药物毒理学长期毒性试验

第二水平，长期毒性试验 （第一阶段）
（1）两种品系、35天染毒、毒性量效曲线，推荐临床使用 途径；
（2）器官毒性试验、死亡情况、体重变化、血液学、临床 生化学、组织学检查；
（3）致突变活性第二阶段筛选； （4）生殖毒性试验； （5）受试动物的药代动力学研究； （6）行为试验； （7）协同、增效、拮抗作用。
➢ 能耐受的剂量范围、完全无毒性反应的安全剂量
长期毒性试验的意义
判断受试药物能否进行临床试验； 预测人类临床用药时可能毒性和安全范围； 制定临床试验中的防治措施； 确定应该着重评价的生理生化指标； 选择I期临床试验时的初试剂量，等。
一、一般原则
动物选择：
敏感动物，年轻动物，雌雄各半 2种（啮齿—大鼠6w、非啮齿—比格犬4-6m） 体重差异不大于平均体重的20% 单笼饲养、定量喂食
安全范围
• 有效量曲线和致死量曲线的斜率不一样时，以TI评
价药物的安全性并不可靠。（原因？） • 安全范围（margin of safety）： ED99~LD1（或 ED95~LD5）之间的距离。值越大越安全。
六、药物毒性作用类别
药物不良反应 （adverse reaction)：凡是不符合 用药目的并为病人带来不适或痛苦的有害反应统称 为药物不良反应。 包括：副反应、后遗效应、停药反应、毒性反应、 变态反应、特异质反应、致癌性、致畸性、致突变 性；
第二期临床研究 第三期临床研究
安全性 { 疗效（有效性） 不良反应（安全性）
大范围的社会考察
不良反应监测
提高疗效， 降低不良反应
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多数毒物发挥其毒性作用至少经历四个过程：
➢ 毒物吸收后经过多种屏障转运到一个或多个靶部位； ➢ 进入靶部位的终毒物与内源靶分子发生交互作用； ➢ 毒物引起机体分子、细胞和组织水平功能和结构紊乱； ➢ 机体启动不同水平的修复机制。当此机制低下或功能和
长期毒性试验
药物毒性是否产生，取决于：
– 药物本身的理化特性（毒性类型、毒性作用剂量） – 给药情况（剂量和给药途径） – 如何被机体代谢（间接毒性）
对一特定药物而言，最重要的影响毒性的因素：
– 给药途径 – 体内停留时间 – 给药频率
（影响靶组织的药物浓度）
半数有效量（median effective dose, ED50 ）：能引起50%的动物或实验标本产生反应 的浓度或剂量。
给药途径：应与拟推荐的临床用药途径一致
– 口服：最好灌胃法，或混在饲料中；犬在给食前给药 – 临床为静脉给药的，动物实验最好用其它适宜的注射
途径代替 – 连续给药，每天固定时间 – 试验期3个月或以上的，每周6天给药，间隔一天
给药容量： 大鼠：一般1-2 mL/100g体重； 按等量不等浓度配药
分组：
– 一般四组：3个试验组、1个溶剂对照组
– 试验<90天，则每组雌雄各10只；
>90天，
20只。
– 若用大型动物，每组雌雄各3-4只
实验室条件： GLP
温湿度、采光、通风等； 饲料、水，记录摄入量； 观察记录，每周称体重
剂量设计：
– 高剂量：能足以使新药的毒性作用充分表现出来，产 生一定的毒性，如体重下降10%，器官毒性，个别动 物死亡但<20%;
– 中剂量：引起轻微的毒性反应，为高剂量的几何平均 值
– 低剂量：应为无毒剂量组，一般为动物有效剂量或人 临床治疗剂量的2-3倍。
限度试验：
口服>5g/kg、注射>2g/kg未出现毒性反应或死亡时，做限 度试验
– 大鼠只做一个高于拟用于临床剂量50倍的剂量组； – 犬只做一个高于拟用临床剂量30倍的剂量组
结构紊乱超过机体修复能力时，机体即出现组织坏死、 癌症、纤维化等毒性损害。
步骤
到达
毒物
途径
Ａ
1
与靶分子相互作用
细胞功能 紊乱，损伤
修复紊乱
毒
2
性
3
Ｂ
作 用
4
Ｃ
药物毒性作用发展的潜在阶段
指对动物反复多次连续用药的毒性试验
目的：观察反复给药情况下，实验动物
➢ 出现的毒性反应、量效关系、主要的靶器官、损害程 度及其可逆性等；
半数致死量（median effective dose, LD50 ） ：能引起50%的动物死亡的浓度或剂量。
治疗指数：TI= LD50/ ED50
ED50（median effective dose）:
LD50 （median lethal dose ）:
药物实验动物的LD50和 ED50的比值称 为治疗指数（therapeutic index, TI） ，用以表示药物的安全性。
• 急性毒性损害：循环、呼吸及神经
• 慢性毒性损害：肝、肾、骨髓、内分泌
新药临床前评价的作用： • 急性毒性试验：治疗指数、
对机体的可能损害； • 慢性毒性试验：慢性毒性的靶器官、
损害可逆性。
（三)药物毒性临床前评价程序（三水平）
第一水平，急性毒性试验：
（1）致死的量效曲线和可能的器官损伤； （2）眼睛和皮肤刺激性试验； （3）致突变活性初筛。
三、检测时间
检查间隔 恢复性观察
资料收集整理 结果评价
试验周期：
一般必须为临床给药周期的3-4倍；
<5天的 给药2周；<2周的 给药4周 2-4周的 给药3月；1-3月的 给药6月 >3月的，啮齿类给药6个月，非啮齿给药9个月
试验周期在6月以上的，可在长期毒性试验进行3个月以后，未发现 明显毒性反应的情况下，申请I期临床试验。
二、检测项目
一般观察 血液学指标 血液生化指标 特殊检查 系统尸体解剖
第三水平，长期毒性试验 （第二阶段）
（1）动物长期毒性试验（半年以上）； （2）哺乳类动物致突变试验； （3）啮齿类动物2年致癌试验； （4）人类药代动力学试验； （5）人类临床试验； （6）短期和长期用药的流行病学资料。
（四）药物毒理学研究 在新药临床试验各阶段的任务
第一期临床研究 探索安全的人用剂量