液相色谱基础

气泡
气泡对测定的影响：
1）柱流量不准
2）检测器基线波动
脱气注意点：
1）每天脱气(无在线脱气器时）
2）混合溶剂脱气时间不能过长
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输液泵
送液方式：
恒流控制 恒压控制
VP系列输液泵：LC-10ADvp泵和LC10ATvp泵
D泵：并联微体积往复式泵 T泵：串联式往复泵
岛津VP系列输液泵
目的
单元
流速范围
特性和应用
分析
LC-10ADVP LC-10ATVP
0.001-9.999 超低脉动，适于 半微量LC 和 LC-MS
0.001-9.999 非凡的耐用性， 适于常量分析
*所有单元都既可做高压梯度又可做低压梯度
进样器
自动进样器 手动进样器 原理：（六通阀） 注入方式：
1）全量注入 2）部分注入
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反相液相色谱 流动相极性大于固定相极性
样品的保留顺序是非极性组分保留值大，极性 组分先流出。 正相液相色谱
流动相极性小于固定相极性
溶剂前处理
过滤：0.45um或更小孔径滤膜
目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其 是使用无机盐配制的缓冲液。
溶剂前处理
脱气
目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的
检测器
示差折光检测器
原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样 各组分浓度。
优点：通用型检测器 缺点：1）对温度变化敏感
2）不能用于梯度检测
检测器
电导检测器
原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的 电导变化来测定电离物质含量。
*离子色谱法中广泛使用的检测器 *对温度变化敏感
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数据处理
岛津液相色谱数据处理单元：
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检测器
LC常用检测器：
紫外检测器（包括二极管阵列检测器） 示差折光检测器 电导检测器
检测器
紫外检测器
原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：比耳定律，A＝KCL 优点：1）对温度和流速不敏感
2）可用于梯度洗提 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质
检测器
岛津VP系列紫外检测器功能：
一、色谱起源
色素 玻璃柱
石油醚 碳酸钙颗粒
二、定义 色谱法：利用组分在两相间分配系数不同 而进行分离的技术 移动相：携带样品流过整个系统的流体 固定相：静止不动的一相，色谱柱固定液
液相色谱流程图
进样器 溶剂 输液泵 柱温箱 检测器 数据处理
流动相
流动相选择注意事项： 纯度：采用“ HPLC ”级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶 剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配
LC-Solution色谱工作站 CLASS－VP色谱工作站 C－R6A色谱数据处理机 C－R7A色谱数据处理机 C－R8A色谱数据处理机
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手动进样器的原理图
No Image
装填状态
样品注入
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柱温箱
柱温控制的优点：
分析结果重现性好 提高柱效 降低柱压 保证检测稳定性
色谱柱
ODS柱的使用注意点：
1）柱压低于150kgf/cm2 2）柱温在40℃左右，最高使用温度为60℃ 3）缓冲液pH使用范围为2～7
*硅胶在pH为3～4时稳定性最好 *碱浓度越低，流动相含水量越低，硅胶越稳定。
1）设定时间程序（切换检测波长等） 2）双波长检测 3）比例色谱，初步判断峰的纯度 4）停泵扫描，确定组分最大吸收波长
检测器
二极管阵列检测器（SPD－M10AVP）
二十一世纪标准紫外检测器
色谱定性依据：
保留时间 常规紫外检测器
峰纯度
二极管阵列检测器
检测器
二极管阵列检测器的优点：
1）采集三维谱图 2）峰纯度检验 3）光谱库检索 4）可以发现单波长检测时未测到的峰