不同氮源对2种微藻生长及总脂含量的影响
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离 的２ 藻— — 网状 空 星 藻 Ｃ ｅ ｓ ｕ ｅｉ ｌｔｍ 株 ｏ ｌ ｔ ｍ ｒｔ ｕａｕ ａｒ ｃ
在试 验 周期 内 ，每天 测定 培养 液 的 Ｏ ８、ｐ Ｄ６ ０ Ｈ 以及 色 素含 量 。Ｏ ８以 Ｔ 一８ ０紫外 可见 分光 光 Ｄ６ ０ ｕ １１ 度计 测定 ；Ｈ 以 ｐ ｃｎ ０ 防水 笔型 ｐ ｐ Ｈｓａ３ 型 Ｈ计测 定 ；
１５ 数据 分析 ．
生长状况最差 ；添加铵硝混合氮（ Ｈ Ｎ ３ Ｎ ４ Ｏ） 条件下 ， ２种 藻生长 速度 也都 快于铵 态 氮（ ４ １ ＮＨ Ｃ） 。２株微 藻 收获 时干质量如 表 １所示 ，２株 藻分别在 添加 Ｎ Ｎ ３ Ｎ ４１ ａ Ｏ 和 Ｈ Ｃ 的情况下获得了最高干质量（ 分别 为 （． ４ ． ）ｇＬ ０８４ ．３ ・一和 最低 干质 ０７ －０ ２ ０ ８ ・一和（．０ ００）ｇＬ － ） 量 （ 为（． ４ ．４ ｇＬ 分别 ０６ － ０） ＇ｊ和（． ４ ． ） ． ） ２０ ０５－ ０ ｇＬ 。 ００ ２
图 １ 不 同氮源 条件 下 ２种微 藻生 长 的生长 曲线
ａ ｒｔｕａｕ ｂ ｓ． ｅｉ ｌｔ ｐ Ｃ ｃ ｍ，
Ｐ（ 叶绿素 ａ＝ １ ．１ ｘ Ｄ６ — ．９ ｘ Ｄ６ ） ６５ ６ ９ Ｏ ６ ８ ６ ２ Ｏ ５ ５ ０ ２
Ｉｇ・ Ｌ ， ｘ ｍ
Ｐ（ 叶绿 素 ｂ＝ ７ ４ ６ —１ ．６ Ｄ６ ）２ ． ０５ ＯＤ ５ １ ８８ Ｏ ６ ４ ｘ ２ ２ ｘ ５
ｌｇ・ Ｌ一 ， ｘ ｍ
生态环境学 报 ２ １， １８：４ ９ຫໍສະໝຸດ Baidu３ ０２ ２ （） １２ —４ ３
Ｅｃ ｌ ｙ ａ ｄ ｏ ｏｇ ｎ Ｅｎｖｉｏ ｒ ｎｍ ｅ ａ ｉｎｃ ｓ ｎｔｌＳｃ ｅ ｅ
ｈｔ：ｗ ｗ．ｅｃ． ｍ ｔ ／ ｗ ｊ ｓｉ ｏ ｐ／ ｅ ｃ Ｅ ｍａｌｅｉ ｒ ｅｓｉ ｏ — ｉ ｄｔ ＠ｊｅｃ． ｍ ： ｏ ｃ
Ｐ（ 萝 卜 ＝ ｘ ４ 岭 ‘ 一。 胡 素）４ ＯＤ ８ ｍＬ ０ 培 养 完成 后 ，取 １ ０ ｍＬ 藻液 经 已烘干 称量 的
基 金项 目： 基础 研 究重 大项 目前 期 研究 专项 （ ０ ０ Ｂ１４ ０ ）国 家科 技支 撑计 划 （ ０ １ Ａ ４ ０ ）海 南 大学 植物 学 国家级 重点 学科 （ ７０ １ ２ １Ｃ ３４ ９ ； ２ １Ｂ Ｄ１Ｂ １ ； ０ １０ ）
２２ 不 同氮 源存在 下 ２株 藻培 养液 的 ｐ ． Ｈ变化
数 据 分 析 采 用 Ｓ Ｓ 软件 单 因素 方 差 分 析 Ａ （ＮＯ Ａ 中的 ｄｎａ Ａ Ｖ ） ｕｃｎ多重 比较法 ，绘 图采用 Ｅ ｃｌ ｘｅ 和 Ｏ ｉｉ ｒ ｎ软件 。 ｇ
不同氮源存在下 ２株藻培养液 的 ｐ Ｈ变化见 图 ２ 可知在培养期间 ２ ， 株微藻的 Ｎ Ｎ ３ 尿素组 ｐ ａＯ 、 Ｈ 波动均 较小 ，而两 株微 藻 的 ＮＨ ｃ 组 ｐ 则 自接种 ４ｌ Ｈ 时开始迅速下 降 ，最低 ｐ ３ ９ 出现 于 ｓ． Ｈ． ０ ｐ的 Ｎ ４ Ｏ 组第 １ 天 。根据生长状况及 ｐ ＨＮ ３ １ Ｈ变化 ，可 以推测 ｃ ｒ ｉ ｌ ｕ 和 ｓ． ｅｃ ａ ｍ ｔｕ ｔ ｐ的最佳生长 ｐ Ｈ可能
为生物柴油的 良好来源 。 关键词 ：氮源 ；网状空星藻 ；栅藻 ；生物量 ；单 位体 积总脂产量
中 图 分 类 号 ：Ｑ ９ ９ ７ Ｓ９ ７３ ４ ． ； １ ． ２ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １７ ．９ ６（ ０ ２ ８１２ －５ ６４５ ０ ２ １ ）０ —４ ９０
不 同氮源对 ２种微藻 生长及 总脂 含量 的影 响
刘平 怀 ，郝 宗娣 ，杨 勋 ，张森 ，时杰
热带 作物 种 质资 源保 护与 开发 利用 教 育部重 点 实验 室 ，海南 海 口 ５０ ２ ７２８
摘 要 ： 用一 次培养的方式研究硝态氮（ ＮＯ３、 采 Ｎａ ） 氨态 氮（ ｃ） 有机氮（ ＮＨ４ １ 、 尿素） 及硝铵混合氮 （ ４ ３ 氮浓 度 １． ｍｍｏ‘ ＮＨ ＮＯ ） （ ７６ ｌ ） Ｌ
＿
收 稿 日期 ：２ １—６２ ０２０—５
生态环境学报
第 ２ 卷第 ８ ２ １ 年 ８ ） １ 期（ ０ ２ 月
０４ ｍ滤 膜 抽滤 ， 于 ８ ℃烘箱 烘至 恒质量 ， ． ｕ ５ 置 ０ 测 定 最终 干质 量 ，重 复 ３次 。
１ ． 总脂含 量 的测 定 ．２ ４
参照许瑾Ｌ ８ 】 等的方法进行总脂含量测定 （ 略有 改进 ） ：培养结束时离心收获藻体后冻干 、研磨 ， 准 确称 取 ０２ｇ 右 藻粉 ， 于具塞 玻璃 离心 管 中 ， ． 左 置 加 入 ２ ｍＬ二 甲基 亚砜 甲醇 （ ０ １％，ｗｖ）溶液 ， ５ ℃水浴超声 １ ｉ ，转入冰水浴 中继续超声 ０ ５ ｍｎ后 ３ｍ ｎ ０ ｉ。离心收集上清液 ，余下藻泥加入乙醚正己 烷混合溶剂 （ ｌ ／ ） １： ，ＦＶ 并使用磁力搅拌器 ４ 下 ￣ Ｃ 搅拌至藻泥灰白，合并上清液 ， 加入蒸馏水调节上 清体积比例为甲醇 ：乙醚 ： 正己烷 ：水＝ １： １： １： １后 静置 过夜 ，取 上层 置于 已称重 的离 心管 中 ，氮 气吹干后置于 ５ ℃烘箱烘至恒质量后称质量。重 ０ 复 ３次 。
状 光 生物 反应 器进 行一 次性 培养 。培养 期 间温 度控
制在（６２ ２＋ １℃，单侧 日 光灯提供 ２ ４ ｈ连续光照 ， 光照强度 １０ ０・ ２・，持续通人无菌空气 。 ５ ｍ ｌ ｒｓ ｎ
持续 发 展能 源 ，但偏 高 的成 本成 为 限制微 藻 生物 柴 １３ 试 验设 计 ． 油产业化的主要瓶颈ｌ ， ４ 因此通过高脂微藻的筛选 、 ＿ 以淡 水 ＢＧ１ 培养 基 为基 础 ，选取 ４种氮 源 ， １ 培 养 条 件 的优 化 来 提 升 单 位 体 积 微 藻 油脂 的 产量 来 降低成 本是 十 分必要 的Ｉ Ｊ ｏ。 通 过 改 变 培 养 基 化 学 成 分 的方 法 来 控 制 微 藻 的新 陈代谢 ，可以提高微藻单位体积油脂产量 。 Ｊ 氮是 微 藻生 长所 必需 的 基本元 素 之一 ，是 构 成藻 体 分 别 为 硝 氮（ Ｎ ） Ｎａ Ｏ３、氨 氮（ Ｈ４ １、有 机 氮（ 素） Ｎ Ｃ） 尿 以及 硝铵 混合 氮 （ ４ ） ＮＨＮＯ３Ｎ浓 度为 １．ｍｍｏ‘ 。 ， ７６ ｌ Ｌ 试 验 前对 藻种 进行 驯化 培 养 ，以使 之适 应 不 同氮源 环境 。 始 接种 ＯＤ６ 约 为 ０ ５ 培养 时 间约 ２周 。 初 ８ ｏ ． ， ０
微 藻是普 遍存 在 于水 体 、湿 地 、滩涂 等 环境 中 的单 细胞 藻类 ，其每 年光 合作 用 固定 的二 氧化 碳 占
全 球 二 氧化碳 固定量 的４ ％以上 ，是 能量 转化 和碳 ０
体 ，由海南 大学 材料 与化 工学 院 生物 工程 实验 室保 藏 。试 验 用药 品均 为 国产分 析纯 （ 广试） 。
不同氮源对于 ｃ ｒ ｉ ｌ ｕ 色素的积累并无 ｅ ｃ ａ ｍ ｔｕ ｔ 明显影 响 ， 组在 ５ｄ均 开始进 入平 稳期 ， ＮＨ Ｃ 各 而 ４１ 组的叶绿素 ａ自 ７ｄ 开始出现明显下降 ，一直持续
２４ ． ２２ ．
２
１８ ． １６ ．
盆
、 。
盆 １４ ．
作 者简 介 ：刘平 怀 （ ９７年 生 ） １６ ，男 ，教授 ，硕 士 。Ｅｍａｌｗｌｈ １３ｃｒ － ｉｔ ｐ＠ ６． ｎ ： ｏ 通信 作 者 ：郝 宗 娣 （ ９ ９年生 ） １８ ，女 ，硕 士研 究 生 。Ｅｍａ ： ｌｎ ｈｏ ｏｍ ｉｃｒ — ｉ ｉａ ｄ ａ＠ｈｔ ａｌｏ ｌｓ ．ｎ
１４ 测 定方 法 ．
１４１ 生 长 状 况 测 定 ．．
内蛋 白质 、 核酸及色素的重要元素，对于藻类的生 长发 育 有着 重要 的作 用 Ｌ 。微 藻可 以利 用 的氮源 范 ｌ …
围较 宽 ，如 无机 氮源 （ 氨态 氮 、硝态 氮 ） 机 氮 、有 源 （ 素Ｉ 尿 ｌ 、酵 母 膏 、氨 基 酸等 ） 源类 型对 微 。氮 藻 的生 长及 油脂 积 累有着 较 为显 著 的影 响【 且 不 ｌ ， 同的藻 种对 氮源 的适 应性 有 差异 ［－］ １１。本文 以新 分 ３５
凸
０
１２ ． Ｏ １ ０８ ． ０６ ．
０４ ． ０． ２ Ｏ
ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １ １ １ ０ １ ２ ｔ ／ ｄ
０ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １ １ １ ０ １ ２ ｔ ／ ｄ
１２ 培养 条 件 ． 藻种 均利 用 实验室 自行 设计 的直径 ８０ｃ 柱 ． ｍ
元素循环中的重要载体【。微藻具有光合作用效率 １ ］ 高 、环境 适应 能力 强 、生长 周期 短 、生物 量 高等特 点 ，是生 产生 物质 能 的潜在 资 源 ，因此成 为 目前 国 内外 的研 究 热点 【 Ｊ微 藻生 物柴 油是 公认 的理想 可 ２。
色素测定 ： 取一定量的藻液 ， 离心弃去上清 ，加入 等体积 甲醇 ５ ０℃超声提取 ２ ｉ，离心测定上清 ０ｍ ｎ 液 的 Ｏ ６、Ｏ ５和 ＯＤ４ ，色素 含量 由下 式计 算 Ｄ６ ５ Ｄ６ ２ ８ ｏ
［６ １］
：
及栅 藻Ｓ ｅｅｅｕ ｓｓ． 象 ，研 究不 同 氮源对 它 ｃｎｄｓｍ ｐ为对
们的生长及总脂含量 的影响，以期为开拓富油微藻 种质 和加强油脂积累提供实验依据 。 １ 材 料 和 方 法 １１ 藻 种来 源 ． 试 验藻 种 网状空 星 藻 Ｃ ｅｉ ｌｔｍ 及栅 藻 ｒｔｕａｕ ｃ ｓ． 别 分 离 自海 口五 公 祠 和金 牛岭 公 园 的淡 水 水 ｐ分
和 ＮＨ４ １情 况下 分 别 获 得 了最 高 的 生 物 量（ ．２ ００ ）ｇＬ Ｃ （ ７ 士 ．８ ・。和 （． ￣ ． ）ｇＬ ０ Ｏ８ ００ ０ ３ － ）和最 高 总 脂 含 量 （ ３ ．５ １ ２％和 （８３￣ ． ） ３
（０２ ￣ ． ） ｏ最终二者在添加 Ｎａ ３ ． ３１ ％ ４ ３ ＮＯ３ 的情况 下单 位体积总脂产量最高 ，分别 为 １９２ ‘。 １０７ ‘～，均 可作 ９ ．６ｍｇＬ 和 ９ ．６ｍｇＬ
对新分 离的两株热带淡水微藻——网状空星藻 Ｃ ｅ ｓ ｕ ｔ ｕａｕ ｏ ｌ ｔ ｍ ｒ ｉ ｌｔｍ及栅藻 Ｓｅ ｅ ｅｕ ｓ ｐ生长情况及 总脂含 量的影响。结 ａ ｒ ｅｃ ｃｎｄｓ ｍ ． ｓ
果 表明 ， 株微 藻在 不同氮源影响下生长状况不 同， ２ 并且造成最终的干质量 、 总脂含量也有较为 明显 的差异 。 ２种藻添加 Ｎ ＮＯ ａ ３
８ ６ ４ ２ １ ８ ６ ４ ２ Ｏ
表 １ 不 同氮 源条 件下 ２株 微藻 的最 终干 质量
Ｔ ｂ ｅ １Ｂｉ ｍａ ｓｏ ｗｏ ｓｒ ｉ ｔ ＮＯ３ ＮＨ４ ， ｒ ａａ ｄＮＨ４ ａ ｌ ｏ ｓ ｆｔ ｔ ｎｓ ｈＮａ ａ ｗｉ ， ＣＩ Ｒ ｅ ｎ ＮＯ３
分 别在 ８ ～ ０和 ８５ ９５ ． １ ５ ． ．。 ～
２ 结 果
２１ 不 同氮源对 ２株 微藻 生长 的影 响 ．
２３ 不 同氮 源对 ２株 微 藻色 素积 累的影 响 ．
不同氮源条件下 ２ 种微藻生长的生长曲线见图 １ ，由图可 知 ，２株 藻均 在添 加硝 态氮 （ａ ３的情 Ｎ ＮＯ） 况下生长状况最佳 ， 而在添加铵态氮 Ｈ ｃ） ４１ 条件下
在试 验 周期 内 ，每天 测定 培养 液 的 Ｏ ８、ｐ Ｄ６ ０ Ｈ 以及 色 素含 量 。Ｏ ８以 Ｔ 一８ ０紫外 可见 分光 光 Ｄ６ ０ ｕ １１ 度计 测定 ；Ｈ 以 ｐ ｃｎ ０ 防水 笔型 ｐ ｐ Ｈｓａ３ 型 Ｈ计测 定 ；
１５ 数据 分析 ．
生长状况最差 ；添加铵硝混合氮（ Ｈ Ｎ ３ Ｎ ４ Ｏ） 条件下 ， ２种 藻生长 速度 也都 快于铵 态 氮（ ４ １ ＮＨ Ｃ） 。２株微 藻 收获 时干质量如 表 １所示 ，２株 藻分别在 添加 Ｎ Ｎ ３ Ｎ ４１ ａ Ｏ 和 Ｈ Ｃ 的情况下获得了最高干质量（ 分别 为 （． ４ ． ）ｇＬ ０８４ ．３ ・一和 最低 干质 ０７ －０ ２ ０ ８ ・一和（．０ ００）ｇＬ － ） 量 （ 为（． ４ ．４ ｇＬ 分别 ０６ － ０） ＇ｊ和（． ４ ． ） ． ） ２０ ０５－ ０ ｇＬ 。 ００ ２
图 １ 不 同氮源 条件 下 ２种微 藻生 长 的生长 曲线
ａ ｒｔｕａｕ ｂ ｓ． ｅｉ ｌｔ ｐ Ｃ ｃ ｍ，
Ｐ（ 叶绿素 ａ＝ １ ．１ ｘ Ｄ６ — ．９ ｘ Ｄ６ ） ６５ ６ ９ Ｏ ６ ８ ６ ２ Ｏ ５ ５ ０ ２
Ｉｇ・ Ｌ ， ｘ ｍ
Ｐ（ 叶绿 素 ｂ＝ ７ ４ ６ —１ ．６ Ｄ６ ）２ ． ０５ ＯＤ ５ １ ８８ Ｏ ６ ４ ｘ ２ ２ ｘ ５
ｌｇ・ Ｌ一 ， ｘ ｍ
生态环境学 报 ２ １， １８：４ ９ຫໍສະໝຸດ Baidu３ ０２ ２ （） １２ —４ ３
Ｅｃ ｌ ｙ ａ ｄ ｏ ｏｇ ｎ Ｅｎｖｉｏ ｒ ｎｍ ｅ ａ ｉｎｃ ｓ ｎｔｌＳｃ ｅ ｅ
ｈｔ：ｗ ｗ．ｅｃ． ｍ ｔ ／ ｗ ｊ ｓｉ ｏ ｐ／ ｅ ｃ Ｅ ｍａｌｅｉ ｒ ｅｓｉ ｏ — ｉ ｄｔ ＠ｊｅｃ． ｍ ： ｏ ｃ
Ｐ（ 萝 卜 ＝ ｘ ４ 岭 ‘ 一。 胡 素）４ ＯＤ ８ ｍＬ ０ 培 养 完成 后 ，取 １ ０ ｍＬ 藻液 经 已烘干 称量 的
基 金项 目： 基础 研 究重 大项 目前 期 研究 专项 （ ０ ０ Ｂ１４ ０ ）国 家科 技支 撑计 划 （ ０ １ Ａ ４ ０ ）海 南 大学 植物 学 国家级 重点 学科 （ ７０ １ ２ １Ｃ ３４ ９ ； ２ １Ｂ Ｄ１Ｂ １ ； ０ １０ ）
２２ 不 同氮 源存在 下 ２株 藻培 养液 的 ｐ ． Ｈ变化
数 据 分 析 采 用 Ｓ Ｓ 软件 单 因素 方 差 分 析 Ａ （ＮＯ Ａ 中的 ｄｎａ Ａ Ｖ ） ｕｃｎ多重 比较法 ，绘 图采用 Ｅ ｃｌ ｘｅ 和 Ｏ ｉｉ ｒ ｎ软件 。 ｇ
不同氮源存在下 ２株藻培养液 的 ｐ Ｈ变化见 图 ２ 可知在培养期间 ２ ， 株微藻的 Ｎ Ｎ ３ 尿素组 ｐ ａＯ 、 Ｈ 波动均 较小 ，而两 株微 藻 的 ＮＨ ｃ 组 ｐ 则 自接种 ４ｌ Ｈ 时开始迅速下 降 ，最低 ｐ ３ ９ 出现 于 ｓ． Ｈ． ０ ｐ的 Ｎ ４ Ｏ 组第 １ 天 。根据生长状况及 ｐ ＨＮ ３ １ Ｈ变化 ，可 以推测 ｃ ｒ ｉ ｌ ｕ 和 ｓ． ｅｃ ａ ｍ ｔｕ ｔ ｐ的最佳生长 ｐ Ｈ可能
为生物柴油的 良好来源 。 关键词 ：氮源 ；网状空星藻 ；栅藻 ；生物量 ；单 位体 积总脂产量
中 图 分 类 号 ：Ｑ ９ ９ ７ Ｓ９ ７３ ４ ． ； １ ． ２ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １７ ．９ ６（ ０ ２ ８１２ －５ ６４５ ０ ２ １ ）０ —４ ９０
不 同氮源对 ２种微藻 生长及 总脂 含量 的影 响
刘平 怀 ，郝 宗娣 ，杨 勋 ，张森 ，时杰
热带 作物 种 质资 源保 护与 开发 利用 教 育部重 点 实验 室 ，海南 海 口 ５０ ２ ７２８
摘 要 ： 用一 次培养的方式研究硝态氮（ ＮＯ３、 采 Ｎａ ） 氨态 氮（ ｃ） 有机氮（ ＮＨ４ １ 、 尿素） 及硝铵混合氮 （ ４ ３ 氮浓 度 １． ｍｍｏ‘ ＮＨ ＮＯ ） （ ７６ ｌ ） Ｌ
＿
收 稿 日期 ：２ １—６２ ０２０—５
生态环境学报
第 ２ 卷第 ８ ２ １ 年 ８ ） １ 期（ ０ ２ 月
０４ ｍ滤 膜 抽滤 ， 于 ８ ℃烘箱 烘至 恒质量 ， ． ｕ ５ 置 ０ 测 定 最终 干质 量 ，重 复 ３次 。
１ ． 总脂含 量 的测 定 ．２ ４
参照许瑾Ｌ ８ 】 等的方法进行总脂含量测定 （ 略有 改进 ） ：培养结束时离心收获藻体后冻干 、研磨 ， 准 确称 取 ０２ｇ 右 藻粉 ， 于具塞 玻璃 离心 管 中 ， ． 左 置 加 入 ２ ｍＬ二 甲基 亚砜 甲醇 （ ０ １％，ｗｖ）溶液 ， ５ ℃水浴超声 １ ｉ ，转入冰水浴 中继续超声 ０ ５ ｍｎ后 ３ｍ ｎ ０ ｉ。离心收集上清液 ，余下藻泥加入乙醚正己 烷混合溶剂 （ ｌ ／ ） １： ，ＦＶ 并使用磁力搅拌器 ４ 下 ￣ Ｃ 搅拌至藻泥灰白，合并上清液 ， 加入蒸馏水调节上 清体积比例为甲醇 ：乙醚 ： 正己烷 ：水＝ １： １： １： １后 静置 过夜 ，取 上层 置于 已称重 的离 心管 中 ，氮 气吹干后置于 ５ ℃烘箱烘至恒质量后称质量。重 ０ 复 ３次 。
状 光 生物 反应 器进 行一 次性 培养 。培养 期 间温 度控
制在（６２ ２＋ １℃，单侧 日 光灯提供 ２ ４ ｈ连续光照 ， 光照强度 １０ ０・ ２・，持续通人无菌空气 。 ５ ｍ ｌ ｒｓ ｎ
持续 发 展能 源 ，但偏 高 的成 本成 为 限制微 藻 生物 柴 １３ 试 验设 计 ． 油产业化的主要瓶颈ｌ ， ４ 因此通过高脂微藻的筛选 、 ＿ 以淡 水 ＢＧ１ 培养 基 为基 础 ，选取 ４种氮 源 ， １ 培 养 条 件 的优 化 来 提 升 单 位 体 积 微 藻 油脂 的 产量 来 降低成 本是 十 分必要 的Ｉ Ｊ ｏ。 通 过 改 变 培 养 基 化 学 成 分 的方 法 来 控 制 微 藻 的新 陈代谢 ，可以提高微藻单位体积油脂产量 。 Ｊ 氮是 微 藻生 长所 必需 的 基本元 素 之一 ，是 构 成藻 体 分 别 为 硝 氮（ Ｎ ） Ｎａ Ｏ３、氨 氮（ Ｈ４ １、有 机 氮（ 素） Ｎ Ｃ） 尿 以及 硝铵 混合 氮 （ ４ ） ＮＨＮＯ３Ｎ浓 度为 １．ｍｍｏ‘ 。 ， ７６ ｌ Ｌ 试 验 前对 藻种 进行 驯化 培 养 ，以使 之适 应 不 同氮源 环境 。 始 接种 ＯＤ６ 约 为 ０ ５ 培养 时 间约 ２周 。 初 ８ ｏ ． ， ０
微 藻是普 遍存 在 于水 体 、湿 地 、滩涂 等 环境 中 的单 细胞 藻类 ，其每 年光 合作 用 固定 的二 氧化 碳 占
全 球 二 氧化碳 固定量 的４ ％以上 ，是 能量 转化 和碳 ０
体 ，由海南 大学 材料 与化 工学 院 生物 工程 实验 室保 藏 。试 验 用药 品均 为 国产分 析纯 （ 广试） 。
不同氮源对于 ｃ ｒ ｉ ｌ ｕ 色素的积累并无 ｅ ｃ ａ ｍ ｔｕ ｔ 明显影 响 ， 组在 ５ｄ均 开始进 入平 稳期 ， ＮＨ Ｃ 各 而 ４１ 组的叶绿素 ａ自 ７ｄ 开始出现明显下降 ，一直持续
２４ ． ２２ ．
２
１８ ． １６ ．
盆
、 。
盆 １４ ．
作 者简 介 ：刘平 怀 （ ９７年 生 ） １６ ，男 ，教授 ，硕 士 。Ｅｍａｌｗｌｈ １３ｃｒ － ｉｔ ｐ＠ ６． ｎ ： ｏ 通信 作 者 ：郝 宗 娣 （ ９ ９年生 ） １８ ，女 ，硕 士研 究 生 。Ｅｍａ ： ｌｎ ｈｏ ｏｍ ｉｃｒ — ｉ ｉａ ｄ ａ＠ｈｔ ａｌｏ ｌｓ ．ｎ
１４ 测 定方 法 ．
１４１ 生 长 状 况 测 定 ．．
内蛋 白质 、 核酸及色素的重要元素，对于藻类的生 长发 育 有着 重要 的作 用 Ｌ 。微 藻可 以利 用 的氮源 范 ｌ …
围较 宽 ，如 无机 氮源 （ 氨态 氮 、硝态 氮 ） 机 氮 、有 源 （ 素Ｉ 尿 ｌ 、酵 母 膏 、氨 基 酸等 ） 源类 型对 微 。氮 藻 的生 长及 油脂 积 累有着 较 为显 著 的影 响【 且 不 ｌ ， 同的藻 种对 氮源 的适 应性 有 差异 ［－］ １１。本文 以新 分 ３５
凸
０
１２ ． Ｏ １ ０８ ． ０６ ．
０４ ． ０． ２ Ｏ
ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １ １ １ ０ １ ２ ｔ ／ ｄ
０ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １ １ １ ０ １ ２ ｔ ／ ｄ
１２ 培养 条 件 ． 藻种 均利 用 实验室 自行 设计 的直径 ８０ｃ 柱 ． ｍ
元素循环中的重要载体【。微藻具有光合作用效率 １ ］ 高 、环境 适应 能力 强 、生长 周期 短 、生物 量 高等特 点 ，是生 产生 物质 能 的潜在 资 源 ，因此成 为 目前 国 内外 的研 究 热点 【 Ｊ微 藻生 物柴 油是 公认 的理想 可 ２。
色素测定 ： 取一定量的藻液 ， 离心弃去上清 ，加入 等体积 甲醇 ５ ０℃超声提取 ２ ｉ，离心测定上清 ０ｍ ｎ 液 的 Ｏ ６、Ｏ ５和 ＯＤ４ ，色素 含量 由下 式计 算 Ｄ６ ５ Ｄ６ ２ ８ ｏ
［６ １］
：
及栅 藻Ｓ ｅｅｅｕ ｓｓ． 象 ，研 究不 同 氮源对 它 ｃｎｄｓｍ ｐ为对
们的生长及总脂含量 的影响，以期为开拓富油微藻 种质 和加强油脂积累提供实验依据 。 １ 材 料 和 方 法 １１ 藻 种来 源 ． 试 验藻 种 网状空 星 藻 Ｃ ｅｉ ｌｔｍ 及栅 藻 ｒｔｕａｕ ｃ ｓ． 别 分 离 自海 口五 公 祠 和金 牛岭 公 园 的淡 水 水 ｐ分
和 ＮＨ４ １情 况下 分 别 获 得 了最 高 的 生 物 量（ ．２ ００ ）ｇＬ Ｃ （ ７ 士 ．８ ・。和 （． ￣ ． ）ｇＬ ０ Ｏ８ ００ ０ ３ － ）和最 高 总 脂 含 量 （ ３ ．５ １ ２％和 （８３￣ ． ） ３
（０２ ￣ ． ） ｏ最终二者在添加 Ｎａ ３ ． ３１ ％ ４ ３ ＮＯ３ 的情况 下单 位体积总脂产量最高 ，分别 为 １９２ ‘。 １０７ ‘～，均 可作 ９ ．６ｍｇＬ 和 ９ ．６ｍｇＬ
对新分 离的两株热带淡水微藻——网状空星藻 Ｃ ｅ ｓ ｕ ｔ ｕａｕ ｏ ｌ ｔ ｍ ｒ ｉ ｌｔｍ及栅藻 Ｓｅ ｅ ｅｕ ｓ ｐ生长情况及 总脂含 量的影响。结 ａ ｒ ｅｃ ｃｎｄｓ ｍ ． ｓ
果 表明 ， 株微 藻在 不同氮源影响下生长状况不 同， ２ 并且造成最终的干质量 、 总脂含量也有较为 明显 的差异 。 ２种藻添加 Ｎ ＮＯ ａ ３
８ ６ ４ ２ １ ８ ６ ４ ２ Ｏ
表 １ 不 同氮 源条 件下 ２株 微藻 的最 终干 质量
Ｔ ｂ ｅ １Ｂｉ ｍａ ｓｏ ｗｏ ｓｒ ｉ ｔ ＮＯ３ ＮＨ４ ， ｒ ａａ ｄＮＨ４ ａ ｌ ｏ ｓ ｆｔ ｔ ｎｓ ｈＮａ ａ ｗｉ ， ＣＩ Ｒ ｅ ｎ ＮＯ３
分 别在 ８ ～ ０和 ８５ ９５ ． １ ５ ． ．。 ～
２ 结 果
２１ 不 同氮源对 ２株 微藻 生长 的影 响 ．
２３ 不 同氮 源对 ２株 微 藻色 素积 累的影 响 ．
不同氮源条件下 ２ 种微藻生长的生长曲线见图 １ ，由图可 知 ，２株 藻均 在添 加硝 态氮 （ａ ３的情 Ｎ ＮＯ） 况下生长状况最佳 ， 而在添加铵态氮 Ｈ ｃ） ４１ 条件下