生理实验设计

动物生理学实验设计

题目：不同浓度钾离子对黄鳝心脏功能的影响组员：

指导老师

中国·武汉

二○一一年十二月

分类号密级不同浓度钾离子对黄鳝心脏功能的影响

一、研究内容

1、通过离体心脏灌流实验观察钾离子浓度对黄鳝心脏功能的影响

2、通过生物信号采集系统对黄鳝收缩曲线进行记录

二、研究对象

黄鳝（Monopterus albus，合鳃鱼科）广泛分布于亚洲东南部，普遍的淡水食用鱼，除西北高原外，各地均产，栖息在池塘、小河、稻田等处，常潜伏在泥洞或石缝中。夜出觅食。

黄鳝心脏由一心房、一心室组成，动脉球和腹主动脉结构简单突出，容易进行心脏插管，因此被开发为研究鱼类心脏活动的实验用动物。

三、实验药品及设备

1、试剂和药品：配制鱼用生理盐水相关药品、蒸馏水

2. 装置和器材：细钢丝一根、木板条一个、纱布一块、万能支架一个、双凹夹一个、蛙心插管一个、蛙心夹一个、大烧杯一个、500ml量筒一个、小动物手术器械一套、滴管一根、棉线、张力换能器一套、计算机及生物信号采集处理系统一套、台秤一台、试管6支。

四、实验方法与步骤

1、鱼用生理盐水的制备

按下列药品制备1000ml鱼用生理盐水

NaCl：5.9g 、KCl：0.25g 、CaCl2：0.28g 、MgSO4·7H2O：0.29g 、NaHCO3：2.1g 、KH2PO4：1.6g 加蒸馏水溶解定容至1000 ml。

2、不同浓度钾离子溶液的制备

以标准鱼用生理盐水中中K+离子浓度为"1",分别配制1/8 倍,1/4 倍,1/2 倍,1倍,2倍,3倍的K+离子浓度(保持鱼用生理盐水中其它离子浓度不变)的溶液各10ml于6支试管中，分别标号为1—6。

3、离体黄鳝心脏标本制备

(1) 暴露心脏。破坏脑和脊髓，用纱布裹住黄鳝的身体，露出头。从枕骨与脊椎交界处剪断脊柱（不要太深，以免剪断腹面的血管），此时可见白色脊髓。用一

细钢丝插入椎管，前后移动，顺势深入(插入椎管的感觉是钢丝前进时有阻力)，可见钢丝所到处的肌肉松弛。钢丝插入深浅视鱼体大小而定，约为峡部（两鳃盖之间的部位）到肛门长度的1/2～3/4。

(2)在动脉球下方穿两根线，一根在腹主动脉远心端结扎并留下线头，另一根线打活结备用。

（3)左手拉住腹主动脉上结扎线头，于动脉球上剪一小口，将装有鱼用生理盐水的的蛙心套管插入动脉球，并顺势推入心室，此时可以看到套管内的液面随心脏搏动而上下移动。用滴管不断更换套管中的灌流液，冲洗心室直至没有血液为止，束紧备用线连同套管尖端一起结扎，并将线头系在套管壁上的小突起上，达到固定作用。最后剪断腹主动脉，提起心脏用线尽量远离静脉窦将其他血管结扎。在结扎外方剪断各组织。此时心脏完全离体，借灌流液而正常搏动。

4、.实验装置连接

将蛙心插管固定于支架上，在心室舒张时将连有一细线的蛙心夹在心脏舒张时夹住心尖，并将细线以适宜的紧张度与张力换能器相连。张力传感器的输出线与计算机生物信号采集处理系统或二道生理记录仪的输入通道相连。

5、实验项目

（1）向插管中滴加1—2滴标准鱼用生理盐水，观察记录心率及收缩幅度，并将其作为正常对照。

（2）用吸管吸出插管中的鱼用生理盐水后，换以等量的试管1内溶液，记录并观察心跳的变化。有变化出现时，应立即将插管内液体吸出，并以等量任氏液换洗2～3次，至心跳恢复正常。

（3）用吸管吸出插管中的鱼用生理盐水后，换以等量的试管2内溶液，记录并观察心跳的变化。有变化出现时，应立即将插管内液体吸出，并以等量任氏液换洗2～3次，至心跳恢复正常。

（4）用吸管吸出插管中的鱼用生理盐水后，换以等量的试管3内溶液，记录并观察心跳的变化。有变化出现时，应立即将插管内液体吸出，并以等量任氏液换洗2～3次，至心跳恢复正常。

（5）用吸管吸出插管中的鱼用生理盐水后，换以等量的试管4内溶液，记录并观察心跳的变化。有变化出现时，应立即将插管内液体吸出，并以等量任氏液换洗2～3次，至心跳恢复正常。

（6）用吸管吸出插管中的鱼用生理盐水后，换以等量的试管5内溶液，记录并观察心跳的变化。有变化出现时，应立即将插管内液体吸出，并以等量任氏液换洗2～3次，至心跳恢复正常。

（7）用吸管吸出插管中的鱼用生理盐水后，换以等量的试管6内溶液，记录并观察心跳的变化。有变化出现时，应立即将插管内液体吸出，并以等量任氏液换洗2～3次，至心跳恢复正常。

6、清洗并整理实验器具

五、预期结果

若滴加不同浓度的K+生理盐水后黄鳝收缩曲线发生明显变化则说明K+浓度对黄鳝心脏功能有影响。