大肠菌群检测方法(中文翻译)

大肠菌群检测方法(中文翻译)

3 定义和简介

3.1 定义

所有的大肠菌群均是发酵乳糖，革兰氏阴性，无牙孢的杆菌。官方的对大肠菌群的定义可能以培养温度（30、32、35、37）不同作评价；或以确定是否发酵乳糖产气作为定义的一个特征.大多数ISO和其他官方标准是利用发酵乳糖产气作为一个定义特征。而在ISO 4832 中则利用了在VRBL上的菌落大小作为其唯一的定义特征。

鉴于这些定义的不同，建议实验室根据相关定义用相应的适当方法。

●国际标准：样品分析是否符合国际交易规范

●官方主市场调整定义：样品分析是否符合地方标准

●一般定义：样品分析是否符合一般规范。

任何必要方法的调改必须通过市场实验室质量确认中心和雀巢研究中心食品安全微生物组的协助。

以下为一些官方定义例子：

*ISO 4831大肠菌群是通过其在选择性肉汤上的生长和发酵乳糖产气能力来定义*AOAC INTERNATIONAL, APHA/FDA定义大肠菌是指发酵乳糖产酸产气（T=32或35度）革兰氏阴性杆菌

*ISO 4832大肠菌群定义是根据其在VRBL-agar(30or35or37度)的菌落大小（最小5mm直径）和产酸情况。(T=30或35或37℃)

3．1．1 液体培养基中

ISO 4831 大肠菌群是根据其在选择性肉汤中生长能力和发酵乳糖产气情况来定义.(T=30或35或37℃)

AOAC INTERMATIONAL,APHA/FA中大肠菌群是指发酵乳糖产酸产气革兰氏阴性杆菌。（T=32或35℃）

由LI第一章概述，大肠菌群是指发酵乳糖气微生物群。

3．1．2 固体培养基中

IOS 4832大肠菌群定义是根据其在VRBL-agar(30or35or37度)的菌落大小（最小5mm直径）和产酸情况。(T=30或35或37℃)

AOAC INTERMATIONAL,APHA/FA中大肠菌群是指发酵乳糖产酸产气革兰氏阴性杆菌。基于以上定义可知大肠菌群在VRBL培养基上会形成5mm以上直径的红色菌落且在确认试验中发酵乳糖产气

由LI第二章概述，大肠菌群是指在VRBL琼脂培养基上会形成特征性菌落且在确认试验中发酵乳糖产气微生物群。

3．2 简注

BGLB：亮绿乳糖胆盐培养基肉汤

LST：月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤

MPN：最可能数

VRBL：紫红胆汁琼脂

4 安全防范

大肠菌群不表现为无害，注意实验室的良好操作。

5 参考资料

5．1 LIs中提到的及其它心要文件

LI-00．700

LI-00．702

LI-00．743-2

5．2 参考书目

*美国公共健康协会(1985).日用品检验标准，华盛顿。DC

*Bruchez N (1996).Research Note QS-TN960017: Detection of coliforms-lnprovement of LST

*Colwell N.D.and M.D. Microbiological techniques-Some statistical aspects.J.Sci.Fd.Agric_20(1969)573-579

*ISO 4831:1991:Microbiology-General guidance for the enumeration of coliforms-Most probable number technique.

* ISO 4831:1991:Microbiology-General guidance for the enumeration of coliforms -Colony count technique.

*Merck Microbiology Manual 2002 http://chemdat.merck.de/mda/ch/de/index.html

*U.S.FDA(1995).Bacteriological Analytical Manual,8th Ed AOAC international, Gaitheresburg,MD,pp 4.01-4.29

6 前面说法之修正

完整修订本额外细节在大肠菌群计数、定义和分离改编中提供。

审批人签名日期

编写者

组领导

部门领导

CT-QM

1安全说明

2

概述

大肠菌群的研究与举例

第一章

液体培养基中的生长研究

1方法原理

接种至原倍或稀释后的选择性培养基中，30℃培养24-48小时，再通过转接阳性管进确认。

摘要

根据大肠菌群相应用的不同定义选用不同的培养温度（30℃/32℃/35℃/37℃）(查阅定义)

2 培养基的准备

在使用化学药品前查阅Sigma/Aldrich化学药品安全指南或其它相应手册或地方权威提供的安全数据表。认真阅读附1中的安全说明。更多的安全信息可从NEC/QS中获得。

2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）

根据制造商说明配制培养基，如是非成品干粉则可按以下方法配备（g/L）

单倍料（g）双倍料(g)

胰蛋白胨 20.0 40.0

乳糖 5.0 10.0

磷酸二氢钾 2.75 5.5

磷酸氢二钾 2.75 5.5

氯化钠 5.0 10.0

月桂硫酸钠 0.1 0,2

蒸馏水 1000ml 1000ml

PH6.6-7.0(25℃)

将以上化合物水中溶解，必要时可以加热，调整PH

单倍料分装到16*160mm的试管中每管10ml

双倍料分装到18*180mm的试管每管10ml

121℃,15分钟灭菌

为了避免月桂硫酸钠沉淀，LST室温贮藏不应超过4星期。

注意

由于样品引起高百分比的假阳性，也就说气体的产生是由于其它微生物而非大肠菌群。

在LST肉汤灭菌后加入无菌梭链孢酸或万古霉素，最终浓度为10毫克每毫升。

2.2 亮绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）

蛋白胨 10.0

乳糖 10.0

脱水牛胆苯 20.0

煌绿 0.0133

蒸馏水 1000ml

PH7.0-7.4(25℃)

将以上化合物水中溶解，必要时可以加热，调整PH, 分装到带有小试管的16*160mm的试管中每管10ml，灭菌后小试管中不应含有气泡。

3 化学药品与材料

商业参考仅供指导，列在页边提到的或是莫克化学药物和试剂目录或是2002莫克微生物手册或是雀巢实验室材料。

3．1化学药品

101310 微生物煌绿

104873 KH2PO4 p.a.

K2HPO4 anhydrous GR

梭链孢酸钠盐 Sigma F 0881

Mannanase solution, Novo Nordisk KHNO1051

a-淀粉酶，Termamyl 1201 Novozymes

106404 氯化钠，p.a.

107657 微生物一水乳糖

112533 生物化学月桂基硫酸钠

822187 万古霉素氢化物，sigma V 2002

3.2 药品和准备

1.03756干纯微生物牛胆苯

1.05454 BGLB或Oxoid CM31

1.07214 胰蛋白胨