蒽酮比色定糖法实验条件的改进探讨

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9 6 ℃ 1 0 0 ℃
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20
反应 时 间/ mi n 田 1 不 同 时 间水 } 苷 显 色 对 吸 光度 的 影 响
③ 采用文献介 绍 的实验条 件 ( I、 Ⅱ、 Ⅲ、 Ⅳ、 V、
Ⅵ、 Ⅶ) 和改 进 实 验 条件 ( Ⅷ) 等 8种实 验 条 件 ( 见表 1 )
霄 剐, 江 汉 大学 农 学 系,武 汉张 家湾 ,4 3 0 0 6 5 胡 志辉 , 陈禅友 , 通 讯地 址 同 第一 作 者
收 稿 日期 : 2 0 01 -0 3 -2 3
2 2 蒽 酮 比色 定 糖 法 蒽 酮一 浓硫 酸 溶液 用量 的影 响 葸 酮 比色 定 糖 法 不 同葸 酮 一 浓 硫 酸 溶 液用 量 对 吸 光 度 值 的 影 响 结 果 ( 见图 2 ) 表明, 葸酮一 浓 硫 酸 溶
蒽 酮 比色 定 糖 法 不 同 显 色 温 度 和 时 间 对 吸 光 度
测糖供试液 :准确称取供试各品种经 风干磨细 、 过 1 m m 筛 的样 品 1 0 0 m g ,分 别 置 于 l 0 m 1 离 心 管 中, 加 8 0 %乙醇 溶液 约 8 m 1 , R 0 水 浴 浸提 3 0 a r i n , 3 0 0 0 r / ai r n离 心 5 a r i n ,上 清 液 倒 入 5 0 m l 容 量 瓶 中。 重 复 浸 提 2次 , 每次 1 0 m i n , 冷却后用 8 0 %乙醇 溶
条件Ⅲ、 Ⅳ、 V、 Ⅵ 是蒽酮 一 浓 硫 酸 煮沸加 热法 , 由于
反 应 系统 间硫 酸 比例 、 煮 沸 时 间不 尽 相 同 , 其 测 定
① 在反 应 系统 中 ,供 测试 液 与葸 酮一 浓硫 酸溶
液 的最 适体积 比为 l : 5 , 以保证 糖能 够充 分显色 。蒽 酮一 浓硫 酸溶 液需 在冷 水浴 中 ,沿试 管 壁缓缓 流人 盛 有样 液的试 管 , 避免 过早显 色 。 ④ 显色反应 在 9 6 ℃水浴 中 3 m i n完成 。 要严 格 控 制加 热时 间 , 以免结果 偏低 。口
田 2 不 同蒽 酮 一 浓 淹 鞋 液 用 ■ 对 吸光 度 的 影 响
2. 3 慧 酮 比色 定 糖 法 8种 不 同 实 验 条 件 的测 定 结 果
加人 5 m l 1 %蒽 酮一 浓硫 酸 溶 液 , 摇匀 , 9 6 ℃水浴 显
色3 m i n , 取 出于 冷 水 浴 中迅 速 冷却 , 摇匀 , 室 温 放 置 1 5 m i n 。以 l c n ]比色 皿 为 空 白对 照 测 定 6 2 0 n 1 ] l l 处 吸光度
关键词 蒽酮 比 色定糖 法 水生蔬 菜
实验 条件 分别对 5种主要水 生蔬菜 品种进行 含糖量测定 , 每个 样 品设 l 5个重 复 , 计 算含糖量平 均值 , 并 以斐林试 剂
滴 定 法 的测 定 结 果 为 1 0 0 %, 作 准 确 性 比较 。
本 实验 以 国 家水 生 蔬 菜 资源 圃 ( 武汉 ) 5种 水 生 蔬
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回落。因此 , 其适 宜用 量 为 5 m l 。
2 . 4 蒽酮 比色定 糖法 8种 不 同实验 条件 刮 定 吸光
度 重 现 性 比 较
n 7 n 6 n 5 型 0 _ 4
0 3
蒽 酮 比色 定 糖法 的 8种 不 同实验 条件 测 定 吸 光度 的平 均值 、 标 准差 和 变异 系数 的结 果 ( 见 表
1 _ 2 实验 方 法
色时间控制在 3 mi n 。 在1 0 0 ℃沸水浴中 , 煮沸 2 m i n , 吸光度 就能达 到最高值 , 但 较上述测 定值 稍低 , 且 该 反应 系统在操作 中 , 溶液 易变灰暗或 灰黑 , 测得 的吸 光 度 均低 。 出现 这 种 现 象 的原 因 , 需 进 一步 研 究 。
④取等量 ( 1 m 1 ) 试液, 按改进实验条件 ( Ⅷ) 加入
试 剂 ,分 别 在 9 6 水浴和 1 0 0 沸 水 浴 中加 热 显 色 1 , 2 , 3 . 5 , 8 , 1 0 , 1 5 a r i n 取出, 测 定 吸 光 度 A( 6 2 0 n m , 下同) 。 比 较 葸 酮 比 色 定 糖 法 两 种 不 同 显 色 温 度 和 不 同 显 色 时 间 吸光 度 的变 化 : ② 取等量 ( 1 m 1 ) 试液 , 分 别加入 葸酮一 浓 硫 酸 溶 液2 . 5 , 3 , 5 , 6 , 7 . 5 m l ,在 9 6 水 浴 中加 热 显 色 3 m i n取 出, 分 别 测 定 其 吸 光 度 。 比 较 葸 酮 比色 定 糖 法 不 同 蒽酮一 浓硫 酸用 量 对 吸光 度 的影 响 。
液定容 。
的影 响结果 ( 见图 1 ) 表明 , 在9 6 水浴 中 , 加 热 时间 l ~ 3 m i n ,吸光度基本上呈直线增加 , 3 a r i n时吸光度 最大。 随加热时间延长, 吸光度逐步降低 , 加热 1 0 m i n 时, 吸光度只有最高值 的 7 9 %。可能是过 长的加热使
蔬 菜品种 进行 合糖 量测 定, 并 与 斐林 试 剂滴定 法的测 定结 果进行 比较 。结果表 明 , 改进 后 的 实验 方 素 ( 1 ml 糖 持测 液加 入 5 ml 的1 %蒽酮一浓硫 酸溶 液 , 9 6 q C ̄
现 性好 . 可 用 于 批 量 样 品 的 微 量 分 析 测 试
条 件 I、 Ⅱ是蒽酮 一 稀 硫酸煮 沸 加热 法 , 反应 系统 中 硫 酸 比例 较 小 , 脱水 反 应 困难 , 部 分 糖 未能 发 生 显 色反 应 ,即便 是煮沸 加热 1 0 - 1 5 m i n ,显 色仍不 充
分, 含糖量 明显 偏低 , 测定 结果 的准确 性较 差 实 验
2 ) 表明 , 改 进实 验条 件 ( Ⅷ) 测定 的 吸光度 平 均值 为 0 . 5 9 6 4 , 标 准差 为 6 . 9 2 x 1 0 , 变异系数 为 l _ l 6 %。 结
果 的重现 性很 好 。
0 2 0 l 0
3 改进实验条 件的技术 要点及注意事项
值 差 异较 大 ,较低 的只 占斐林试 剂 滴定 法 的 7 9 %。 实 验 条件 Ⅶ是 在室 温 下 , 利 用浓 硫 酸 与水 发 生水合 作 用 时放 出 的热能 , 使 反应 系统 自行 升温 达 到充分
显 色 。该法 要 求操作 熟 练 、 一致 , 稍 有 疏忽 , 极 易造 成误差 , 测定 结 果 的 准确 性 不 稳 定 , 且 不 同季 节 的 室 温变 化对测 定结 果亦有 影 响 。
0 . 6 , 0 . 8 , 1 . 0 m l 葡 萄糖标 准 液 于干 洁的试 管 中 , 用 蒸 馏水 或 8 0 %乙醇分 别调 整其 体积 为 1 . 0 m l , 按 上述
方法 显色 、 测定 , 建立 回归 方程 。 ⑧ 计算样 品含糖 量。 3 . 2 注意事 项
的 准 确 性 比较
8种实 验 条件 的测 定结 果 准确性 比较 结果 ( 见
表2 ) 表 明, 改进 实验条 件 ( Ⅷ) 的测定值 与 斐林试 剂
滴 定法 测定 值 的相对 比值 最 高 , 准 确性 最好 。实 验
②标 准 曲线制 作
用 移液 管 分别 移取 0 . 2 , 0 .
( 参考文 献 6篇略)
表 1 慧 酮定 嚣涪 的 8种不 同 实啦 条 件
长江越 蕈 2 ∞l ,

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蒽酮 比ຫໍສະໝຸດ Baidu定糖法实验条件的改进探讨
雷刚 胡 志辉 陈 掸友

要 将文献 介 绍的 7种蒽 酮 比 色定糖 法 实验 条件 和 经改进 的 实验 条件 等 8种 方法对 5种 主要 水生
热3 mi n完成显 色反 应 )的测 定姑 果准 确度 高 , 重
液用量不 同吸光度也不 同 , 用 量在 Z5 ~ 5 m l 时, 随着
用 量 的增加 , 吸光度值 增 大 , 用量为 5 m l 时, 吸 光 度 值 达最 大 , 再增加用量至 6 m l , 7 . 5 m l 时, 吸光 度 稍 有
圃 2 帅 I , 8 长 江 蘸 菜
3 . 1 技 术 要 点
①样 品测定 吸取 糖 待测溶 液 1 . 0 r n l ( 耱 含 量
恿 削 一旅 丽 酸 疆 用 量 / m]
高的样 液 ,取用 前先 稀释 5 - 1 0倍 )于干 洁 的试 管 ( 1 6 mm × l 8 0Ⅱ 1 l n ) 中, 在冷水浴 中, 沿 试 管壁 缓 缓
菜: 莲藕( 鄂莲二 号) 、 荸荠( 孝感 杨店荸) 、 慈姑 ( 南 宁慈
姑) 、 茭 白( 玉溪 茭 ) 和菱 ( 嘉鱼菱 ) 为 材 料 进 行 含 糖 量 测 定( 本 文 只介 绍 莲 藕 的 实验 数 据 , 其 它 4种 蔬 菜 的结 果 与之 一 致 ) .以 斐 林 试 剂 滴 定 法 的 测 定 结 果 为 准 确 性 参比, 研究 了蒽酮 比色法测 含糖量 的实验 条件 , 提出 了改 进 实验 方 案 。
糠 醛衍 生 物 被 破 坏 , 颜 色 出现 消 退 。因此 . 应 把 加 热 显
1 0 0 g / m l 葡 萄 糖 标 准 溶 液 :称 取 2 5 0 n a g干 燥 的分 析 纯 葡萄 糖 , 移入 2 5 0 m 1 容量瓶 中 , 用 蒸 馏 水 或 8 0 %乙 醇 配 成 1 m m l 浓 度 溶 液 。用 移 液 管 移 取 l 0 m l 上述溶液 于 1 0 0 m l 容 量 瓶 中 ,用 蒸 馏 水 或 8 % 乙 0 醇稀释至刻度 , 摇匀 =
④ 按 8种 不同实验条 件 ,各取莲 藕等量试 液 3 5 份分 别置于 3 5支试管 中 , 显色测定 吸光度 , 比较其
重 现性 。
2 结 果 与分 析
2 . 1 蒽 酮 比色 定 糖 法 显 色 温 度和 时 间的 影 响
0 O 0
1 材料 与方 法
1 . 1 实验 材 料
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