血清总胆固醇酶试剂法测定法
实验三、血清中总胆固醇的测定
血清中总胆固醇 的测定
（胆固醇氧化酶法）
一、实验目的
学习胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。
掌握血清总胆固醇的测定方法及操作技术。
二、实验原理
血清总胆固醇 （1） 胆固醇酯 游离胆固醇
胆固醇酯酶
游离胆固醇＋FAA
胆甾烯酮+H2O2
（2）游离胆固醇
胆固醇氧化酶
（3）H2O2+4-氨基安替吡啉（4-AAP）＋苯酚
（2）计算： 依据朗伯-比尔定律： Al/L
A样 C样= × C 标 A标
样品管光密度值 ×5.17 样品管胆固醇浓度 ＝ 标准管光密度值 (mmol/L)
参考值
胆固醇
血清参考值：3.0 ~ 5.20mmol/L 危险阈值：5.20 ~ 6.20mmol/L 高胆固醇血症：> 6.20mmol/L
过氧化物酶 （POD）
H2O ＋红色醌类物质
510nm
相对血清总胆固醇浓度
光吸收法测定
三、实验器材
材料：人血清
试剂：总胆固醇测定试剂盒 用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架， 恒温水浴锅
四、实验步骤
（1）取3支试管，按下表加入试剂:
充分混匀，37℃ 水浴中保温15min； 冷却至室温后，510nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。
注意事项
正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比 色液应占比色皿的2/3。
测定胆固醇所用的试剂应防止被葡萄糖和甘 油三酯污染。
微量移液枪的正确使用
思考题
1、简述胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 的基本原理？ 2、分析影响实验结果的因素有哪些？如何 克服？
血清总胆固醇TC测定操作规程
血清总胆固醇TC测定操作规程.docx血清总胆固醇（TC）测定操作规程1. 目的本操作规程旨在规范血清总胆固醇（TC）的测定过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 原理血清总胆固醇（TC）测定通常采用酶法，通过胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化为胆甾酮和H2O2，最后利用过氧化物酶将H2O2分解为2H2O和O2，同时产生颜色变化。
颜色的深浅与血清中胆固醇含量成正比，可通过比色法测定。
3. 试剂和材料酶试剂盒（含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶等）校准品和质控品血清样本蒸馏水移液枪及吸头比色杯恒温水浴箱自动生化分析仪或分光光度计4. 操作步骤4.1 准备工作确保所有试剂和样本均已在室温下平衡至25°C。
校准生化分析仪或分光光度计至适当的波长（通常为500-550nm）。
4.2 试剂准备根据试剂盒说明书，将酶试剂混合均匀，并预热至25°C。
4.3 样本处理取适量的血清样本，避免溶血和脂血样本。
如有必要，对样本进行离心，去除沉淀物。
4.4 加样使用移液枪准确取样，将血清样本加入比色杯中。
按照试剂盒说明书，加入等量的酶试剂至每个比色杯中。
4.5 反应将比色杯放入恒温水浴箱中，保持37°C反应一定时间（通常为5-10分钟）。
4.6 比色测定将反应后的比色杯放入自动生化分析仪或分光光度计中。
读取吸光度值，并根据标准曲线计算血清总胆固醇浓度。
5. 质量控制每次测定前，使用校准品进行仪器校准。
定期使用质控品进行质量控制，确保结果的准确性和稳定性。
6. 结果记录与报告记录所有测定结果，包括吸光度值、胆固醇浓度等。
根据医院或实验室的标准操作程序，编写并发布检测报告。
7. 安全注意事项操作时应穿戴适当的个人防护装备，如手套和实验服。
避免接触试剂和样本，尤其是避免吸入和摄入。
按照当地法规处理废弃物。
8. 维护和校准定期对生化分析仪或分光光度计进行维护和校准，确保仪器的准确性。
血清总胆固醇的测定
八、思考题
本次测定的血清样本Ch值是否正腹血清胆固醇浓度为2.6—6.5mmol/L
七、注意事项 1．测定标本要求空腹抽血。 2. 酶法测定胆固醇的前二步反应特异性高，而指 示反应（第三步反应）特异性则较差，干扰反应 往往发生在指示反应。溶血标本、黄疸标本及高 血脂标本均不影响测定结果，但血液中一些还原 性物质，如维生素C、谷胱甘肽及左旋多巴可与 色原性氧受体竞争H2O2，使结果出现偏差。 3．胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，造成结 果偏低。
• 工作液：临用时按需要量将试剂1和2按9：1的比例混匀 即成，其他工作液置4℃冰箱一周内稳定。
• 标准胆固醇液一支：1ml，浓度为4.09 m mol /L (100mg/dl)。
四、器材
试管、微量加样器、 恒温水浴箱、分光光度计等。
五、操作 • 取试管3支，编号，按下表依次操作：
六、计算
• 胆固醇浓度（mmol/L）= A测/A标×C标 • C标为4.09mmol/L
一、目的
了解胆固醇的测定方法 掌握胆固醇测定临床意义
二、原理
胆固醇酯加水在胆固醇酯酶的作用下生成游离胆固醇和脂肪酸。 游离胆固醇加氧在胆固醇氧化酶的作用下生成胆脘-4-烯-3-酮和过氧 化氢，过氧化氢再加4-氨基氨替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成 红色的苯醌亚胺。其反应如下：
三、试剂 宁波慈城生化试剂厂生产的胆固醇测定试剂盒中包括： • 缓冲液二瓶：90ml×2 • 酶溶液一瓶：10ml×2
血清总胆固醇测定标准操作规程
血清总胆固醇测定标准操作规程1.检验原理：（氧化酶法）血清中总胆固醇（TC ）包括游离胆固醇（FC ）和胆固醇酯（CE ）两部分。
血清中胆固醇可被脂蛋白酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA ），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠存在时，晶过氧化物酶（POD ）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
胆固醇酯+22O H −−−→−胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸 胆固醇+2O −−−−→−胆固醇氧化酶胆甾烯酮+22O H 222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD红色醌类物质+422O H 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃可保存1年。
样本应避免反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程） 5参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×38.77.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在500nm处吸光度大于0.080时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明或淡黄色液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.0808.4线性区间：试剂的线性区间为[0.5-20.0]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.0-20.0]mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用具有溯源性的标准品进行测定，实测值与标识值的相对偏差应在±10%内。
8.6分析灵敏度：在500nm处，光径1cm时，测量已知浓度样品换算成1mmol/L 的总胆固醇时，吸光度变化△Ammol/L≥0.0028.7批内精密度：CV≤4.0%8.8批间差：R≤6.0%8.9稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足1-8.7的要求。
总胆固醇实验报告
实验名称：血清总胆固醇测定实验目的：通过本实验，掌握血清总胆固醇的测定方法，了解血清总胆固醇在临床诊断和预防治疗中的重要性。
实验原理：血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是血液中所有胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
血清总胆固醇的测定方法主要有酶法、比色法、沉淀法等。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇，其原理是利用胆固醇酯酶（Cholesterol Esterase）将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶（Cholesterol Oxidase）将游离胆固醇氧化为胆汁酸，最后在碱性条件下与磷钼酸反应生成磷钼蓝，通过比色法测定其吸光度，从而计算出血清总胆固醇的浓度。
实验材料：1. 血清样品：取自健康志愿者，经离心分离后获得。
2. 胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷酸盐缓冲液、磷钼酸、抗坏血酸、硫酸铜、邻苯二甲酸氢钾、氯仿、无水乙醇等试剂。
3. 仪器：酶标仪、移液器、恒温水浴锅、离心机等。
实验步骤：1. 样品处理：取血清样品1.0ml，加入氯仿和无水乙醇（1:2，V/V）混合液5.0ml，涡旋混合，离心10分钟，取上清液待测。
2. 标准曲线绘制：将胆固醇标准品配制成一系列浓度梯度的标准溶液，分别加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷酸盐缓冲液、磷钼酸等试剂，按照实验步骤进行操作，测定吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取处理后的血清样品，按照标准曲线绘制步骤进行操作，测定吸光度。
根据标准曲线，计算样品中血清总胆固醇的浓度。
实验结果：1. 标准曲线绘制：以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
结果显示，胆固醇浓度在0.5-10.0mg/dl范围内，吸光度与胆固醇浓度呈线性关系。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算样品中血清总胆固醇的浓度为X mg/dl。
实验讨论：1. 血清总胆固醇是人体内重要的脂质成分，其浓度异常与心血管疾病、动脉粥样硬化等疾病密切相关。
酶法检测血清总胆固醇
酶法检测血清总胆固醇酶法检测血清总胆固醇是目前公认为最适于作血清总胆固醇测定的常规方法 [1] ，在各大中小医院实验室测定TC大多采用酶法，既可于作终点法手工操作，分光光度计比色测定，也可于半自动、全自动生化分析仪检测。
它具有试剂单一、试验稳定、使用方便等优点。
现报告如下。
1 原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Cho1)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trind er反应)。
醌亚胺的最大吸收在500 nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
2 试剂(1)酶试剂：组成因不同商品试剂盒而异，酶用量也因酶制品质量而定。
(2)chol标准参考血清：本法TＣ测定中以准确定值的参考血清为标准，参考血清的Chol浓度最好有高、中、低3种，中浓度血清的Chol含量应在3.8～5.2mmol／L。
(3)试剂与参考血清的稳定性：未开瓶的试剂4℃存放至少稳定1年。
复溶后的酶试剂在2～8℃至少稳定1周，15～25℃3天，如在此期内出现肉眼可辨的粉红色为不合格。
标签上注明出品日期及有效期。
液态的Chol参考血清(含有不抑制CHE、CHOD与POD的防腐剂)，-20℃保存至少稳定2年，冻干品更稳定。
标签上注明出品日期及有效期。
3 操作(1)标本为及时分离的空腹血清、肝素或ED-TA抗凝血浆。
(2)终点法测定时标本管与标准管中分别加入标本与定值血清各10μl，酶试剂1ml，混匀后在37℃放置5分钟，或20-25℃放置10分钟后用光度计比色，以试剂空白调零，波长500nm或520nm，颜色稳定至少60分钟。
4 计算TC(mmol／L)=A测定／A标准×定标血清TC浓度(mmol/L)。
速率法测定根据仪器性能及所用试剂的反应速度设计操作程序，一般要求试剂中酶用量较高。
实验九血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)
实验九血清胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）实验十四血清胆固醇测定(胆固醇氧化酶法)胆固醇的测定方法很多;通常可分为化学试剂比色法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法五大类。
化学试剂比色法中有直接法和间接法;前者可用血清直接测定，后者是用溶剂或其它方法提取胆固醇后再作定量。
酶法由于操作简便、结果准确，试剂无腐蚀性，而且因使用特异性酶，大大减少了血液中其它成分的干扰，目前已成为测定胆固醇的主要方法。
【目的】1(了解胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇的原理，能进行血清胆固醇测定的操作。
2.掌握血清胆固醇测定的临床意义。
【原理】血清中总胆固醇(TC)包括胆固醇酯(CE)和游离型胆固醇(FC),酯型占70%，游离型占30%。
胆固醇酯酶(CEH)先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固4醇氧化酶(COD)的作用下氧化生成Δ-胆甾烯酮和过氧化氢。
后者经过氧化物酶(POD)催化氢与4-氨基安替比林(4-AAP)和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。
反应式如下:CEH胆固醇酯胆固醇，脂肪酸COD胆固醇， O42?-胆甾烯酮， HO22POD2HO ， 4-氨基安替比林，酚22红色醌亚胺【器材】试管、吸管、试管架、微量加样器、恒温水浴箱、分光光度计。
【试剂】酶法测定胆固醇多采用市售试剂盒。
1. 酶应用液胆固醇酶试剂的组成为:pH6.7磷酸盐缓冲液 50mmol/L胆固醇酯酶 ?200U/L胆固醇氧化酶 ?100U/L过氧化物酶 ?3 000U/L4-氨基安替比林 0.3 mmol/L苯酚 5 mmol/L 此外还含有胆酸钠和Triton X-100，胆酸钠是胆固醇酯酶的激活剂，表面活性剂Triton X-100能促进脂蛋白释放胆固醇和胆固醇酯，有利于胆固醇酯的水解。
2( 5.17 mmol/L(200mg /dl)胆固醇标准液精确称取胆固醇 200mg溶于无水乙醇，移入100ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度(也可用异丙醇等配制)。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告胆固醇是人体内一种重要的脂质物质，它在维持细胞膜的完整性、合成激素和胆汁酸等方面发挥着重要作用。
然而，过高的血清总胆固醇水平会增加心脑血管疾病的风险。
因此，及时测定血清总胆固醇水平对于预防和治疗心脑血管疾病具有重要意义。
本实验旨在通过测定血清中总胆固醇的含量，掌握其测定方法，并了解不同因素对血清总胆固醇含量的影响，为临床诊断和研究提供参考。
1. 实验原理。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇含量。
首先，将血清样本与试剂中的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶发生反应，将胆固醇酯水解成游离的胆固醇和脂肪酸，然后游离的胆固醇与试剂中的胆固醇氧化酶再次发生反应，生成过氧化物酶，最终生成带有颜色的化合物。
通过测定产生的有色产物的光密度，即可计算出血清中总胆固醇的含量。
2. 实验步骤。
（1）取适量血清样本，离心沉淀，取上清液备用。
（2）将标准品和上清液分别加入反应管中，加入试剂A和试剂B，混匀后放置37℃恒温水浴中反应一定时间。
（3）加入硫酸后，混匀放置10min，再加入试剂C混匀后放置2min。
（4）测定吸光度值，并根据标准曲线计算出血清总胆固醇的含量。
3. 实验结果。
通过实验测定，得出不同血清样本中总胆固醇的含量分别为X mg/dL、Ymg/dL和Z mg/dL。
根据实验结果，我们可以得出……（根据实验结果进行分析和讨论）。
4. 实验结论。
本实验通过酶法测定了血清中总胆固醇的含量，结果表明……（根据实验结果进行结论）。
5. 实验注意事项。
（1）在实验过程中，要注意血清样本的保存和处理，避免样本受到污染或变质。
（2）在试剂配制和使用过程中，要按照相关操作规程，严格控制试剂的质量和使用量。
（3）实验操作过程中，要注意实验室安全，避免发生意外。
6. 实验意义和应用。
本实验方法可以准确测定血清中总胆固醇的含量，为临床诊断和研究提供了重要的参考数据。
同时，也为进一步研究血清总胆固醇与心脑血管疾病的关系提供了实验基础。
血清总胆固醇(TCH)测定
授课对象：06级检验1-5班 课 时：2学时血清总胆固醇（TCH ）测定目 标：1.掌握酶法测血清TCH 的基本原理及注意事项。
2.熟练操作步骤。
3.了解TCH 测定的主要临床意义。
实验用品：总胆固醇酶试剂盒（3v ），，721型分光光度计，YZ-602稀释器，血清等。
内 容： 原理：胆固醇酯 + H 2O −−−−→−胆固醇酯酶胆固醇 + RCOOH胆固醇 + O 2 −−−−−→−胆固醇氧化酶Δ 4 -胆甾烯酮 + H 2O 2H 2O 2 + 4 – AA + 酚 −−−−→−过氧化物酶醌亚胺染料 + H 2O在500 nm 波长下比色测定，可求得标本内总胆固醇的含量。
操作步骤：加入物 R S B 血清（μl ） 15 — 标准液(μl) — 15 — 蒸馏水 — — 15 酶工作液(ml)1.51.51.5混匀，置37℃水浴6～10分钟。
以B 管校“0”，500 nm 波长比色，取A 值。
结果计算：TCH (mmol/L) = A R / A S × 5.17结果报告：TCH：mmol/L正常参考值： 2.33～5 .69mmol/L临床意义：TCH↑：常见于动脉粥样硬化等。
TCH↓：甲亢、严重贫血、急性感染等。
注意事项：1.试剂与样品的用量可按其比例放大缩小，计算公式不变。
2.溶血标本胆红素引起正偏差，维生素C、谷胱甘肽、氟化物引起负偏差。
3.样品中的总胆固醇＞15.5mmol/L, 用生理盐水稀释后再重新测定，结果乘以稀释倍数。
课后小结：。
血清总胆固醇测定操作规程
血清总胆固醇测定操作规程《血清总胆固醇测定操作规程》一、目的本规程旨在规范血清总胆固醇测定的操作步骤，确保测定结果准确可靠。
二、适用范围本规程适用于各医疗机构进行血清总胆固醇测定的操作。
三、仪器与试剂1. 仪器：分光光度计2. 试剂：血清总胆固醇测定试剂盒四、操作步骤1. 准备工作a. 开机预热分光光度计，确保仪器处于工作状态。
b. 取出血清总胆固醇测定试剂盒，检查试剂有效期和存储条件。
c. 准备标准品和样本待测血清。
2. 操作流程a. 取出试剂盒中的标准品，按照说明书稀释成不同浓度。
b. 加标准品和待测血清分别加入试剂管中，混匀后置于恒温水浴中反应一定时间。
c. 反应结束后，使用分光光度计在特定波长下测定吸光值。
3. 结果计算a. 使用标准品的吸光值绘制标准曲线。
b. 读取待测血清的吸光值，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
五、结果判定根据患者血清总胆固醇的测定值，参照相关标准进行结果判定和医疗建议。
六、注意事项1. 操作人员应熟练掌握仪器和试剂使用方法，严格按照操作规程进行操作。
2. 试剂及仪器的质量控制应在每次实验前进行验证。
3. 操作过程中应注意个人防护，避免污染试剂和样本。
七、记录与保存1. 对每次测定的操作步骤、结果和质控记录进行详细记录，确保测定结果可追溯。
2. 相关记录资料应按规定保存，以备查。
八、附则对于特殊情况的处理和异常结果的分析，应根据实际情况进行相应操作，并记录详细的处理过程。
以上即为《血清总胆固醇测定操作规程》，希望操作人员严格按照规程执行，确保测定结果的准确性和可靠性。
胆固醇测定实验报告
本次实验旨在通过学习血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）的测定方法，掌握酶法测定胆固醇的原理和操作步骤，并了解血清总胆固醇在临床诊断中的应用。
二、实验原理血清总胆固醇的测定采用酶法，利用胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为胆固醇和脂肪酸，再利用胆固醇氧化酶将胆固醇氧化为胆汁酸，同时生成过氧化氢。
在过氧化氢的作用下，加入的4-氨基安替比林和酚酞在酸性条件下生成红色化合物，其颜色深浅与胆固醇含量成正比。
通过比色法测定吸光度，即可计算出血清中胆固醇的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清样品- 胆固醇酯酶试剂- 胆固醇氧化酶试剂- 4-氨基安替比林试剂- 酚酞试剂- 磷酸缓冲液- 96孔微孔板- 吸量器- 酶标仪2. 实验仪器：- 恒温水浴锅- 离心机- 移液器- 烧杯- 移液管1. 准备工作- 将所有试剂和器材准备好，并确保其清洁、干燥。
- 将血清样品进行编号，并在实验过程中注意避免交叉污染。
2. 样品处理- 取一定量的血清样品，按照实验要求进行稀释。
- 将稀释后的血清样品加入微孔板中，每孔加入一定量的胆固醇酯酶试剂。
3. 酶反应- 将微孔板放入恒温水浴锅中，在37℃下孵育一定时间，使胆固醇酯酶与胆固醇发生反应。
4. 洗板- 将微孔板取出，用去离子水冲洗3次，以去除未反应的酶和底物。
5. 添加试剂- 向每个微孔中加入一定量的胆固醇氧化酶试剂、4-氨基安替比林试剂和酚酞试剂。
- 加入磷酸缓冲液，使溶液pH值保持在酸性范围内。
6. 比色- 将微孔板放入酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 将吸光度值与标准曲线进行对比，计算出血清中胆固醇的含量。
7. 结果分析- 根据实验结果，分析血清总胆固醇水平与临床诊断的关系。
五、实验结果与分析1. 实验结果- 根据实验数据，绘制标准曲线，并计算出样品中胆固醇的含量。
2. 结果分析- 通过实验结果，了解血清总胆固醇水平与临床诊断的关系，为临床诊断提供依据。
血清总胆固醇测定实验报告
血清总胆固醇测定实验报告背景介绍：总胆固醇（TC）是指血浆中所有脂蛋白的胆固醇总和，包括低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）。
总胆固醇水平的高低与心血管疾病的发生密切相关，因此对其进行准确测定具有重要的临床意义。
实验目的：通过本实验，掌握血清总胆固醇的测定方法，了解其在临床诊断中的应用。
实验原理：本实验采用酶法测定血清总胆固醇，其原理为将胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶加入样本中，将胆固醇和脂蛋白水解为游离胆固醇和过氧化物，再由过氧化物与酚类物质发生反应，生成有色产物，最后通过比色计测定其吸光度，从而计算出总胆固醇的含量。
实验步骤：1. 取血清标本，离心分离血清。
2. 用标准吸光度计预热，设置波长为500nm。
3. 取适量样本和对照品，加入试剂A和试剂B，混匀后在37°C恒温水浴中反应15分钟。
4. 加入试剂C混匀，再在37°C恒温水浴中反应5分钟。
5. 用比色计在波长为500nm处对样本和对照品吸光度，计算总胆固醇含量。
实验结果：样本A吸光度为0.6，对照品吸光度为0.3，根据标准曲线计算出样本A的总胆固醇含量为5.0mmol/L。
样本B吸光度为0.7，对照品吸光度为0.4，计算出样本B的总胆固醇含量为6.0mmol/L。
实验结论：根据上述实验结果，样本A的总胆固醇含量正常，而样本B的总胆固醇含量超标，提示可能存在心血管疾病的风险。
因此，血清总胆固醇的测定对于心血管疾病的筛查和诊断具有重要意义，有助于及时采取预防和治疗措施。
总结：通过本次实验，我们掌握了血清总胆固醇的测定方法及其临床意义，了解了其在心血管疾病中的重要性。
在临床实践中，我们应该重视血清总胆固醇的监测，及时发现异常情况并采取相应的干预措施，以保障患者的健康。
血清总胆固醇测定法
血清总胆固醇测定法1.实验原理胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。
醌亚胺的最大吸光度在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：CEH胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸COD胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2POD2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂8×70ml）6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L酚20mmol/L4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇水平，了解被检测者的心血管健康状况，为预防和治疗心血管疾病提供参考依据。
二、实验原理。
血清总胆固醇是指血液中所有脂蛋白和游离胆固醇的总和，通常以毫摩尔/升（mmol/L）为单位进行测定。
在实验室中，我们采用酶法测定血清总胆固醇，即通过酶的催化作用将胆固醇氧化成酮醇，然后通过比色法测定产生的色素来确定总胆固醇的浓度。
三、实验步骤。
1. 采集被检测者的静脉血样本，放置于离心管中，离心10分钟后取上清液。
2. 将上清液放入试剂盒中，按照说明书的操作步骤进行样本处理和试剂添加。
3. 使用分光光度计测定样本吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
四、实验结果。
根据实验测定，被检测者的血清总胆固醇水平为X mmol/L。
五、实验分析。
根据血清总胆固醇的测定结果，结合被检测者的年龄、性别、生活方式等因素，可以初步判断其心血管健康状况。
若总胆固醇水平偏高，可能存在心血管疾病的风险，需要进一步进行相关检查和干预措施。
若总胆固醇水平正常，被检测者的心血管健康状况良好。
六、实验注意事项。
1. 在采集血样和进行实验操作时，要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验过程中要注意化学试剂的使用安全，避免接触皮肤和吸入气体，必要时戴上防护手套和口罩。
3. 实验设备的使用和维护要符合相关规定，保证设备的正常运转和数据的准确性。
七、实验结论。
通过本次实验测定，我们成功得出了被检测者的血清总胆固醇水平，并对其心血管健康状况进行了初步分析。
实验结果对于预防和治疗心血管疾病具有一定的参考价值。
八、实验展望。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验方法，提高测定精度和准确性，为更多人群的心血管健康提供更多的数据支持和科学依据。
以上就是本次血清总胆固醇的测定实验报告，希望对大家有所帮助。
总胆固醇测量方法
总胆固醇测量方法《总胆固醇测量方法》一、前言总胆固醇是一种有机化合物，是一种重要的体内血脂代谢物质。
总胆固醇的水平测量可以推测血液中胆固醇含量，是检测脂质代谢紊乱的重要指标。
二、测量原理总胆固醇测量一般采用酶联免疫酶法，电化学发光法，比色法等测量方法进行测试，其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应，以此测定血清中总胆固醇的含量。
三、实验材料及仪器1. 操作材料：血清/血浆样本，质控品，抗原及抗体，洗涤液，酶标板，酶，3,3',5,5'-四甲基联苯胺棕榈酸根（TMB）试剂级及稀释剂，发光消除液。
2. 仪器：酶标仪、微量滴定管、离心机、分光光度计、体外诊断试剂诊断仪、热微波消解仪等。
3. 试剂：总胆固醇质控品及标准品，TMB和助剂试剂。
四、步骤1. 酶标仪的设置：在酶标仪中进行试剂和质控程序的设置，确定比色曲线，并计算相应的曲线斜率，计算相关性系数的可信度水平。
2. 加样：按试剂的操作规程，向各个试管中加入合适的血清样本、抗体和抗原。
3. 免疫反应：将各个试管放置在摇床中，摇晃3—5分钟，以使其充分混合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应。
4. 测量：将试管放入离心机进行离心，将各个试管的比色结果通过分光光度计或其他胆固醇测量仪法进行测量。
5. 校正：将质控试管的测定结果与标准值进行比较，根据结果，调节测量结果的可信度水平。
6. 报告：根据测量结果，报告总胆固醇的测定结果及可信度水平。
五、注意事项1. 在质控品、样本标记及加样时要注意完整性及准确性，以防止交叉污染等偏差。
2. 加样时，要注意充分混合，以保证实验的准确性。
3. 测量结果要经过校正后，才能确定总胆固醇的测定结果及可信度水平。
六、总结总胆固醇是检测脂质代谢紊乱的重要指标，常用的总胆固醇测量方法有酶联免疫酶法，电化学发光法，比色法等，其原理是利用抗原特异性抗体与特异抗原结合，催化特异性酶而诱导发光或比色反应，以此测定血清中总胆固醇的含量。
实验十七血清总胆固醇测定（CHODPAP终点法）45
实验十七血清总胆固醇测定（CHOD PAP终点法）一、实验目的与要求1 了解血清总胆固醇（cholesterol）测定在人体营养学上的意义及其生理学上的重要性。
2 掌握血清总胆固醇测定方法及721型分光光度计或半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。
二、实验原理胆固醇 + H2O胆固醇酯酶游离胆固醇 + 脂肪酸游离胆固醇+O2胆固醇酯酶Δ4胆甾烯酮+H2O2H2O2+4氨基安替吡啉+酚过氧化物酶红色醌亚胺 + H2O红色醌亚胺在波长505nm处有最大吸收峰,颜色深浅与标本中总胆固醇含量成正比。
三、实验仪器与试剂1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2）四孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。
2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 10μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 2ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。
3 本试剂盒内含3种试剂：（1）酶试剂10ml×2瓶包括： 4AAP 2mmol/L胆固醇酯酶≥1500U/L胆固醇氧化酶≥1500U/L过氧化物酶≥3000U/L缓冲液 50mmol/L保护剂、稳定剂适量（2）稀释液 80ml×1瓶包括：缓冲液 50mmol/L酚 3.889mmol/L胆酸盐、乳化剂适量（3）胆固醇标准液 2ml×1瓶［5.17mmol/L(200mg/dl)］四、实验步骤1 配制酶工作液将酶试剂和稀释液按1∶4混合而成（4℃冰箱中可保存1周）。
2 于一系列试管中，按下表加入各溶液：表171系列反应管中各管所加溶液空白管标准管测定管蒸馏水（μl）10——标准液（μl）—10—血清（μl）——10酶工作液（ml）1.01.01.03 混合，置37℃水浴保温15min。
4 于波长510nm处以空白校零，读取各管吸光度（A）。
总胆固醇的测定方法
总胆固醇的测定方法
总胆固醇是一种重要的生物标志物，它与心血管疾病的发生密
切相关。
因此，准确测定总胆固醇水平对于预防和治疗心血管疾病
具有重要意义。
下面将介绍几种常见的总胆固醇测定方法。
1. 酶法测定，这是目前常用的总胆固醇测定方法。
该方法通过
酶法将胆固醇氧化成酮醇，然后使用特定的试剂进行比色测定，根
据产生的色素浓度来计算总胆固醇的含量。
2. 色谱法测定，色谱法是一种高效分离和测定物质的方法，通
过气相色谱或液相色谱技术可以准确地测定血清中的总胆固醇含量。
3. 免疫测定法，这种方法利用特定的抗体与总胆固醇结合，形
成抗原-抗体复合物，然后通过免疫学技术进行测定。
总的来说，这些方法都可以准确地测定总胆固醇的含量，但在
选择测定方法时需要根据实际情况和实验室条件进行合理选择。
通
过准确测定总胆固醇水平，可以及时发现心血管疾病的风险，并采
取相应的预防和治疗措施，有助于保护心血管健康。
血清胆固醇测定方法
血清胆固醇测定方法
血清胆固醇测定方法包括下面几种常见的方法：
1. 酶测法：使用胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶，将血清中的胆固醇转化为胆酮和Peroxidase，通过测定产生的Peroxidase的活性来确定血清胆固醇水平。
2. 光度法：使用胆固醇草酮胆固醇草酮胆酰和草酮巯酸酯，通过测量产生的草酮巯酸酯的颜色强度来确定血清胆固醇水平。
3. 脂质染色法：使用思維染料等染料，将血清中的胆固醇与染料结合成一个染色复合物，通过比色法或荧光法来测定复合物的浓度，从而确定血清胆固醇水平。
4. 气相色谱法：将血清中的胆固醇与浓硝基苯甲酸酐反应生成苯甲酰胆固醇，然后使用气相色谱进行分离和定量测定。
请注意，这些方法都需要在实验室环境中进行，需要专业的设备和操作技术。
ISO15189血清总胆固醇酶试剂法测定法
只是起过筛作用， 如 果要对危险作较好 的 评估，必须另外进 行 HDL-C 和 LDL-C 检测 。
近 年 来 ，通 过 控 制 饮 食 、改 变 生 活 方 式 的 治 疗 、和 /或 使 用 各 种 药 物 治 疗 (特 别 他 汀 类 药
物[HMG CoA 还原酶 抑 制剂])临床试验 ，说 明了降低总胆固醇 和 LDL-C 水平可极大地 减 少 CHD
批内精密度
x
s
CV
批间精密度
x
s
CV
n=20
(mmol/L) (mmol/L)
(%)
n=20
(mmol/L) (mmol/L)
(%)
ABC 医院检验科
依据 ISO15189 编制
生效日期：2019-10-20
样品 1
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血清总胆固醇酶试剂法测定法
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样品 1
2.69
合适范围：
5.2mmol/L
高度危险临界值：
5.2～ 6.2mmol/L
高度危险范围：
>6.2mmol/L
1 3. 临 床 意 义 ：胆 固 醇 由 体 细 胞 合 成 和 来 自 对 食 物 的 吸 收 [ 1 ] ，是 细 胞 膜 的 组 分 和 类 固 醇 激 素 、
胆 汁 酸 的 前 体 。血 液 中 的 脂 蛋 白 是 脂 肪 和 载 脂 蛋 白 的 复 合 物 ，由 它 转 运 胆 固 醇 。脂 蛋 白 有 四
16. 病 危报 警值 的处理 ： 高度危险范围>6.2mmol/L。
17. 方 法局 限性
17.1 本法对胆 固醇的 检测范围为 0.08～ 19.4mmol/L。当 样品测定 值超过上限时 ，应将 样品
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇【原理】血清中总胆固醇(total cholesterol ，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol ，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester ，CE)两部分。
血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H 2O 2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
【试剂】1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献)GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚5mmol/L2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg ，用异丙醇配成100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。
也可用定值的参考血清作标准。
【操作步骤】 终点法检测TC 按下表依次加样。
酶法测定TC 操作步骤项目 测定管 标准管 空白管 血清(μl) 50 － － 标准液/定值血清(μl)－ 50 － 蒸馏水(μl) － － 50 酶试剂(μl)1.501.501.50混匀后，37℃保温5 min ，用分光光度计比色，于500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。
【计算】血清TC (mmol/L)＝标准管吸光度测定管吸光度×胆固醇标准液浓度【参考范围】血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。
【临床意义】1．TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。
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血清总胆固醇酶试剂法测定法
1.实验原理
胆固醇酯酶(CHE)、胆固醇氧化酶(CHO)、过氧化物酶(POD)、Trinder反应偶联比色终点法。
反应式如下：
CHE
胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸
CHO
胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2
POD
2H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚醌亚胺(显色) + 4H2O
2. 标本：
2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料
6.1 试剂威特曼总胆固醇试剂盒试剂1 试剂2
6.1.1 试剂准备试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见AU2700生化分析仪操作规程.SOP 文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总胆固醇校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠检测结果。
12. 参考值范围（mmol/L）
合适范围： 5.2mmol/L 高度危险临界值： 5.2～6.2mmol/L 高度危险范围：>6.2mmol/L 13. 临床意义：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸
收[1]，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。
血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。
脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。
LDL参与将胆固醇运送至外周细胞，而HDL负责从细胞中吸收胆固醇。
四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。
低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病(CHD)以及相关的死亡率有着非常密切的关系。
即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C浓度的升高也预示了高度危险。
HDL-C 具有抵御斑块形成的作用，它与冠心病的发生呈负相关。
事实上，低HDL-C值是独立的危险因子。
进行个体总胆固醇的检测只是起过筛作用，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行HDL-C和LDL-C检测。
近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/或使用各种药物治疗(特别他汀类药物[HMG CoA还原酶抑制剂])临床试验，说明了降低总胆固醇和LDL-C水平可极大地减少CHD的危险。
14. 操作性能
14.1 线性范围：0.08～19.4mmol/L。
14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
批间精密
度
n=20
x
(mmol/L
)
s
(mmol/L
)
CV
(%)
样品1 2.79 0.046 1.65 样品1 2.69 0.031 1.15 样品2 6.10 0.037 0.61 样品2 5.46 0.066 1.21 样品3 6.57 0.041 0.62 样品3 6.34 0.059 0.93 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂
盒(x)，同时对78个样品进行CHOL检测，将检测结果作
方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.065mmol/L；
r =0.995。
14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.08mmol/L。
14.5 病人结果可报告范围：0.08～19.4mmol/L。
15. 超出范围结果处理：本法对胆固醇的检测范围为0.08～19.4mmol/L。
当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+4稀释，重新测定，结果乘以5。
16. 病危报警值的处理：高度危险范围>6.2mmol/L。
17. 方法局限性
17.1 本法对胆固醇的检测范围为0.08～19.4mmol/L。
当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+4稀释，重新测定，结果乘以5。
17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤2840μmol/L，胆红素浓度≤342μmol/L，血红蛋白浓度≤2.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19. 参考文献
1.Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids,
lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical
Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.809-61.
2.Recommendation of the Second Joint Task Force
of European and other Societies on Coronary Prevention. Prevention of coronary heart disease in clinical practice. Eur Heart J 1998;19:1434-503.
3.Artiss JD, Zak B. Measurement of cholesterol
concentration. In: Rifai N, Warnick GR , Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:99-114.
4.Deeg R, Ziegenhorn J. Kinetic enzymatic method
for automated determination of total cholesterol in serum. Clin Chem 1983;29:1798-802.
5.Schaefer EJ, McNamara J. Overview of the diagnosis and treatment of lipid disorder. In Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997:25-48
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。