复习_单克隆抗体的过程

单克隆抗体的制备 1、怎样获得能分泌专一抗体的B淋巴细胞？
反复注射特定的抗原，免疫小鼠。
2、从何处获得较多的B淋巴细胞？ 小鼠的脾脏 3、用什么方法可以使B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？
PEG、灭活的病毒等
4、怎样筛选出杂交瘤细胞？利用HAT选择培养基培养，筛选

5、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？
不断分裂增殖。
你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？
在培养基中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！ 3种杂交细胞：①B-B融合细胞、②杂交瘤细胞 ③瘤-瘤融合细胞
未融合的细胞：④单个的B细胞、⑤单个的骨髓瘤细胞
这五种细胞中， ① ④没有分裂能力，逐渐衰老死亡； ③ ⑤的DNA复制只有D途径， 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，也逐渐衰老死亡， 但②的DNA复制有D、S两条途径，虽然D途径被氨基嘌呤阻断， 但是还可以通过 S 途径进行DNA的复制，使细胞有分裂能力。
（3）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种： ①体外培养法，可获得10μg/mL的抗体；②动物体内 诱生法可获得5~20mg/mL的抗体。你选择的方法及原 因是 大量生产选①，小规模生产选② 。
（4）用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性，因 效应B 为它是用小鼠的_______细胞制备的，其化学本质是 蛋白质 ___________，应用于人体，会作为 异物 产 生 免疫反应，解决这个问题的方法是 采用人的效应B细胞制备 _____________________________。
5.整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选用特定的选择培养基， 筛选出杂交瘤细胞（多种）
第二次用多孔培养板，
筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的 不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。
科勒
米尔斯坦
荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖
4、单抗隆抗体的应用
①作为诊断试剂
15、（1）单克隆抗体是指化学性质单一，特异性强的抗体 。 （2）制备单克隆抗体的步骤： 抗原 ①将__________注入小鼠体内，从小鼠脾脏中获得淋巴细 胞，其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体。 ②将步骤①获得的B淋巴细胞与步骤②培养的骨髓瘤细胞 在_________________的诱导下融合。 聚乙二醇 选择性 ③将诱导后产生的多种细胞，放在_______培养基的多孔 培养板上培养，筛选。 产生专一抗体 ④这样获得的杂交瘤细胞既具有B淋巴细胞_____________ 无限增殖 的能力，又具有________________的本领。 ⑤检测和分离带有抗X抗体的阳性细胞，培养板中每孔放 一个细胞进行培养。 ⑥将阳性细胞进行增殖，从而制备出大量抗该抗原的单克 隆抗体。
• 动物细胞工程： • 动物细胞培养（细胞增殖） • 核移植（动物细胞核的全能性） 动物细胞融合（细胞膜的流动性） • 单克隆抗体 • （细胞膜的流动性、细胞增殖）
传统的抗体生产方法及缺陷
1.传统的生产方法:
主要分布血清， 还有的分布在组织液，外 分泌液
向动物体内反复注射某种抗原，使动物产 生抗体，然后从动物血清中分离所需要的 抗体。
2.缺陷：产量低、纯度低，而且制备的抗体 特异性差。
单克隆抗体
1.概念： 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）， 形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所 产生的化学性质单一、特异性强的抗体 称为单克隆抗体。 2.特点： 特异性强、灵敏度高
单克隆抗体
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体
骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖
用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，纯度高、 特异性强，具有准确、高效、简易、快速的优点。
②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病
利用同位素标记单抗，在特定组织成像
③用于治疗疾病和运载药物
制成生物导弹，将药物定向带到癌细胞所在的位置， 在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。
“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物 导向 杀死癌细胞
单克隆抗体
温故知新：
• 1.细胞工程的两大类型？各自的技术手段及 其原理是？ 2.核移植的两大类型？其中提供细胞质 的为去核的卵母细胞，为什么选去核的 卵母细胞？
体积大，易操作； 含有使细胞核的全能性容易表达的物质和营养条件
3.动物细胞融合的实质，原理和方法？ 融合后的细胞叫？
• 植物细胞工程： • 植物组织培养（细胞的全能性） • 植物体细胞杂交 • （细胞的全能性、细胞膜的流动性）
单克隆 抗体
动物细胞培养技术
杂交瘤细胞
动物细胞融合
既能在体外大量繁殖， 又能产生特异性抗体
融合 浆细胞
第一次筛选用特定的选择培养基 帅选出杂交瘤细胞
小资料：
①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被
氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般 不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能
用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内不多于一个细胞。 抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应
6、怎样获得大量的单一抗体？
体内或体外大量培养特异的杂交 瘤细胞，从中提取单一抗体。
(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠 体内的 效应B 细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之 前，应给小鼠注射_____________类物质。 抗原 （2）d过程是一个_____________过程，该过程的进 细胞融合 行常用_____________或_____________的诱导。 聚乙二醇 灭活的病毒 (3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成 3 种 选择性 类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细 胞用于培养，D细胞的名称是 杂交瘤细胞 ，其特点 是_________________________________________。 既能无限增殖又能产生特异性抗体
方法——抗原-抗体杂交法
阳性孔 用多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内 不多于一个细胞。
抗原抗体杂交法检测——呈阳性反应
如何得到大量的单克隆抗体？
单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。
免疫 经过免疫的 注射抗原 B淋巴细胞
骨髓瘤 细胞
单 克 隆 抗 体 的 制 备 过 程 ：
有丝 (4)在培养时通过________分裂方式大量繁殖。D细 胞体外培养需要注意的条件是（要求答5项） 无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH； __________________________________。 适宜的气体环境 （5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面 特异性强、灵敏度高 ，与常规抗体相比，其特点是_________________。
诱导细胞融合
动物 细胞 融合 技术 动物 细胞 培养 技术 杂交细胞 第一次筛选 杂交瘤细胞 第二次筛选 特异性杂交瘤细胞 体外或体内 培养 杂交瘤细胞系 提取 单克隆抗体
特点：既能大量繁殖 又能产生专一抗体
特点：特异性强灵敏 度高可大量制备
特定的选择培养 基
多孔细胞培养板
高考热点：
1.此过程中的B淋巴细胞是经过免疫的，实际 上就是浆细胞。 2.融合后形成的杂交细胞有多种，考虑两两 融合，共有三种： B-B、B-瘤(杂交瘤细胞) 、瘤-瘤 3.单克隆抗体制备中用到的技术手段： 动物细胞融合、动物细胞培养。 4.原理：细胞膜的流动性、细胞增殖
②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
通常采用有限稀释法，将筛选出来的杂交瘤 细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养， 使每孔细胞不多于一个，再由这些单细胞克隆生 长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那 些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。 最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩 大培养。