实验四 病原性球菌
实验四 化脓性球菌和肠道杆菌的病原学检测(1)
肺炎球菌
pneumococcus
G+双球菌，致病株有荚膜
脑膜炎球菌
meningococcus
G－双球菌
淋球菌
gonococcus
G－双球菌
巧克力平皿，5-10%CO2， 37℃24-48h，菌落小， 呈灰白色。
血浆凝固酶试验
玻片法 ① 取洁净载玻片一张，两端各加生理盐水一滴。 ② 灭菌接种环自血琼脂平板上挑取两种葡萄球 菌培养物少许，分别混悬于玻片上的生理盐水 成均匀的细菌悬液，观察有无自凝现象。 ③ 于每滴细菌悬液内，各加入兔血浆1d，混匀。 ④ 数秒后观察结果，若细菌呈颗粒状凝集时为 (+)，若无凝集时为(-)。
金葡菌 表葡菌 金黄色 ＋ ＋ ＋ 强 白色 － － － 弱或无
腐生葡萄球菌 白色或柠檬色 － － － 无
鉴别肺炎球菌与甲链
菊糖分解 胆汁溶菌实验
本次实验课结束
交作业，值日同学留下 下周再见！
G+球菌，呈葡萄串状排列
葡萄球菌
金黄色葡萄 球菌 血平 皿培 养基 白色葡萄球 菌 柠檬色葡萄 球菌
staphylococcus
金黄色色素 白色色素 柠檬色色素 致病力强 条件致病菌 条件致病菌
链球菌
streptococus
G+球菌，呈链状排列
链球菌
streptococus
血平 甲型溶血链球菌（草绿色溶血环） 皿培 乙型溶血链球菌 (无色溶血环) 养基 丙型溶血链球菌 (无溶血环)
微生物学试验
实验四 化脓性球菌和 肠道杆菌的病原学检测（1）
实验目的要求
1.掌握常见化脓性球菌的形态染色
特点 2.熟悉常见化脓性球菌的培养特征 3.熟悉血浆凝固酶试验、触酶试验 及抗“O”试验的原理、方法、结果 及意义 4.了解常见化脓性球菌的致病特点
医学微生物学实验报告
医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
主要的病原性细菌
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3、抗原
链球菌分为20个血清群。 与致病性有关的Ｍ蛋白（细胞壁的蛋白质抗原）
主要见于Ａ群链球菌。根据M蛋白不同，将A群链球 菌分为６０多个血清型。
M蛋白与致病性及免疫原性有关
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4、分类
链球菌在血琼脂平板上的溶血现象在鉴定链球菌的致 病性方面有一定的意义。
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产溶血素，菌落周围呈明显的β溶血。
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5、毒素和酶
金色葡萄球菌可产生多种毒素和酶，故致病性强。常引起化 脓性疾病和毒素性疾病。
（1 ）毒素
A．溶血素：具有溶血作用，是金黄色葡萄球菌的重要致病物质。 B．杀白细胞素：损伤中性粒细胞和巨噬细胞。 C．肠毒素：引起人胃肠炎和食物中毒。肠毒素耐热，100℃ 30min仍有毒
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第五节 炭疽芽孢杆菌
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一、所致疾病
炭疽杆菌(炭疽芽孢杆菌)，可引致多种 动物的炭疽，其中草食兽最易感，犬、猫、 食肉兽等则有相当大的抵抗力，禽类一般不 感染。
食草动物——急性败血症 猪——慢性的咽部局限感染 犬、猫和食肉兽——肠炭疽
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二、主要生物学性状
1、形态及染色特性
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一、所致疾病
致病性大肠杆菌能引起动物的大肠杆菌病。 猪：仔猪黄痢、仔猪白痢、仔猪水肿病。 鸡：发生急性败血症、气囊炎、关节滑膜炎、眼球炎、
脐炎、输卵管炎和腹膜炎等。
大肠杆菌在公共卫生、食品卫生学上，常用作被粪便 污染的检验指标。
球菌
SPA
葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A，SPA）
概念：是存在于金黄色葡萄球菌细胞壁表
面的一种蛋白质. 特点:能与人及多种哺乳动物的IgG Fc段 非特异性结合. 生物学意义：抗吞噬、促细胞分裂、引起 变态反应、损伤血小板等作用. 用途：协同凝集试验.
毒素性疾病
食物中毒 烫伤样皮肤综合征(SSSS) 毒性休克综合征(TSS)
假膜性肠炎
三、免疫性
人类有一定的天然免疫力，只有
当皮肤黏膜受伤后，宿主免疫力降低 时，才易引起葡萄球菌感染。 感染后能获得一定的免疫力，但 不强，难以防止再次感染。
微生物学检查
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性 观察菌落性状、溶血性、色素 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定
4. 肠毒素：
是一组热稳定的可溶性蛋白， 耐100℃ 30min；
抗胃蛋白酶分解； 刺激呕吐中枢，导致以呕吐
为主要症状的食物中毒
常污染食物有牛奶、肉类等
5. 表皮剥脱毒素：
使表皮层细胞脱落，引起剥脱性皮炎
裂解表皮组织的棘状颗粒层
表 皮与真皮脱离
烫伤样皮肤综合征
6. 毒性休克综合征毒素-1（ TSST-1） （toxic shock syndrom toxin 1）
抗吞噬：
（体内作用）
SPA
抗体
金葡菌
协同凝集实验： 未知Ag(病原菌)
（体外作用）
金葡菌
抗体
SPA
分 类：
金黄色葡萄球菌（致病菌） 产生色素
表皮葡萄球菌（条件致病菌）
腐生葡萄球菌
产生凝固酶 噬菌体分型
实验四病原性球菌
凝集物可被涂散，变阴性。
阳性对照 阴性对照 待测血清 各加溶血素“O” 1滴轻摇1min 再加SLO胶乳1滴轻摇3min 观察成果
成果鉴定：
稀释度
ASO （IU/ml）
1：15 1：30 1：60
400 800 1600
ASO≤250 IU/ml 阴性
注意事项：
1. 液体量要一样，菌量一样。 2. 血浆多挑几环（一滴旳量），菌少挑点，
表3
甲型链球菌 乙型链球菌
血平板 针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环 针尖小菌落、透明宽敞溶血环
3. 血浆凝固酶试验--玻片法 （操作，1人/组）
原理：
措施：
1
2
3
兔血浆
+ 金葡
兔血浆
+ 白葡
生理盐水
+ 金葡
凝集（+） 不凝集（-） 不凝集（-）
4、血浆凝固酶试验（试管法） 示教
凝 集 为 阳 性
金葡菌
Байду номын сангаас
白葡菌
+
+
兔血浆
兔血浆
37℃30′水浴观察
不 凝 集 为 阴 性
凝固酶试验 （试管法）
五、抗链球菌溶血素“O”（ASO） 迅速胶乳法 （操作，1人/组）
原理： 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平
旳抗体后，还有多出ASO，这些多出抗体即与SLO胶乳 试剂反应，出现清楚、均匀旳凝集颗粒。
措施：
实验四病原性球菌
1. 五类病原性球菌旳形态、排列及染色性 示教
G+球菌：
金葡菌
链球菌
肺炎双球菌
G-球菌：
实验四病原性球菌的检验
1、标本采集：脓液
2、检验程序：
脓液
↓
↓
直接涂片
分离培养
革兰染色镜检 （操作）（血琼脂平板）
↓
↓ 37℃ 18～24h
初报 挑取可疑菌落（性状、色素、溶血）
↓
鉴定试验及药敏试验
↓
↓
↓
↓
革兰染色镜检 生化反应鉴定 其他鉴定 药敏试验
↓
↓
↓
↓
↓37℃ 18～24h
报告
三、葡萄球菌属生物化学反应：
（一）触酶试验（操作）
规定时间内出现清晰凝集者为阳性，不出现凝集 者为阴性。
主要用于风湿热的辅助诊断：
风湿热患者ASO大多在250单位；
活动性风湿热患者ASO一般≥400单位。
『实验报告』
绘出化脓性球菌镜下形态图。 记录脓液标本的分离培养与鉴定程序。
实验四 病原性球菌的检验
病原性球菌，又称化脓性球菌，根据革 兰染色性的不同，分为两类： G＋球菌： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链 球菌等。 G- 球菌： 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 等。
『目的要求』
掌握：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜 炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的形态及染色特点；葡 萄球菌、链球菌的菌落特点及链球菌在血琼脂 平板上的溶血性；血浆凝固酶试验、触酶试验 的试验方法、结果及意义。
四、抗链球菌溶血素“O”的测定（乳胶法，示教）
1、原理：ASO高滴度的血清被适量溶血素“O”中 和后，失去了正常水平量的抗体，多余的抗“O” 抗体与ASO乳胶试剂反应，出现肉眼可见的，清 晰均匀的凝集颗粒（ASO乳胶试剂系羧化聚苯乙 烯乳胶与溶血素“O”共价交联的产物）。
2、方法：（略）3、结Fra bibliotek及意义：1、原理：
微生物免疫学实验报告
1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的：5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。
因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。
1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。
2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。
对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。
3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。
避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。
置于干燥处，以防受潮。
(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）一、实验内容：3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的：1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
常见病原性细菌
(2) M蛋白 是A群链球菌的主要致病因子，含M蛋白的链球
菌具有抗吞噬和抵抗细胞内杀菌作用；与某些超敏反 应疾病有关。
(3) 致热外毒素 是人类猩红热的主要毒性物质。
(4) 链球菌溶素 溶解红细胞、破坏白细胞和血小板。 链球菌溶素O（SLO）：对氧敏感。抗原性强，可
刺激机体产生抗体。 链球菌溶素S（SLS）：对氧稳定。无免疫原性。
固体培养基生长现象
β溶血
生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。 致病性菌株分解甘露醇。 触酶阳性（与链球菌区分标准）。
抗原 ① 葡萄球菌A蛋白(SPA)：细胞壁表面蛋白质，完全抗原。
S.aureus
Ab
Ag
协同凝集试验（coagglutination）
② 荚膜多糖：有利于细菌粘附。 ③ 多糖抗原：存在于细胞壁，有群特异性。
三、 奈瑟菌属(Neisseria)
G-，双球菌，无鞭毛、芽胞，有荚膜和菌毛。 专性需氧。
脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌
脑膜炎奈瑟菌
G-,双球菌，肾形或豆形，无鞭毛、芽胞，有菌毛和荚膜。 培养特性
营养要求高 巧克力培养基 专性需氧 产生自溶酶
抗原结构 荚膜多糖群特异性抗原: 分群 外膜蛋白型特异性抗原: 分型 脂寡糖抗原：主要致病物质
根据溶血现象分为3类
类别 甲型溶血性链球菌
草绿色链球菌
溶血环现象 草绿色溶血环
名称
致病性
溶血 多为条件致病菌
乙型溶血性链球菌 溶血性链球菌
透明无色溶血环
溶血
致病力强
丙型链球菌 不溶血性链球菌
不溶血
无致病性
A群链球菌
球形或椭圆形，链状排列，G＋，无芽胞，无鞭毛，培养 早期形成透明质酸的荚膜。
病原性球菌及检验
病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。
G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。
G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。
对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。
常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。
一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。
为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。
(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。
1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。
2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。
(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。
1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。
存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。
2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。
有型特异性，分A、B、C三型。
(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。
2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。
3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。
(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。
在20%CO2环境中，有利于毒力产生。
最适温度37℃，最适PH7.4。
DNA中G+C含量：30-39%。
1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。
病原性球菌实训报告
一、实训目的1. 掌握病原性球菌的基本概念和分类。
2. 熟悉病原性球菌的形态学观察方法。
3. 理解病原性球菌的培养特性及生化反应。
4. 提高实验室操作技能，为临床诊断提供依据。
二、实训时间2023年10月15日三、实训地点微生物实验室四、实训器材与试剂1. 器材：显微镜、接种环、玻片、酒精灯、无菌生理盐水、肉浸液琼脂平板、血琼脂平板、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、明胶、石炭酸复红染液、结晶紫、碘液、95%乙醇等。
2. 试剂：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等。
五、实训内容1. 病原性球菌的形态学观察（1）革兰染色：取适量金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等，分别进行革兰染色，观察其染色特性。
（2）镜检：将染色后的玻片置于显微镜下观察，记录细菌的形态、排列方式、细胞壁结构等特征。
2. 病原性球菌的培养特性观察（1）肉浸液琼脂平板培养：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于肉浸液琼脂平板，37℃培养24小时，观察菌落特征。
（2）血琼脂平板培养：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于血琼脂平板，37℃培养24小时，观察菌落特征及溶血现象。
3. 病原性球菌的生化反应观察（1）糖发酵试验：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇等培养基，37℃培养24小时，观察是否产生气泡。
（2）明胶液化试验：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于明胶培养基，37℃培养24小时，观察明胶是否液化。
4. 病原性球菌的免疫学检验（1）SPA协同凝集试验：将金黄色葡萄球菌与SPA抗体混合，观察是否出现凝集现象。
（2）血浆凝固酶试验：将金黄色葡萄球菌接种于血浆培养基，37℃培养24小时，观察血浆是否凝固。
六、实训结果与分析1. 革兰染色观察：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌均为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串样排列；溶血性链球菌为革兰氏阴性球菌，呈链状排列。
病原基础实验报告(3篇)
第1篇实验日期：2023年11月15日实验地点：病原生物学实验室实验目的：1. 学习病原微生物的基本形态结构观察方法。
2. 掌握细菌革兰染色技术。
3. 了解鲎实验的基本原理和应用。
4. 学习药敏试验的操作步骤。
5. 掌握皮肤细菌检查的方法。
6. 熟悉五糖发酵实验的操作和结果分析。
7. 了解乙肝病毒抗原抗体检测的原理和步骤。
实验材料：1. 细菌样本：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
2. 革兰染色染料：结晶紫、碘液、酒精、盐酸酒精。
3. 鲎试剂。
4. 药敏纸片。
5. 皮肤拭子。
6. 五糖发酵培养基。
7. 乙肝病毒抗原抗体检测试剂盒。
实验方法：一、细菌革兰染色1. 将细菌样本涂布在载玻片上，自然干燥。
2. 使用结晶紫染色，染2-3分钟。
3. 洗去浮色，使用碘液媒染1分钟。
4. 使用酒精脱色，观察革兰阳性菌和革兰阴性菌的颜色差异。
二、细菌的形态结构观察1. 使用显微镜观察细菌样本，观察细菌的形态、大小、排列等特征。
2. 记录观察结果。
三、鲎实验1. 将鲎试剂加入含有细菌样本的试管中。
2. 观察试管中的变化，记录结果。
四、药敏试验1. 将药敏纸片贴在含有细菌样本的培养基上。
2. 观察纸片周围的抑菌圈大小，记录结果。
五、皮肤细菌检查1. 使用皮肤拭子采集皮肤样本。
2. 将皮肤拭子涂布在培养基上，观察细菌生长情况。
六、五糖发酵实验1. 将细菌样本接种到五糖发酵培养基中。
2. 观察培养基中的颜色变化，记录结果。
七、乙肝病毒抗原抗体检测1. 使用乙肝病毒抗原抗体检测试剂盒，按照说明书进行操作。
2. 观察结果，记录检测结果。
实验结果与分析：一、细菌革兰染色观察结果显示，金黄色葡萄球菌为革兰阳性菌，大肠杆菌为革兰阴性菌。
二、细菌的形态结构观察金黄色葡萄球菌为球形，单个或成对排列；大肠杆菌为杆状，单个或成链排列。
三、鲎实验实验结果显示，鲎试剂加入细菌样本后，出现凝集现象。
四、药敏试验金黄色葡萄球菌对青霉素、红霉素敏感；大肠杆菌对阿莫西林、头孢唑啉敏感。
临床常见病原菌检验—需氧G+球菌检验(微生物检验课件)
3、鉴定试验
（2）菌属内种鉴定试验：表3-8、表3-9 临床主要鉴定粪肠球菌、屎肠球菌。
第一节 葡萄球菌属
(Staphylococcus)
45种，21个亚种，最常见、最重要的致病菌是 金黄色葡萄球菌
一、生 物 学 性状
（一）形态与染色
G+，球形，无鞭毛、无芽孢， 固体培养基：呈葡萄串状排列 液体培养基：成单、成双或
短链状排列（链球菌）
（二）培养特性
金黄色葡萄球菌金黄色脂溶性色素
表皮葡萄球菌在普通琼 脂平皿上的白色色素
其他鉴定试验
报告
（三）检验方法
1、直接涂片
适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液） 伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等
初步报告： “查见革兰阳性球菌,葡萄状排列，疑为
葡萄球菌”
2、分离培养
血液标本5ml
脑脊液、脓液、
穿刺液、咽拭、
50ml葡萄糖肉汤（增菌）
尿液
粪便、 呕吐物
无菌（7天）
浑浊
血平板
表皮葡萄球菌在血 平板上的白色色素
中等大小，圆形凸起，
不透明、有色、S型菌落。
葡萄球菌菌落形态 （普通琼脂平板）
液体：均匀浑浊生长
表皮葡萄球菌无 溶血环。
金黄色葡萄球菌 有透明溶血环。
耐盐：
10-15% g/L NaCl培养基中生长
选择性平板：
高盐甘露醇平板，致病菌可
分解甘露醇产酸使指示剂
呈淡黄色。
G-菌在此平板上不生长。
病原实验报告脓汁标本(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握脓汁标本的采集、保存和送检方法。
2. 熟悉脓汁标本的病原检测流程。
3. 学会观察和分析脓汁标本中的病原菌。
二、实验原理脓汁标本病原检测是通过对脓汁标本进行微生物学检测，确定病原菌种类，为临床诊断和治疗提供依据。
本实验采用细菌培养、革兰染色和生化试验等方法进行病原检测。
三、实验材料1. 脓汁标本2. 培养基：营养肉汤、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板3. 革兰染色液4. 生化试剂：糖发酵试剂、氧化酶试剂等5. 实验器材：无菌操作台、无菌棉签、无菌试管、酒精灯、接种环等四、实验步骤1. 标本采集：用无菌棉签蘸取脓汁，放入无菌试管中，密封后送检。
2. 标本保存：将采集到的脓汁标本放入4℃冰箱保存，尽快进行检测。
3. 细菌培养：a. 取适量脓汁，接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
b. 取培养后的肉汤，接种于血琼脂平板和麦康凯琼脂平板，37℃培养24小时。
4. 革兰染色：a. 取培养出的细菌，涂片，进行革兰染色。
b. 镜检观察细菌的革兰染色结果，初步判断细菌种类。
5. 生化试验：a. 根据革兰染色结果，选择相应的细菌进行生化试验。
b. 进行糖发酵试验、氧化酶试验等，进一步鉴定细菌种类。
6. 结果分析：根据细菌培养、革兰染色和生化试验结果，确定脓汁标本中的病原菌种类。
五、实验结果1. 脓汁标本培养结果：血琼脂平板上生长出典型的金黄色葡萄球菌菌落；麦康凯琼脂平板上生长出典型的化脓性链球菌菌落。
2. 革兰染色结果：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌；化脓性链球菌为革兰氏阳性球菌。
3. 生化试验结果：金黄色葡萄球菌发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖；氧化酶试验阳性；化脓性链球菌发酵葡萄糖、麦芽糖、乳糖；氧化酶试验阳性。
六、实验结论根据细菌培养、革兰染色和生化试验结果，本脓汁标本中的病原菌为金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌。
七、实验讨论1. 脓汁标本的采集和保存对病原检测结果有重要影响，应严格按照无菌操作规程进行。
常见病原菌特性、检查方法和防治原则
一、葡萄球菌属 (staphylococcus)
是最常见的化脓性球菌
概述： 分布广泛
医院内交叉感染的重要传染源
耐药性
（一）、生物学特性
1、形态与染色： 球形，葡萄串状，革兰染色 阳性 （G+），无鞭毛，无芽孢，幼龄培养物可见荚膜。
金黄色葡萄球菌纯培养镜下形态（革兰染色）
注意 个人卫生
小结
1. 为最常见的化脓性球菌，呈球形，G+，葡 萄串状排列；
2. 致病菌株大多产生金黄色色素，并有β溶血 现象；
3. 主要致病物质为外毒素和侵袭酶；
4. 主要引起人类皮肤、黏膜的化脓性感染及 毒素性疾病。
二、链球菌属 （一）生物学特性
1、形态与染色：
G+，球形或卵圆形，链状排列，无芽孢和鞭毛，有菌毛样 结构，幼龄培养物可形成荚膜，革兰氏染色阳性(G+)。
原理：中和试验 方法：间接凝集 结果：效价大于400单位有诊断意义。 意义：风湿热及其活动性的辅助诊断。
（四）、防治原则
• 减少传染源 • 注意消毒 • 早期彻底治疗儿童链球菌感染，防止急
性肾小球肾炎和风湿热的发生。治疗患 者以青霉素G为首选药物，须治疗彻底， 防止超敏反应性疾病的发生
小结
1. 链球菌呈球形，G+，链状排列； 2. 营养要求较高，血平板上为灰白色的微小
②致热外毒素：
又称红疹毒素或猩红热毒素，A群链球菌溶原菌菌株 产生，引起猩红热,发热，全身红斑。
（3）侵袭性酶： ①透明脂酸酶：扩散因子，分解细胞间质
的透明质酸→组织中扩散
②链激酶：使血液中纤维蛋白酶原→纤维 蛋白酶，溶解血块或阻止血浆凝固→细菌扩散
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9
方法：
阳性对照 阴性对照 待测血清 各加溶血素“O” 1滴轻摇1min 再加SLO胶乳1滴轻摇3min
观察结果
整理版
10
结果判定：
稀释度
ASO （IU/ml）
1：15 1：30 1：60
400 800 1600
ASO≤250 IU/ml 阴性
整理版11Fra bibliotek 注意事项：1. 液体量要一样，菌量一样。 2. 血浆多挑几环（一滴的量），菌少挑点，
实验四 病原性球菌
1. 五类病原性球菌的形态、排列及染色性 示教 2. 葡萄球菌、链球菌的培养物 示教 3. 血浆凝固酶试验--玻片法 （操作，1人/组）
试管法 示教 4、抗链球菌溶血素”O”（ASO）乳胶试验 示教 5、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定 （操作，1人/组）
整理版
1
1. 五类病原性球菌的形态、排列及染色性 示教
兔血浆
性
37℃30′水浴观察
整理版
不 凝 集 为 阴 性
7
凝固酶实验 （试管法）
整理版
8
五、抗链球菌溶血素“O”（ASO） 快速胶乳法 （操作，1人/组）
原理： 高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平
的抗体后，还有多余ASO，这些多余抗体即与SLO胶乳 试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。
整理版
G+球菌：
金葡菌
链球菌
整理版
肺炎双球菌
2
G-球菌：
淋球菌
脑膜炎球菌
整理版
3
2. 葡萄球菌、链球菌的培养物 示教
表1
金葡 柠葡 白葡
普通琼脂平板
菌落形状
色素
圆形凸起光滑中等大小 金黄色
同上
柠檬色
同上
白色
血平板 溶血性
+ -
整理版
4
表2 脑膜炎双球菌
巧克力血平板 菌落透明似露滴状
表3
甲型链球菌 乙型链球菌
不能干。 3. 涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂
凝集物可被涂散，变阴性。
整理版
12
血平板 针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环 针尖小菌落、透明宽大溶血环
整理版
5
3. 血浆凝固酶试验--玻片法 （操作，1人/组）
原理：
方法：
1
2
3
兔血浆
+ 金葡
兔血浆
+ 白葡
生理盐水
+ 金葡
凝集（+）整理不版凝集（-） 不凝集（-）
6
4、血浆凝固酶试验（试管法） 示教
凝 集 金葡菌
白葡菌
为+
+
阳 兔血浆