很实时为止。
③、如果体系中没有设预柱，层析柱中上端硅胶不把装满，留出空间待“上样”用。
④、如果有预柱的体系，层析柱应装满硅胶。
⑤、干法装柱，粉尘大，且敲击声大，柱外表易变成不光亮，但不耗溶剂。
2、湿法装柱
①、同上，准备一定时的硅胶，且记录下硅胶量。
②、准备一只30-50升的耐溶剂腐蚀的塑料桶，例入极性小的且配洗脱剂时需用的溶剂（例如
已烷，石油醚、甲苯等），再例入硅胶，搅拌混合。
再将此浆液倒入（或用勺舀）层析柱中。
这样，一次次倒入后，柱内浆液面上升到柱上部；再将柱下端出液管通过一缓冲罐与真空系统接通（事先接好）。
开关真空，使柱上端浆液慢慢下降，再不断补浆液（最好使硅胶面总是在液面下，这样柱中几乎没有空气），直至装满。
再不断开真空抽液，不断从柱上端加入溶剂，直至硅胶面基本不降为止。
③、湿法装柱，有一部分溶剂损耗，且溶剂气味大，环境不佳；但粉尘少，且不伤柱的外表面。
④、干法装的硅胶量，有可能比湿法装得稍多一点
三、上样
1、干法上样
①、制样：将物料用极性较大的且洗脱剂中需用的溶剂溶解成浆状（或溶液状），再加入硅藻土（或硅胶）充分混合，晾干；再粉碎成粉未状，混合均匀。
②、将制好的样品，置于预柱中或层析柱上端硅胶床层的上面，铺平；再放上滤布（网），筛
板，再按图装好柱上端封头。
2、湿法上样
①、制样：将物料用极性比硅胶小的溶剂（例如：二氯甲烷、乙酸乙醇-乙烷混合液、乙烷、
甲苯等）溶解或制成浆状，直接倒在层析柱硅胶床层的上面，铺平即可（如果上样液多，也可以用泵（或氮气）慢慢打（压）入柱中）。
②、同上，放上滤布（网）筛板，装好上封头。
四、洗脱
1、平衡柱子
即用洗脱剂中极性小的溶剂（例如乙烷、二氯甲烷、甲苯等）用计量泵（或氮气）打入（压入）层析柱上端。
此溶剂因极性小于硅胶，不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来，而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。
另外，此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。
这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。
可使硅胶被溶剂浸润，且排出空气，有利于续后的洗脱分离过程。
当平衡用的溶剂从柱下流出后，可以停止此过程，改用洗脱剂洗脱分离过程；平衡过程也可以再理行一段时间，将柱子中的空气多排出一些，但溶剂耗量也会增加。
2、洗脱
根据小试结果，用一定组成的洗脱剂洗脱柱子中硅胶上吸附着的各种物质，且达到分离。
洗脱
时溶剂的流速选用1-2cm/min较合适。
3、洗柱
当有用物质流出柱子后，再改用极性大的溶剂将硅胶床层内的极性大的杂质洗下，排出柱外。
4、再“平衡”柱子
用极性小的溶剂，将柱中前过程中留下的极性大的溶剂顶出柱外，接着可进行下批物料的上样过程。
资料来源：迈思通(北京)管路系统有限公司。