(完整版)VC标准曲线
液相色谱提取维生素C
3实验结果
3.1标准曲线的绘制
表1Vc标准样品的高效液相色谱数据
CVc/mg·L-1
保留时间/min
峰面积
5
3.039
150647
20
2.910
4.2结论
本实验用微波辅助提取法以1mol/L乙酸萃取3组质量分别为5.0177g、5.0015g、5.0002g的不同水果样品中的Vc，用高效液相色谱法对其进行分析测定。由系列Vc标准溶液可得标准曲线方程y =32600x-44230，相关系数为R² =0.9971。将样品的Vc峰面积值代入标准曲线，可得出火龙果，猕猴桃，鸭梨Vc的浓度分别为3.11mg·L-1、15.56mg·L-1、1.76mg·L-1，含量分别为6.20mg/100g、31.12mg/100g、3.52mg/100g。在实验过程中应该出现了问题，因为鸭梨的峰值都是负值，因鸭梨是最后一个测定的，故无法知道是仪器问题还是样品的问题。高效液相色谱法测定蔬果中的维生素C含量，具有分析速度快、操作简单、灵敏度高、准确性高、试剂用量少等优点。
微波辅助提取-高效液相色谱法测定蔬果中的Vc含量
摘要本实验以微波辅助提取法，用1mol/L的乙酸萃取3组质量分别为5.0177g、5.0002g、5.0015g的火龙果，猕猴桃，鸭梨样品中的Vc，用高效液相色谱法进行定性和定量分析。通过对比保留时间进行定性分析，以标准曲线法进行定量分析。配制系Vc列标准溶液，以峰面积对浓度作图绘制标准曲线，再测定样品的峰面积，然后代入标准曲线方程，便可得出样品Vc浓度，进一步可算出Vc含量。实验所得标准曲线方程为y =32600x-44230，相关系数为R² =0.9971。实验测得火龙果，猕猴桃，鸭梨的Vc含量分别为6.20mg/100g、31.12mg/100g、3.52mg/100g。高效液相色谱法测定蔬果中维生素C含量，具有操作简单、分析速度快、灵敏度高、准确性高，试剂用量少等优点。
紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量 This manuscript was revised on November 28, 2020紫外分光光度法测定维生素C 和维生素E 含量【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C 和维生素E 组成的混合物中各组分的浓度。
在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。
【关键词】紫外分光光度法；维生素C ；维生素E ；浓度1、 引言维生素C （抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。
两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。
因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。
维生素C 是水溶性的，维生素E 是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。
2、实验原理根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。
由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。
例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。
混合组分中在λ1处的吸收等于组分A 和组分B 分别在λ1处的吸光度之和A λ1A +B ，即：A λ1A +B =κλ1A bc A +κλ1B bc B同理，混合组分在λ2处吸光度之和A λ2A +B 应为：A λ2A +B =κλ2A bc A +κλ2B bc B若先用A 、B 组分的标样，分别测的A 、B 两组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A 、κλ2A 、κλ1B 、κλ2B ；当测的未知试样在λ1和λ1处的吸光度A λ1A +B 和A λ2A +B 后，解下列二元一次方程组：A λ1A +B =κλ1A bc A +κλ1B bc BA λ2A +B =κλ2A bc A +κλ2B bc B即可求得A 、B 两组分各自的浓度c A 和c B 。
VC含量测定
VC含量的测定
一、实验仪器、试剂
仪器：分光光度计、天平、移液管、容量瓶、烧杯
试剂：1％草酸溶液、100 μg／mL维生素C标准溶液(现配)、蒸馏水、维生素C片剂(50 mg ／片)
二、实验方法
1.维生素C标准液(100 μg／mL)配制：
将2片维生素C片剂用研钵研碎，然后用蒸馏水定容于1000mL容量瓶中。
2.标准曲线的绘制：
分别移取100μg／mL的维生素C标准溶液5、15、25、35、45、55 mL于100 mL容量瓶中、用l％草酸溶液定容。
分别得到5、15、25、35、45、55μg /mL的维生素c标准溶液。
以1％草酸溶液作为空白参照，在243 nm波长下测定不同浓度的维生素C标准溶液的吸光度。
然后通过吸光度与待测液中维生素c的浓度呈线性的关系，构建标准曲线方程。
3.待测样品液的配制：
取新鲜生菜40g用蒸馏水洗净，捣碎，然后过滤，匀浆部分用l％草酸溶液溶解后定容于1000 mL容量瓶中作为待测液。
4.待测样品中维生素C含量的测定：
取100 mL待测生菜样品溶液，在243 nm的波长下测定其吸光值，每个待测液做3次重复实验，取其平均值作为测定结果。
通过标准曲线的线性方程，计算出待测液中维生素C的浓度
(μg／mL)，然后再通过如下公式计算待测水果的维生素c含量(mg／100 g)：
维生素C含量=（C*V*1000）/（m*1000）
C：通过标准曲线方程计算得到的样品中维生素C溶液的浓度
V：待测样品定容后的总体积
m：测定时所取待测生菜的质量。
抗坏血酸(维生素C)的测定方法
抗坏血酸(维生素C)的测定方法(1)在测定维生素C的国标方法中，荧光法为测定食物中维生素C含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法1．原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺(OPDA)反应生成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为0.022g/ml。
2．适用范围GB12392-90本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3．仪器3．1．实验室常用设备。
3.2.荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。
3．3．打碎机。
4.试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。
(1)偏磷酸一乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。
4°C冰箱可保存7〜10天。
(2)0.15mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。
(3)偏磷酸一乙酸一硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。
(4)50%乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠(CH3C00Na・3H20),加水至1000ml。
(5)硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液(4.4)中。
临用前配制。
(6)邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。
(7)0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。
变色范围：pH=1.2红色pH=2.8黄色pH>4.0兰色(8)活性炭的活化：加200g炭粉于1L1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120C烘箱中干燥，备用。
vc片中维生素c的测定
VC片中维生素C的测定1. 引言维生素C，也称为抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素。
它在人体内具有许多重要的功能，包括抗氧化、参与胶原蛋白合成和免疫调节等。
准确测定VC片中维生素C的含量对于保证产品质量和满足消费者需求至关重要。
本文将介绍一种常用的方法——碘滴定法来测定VC片中维生素C的含量。
该方法基于VC与碘溶液反应生成碘化物的化学反应，通过测定反应前后溶液中未反应的碘量来计算VC含量。
2. 实验步骤2.1 材料准备•VC片样品•碘标准溶液•淀粉指示剂•硫酸•蒸馏水•称量瓶、容量瓶、烧杯等实验器具2.2 碘滴定法测定步骤步骤1：制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的VC标准溶液。
2.取一定体积的VC标准溶液，加入烧杯中。
3.加入适量的碘标准溶液，使反应完全。
4.加入淀粉指示剂，继续滴定至溶液呈现蓝黑色。
5.记录滴定所需的碘标准溶液体积。
步骤2：测定样品1.取一定质量的VC片样品，加入称量瓶中。
2.加入适量蒸馏水，使VC片完全溶解。
3.加入硫酸，使样品酸化。
4.将样品转移至容量瓶中，并用蒸馏水稀释到刻度线处。
5.取一定体积的稀释后的样品溶液，加入烧杯中。
6.加入适量的碘标准溶液，使反应完全。
7.加入淀粉指示剂，继续滴定至溶液呈现蓝黑色。
8.记录滴定所需的碘标准溶液体积。
3. 数据处理与结果分析3.1 标准曲线绘制根据步骤2中制备的标准曲线数据（VC标准溶液浓度与滴定所需的碘标准溶液体积），绘制标准曲线图。
横坐标为VC标准溶液浓度，纵坐标为滴定所需的碘标准溶液体积。
3.2 样品测定结果计算根据步骤2中测定样品时记录的滴定所需的碘标准溶液体积，结合标准曲线，计算出样品中维生素C的含量。
3.3 结果分析将样品测定结果与产品规格要求进行比较，评估样品是否符合要求。
如果样品中维生素C的含量低于规定范围，则可能需要调整生产工艺或增加添加量。
4. 实验注意事项1.实验过程中应注意安全操作，避免接触皮肤和吸入有害气体。
实验四-测定食品中Vc的含量
实验三测定食品中Vc的含量一、能力目标1、熟练仪器的规范操作与检测；2、熟练标准工作曲线绘制；3、熟练原始记录、数据处理与报告。
二、原理根据维生素C具有对紫外光产生吸收、对碱不稳定的特性，在243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度值之差，并通过标准曲线，即可计算出维生素C的含量。
三、仪器与试剂1、仪器紫外可见分光光度计2、试剂1）10%HCl：取133mL浓盐酸，加水稀释至500mL；2）1% HCl：取22mL浓盐酸，加水稀释至100mL；3）1mol/L NaOH溶液：称取40g 氢氧化钠，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000mL。
4）维生素C标准使用液的配制：在分析天平上准确称取抗坏血酸10mg，加2mL 10%HCl，再蒸馏水定容至100mL，混匀，即为100 μg/mL维生素C标准溶液。
四、测定步骤1、维生素C标准系列溶液的配制及测定取6个50mL容量瓶，依序加入100μg/mL维生素C标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL，分别补加蒸馏水至50.0mL，摇匀。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定标准系列维生素C溶液的吸光度。
2、样品中维生素C含量的测定（1）样品的测定：在两个盛有1.0～2.0mL10%HCl的50 mL容量瓶中，分别准确加入0.5～1.0mL样品液，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定吸光度。
（2）待测碱处理液的制备与测定：分别准确吸取0.5～1.0mL样品液、10mL蒸馏水和3～4 mL1mol/L NaOH溶液依次放入50 mL容量瓶中，混匀，15min后加入3～4 mL10%HCl，混匀，加蒸馏水定容至刻度。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定吸光度。
也可以碱处理待测液为空白，在243nm处测定样品提取液的吸光度。
五、数据记录及处理1．皿差的测定2．标准溶液吸光度测定以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量
紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。
在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。
【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度1、引言维生素C（抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。
两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。
因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。
维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。
2、实验原理根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。
由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。
例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。
混合组分中在λ1处的吸收等于组分A和组分B分别在λ1处的吸光度之和，即：同理，混合组分在λ2处吸光度之和应为：若先用A、B组分的标样，分别测的A、B两组分在和处的摩尔吸收系数、、、；当测的未知试样在λ1和λ1处的吸光度和后，解下列二元一次方程组：即可求得A、B两组分各自的浓度和。
一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A、B两组分最大吸收峰处或其附近。
3、紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量3.1、仪器试剂仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S），石英吸收池一对试剂：维生素C（抗坏血酸），维生素E(α-生育酚)，无水乙醇3.2、实验步骤3.2.1、检查仪器开机预热20min，并调试至正常工作状态。
实验四-维生素c的测定
实验四：维生素C含量测定一、实验目的1、了解生化组分含量定量测定的意义。
2、掌握维生素C定量测定的方法。
3、了解定量试验统计学数据分析方法。
二、实验原理滴定法是一些生理生化指标测定中比较常用的一种方法，一般可以分为两类：目前一般实验室滴定分析采用的是人工滴定法，它是根据指示剂的颜色变化指示滴定终点，然后目测标准溶液消耗体积，计算分析结果。
自动电位滴定法是通过电位的变化，由仪器自动判断终点。
维生素又名维他命，是维持人体生命活动必需的一类有机物质，也是保持人体健康的重要活性物质。
维生素在体内的含量很少，但在人体生长、代谢、发育过程中却发挥着重要的作用。
维生素不是构成机体组织和细胞的组成成分，它也不会产生能量，它的作用主要是参与机体代谢的调节。
大多数的维生素，机体不能合成或合成量不足，不能满足机体的需要，必须经常通过食物中获得。
人体对维生素的需要量很小，日需要量常以毫克(mg)或微克(μg)计算，但一旦缺乏就会引发相应的维生素缺乏症，对人体健康造成损害。
维生素C又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素。
分子式：C6H8O6，分子量：176.12，酸性，具有较强的还原性，加热或在溶液中易氧化分解，在碱性条件下更易被氧化。
其功能主要有：1、促进骨胶原的生物合成。
利于组织创伤口的更快愈合；2、促进氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代谢，延长肌体寿命。
3、改善铁、钙和叶酸的利用。
4、改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代谢，预防心血管病。
5、促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血。
6、增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力。
维生素C在自然界分布广泛，在柠檬汁、绿色植物及番茄中含量很高。
维生素C是最不稳定的一种维生素,由于它容易被氧化，在食物贮藏或烹调过程中，甚至切碎新鲜蔬菜时维生素C都能被破坏。
微量的铜、铁离子可加快破坏的速度。
因此，只有新鲜的蔬菜、水果或生拌菜才是维生素C的丰富来源。
它是无色晶体，熔点190～192℃，易溶于水，水溶液呈酸性，化学性质较活泼，遇热、碱和重金属离子容易分解，所以炒菜不可用铜锅和加热过久。
紫外光度法测定维生素C实验报告
紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量一、实验目的1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法；2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。
二、实验原理维生素C（VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。
维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H+,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。
维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。
在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。
具有π电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其摩尔吸收系数k可达104-106数量级。
利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。
根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH 5～6之间稳定）中，在245 nm 波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。
三、实验仪器及试剂实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5 ml）、烧杯、紫外分光光度计实验用品：98%浓硫酸（分析纯，1.84 g/ml）、维生素C对照品系以原料药经105 ℃干燥至恒重（含量为99.7 %）、维生素C片（2片）、去离子水四、实验步骤1. 0.005 mol·L-1硫酸溶液的配制用0.5 ml移液管移取0.27 ml 98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌，冷却至室温后移入1000 ml容量瓶，稀释至刻度，待用。
2. 0.5 g·L-1对照品溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的维生素C对照品50 mg置100 ml量瓶中，加0.005 mol·L-1硫酸溶液制成0.5 g·L-1对照品溶液。
维生素C注射液的检查和含量测定
色谱柱: C18 (4.0mm，3. 9×150mm) 流动相: 0.1%草酸
流速: 0.6ml/ min 柱温: 25 ℃ 检测波长: 254nm 进样量: 10μL
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色谱法——薄层扫描法
实验原理：维生素C具有较强还原性, 可使蓝色染料2, 6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺, 而本身被 氧化成去氧抗坏血酸。 实验方法： 制备2, 6-二氯靛酚钠试纸 配制柠檬酸缓冲溶液(pH3.5) 确定扫描条件：维生素C 在290nm处有最大吸收, 420nm处无吸收, 故选择s=290nm, R=420nm, 双波长反射式锯齿扫描 线性实验：△A的积分值Y (峰面积)为纵坐标, 点样量 为横坐标X 样品的含量测定
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紫外分光光度法
优点：与碘量法相比，操作简便、快速、准确、稳定 性好。且本法专属性较好，每种还原物质以及多种药 物辅料存在时，对Vc的测定均无干扰。 缺点：仪器设备要求高。
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阻抑光度法
实验原理：在H2SO4-KBr介质中，维生素C对碘酸钾氧化 氨基苯磺酸黄的褪色反应有抑制作用，且抑制作用的强弱 与维生素C的含量之间呈良好的线性关系。 实验方法： 测定波长：528nm 试剂：氨基苯磺酸黄，KBr溶液，1mol/L H2SO4 ， 0.005%KIO3 反应温度与时间：75℃，3min
绘制标准曲线配制一系列浓度的维生素c对照品溶液0005moll硫酸溶液为溶剂以溶剂为空白在245nm波长处测定吸收度以浓度对吸收度作线性回归样品含量测定精密称取适量置100ml量瓶中加0005moll硫酸溶液适量超声5min使溶解再加0005moll硫酸溶液至刻度摇匀滤过精密量取续滤液20ml置100ml量瓶中加0005moll硫酸溶液至刻度摇匀245nm波长处测定吸收度wwwthemegallerycomlogo紫外分光光度法优点
维生素C的测定
维生素C的测定维生素C是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中，新奇的水果、蔬菜，特殊是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。
它是氧化还原酶之一，本身易被氧化，但在有些条件下又是一种抗氧化剂。
维生素C（还原型）纯品为白色无臭结晶，熔点190～192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。
在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定，维生素C开头氧化为脱氢型抗坏血酸（有生理作用）。
假如进一步水解则生成2，3-二酮古乐糖酸，失去生理作用。
依据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。
常用的测定方法有（1）2，6-二氯靛酚法（还原型VC）（2）2，4-二硝基苯肼法（总VC）（3）碘酸法（4）碘量法（5）荧光分光光度法一、2，6-二氯靛酚滴定法1、原理：还原型抗坏血酸还原染料2，6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消逝。
还原型抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。
在没有杂质干扰时，肯定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
2、试剂⑴ 1%草酸溶液：称取10g草酸，加水至1000ml；⑵ 2%草酸溶液：称20g草酸，加水至1000ml；⑶ 维生素C标准液：精确称20mgVC溶于1%草酸中，并稀释至100ml，吸5ml于50ml容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有0.02mgVC；⑷ 0.02%2，6-二氯靛酚溶液：称取2，6-二氯靛酚50mg，溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至250ml，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。
标定一：吸标液（VC）5ml于三角瓶加6%KI溶液0.5ml加1%淀粉3滴用0.001N KIO3标液滴定到淡兰色。
计算：抗坏血酸浓度（mg/ml）= （V1 0.088）/ V2V1 - 滴定时消耗0.001N KIO3标液的体积（ml）V2 -维生素C重量（g）0.088 -1ml0.001N KIO3标液维生素C的量（mg/ml）标定二：吸5ml已知浓度V C标液加5ml1%草酸用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点计算：每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度（T）T= （C V1）/ V2C - 维生素C的浓度（mg/ml）V1 -维生素C的体积（ml）V2 -消耗2，6-二氯靛酚的体积（ml）⑸ 0.001N KIO3标液：吸0.1N KIO3溶液5ml于500ml容量瓶内加水至刻度，每毫升相当于VC0.008mg；⑹ 0.5%淀粉溶液；⑺ 6%KI溶液；3、操作方法⑴ 提取：称样50g加2%草酸100ml到入捣碎机中处理过滤颜色若深可加白陶土⑵ 滴定：吸5ml样液于三角瓶用染料滴定至粉红色15秒内不褪色计算：VC（mg/100g）=（V T）/ W 100V -消耗染料体积（ml）T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数W- 滴定时全部滤液中含有样品的克数4、留意事项⑴ 全部试剂的配制最好都用重蒸馏水；⑵ 滴定时，可同时吸二个样品。
抗坏血酸的测定方法
抗坏血酸（Vc）的测定方法测定Vc的国标方法中，荧光法为测定食物中Vc含量的第一标准方法，2、4－二硝基苯肼法作为第二法。
一、荧光法1．原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹喔啉（quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。
脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。
本方法的最小检出限为0.022 g/ml。
2．适用范围GB12392-90 本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3．仪器3．1．实验室常用设备。
3．2．荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。
3．3．打碎机。
4．试剂本实验用水均为蒸馏水，试剂不加说明均为分析纯试剂。
（1）偏磷酸－乙酸液：称取15g偏磷酸，加入40ml冰乙酸及250ml水，搅拌，放置过夜使之逐渐溶解，加水至500ml。
4℃冰箱可保存7～10天。
（2）0.15 mol/L硫酸：取10ml硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200ml。
（3）偏磷酸－乙酸－硫酸液：以0.15mol/L硫酸液为稀释液，其余同4.1.配制。
（4）50％乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH3COONa·3H2O），加水至1000ml。
（5）硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100ml乙酸钠溶液（4.4）中。
临用前配制。
（6）邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。
（7）0.04%百里酚蓝指示剂溶液：称取0.1g百里酚蓝，加0.02mol/L氢氧化钠溶液，在玻璃研钵中研磨至溶解，氢氧化钠的用量约为10.75ml，磨溶后用水稀释至250ml。
变色范围：pH=1.2 红色pH=2.8 黄色pH＞4.0 兰色（8）活性炭的活化：加200g炭粉于1L 1+9盐酸中，加热回流1~2h，过滤，用水洗至滤液中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥，备用。
(完整版)VC标准曲线
药用的维生素c是人工合成的。
合成的方法有多种。
一般是由葡萄糖制成D-山梨醇，再用黑乙酸菌（Acetobacter Suboxydans)氧化发酵，生成L-山梨糖，经缩合生成二丙酮-L-山梨糖，再氧化生成二丙酮-2-酮-L-葡萄糖酸，然后酯化成2-酮-L-葡萄糖酸甲酯，与甲醇钠作用生成抗坏血酸钠，与盐酸加热制成抗坏血酸。
所以它指的就是你的Vc含量，严格意义上来讲是L-抗坏血酸。
通常抗坏血酸总量被认为是维生素C( V itam in C, VC )和其氧化形式二十二碳六烯酸( docosahexaeno ic _ac id, DHA ) 的总和2,4-二硝基苯肼比色法8原理总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸,样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比,进行比色定量。
9试剂本实验用水均为蒸馏水。
试剂纯度均为分析纯。
9.1 4.5mol/L硫酸: 谨慎地加硫酸(比重1.84)250mL于700mL水中,冷却后用水稀释至1000mL。
9.285%硫酸：谨慎地加900mL硫酸(比重1.84)于100mL水中。
9.32%2,4-二硝基苯肼溶液:溶解2g2,4-二硝基苯肼于100mL4.5mol/L硫酸内,过滤。
不用时存于冰箱内,每次用前必须过滤。
9.42%草酸溶液:溶解20g草酸(H2C2O2)于700mL水中,稀释至1000mL。
9.51%草酸溶液:稀释500mL2%草酸溶液到1000mL。
9.61%硫脲溶液:溶解5g硫脲于500mL1%草酸溶液中。
9.72%硫脲溶液:溶解10g硫脲于500mL1%草酸溶液中。
9.81mol/L盐酸:取100ml盐酸,加入水中,并稀释至1200mL。
9.9 抗坏血酸标准溶液:溶解100mg纯抗坏血酸于100 mL1%草酸中,配成每毫升相当于1mg 抗坏血酸。
9.10 活性炭:将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中,回流1～2h,过滤,用水洗数次,至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110℃烘箱中烘干。
Vc含量测定
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载Vc含量测定地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容方法一、 2.6－二氯酚靛酚滴定法二、原理Vc又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料 2.6－二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中， 2.6－二氯酚靛酚钠离子呈红色，被还原后变为无色。
三、实验器材锥形瓶、微量滴定管、研钵、容量瓶、吸量管等。
四、实验试剂2% 草酸溶液：取2g草酸溶于100ml蒸馏水中。
1% 草酸溶液：取1g草酸溶于100ml蒸馏水中。
标准抗坏血酸溶液（ 0.1mg/ml ）：精确称取10mg抗坏血酸，以1%草酸溶解并定容到100ml。
储存到棕色玻璃瓶中，最好临用前配制。
0.001N 2.6－二氯酚靛酚钠溶液：将50mg2.6－二氯酚靛酚钠溶解于约200ml含有52mg NaHCO3的热蒸馏水中，冷却后定容到250ml，储存在棕色瓶中，保存在低温下。
2.6－二氯酚靛酚钠不稳定，必须在一周内用完。
用前必须标定到1ml2.6－二氯酚靛酚钠相当于0.088mg抗坏血酸。
五、操作1、植物样品Vc提取液的制备：用电子天平准确地称取辣椒 0.5 g ，样品必须预先用温水洗去泥土，并在空气中风干，加25ml 2%草酸溶液匀浆，并将匀浆液转入50ml离心管中；用少量2%草酸溶液冲洗匀浆杯，一起转入离心管中进行离心（ 5min,4500rp ），将上清液移入 50ml 容量瓶，用少量2%草酸冲洗沉淀并离心保留上清，如此反复抽提 3 次，最后用 2% 草酸定容到50ml。
2、测定：每次量取 5ml提取液放入小锥形瓶内进行滴定。
用微量滴定管以 2.6－二氯酚靛酚钠溶液滴定到提取液呈现淡粉红色，并在 15～30 秒内不褪色，滴定过程必须迅速，不要超过 2 分钟。
食品中维生素C含量的测定
⾷品中维⽣素C含量的测定⾷品中维⽣素C的测定摘要：维⽣素C（抗坏⾎酸）是⼀种⼰糖醛基酸，有四种异构体，其中L-（+）-抗坏⾎酸的活性最强，极易被氧化。
它在细胞氧化、胶原蛋⽩的形成、铁离⼦由⾎浆到组织器官中的转运、肌体免疫及抗体形成中起着重要的作⽤。
测定维⽣素C常⽤的⽅法有2，6-⼆氯靛粉滴定法、2，4-⼆硝基苯肼法、荧光法及⾼效液相⾊谱法、极谱法等。
2，6-⼆氯靛酚滴定法测定的是还原型抗坏⾎酸，该法简便、快速，但易受其他还原物质⼲扰、对深⾊样液难辨终点；荧光法、⾼效液相⾊谱法及极谱法对实验仪器和技术的要求⽐较⾼，综合各⽅⾯本⽂采⽤2，4-⼆硝基苯肼法，利⽤分光光度计分别测定橙汁、猕猴桃汁、梨汁的汁，再根据标准曲线计算其维⽣素C含量。
关键词：维⽣素C、2，4-⼆硝基苯肼法、分光光度计、标准曲线前⾔：本⽂介绍了靛粉滴定法、⾼效液相⾊谱法及2，4-⼆硝基苯肼法这三种维⽣素C含量的测定⽅法，通过分析⽐较并结合实验室的设备条件及对操作技术的要求，采⽤2，4-⼆硝基苯肼法。
先测总抗坏⾎酸，总抗坏⾎酸包括还原型、脱氢型和⼆酮古乐糖酸型。
此法是将样品的还原型抗坏⾎酸氧化为脱氢型抗坏⾎酸，然后与2，4-⼆硝基苯肼作⽤，⽣成红⾊的脎。
脎的量与总抗坏⾎酸含量成正⽐，将红⾊脎溶于硫酸后进⾏⽐⾊，由标准曲线计算样品中总Vc。
⽤酸处理过的活性炭把还原型的抗坏⾎酸氧化为脱氢型抗坏⾎酸，再继续氧化为⼆酮古乐糖酸。
⼆酮古乐糖酸与2，4-⼆硝基苯肼偶联⽣成红⾊的脎，其成⾊的强度与⼆酮古乐糖酸浓度呈正⽐，可以⽐⾊定量。
由于橙汁中的Vc含量较⾼，所以所测样品为1：10样液；梨的Vc含量较低，所以测其原液；⽽猕猴桃中Vc含量也较⾼，为了实验的完整性及对照性，测定猕猴桃原液及1：10样液。
实验⽅案：⽅案⼀：2，6-⼆氯靛酚滴定法⽔洗⼲净整株新鲜蔬菜或整个新鲜⽔果，⽤纱布或吸⽔纸吸⼲表⾯⽔分。
然后称取20g，加⼊20ml 2%草酸，⽤研钵研磨，四层纱布过滤，滤液备⽤。
紫外光度法测定维生素C实验报告
紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量一、实验目的1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法；2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。
二、实验原理维生素C（VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。
维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H+,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。
维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。
在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。
具有π电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其摩尔吸收系数k可达104-106数量级。
利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。
根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH 5～6之间稳定）中，在245 nm 波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。
三、实验仪器及试剂实验仪器：容量瓶（100 ml、1000 ml）、移液管（0.5 ml、5 ml）、烧杯、紫外分光光度计实验用品：98%浓硫酸（分析纯，1.84 g/ml）、维生素C对照品系以原料药经105 ℃干燥至恒重（含量为99.7 %）、维生素C片（2片）、去离子水四、实验步骤1. 0.005 mol·L-1硫酸溶液的配制用0.5 ml移液管移取0.27 ml 98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌，冷却至室温后移入1000 ml容量瓶，稀释至刻度，待用。
2. 0.5 g·L-1对照品溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的维生素C对照品50 mg置100 ml量瓶中，加0.005 mol·L-1硫酸溶液制成0.5 g·L-1对照品溶液。
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药用的维生素c是人工合成的。
合成的方法有多种。
一般是由葡萄糖制成D-山梨醇，再用黑乙酸菌（Acetobacter Suboxydans)氧化发酵，生成L-山梨糖，经缩合生成二丙酮-L-山梨糖，再氧化生成二丙酮-2-酮-L-葡萄糖酸，然后酯化成2-酮-L-葡萄糖酸甲酯，与甲醇钠作用生成抗坏血酸钠，与盐酸加热制成抗坏血酸。
所以它指的就是你的Vc含量，严格意义上来讲是L-抗坏血酸。
通常抗坏血酸总量被认为是维生素C( V itam in C, VC )和其氧化形式二十二碳六烯酸( docosahexaeno ic _ac id, DHA ) 的总和
2,4-二硝基苯肼比色法
8原理
总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸,样品中还原型抗坏血酸经活性炭
氧化为脱氢抗坏血酸,再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色脎,根据脎在硫酸溶液中的含量
与总抗坏血酸含量成正比,进行比色定量。
9试剂
本实验用水均为蒸馏水。
试剂纯度均为分析纯。
9.1 4.5mol/L硫酸: 谨慎地加硫酸(比重1.84)250mL于700mL水中,冷却后用水稀释至1000mL。
9.285%硫酸：谨慎地加900mL硫酸(比重1.84)于100mL水中。
9.32%2,4-二硝基苯肼溶液:溶解2g2,4-二硝基苯肼于100mL4.5mol/L硫酸内,过滤。
不用时存于冰箱内,每次用前必须过滤。
9.42%草酸溶液:溶解20g草酸(H2C2O2)于700mL水中,稀释至1000mL。
9.51%草酸溶液:稀释500mL2%草酸溶液到1000mL。
9.61%硫脲溶液:溶解5g硫脲于500mL1%草酸溶液中。
9.72%硫脲溶液:溶解10g硫脲于500mL1%草酸溶液中。
9.81mol/L盐酸:取100ml盐酸,加入水中,并稀释至1200mL。
9.9 抗坏血酸标准溶液:溶解100mg纯抗坏血酸于100 mL1%草酸中,配成每毫升相当于1mg 抗坏血酸。
9.10 活性炭:将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中,回流1～2h,过滤,用水洗数次,
至滤液中无铁离子(Fe3+)为止,然后置于110℃烘箱中烘干。
检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应。
将2%亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合,将上述
洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀。
10 仪器和设备
10.1 恒温箱：37 ±0.5℃。
10.2 可见-紫外分光光度计。
10.3 捣碎机。
11 操作步骤
11.1 样品的制备
全部实验过程应避光。
11.1.1鲜样的制备:称100g鲜样和100g2%草酸溶液,倒入捣碎机中打成匀浆,取10～40g
匀浆(含1～2mg抗坏血酸)倒入100mL容量瓶中,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀。
11.1.2 干样制备:称1～4g干样(含1～2mg抗坏血酸)放入乳钵内,加入1%草酸溶液磨成匀浆,倒入100mL容量瓶内,用1%草酸溶液稀释至刻度,混匀。
11.1.3将(11.1.1)和(11.1.2)液过滤,滤液备用。
不易过滤的样品可用离心机沉淀后,
倾出上清液,过滤,备用。
11.2 氧化处理：取25mL上述滤液,加入2g活性炭,振摇1min,过滤,弃去最初数毫升
滤液。
取10mL此氧化提取液,加入10mL2%硫脲溶液,混匀。
11.3呈色反应
11.3.1 于三个试管中各加入4mL稀释液(11.2)。
一个试管作为空白,在其余试管中加入
1.0mL2%2,4-二硝基苯肼溶液,将所有试管放入37±0.5℃恒温箱或水浴中,保温3h。
11.3.2 3h后取出,除空白管外,将所有试管放入冰水中。
空白管取出后使其冷到室温,
然后加入1.0mL2%2,4-二硝基苯肼溶液,在室温中放置10～15min后放入冰水内。
其余步骤同样品。
11.4 85%硫酸处理：当试管放入冰水后,向每一试管中加入5mL 85 %硫酸,滴加时间至
少需要1min,需边加边摇动试管。
将试管自冰水中取出,在室温放置30min后比色。
11.5 比色：用1cm比色杯,以空白液调零点,于490nm波长测吸光值。
11.6标准曲线绘制
11.6.1 加2g活性炭于50mL标准溶液中,摇动1min，过滤。
11.6.2 取10mL滤液放入500mL容量瓶中,加5.0g硫脲,用1%草酸溶液稀释至刻度,抗坏血酸浓度20μg/mL。
11.6.3取10、20、30、40、50mL稀释液,分别放入5个50mL容量瓶中,用1%硫脲溶液稀释至刻度,使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为4、8、12、16、20μg/mL。
11.6.4 按样品测定步骤形成脎并比色。
11.8.5 以吸光值为纵坐标,以抗坏血酸浓度(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线。
12计算
c•V100
X=━━━━━×F×━━━━ (2)
m 1000
式中：X─—样品中总抗坏血酸含量,mg/100g;
c─一由标准曲线查得或由回归方程算得“样品氧化液”中总抗坏血酸的浓度,μg/ mL；
V─—试样用1%草酸溶液定容的体积,mL；
F──样品氧化处理过程中的稀释倍数；
m──试样质量,g。
13 结果的允许差：同一实验室平行或重复测定相对偏差绝对值≤10%。
空白：0.062±0.0055
4μg/mL0.162
8μg/mL0.243
12μg/mL0.360
16μg/m L 0.446
20μg/mL0.532
线性方程：Y=0.0233X+0.0039
R2=0.9978
一、原理
还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉（4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP）反应形成红色螯合物。
在534nm波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。
二、仪器与用具
离心机；分光光度计；研钵；试管。
三、试剂
5%三氯乙酸（TCA）；无水乙醇溶液；0.4%磷酸－乙醇溶液；0.5%BP－乙醇溶液；0.03%FeCl3－乙醇溶液（请注意结晶水合物需要扣除结晶水含量，试剂浓度不在99%以上的需要换算成实际质量）
四、步骤
1. 制作标准曲线配制浓度为，1mg/L ，2mg/L，4mg/L，8mg/L，10mg/L，15mg/L，25mg/L 的AsA系列标准液。
25mg/L抗坏血酸：准确称取2.5mg抗坏血酸溶于水定容至100mL容量瓶。
15 mg/L抗坏血酸：从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取15mL定容至25mL
10mg/L抗坏血酸：从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取10mL定容至25mL
8mg/L抗坏血酸：从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取8mL定容至25mL
4mg/L抗坏血酸：从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取4mL定容至25mL
2 mg/L抗坏血酸：从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取2mL定容至25mL
1 mg/L抗坏血酸：从25mg/L抗坏血酸溶剂中吸取1mL定容至25mL
取各浓度标准液1.0ml于试管中，加入1.0ml 5%TCA、1.0ml乙醇摇匀，再依次加入0.5ml 0.4%H3PO4－乙醇、1.0ml 0.5%BP－乙醇、0.5ml 0.03%FeCl3－乙醇，总体积5.0ml。
将溶液置于30℃下反应90min，然后测定A534。
以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。
整个实验需要避光，如果当天做不完，试剂需要在冰箱冷藏室保存。
2. 提取取植物叶片1.0g，按1∶5（W/V）加入5%TCA研磨，4000r/min离心10min，上清液供测定。
在氮气保护中研磨且避光做不到，也可直接超声10min后取上清液测定，最好能过滤或离心。
3. 测定
（1）AsA测定取1.0ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。
AsA标准曲线：
-0.0895 1μg/mL
-0.058 2μg/mL
-0.0317 4μg/mL
0.0321 8μg/mL
0.0648 10μg/mL
0.1662 15μg/mL
0.3143 25μg/mL
Y=59.535X+5.899
R2=0.9971
第二个方法仅仅是试剂毒性较小，两者测定VC含量理论上应该没有什么差异。