遗传学实验ppt

2、固定染色
吸去生理盐水，滴数滴盐酸，水解５分钟， 使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体 散开。
吸去盐酸，加1滴蒸馏水轻轻冲洗后吸干， 滴1~2滴醋酸洋红染液，固定染色10~20分 钟。
3.制片
染色完成后，盖上盖玻片压片，然后用吸水 纸包被玻片，吸干多余染色液，并用手指轻压 盖玻片，再用铅笔的橡皮头或解剖针柄垂直轻 敲，或进一步用拇指在盖玻片上适当用力压片， 注意勿使盖玻片移动。
3、果蝇的转接 被麻醉果蝇移入饲养瓶中，将瓶横卧置放， 否则未醒果蝇粘着于饲料会溺死。待果蝇苏 醒后再将瓶直立，贴上标签，放入培养箱。
３、处女果蝇的选取
雌果蝇受精囊内可贮存大量的精子，因此 在做品系间杂交时，母本必须选用处女蝇。 雌蝇孵出12小时后才会交配（8小时更为可 靠），所以将老果蝇清除后，12小时内所 收集到的雌蝇就是处女蝇。
（二）果蝇的培养及杂交
1、果蝇培养时常用的培养基
2、果蝇的麻醉 首先，将培养瓶棉塞上的果蝇驱到瓶底，打开 培养瓶与麻醉瓶的瓶塞，迅速使两瓶口对接， 将培养瓶中部分果蝇驱入麻醉瓶中，迅速塞上 棉塞，防止果蝇的种群污染，拔开麻醉瓶棉塞， 以其侧面遮盖麻醉瓶口，再棉塞中央滴几滴乙 醚，塞上棉塞，等果蝇麻醉。（果蝇翅膀外层 45度角表死亡）
X2检验（ F2）
实验三 果蝇巨染色体的制片与观察
一 实验目的
1、练习果蝇幼虫的解剖技术及果蝇唾 腺染色体的制片方法
2、观察果蝇的唾腺染色体
二 实验原理
唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫幼虫 唾液腺内的巨大染色体，由于染色体DNA经过 多次复制，但并未发生细胞核分裂，重复复制 后的染色线聚集在一起，因此比一般的染色体 大得多。同时，唾腺细胞中的同源染色体总是 处于配对状态，因此在果蝇唾腺细胞只能看到 体细胞染色体数目的一半。
2、第二周，倒去杂交亲本果蝇。
3、第三周，观察F1眼睛颜色。将F1全部倒 出，轻度麻醉，观察F1成蝇，记载正反交 结果 。观察后，将F1果蝇全部移入一新培 养瓶（这里不需用处女蝇）置25℃温箱中 培养。
4、第四周，倒去F1亲本。 5、第五周，观察F2成蝇眼睛颜色。被统计
过的果蝇处理掉。
四、实验记录及结果分析
实验二 果蝇的伴性遗传实验
一、实验目的
❖ 了解伴性遗传和非伴性遗传的区别，了解伴 性遗传基因在正、反杂交中的差异。
❖ 掌握基本的遗传结果记录及统计处
1、杂交组合亲本设计
正交：红眼雌蝇(处女蝇)×白眼雄蝇
反交：白眼雌蝇(处女蝇)×红眼雄蝇
反交方法： (a)把红眼果蝇倒出麻醉，仔细挑出４只雄蝇，移到 上述杂交瓶中，贴好标签。 (b) 把白眼雌蝇（处女蝇）倒出麻醉，挑４只移到杂 交瓶中。 (c)等杂交亲本在杂交瓶中全部苏醒后，将杂交瓶移 入25℃温箱中培养。
遗传学实验
1.果蝇的培养、形态观察及整体装片的制作 2.果蝇的伴性遗传 3.果蝇巨染色体的制片和观察 4.从口腔脱落细胞中提取人类基因组DNA 5.PCR法鉴定人SRY基因 6.学生自主创新性实验——微核检测技术 7.荧光定量PCR检测烟草刺激后人肺细胞 ERCC4基因和GAPDH基因的表达变化 8.人类ACE基因多态检测及其与耐力运动能 力的关联分析
DNA提取的方法：
1.用蛋白酶K（使膜上蛋白 变性分解）和去污剂SDS
➢ 浓盐法 ➢ 阴离子去污剂法 ➢ 苯酚抽提法
（破坏细胞膜的脂质结构） 共同消化细胞。
2.然后酚、氯仿等有机溶剂 进行抽提，进行DNA的纯化，
（三）果蝇整体装片的制作
１、制片：取轻度麻醉的雌雄果蝇各一只放在 载玻片上，待果蝇将醒能动时，滴一滴树胶 在果蝇上，盖上盖玻片，让盖片自然沉降， 要防止气泡产生。滴树胶的量以浸没果蝇， 盖上盖片不外漏为度。
２、观察：果蝇的背部横纹、雄果蝇的性梳。
（四）作业
制作一张良好的装片，要求能够看到果蝇的背 部横纹及性梳。
研究证明，多线染色体的带纹与某些特定 的基因相联系，由于多线染色体上的带纹清晰 可数，因此巨染色体是遗传学上研究染色体形 态结构和染色体畸变的好材料。
三 实验步骤
1、取材(三龄幼虫，5mm)
取一张载玻片放在双筒解剖镜下，滴一滴生理盐水， 将幼虫放在生理盐水内。两手各握一枚解剖针，一 枚钉住幼虫末端的1/3处固定幼虫，另一枚解剖针钉 住幼虫头部，前拉，把头部自身体拉开，可看到唾 腺，剔除唾腺周围的脂肪及其它物质。
四 作业
❖ 制作果蝇巨染色体装片 ❖ 画出你所观察到的果蝇巨染色体，并加
以标注与描述。
实验四 从口腔脱落细胞中提取 人类基因组DNA
实验目的
1、了解从细胞中提取DNA的基本原理
2、学习从口腔脱落细胞中提取高分子量DNA 的基本操作步骤和会影响提取效果的注意事 项。
实验原理
破坏细胞的细胞膜，释放出 DNA。
实验一
果蝇的培养、形态观察及整体装片 的制作
（一）果蝇的生活史
昆虫纲，双翅目。25℃下，~12天完成一个周 期 ：卵→幼虫→蛹→成虫。成体果蝇可活 几周。
卵 幼虫
蛹 成虫
雌雄果蝇的主要 形态特征
性状
体型 腹部末端 背部黑色横纹 腹片数 性梳
雌蝇
较大 腹端尖 7条(可见5条) 6片 无
雄蝇
较小 腹端钝 5条(可见3条) 4片 有、位于前足附节上
4.观察
将制片置低倍镜下找到分散好的标本，移至 视野中心，然后转到高倍镜下观察。对染色体 分散、个体性清楚的片子，应仔细观察染色体 的横纹数量、形状和排列顺序，以便对照模式 照片辨认出不同的染色体臂。
一般在一个唾腺细胞中能看到5条长臂的染色体，分 别为X染色体、第二对染色体的左臂（L）、右臂 （R）、第三对染色体的左臂（L）、右臂（R）， 这5条染色体臂由染色中心发射出来。这是由于第 四对染色体相当小看不清，Y染色体浓缩，X染色体 的着丝点位于端部只有一条臂之故。
注意安全！
❖ 1.穿实验服。 ❖ 2.各项操作务必规范，小心谨慎。对有
毒有害物质进行操作时，要做好防护。 ❖ 3.避免在实验室吃喝食物。 ❖ 4.遵守实验室其他安全守则。
实验报告格式
❖ 实验名称 实验人员姓名 学号 实验时间 ❖ 一、实验目的 ❖ 二、实验原理 ❖ 三、实验步骤 ❖ 四、实验结果