江西省血液中心核酸检测经验介绍
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江西省血液中心核酸检测经验介 绍
主要内容
中心简介 核酸检测实验室的设置及工作流程 核酸检测实验室管理和检测关键控制点 开站核酸检测情况
2
江西省血液中心概况
江西省血液中心于1984年成 立，隶属省卫生厅管理的公共卫 生事业单位。占地面积63.4亩， 总建筑面积21788㎡,现有职工 171人，供应省直13家医疗机构 临床用血，2011年总供血量为 23.8吨，并承担全省采供血机构 质量控制及评价、业务技术指导、 人才培训及血液相关的科研等任 务。自2006年起，临床用血已实 现100%来自于自愿无偿献血。成 分输血达到99.8%。
12
19.00 20.00 21.00 22.00 23.00 24.00 01.00 02.00 03.00 04.00 05.00 06.00 07.00
核酸检测的关键控制点—标本
采血管的选择 留样方式及注意事项 运输过程中标本质量保证 标本处理方式及细节解读 标本检测
13
核酸检测采血管的要求
抗凝剂：首选EDTA和枸 橼酸盐，避免使用肝素 抗凝。
无菌 无DNA酶、无RNA酶： 含分离胶的真空采血管；
14
标本留取细节解读
防污染
留取人员的个人防护，留取前的清洁消毒，留 取过程中保持密闭，防止其他可能污染物。
充分混匀
注意样品采集后的充分混匀，一般上下颠倒５ 次以上，如操作不规范，则容易出现凝块，给后续 检测带来弊端：核酸检测出现凝块报错，引起人力、 试剂等不必要的浪费，增加标本污染风险。
机采标本
标本采集后4小时内进行离心处理； 加样模式：六混样（1机采标本+5全血标本）
10
核酸检测实验室工作流程
ห้องสมุดไป่ตู้
08.00 09.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00 19.00 20.00 21.00 22.00 23.00
19
核酸标本离心细节解读
离心机的选择：低温离心机； 离心条件：3000g,20min，应根据实际进行调整以
确保离心充分； 另外，为更好的消除凝块，可在离心前再次颠倒混
匀；也可在检测前进行二次离心。
20
检测前准备
➢ 检测前核对：状态、标识、离心时间、保存 条件等；
➢ 室温平衡：如标本在4℃中保存，检测前应 室温平衡30分钟以上（非常重要，否则易产 生clot）；
提取扩增检测区：用于核酸的提取、PCR扩增和检测。 设备：3套 COBAS® AmpliPrep+COBAS® TaqMan 、服务器1台、 试剂暂存冰箱1台、移动紫外车3台
7
核酸检测实验室的设置
实验室平面图
8
检测系统： cobas s 201核酸血液筛查系统
设备配置： 2 STAR+ 3CAP+ 3docking+ 3CTM
3
中心重视科研工作，致力从临床输血治疗和开展新 技术治疗的需求出发，开展了血液去除白细胞、血 浆病毒灭活等新技术。2010年4月份，中心及北京、 上海、广州等12个省市15所采供血机构一道，被卫 生部列为我国内地首批核酸检测试点单位。此外， 中心先后开展了骨髓移植配血、器官移植配型(基因 法)、产前血型血清学检测、新生儿溶血病检测、亲 子鉴定(基因法)等研究工作。
4
中心核心价值观
忠诚履行输血使命 精益服务健康人生
5
中心环境
6
核酸检测实验室的设置
标本交接离心区：用于核酸标本的接收、离心处理； 设备：大容量低温离心机2台
混样区：用于血液标本开盖、混样、以及质控品的加样； 设备：全自动混样仪HAMILTON STARIVD 2台、生物安全柜1台、 移动紫外车3台；
➢ 如何避免留取脂血标本？ 应注意饮食情况等的征询，可一定程度消除 留取脂血标本。
17
NAT标本中的其它影响因素
➢ 内源性：免疫球蛋白、蛋白酶、离子等； ➢ 外源性：肝素抗凝剂、手套滑石粉、标本容
器或采样器材中含有的抑制物等。
18
标本的运输
冷链控制 专用标本运输箱的使用； 确保标本在采集后4小时内离心。
酶免检测第一批
酶免检测第二批 酶免检测第三批
Start NAT
核酸检测（酶免第一批阴性）
核酸检测（酶免第二批阴性）
核酸检测（酶免第三批阴性）
2 staffs
核酸检测如有阳性结果，当天进行拆分实验 11
核酸检测实验室工作流程
核酸检测阳性样本拆分实验 1 staff
全部样本在48小时内出报告，符合卫生部核酸检测要求
➢ 开盖： 加样前开盖； 在生物安全柜中进行；
21
加样过程中凝块报错原因分析
➢ 采血后混匀不充分：局部抗凝效果不佳致凝块析出； ➢ 离心条件不充分：离心力或离心时间不足所致，如
血浆中存在的微量血细胞、分离胶、纤维蛋白等为 引发凝块的原始因素。 ➢ 加样前室温平衡时间不足。 ➢ 加样设备问题：为假凝块，多为设备感应异常、设 备硬件及软件的兼容性欠缺等原因引起，可通过调 整参数、软件兼容性等方法解决；
标本量
标本留取应检查是否足量，如量少，应更换采 血管重新留取，杜绝开盖留取。
15
NAT标本溶血及影响
溶血：原因多为标本留取中机械作用致红细胞破 裂引起，如标本留取不畅、留取速度过快等；另 外，剧烈震荡也可引起溶血，如运输颠簸等
溶血对NAT检测的影响： 血红蛋白是核酸检测的主要抑制物之一，可抑
制核酸检测；另外可核酸酶的释放加速核酸降解。 如何避免溶血现象出现？
标本留取时将血液顺管壁缓慢注入真空管中；另 外避免震荡，以防血细胞破裂而溶血。
16
NAT标本脂血及影响
➢ 脂血是指血液标本采集后，经过离心处理， 分离出来的血清中含有脂类物质。从外观上 看，血浆呈浑浊的乳白色。
➢ 脂血对NAT检测的影响：脂血易引起加样环 节液面感应异常报错；高脂血标本可通过对 荧光的屏蔽和吸收作用而干扰检测。
试剂组成：
cobas® TaqScreen MPX Test（96人份，一代） cobas® TaqScreen MPX Control Kit（一代：6*6） cobas® TaqScreen Wash Reagent
9
核酸检测实验室工作流程
全血标本
标本采集后4小时内进行离心处理。样本离心后先进行常规酶 免检测，然后将酶免试剂阴性结果标本进行六混样核酸检测。 如混样检测有反应性，再进行拆分检测。
主要内容
中心简介 核酸检测实验室的设置及工作流程 核酸检测实验室管理和检测关键控制点 开站核酸检测情况
2
江西省血液中心概况
江西省血液中心于1984年成 立，隶属省卫生厅管理的公共卫 生事业单位。占地面积63.4亩， 总建筑面积21788㎡,现有职工 171人，供应省直13家医疗机构 临床用血，2011年总供血量为 23.8吨，并承担全省采供血机构 质量控制及评价、业务技术指导、 人才培训及血液相关的科研等任 务。自2006年起，临床用血已实 现100%来自于自愿无偿献血。成 分输血达到99.8%。
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19.00 20.00 21.00 22.00 23.00 24.00 01.00 02.00 03.00 04.00 05.00 06.00 07.00
核酸检测的关键控制点—标本
采血管的选择 留样方式及注意事项 运输过程中标本质量保证 标本处理方式及细节解读 标本检测
13
核酸检测采血管的要求
抗凝剂：首选EDTA和枸 橼酸盐，避免使用肝素 抗凝。
无菌 无DNA酶、无RNA酶： 含分离胶的真空采血管；
14
标本留取细节解读
防污染
留取人员的个人防护，留取前的清洁消毒，留 取过程中保持密闭，防止其他可能污染物。
充分混匀
注意样品采集后的充分混匀，一般上下颠倒５ 次以上，如操作不规范，则容易出现凝块，给后续 检测带来弊端：核酸检测出现凝块报错，引起人力、 试剂等不必要的浪费，增加标本污染风险。
机采标本
标本采集后4小时内进行离心处理； 加样模式：六混样（1机采标本+5全血标本）
10
核酸检测实验室工作流程
ห้องสมุดไป่ตู้
08.00 09.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00 18.00 19.00 20.00 21.00 22.00 23.00
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核酸标本离心细节解读
离心机的选择：低温离心机； 离心条件：3000g,20min，应根据实际进行调整以
确保离心充分； 另外，为更好的消除凝块，可在离心前再次颠倒混
匀；也可在检测前进行二次离心。
20
检测前准备
➢ 检测前核对：状态、标识、离心时间、保存 条件等；
➢ 室温平衡：如标本在4℃中保存，检测前应 室温平衡30分钟以上（非常重要，否则易产 生clot）；
提取扩增检测区：用于核酸的提取、PCR扩增和检测。 设备：3套 COBAS® AmpliPrep+COBAS® TaqMan 、服务器1台、 试剂暂存冰箱1台、移动紫外车3台
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核酸检测实验室的设置
实验室平面图
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检测系统： cobas s 201核酸血液筛查系统
设备配置： 2 STAR+ 3CAP+ 3docking+ 3CTM
3
中心重视科研工作，致力从临床输血治疗和开展新 技术治疗的需求出发，开展了血液去除白细胞、血 浆病毒灭活等新技术。2010年4月份，中心及北京、 上海、广州等12个省市15所采供血机构一道，被卫 生部列为我国内地首批核酸检测试点单位。此外， 中心先后开展了骨髓移植配血、器官移植配型(基因 法)、产前血型血清学检测、新生儿溶血病检测、亲 子鉴定(基因法)等研究工作。
4
中心核心价值观
忠诚履行输血使命 精益服务健康人生
5
中心环境
6
核酸检测实验室的设置
标本交接离心区：用于核酸标本的接收、离心处理； 设备：大容量低温离心机2台
混样区：用于血液标本开盖、混样、以及质控品的加样； 设备：全自动混样仪HAMILTON STARIVD 2台、生物安全柜1台、 移动紫外车3台；
➢ 如何避免留取脂血标本？ 应注意饮食情况等的征询，可一定程度消除 留取脂血标本。
17
NAT标本中的其它影响因素
➢ 内源性：免疫球蛋白、蛋白酶、离子等； ➢ 外源性：肝素抗凝剂、手套滑石粉、标本容
器或采样器材中含有的抑制物等。
18
标本的运输
冷链控制 专用标本运输箱的使用； 确保标本在采集后4小时内离心。
酶免检测第一批
酶免检测第二批 酶免检测第三批
Start NAT
核酸检测（酶免第一批阴性）
核酸检测（酶免第二批阴性）
核酸检测（酶免第三批阴性）
2 staffs
核酸检测如有阳性结果，当天进行拆分实验 11
核酸检测实验室工作流程
核酸检测阳性样本拆分实验 1 staff
全部样本在48小时内出报告，符合卫生部核酸检测要求
➢ 开盖： 加样前开盖； 在生物安全柜中进行；
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加样过程中凝块报错原因分析
➢ 采血后混匀不充分：局部抗凝效果不佳致凝块析出； ➢ 离心条件不充分：离心力或离心时间不足所致，如
血浆中存在的微量血细胞、分离胶、纤维蛋白等为 引发凝块的原始因素。 ➢ 加样前室温平衡时间不足。 ➢ 加样设备问题：为假凝块，多为设备感应异常、设 备硬件及软件的兼容性欠缺等原因引起，可通过调 整参数、软件兼容性等方法解决；
标本量
标本留取应检查是否足量，如量少，应更换采 血管重新留取，杜绝开盖留取。
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NAT标本溶血及影响
溶血：原因多为标本留取中机械作用致红细胞破 裂引起，如标本留取不畅、留取速度过快等；另 外，剧烈震荡也可引起溶血，如运输颠簸等
溶血对NAT检测的影响： 血红蛋白是核酸检测的主要抑制物之一，可抑
制核酸检测；另外可核酸酶的释放加速核酸降解。 如何避免溶血现象出现？
标本留取时将血液顺管壁缓慢注入真空管中；另 外避免震荡，以防血细胞破裂而溶血。
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NAT标本脂血及影响
➢ 脂血是指血液标本采集后，经过离心处理， 分离出来的血清中含有脂类物质。从外观上 看，血浆呈浑浊的乳白色。
➢ 脂血对NAT检测的影响：脂血易引起加样环 节液面感应异常报错；高脂血标本可通过对 荧光的屏蔽和吸收作用而干扰检测。
试剂组成：
cobas® TaqScreen MPX Test（96人份，一代） cobas® TaqScreen MPX Control Kit（一代：6*6） cobas® TaqScreen Wash Reagent
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核酸检测实验室工作流程
全血标本
标本采集后4小时内进行离心处理。样本离心后先进行常规酶 免检测，然后将酶免试剂阴性结果标本进行六混样核酸检测。 如混样检测有反应性，再进行拆分检测。