欧洲药典蛋白含量测定方法
欧洲药典的氨基酸
欧洲药典的氨基酸欧洲药典氨基酸是指欧洲药典中规定的氨基酸种类和含量。
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，在人体内具有重要的作用。
欧洲药典中的氨基酸种类和含量是根据国际标准和欧洲药品质量管理局（EDQM）的规定进行制定的。
一、欧洲药典氨基酸的种类欧洲药典中规定了多种氨基酸的种类和含量，其中常见的有20种基本氨基酸，包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸。
二、欧洲药典氨基酸的用途1.营养补充剂：欧洲药典氨基酸可以作为营养补充剂，用于补充人体所需的氨基酸种类和含量，特别是对于一些疾病患者或老年人等需要特殊营养的人群。
2.药物合成：欧洲药典氨基酸可以作为药物合成的原料，用于合成一些具有特定生物活性的药物，如抗生素、抗病毒药物等。
3.生物制品原料：欧洲药典氨基酸可以作为生物制品原料，用于制备一些生物制品，如胰岛素、干扰素等。
4.食品添加剂：欧洲药典氨基酸可以作为食品添加剂，用于改善食品的营养价值和口感。
三、欧洲药典氨基酸的优点1.高纯度：欧洲药典氨基酸的纯度较高，可以保证其质量和安全性。
2.稳定性好：欧洲药典氨基酸的稳定性较好，可以保证其在使用过程中的有效性。
3.安全性高：欧洲药典氨基酸经过严格的检测和评估，可以保证其在使用过程中的安全性。
4.符合国际标准：欧洲药典氨基酸的种类和含量是根据国际标准和欧洲药品质量管理局的规定进行制定的，符合国际标准的要求。
四、欧洲药典氨基酸的应用范围1.医疗领域：欧洲药典氨基酸在医疗领域中有着广泛的应用，如营养补充剂、药物合成、生物制品原料等。
2.食品工业：欧洲药典氨基酸可以作为食品添加剂，用于改善食品的营养价值和口感，也可以作为食品原料用于生产一些特殊食品。
3.科学研究：欧洲药典氨基酸在科学研究中也有着广泛的应用，如生物化学研究、蛋白质组学研究等。
生物药物分析与检验
规定“量取”时,系指可用量筒或按 照量取体积的有效数位选用量具.
取用量为“约”若干时,系指取用量 不得超过规定量的±10％.
(2)恒重
除另有规定外，系指供试品连续两次 干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以 下的重量；
⑵诊断血清的制备步骤 ①制备细菌抗原 ②免疫动物和制备抗体血清
⑶诊断血清诊断方法
⒉乙型肝炎病毒表面抗原的 反向被动血凝诊断试剂
⒊妊娠诊断试剂 ⒋抗ABO血型系统血清
血型
A型 B型 O型 AB型
红细胞上的抗原 血清中的抗体
A B 无A，无B A和B
抗B 抗A 抗A，抗B
看看书，找答案
1、生物药物的质量在国内和国际上分别有什 么标准
(2)对照品 指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪 器性能的标准物质。
• 使用生化方法测定的叫标准品； 使用化学方法测定的叫对照品，也就是一 般上仪器的都叫对照品
• 两者都是测量药品质量的基准；也是做为 校正测试仪器与方法的物质标准；是确定 药品真伪优劣的对照
4.计量
本版药典使用的滴定液和供试液的浓度， 以mol／L(摩尔／升)表示者，其浓度要求 精密标定的滴定液用“XXX滴定液 (YYYmol／L)”表示；
药物，如：青霉素、尿激酶、甾体激素、 维生素 。
（3）生物制品
• 预防接种用的生物制品包括疫苗、菌苗 和类毒素。
• 由细菌制成的为菌苗； • 由病毒、立克次体、螺旋体制成的为
疫苗。
• 凡是从微生物、原虫、动物或人体材料直 接制备或用现代生物技术、化学方法制成， 作为预防、治疗、诊断特定传染病或其他 疾病的制剂，通称为生物制品。
欧洲药品评价局EMEA和欧洲药品质量管理局(EDQM)介绍
欧洲药品评价局EMEA和欧洲药品质量管理局（EDQM）介绍一九九四年经欧共体与欧洲议会协商后，以设在法国的欧洲药典委员会秘书处为基础成立了欧洲药品质量管理局(EDQM)。
相对于设在英国伦敦主要负责对新药和新生物制品审评的欧洲药品审评委员会(EMEA)，EDQM主要功能之一是对上市后的仿制药品的监督管理，其主要监管手段是对产品的Certification of Suitability和对通过欧洲各国家官方药品检验所（OMCL）之间的欧洲网络系统来对药品的市场监督。
EMEA （European Medicines uation Agency）翻译为欧洲药品评价局，其机构正在改革变化中，首先，EMEA将从现有的“欧洲药品评价局(European Medicines uation Agency，EMEA) 更名为“欧洲药品局(European Medicines Agency，EMA)“。
欧洲药品质量理事会EDQM （European Directorate for the Quality of Medicines）作为另一重要欧洲官方药管机构，欧洲药品质量管理局是由欧洲药典委员会技术秘书处演化而来，它有很多职能，具体职能如下：1、欧洲药典委员会的技术秘书处提供技术支持2、负责欧洲药典及相关产品的出版与发行3、负责化学药物标准品和生物制品标准品的制备与销售4、负责对欧洲药典各论的适用性认证5、负责构建欧洲官方药品检验实验室网络，承担生物制品批签发与上市药品的监督任务。
EMEA和EDQM之间的关系？欧洲药品评价局EMEA(European Agency for the uation of Medicinal Products)是欧洲官方药管机构之一，它有很多职能，其中很重要的一点就是负责药品（制剂）上市核准程序；而欧洲药品质量理事会EDQM（European Directorate for the Quality of Medicines）作为另一重要欧洲官方药事管理机构，它有很多职能，如：建立药品的质量标准以供欧洲药典委员会使用，制备标准品CRS，执行COS程序最终颁发COS证书等等。
欧洲药典 10.0 2.6.13 非无菌产品的微生物检测 特定微生物的检测
04/2010:206132.6.13.非无菌产品的微生物检测: 特定微生物的检测（4）1.介绍以下描述的几项检测可用于检测不得存在或限量存在的特定微生物，这些微生物可在规定的条件下检出。
设计这些检测,主要用于鉴定一种物质或制剂是否符合一个已建立的微生物质量规定。
用于此目的时，可按如下规定确定取样数量，判定结果。
如果能证明它等同于药典的方法，可采用替代性的微生物的检测程序（包括自动化的方法）。
2 .一般性操作规程按通用章节2.6.12所述制备样品。
若供试品有抑菌性活性，需按通用章节2.6.12所述尽可能的减少其抑菌性或中和。
如果样品制备过程中使用了表面活性剂，则必须按通用章节2.6.12所述证明表面活性剂对微生物的无毒性和它与所使用的钝化剂的相容性。
3. 培养基的促生长性和抑制性以及检测的适用性必须验证在有供试品存在的条件下检测方法检出微生物的能力。
如果检测过程或产品发生了变化，且该变化可能影响检测的结果，则需证明其适用性。
3-1. 检测菌株的制备使用稳定的标准检测菌株混悬液或按以下规定制备。
采用种子菌培养保持技术，确保原代菌连续传代不超过5次。
3-1-1.需氧的微生物。
将每种细菌检测菌株分别在大豆酪蛋白消化物肉汤培养基或大豆酪蛋白消化琼脂培养基上于30 - 35 ℃培养18 - 24小时。
将白色念珠菌的检测菌株在分别在萨布罗右旋糖琼脂培养基上或萨布罗右旋糖肉汤培养基上于20 - 25 ℃培养2 - 3天。
－金黄色葡萄球菌如：ATCC 6538，NCIMB 9518，CIP 4.83或NBRC 13276；（4）本章已通过药典协调，见章5.8.药典协调－铜绿假单胞菌如：ATCC 9027，NCIMB 8626，CIP 82.118或NBRC 13275；－大肠杆菌如：ATCC 8739，NCIMB 8545，CIP 53.126或NBRC 3972；－肠道沙门菌：血清型为salmonella enterica subsp.enterica serptype typhimutium,如ATTC 14028，或其替代品salmonella enterica subsp.enterica serotype abony如NBRC 100797，NCTC 6017或CIP 80.39;－白色念珠菌如：ATCC 10231，NCPF 3179，IP 48.72或NBRC 1594；用pH 7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲溶液或pH 7.2的磷酸缓冲溶液配制供试混悬液。
欧洲药典EP6.0-2.6.12微生物限度
2.6.12非无菌产品的微生物限度检查（总的需氧菌菌落计数）本章包括两种检验方法。
第一种方法给出的是测定适用性的参考方法。
因些在一个专论中依照本法就意味着依从第一种方法，除非特别指出要使用第二种方法。
第二种方法也是欧洲药典的官方组成部分，并且值得注意的是第二种方法特别适用于销售认可。
一旦该相关专论被修订就意味着将用第二种方法替代第一种方法。
第二种方法包含日本药典和美国药典的共同部分使其能够协调。
A．欧洲药典方法该试验方法所讲的是在需氧条件下生长的嗜温性细菌和真菌类微生物的定量检测。
设计该试验的最初目的是以审疑的态度为了测定一种物质按照欧洲药典的检测方法是否符合微生物的特定限定要求。
如果是以这种目的来测定的话，根据下述方法，包括所需的样品数和按照下面方法来解释结果。
该法也用来测定药典所描述的抗菌保留的有效性（5.1.3）。
此外，该法也可以用来监测原料质量同时也可以用来作为微生物质量检测的指导方针（5.1.4）。
如果是用来指导以下目的，如生产厂家的原料检测和/或终产品的检测或终点判定，则包括所需样品数和结果解释的试验方法就必须在生产厂家和主管当局之间达成一致。
执行该方法所设计的实验条件就必须避免所测产品受到意外污染。
避免污染所采取的措施不侧够影响任何所测的微生物。
如果所测产品有抗菌活性，则该产品活性必须补充分中和掉。
如果因为该种目的使用灭活剂则必须证明该灭活剂对微生物的有效性和无毒性。
测定总的需氧微生物数通过微孔滤膜法或专论中所描述的平板菌落计数法。
当没有其它方法可以釆用来测定细菌数时保留最大可能数（Most Probable Number, MPN）.选择哪种应该根据产品的特性和可预计的微生物数等因素来选择。
任何选择的方法必须通过合理的验证。
当根据5.1.3或5.1.4使用时，可以使用平板浇注法和表面扩散法，和微孔滤膜法。
样品制备：抽样检验方法：所选样品必须遵循抽样样品规则。
抽样检验的结果依赖于下列因素：如样品批号，不可接受的高污染产品的健康危害，产品特性，可预料的污染程度等。
欧洲药典7.0-凡例(全)
07/2010:10000 1. 凡例1.1. 概述凡例的内容适用于各论和欧洲药典中的其它章节。
欧洲药典以英语和法语形式发行，欧洲药典委员会的签署国可将药典内容译成其它语言，但若发生争议，应以英语和法语版为权威。
在欧洲药典中，如无特殊规定，“药典”是指欧洲药典，官方缩写Ph. Eur.也指欧洲药典。
文章中如果引用了各论中的标题和副标题意味着文章内容符合相关各论的要求。
文章参考药典中各论内容时，以斜体的各论题目或相关数字表示。
制剂在有效期内必须性质稳定，明确的有效期或说明书应由权力机构批准。
任何各论的物质也必须服从其使用期限。
任何药品的有效期和有效期的计算由权力机构经稳定性研究的试验结果决定。
除凡例和各论中另有说明，各论中的说明为强制要求；除了特定的引用信息，如果各论引用总论中内容时，该总论要求为法定要求。
各论中描述的活性物质，赋形剂，药物制剂和其它项目都是人用和兽用的（除非明确限制不可使用）。
药品项目必须符合各论的要求，否则不符合药典质量。
但并不要求产品放行前，生产商要做各论中的每项试验以满足药典要求。
生产商可通过原始数据，例如生产过程验证，和中间体控制，确保药品是否符合药典要求。
公布的环境参数，权力机构可适当采信，但不排除故意满足药典要求的可能。
检测和试验方法应基于药典标准的官方方法。
经权利机构允许可采用其它替代的分析方法以达到控制目的，并证明该方法是否能达到各论各标准。
若出现争论或异议，应以药典方法为准。
药典各论中的某些物质有多个等级可满足各种需要，除各论中另有说明，要求适用于各等级。
在一些各论中，特别是赋形剂，一系列相关的功能特性都有介绍，其中给出了一些特性的检测方法。
质量体系：在适宜的质量体系架构下，产生有疑问的项目时，应以各论中的质量标准为法定标准。
通则：各论中介绍的药物和制剂也应符合通则中的相关要求。
交叉引用的通则在各论中不特别指出。
除非限定了适用条件，如规定适用于药典各论中的物质，通则的内容适用于各论定义范围内的所有药物和制剂。
欧洲药典EP11.0-2.6.1无菌检查(中文版)
EP2.6.1无菌检查法该试验适用于检查药典要求无菌的药物、制剂产品或其他物品是否无菌的一种方法。
然而，合格的结果仅表明在该试验条件下样品中未发现微生物污染。
预防微生物污染的措施无菌检查应在无菌条件下进行。
为了达到该条件，试验环境必须达到无菌检查的要求。
防止污染采取的措施应确保不会影响供试品中微生物的检出。
通过对工作区域进行适当取样并进行适当控制，来定期监控进行试验的工作条件。
培养基和培养温度用于试验的培养基可按如下所述制备，或可使用等效的商业培养基，只要它们符合生长促进试验的要求。
以下培养基已被证实适用于无菌试验。
硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养。
但其也可用于需氧菌培养。
大豆-酪蛋白培养基适用于真菌和需氧菌的培养。
硫乙醇酸盐流体培养基成分重量L-胱氨酸0.5g氯化钠 2.5g水合葡萄糖/无水 5.5/5.0g琼脂0.75g酵母提取物(水溶性) 5.0g胰酶消化酪蛋白胨15.0g硫乙醇酸钠0.5g或硫乙醇酸0.3mL新配制的刃天青钠溶液(1:1000) 1.0mL纯水1000mL注：灭菌后的pH值:7.1±0.2。
将L-胱氨酸、琼脂、氯化钠、葡萄糖、酵母提取物和酪蛋白的胰腺消化物与纯水混合，并加热至溶解。
将硫乙醇酸钠或硫乙醇酸溶解于该溶液，如果需要可加入1mol/L氢氧化钠溶液，以便在灭菌后该溶液呈pH值7.1±0.2。
如需要过滤，再次加热该溶液但不得煮沸，并趁热以湿润滤纸将该溶液过滤。
加入刃天青钠溶液，混匀，并将该培养基置于适当容器中，该容器应为培养基提供特定的面积/深度比，以使在培养期结束后能明确显示氧气摄入的变色部分不超过培养基的上半部分。
使用经过验证的工艺进行灭菌。
如果需要贮存该培养基，应将其置于无菌、气密容器中，在2～25℃贮藏。
如果超过三分之一的培养基已经呈粉红色，可以用以下方法恢复该培养基功能，但每批培养基仅能恢复一次：在水浴锅中或者自由流动蒸汽中加热该容器，直至粉色消失，并迅速放凉，须小心防止非无菌空气进入到容器中。
欧洲、中东、非洲和欧洲药品药监局EDQM
欧洲药品评价局EMEA和欧洲药品质量管理局（EDQM）介绍一九九四年经欧共体与欧洲议会协商后，以设在法国的欧洲药典委员会秘书处为基础成立了欧洲药品质量管理局(EDQM)。
相对于设在英国伦敦主要负责对新药和新生物制品审评的欧洲药品审评委员会(EMEA)，EDQM主要功能之一是对上市后的仿制药品的监督管理，其主要监管手段是对产品的Certification of Suitability和对通过欧洲各国家官方药品检验所（OMCL）之间的欧洲网络系统来对药品的市场监督。
EMEA （European Medic ines uation Agency）翻译为欧洲药品评价局，其机构正在改革变化中，首先，EMEA将从现有的“欧洲药品评价局(European Medicines uation Agency，EMEA) 更名为“欧洲药品局(European Medicines Agency，EMA)“。
欧洲药品质量理事会EDQM （European Directorate for the Quality of Medicines）作为另一重要欧洲官方药管机构，欧洲药品质量管理局是由欧洲药典委员会技术秘书处演化而来，它有很多职能，具体职能如下：1、欧洲药典委员会的技术秘书处提供技术支持2、负责欧洲药典及相关产品的出版与发行3、负责化学药物标准品和生物制品标准品的制备与销售4、负责对欧洲药典各论的适用性认证5、负责构建欧洲官方药品检验实验室网络，承担生物制品批签发与上市药品的监督任务。
EMEA和EDQM之间的关系？欧洲药品评价局EMEA(European Agency for the uation of Medicinal Products)是欧洲官方药管机构之一，它有很多职能，其中很重要的一点就是负责药品（制剂）上市核准程序；而欧洲药品质量理事会EDQM（European Directorate for the Quality of Medicines）作为另一重要欧洲官方药事管理机构，它有很多职能，如：建立药品的质量标准以供欧洲药典委员会使用，制备标准品CRS，执行COS程序最终颁发COS证书等等。
人血白蛋白—药典注释
人血白蛋白人血白蛋白是最早从人血浆提取并获得大规模生产和应用的血液制品。
白蛋白的研发始于二次世界大战，为抢救伤员美国哈佛大学医学院Cohn教授等人于1942年1月成功从人血浆提纯了白蛋白用于战时伤员抢救。
发展至今已有60年的历史。
我国人血白蛋白的生产始于上世纪70年代初期，《中国生物制品规程》1979年版开始收载，历经《中国生物制品规程》1990年版、2000年版、《中国药典》2005年版、2010年版收载。
人血白蛋白系由肝实质细胞合成，在血浆中的半寿期约为15-19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋白的40%-60%，每100ml血浆含3500-5500mg 白蛋白。
白蛋白在体内的合成率虽然受食物中蛋白质含量的影响，但主要受血浆中白蛋白水平调节，在肝细胞中没有储存，在所有细胞外液中都含有微量的白蛋白。
人血白蛋白的分子结构为含610（585）个氨基酸残基的单链多肽，分子量为66458，分子中含17个二硫键，不含有糖的组分。
在体液pH7.4的环境中，白蛋白为负离子，每分子可以带有200个以上负电荷。
人血白蛋白的主要作用：1.增加血容量和维持血浆胶体渗透压：白蛋白占血浆胶体渗透压的80%，主要调节组织与血管之间水分的动态平衡。
由于白蛋白分子量较高，与盐类及水分相比，透过膜内速度较慢，使白蛋白的胶体渗透压与毛细管的静力压抗衡，以此维持正常与恒定的血容量；同时在血循环中，1g白蛋白可保留18ml水，每5g白蛋白保留循环内水分的能力约相当于100ml血浆或200ml全血的功能，从而起到增加循环血容量和维持血浆胶体渗透压的作用。
2.运输及解毒：白蛋白能结合阴离子也能结合阳离子，可以输送不同的物质，也可以将有毒物质输送到解毒器官。
3.营养供给:组织蛋白和血浆蛋白可互相转化，在氮代谢障碍时，白蛋白可作为氮源为组织提供营养。
主要适应于：1.失血创伤、烧伤引起的休克。
2.脑水肿及损伤引起的颅压升高。
3.肝硬化及肾病引起的水肿或腹水。
EPO原液的概述
EPO 浓缩液（欧洲药典2002版）EPO（红细胞生成素）浓缩液是由一系列紧密关联的糖蛋白组成。
它与自然生成的人类EPO ( 尿 EPO)在氨基酸顺序（165个氨基酸）和一般的糖基化形式上基本相同。
EPO浓缩液的浓度一般应在0.5mg/ml至10mg/ml之间，其中可包含缓冲盐和赋形剂。
其比活应不小于1.0×105IU/mg.生产EPO是应用重组DNA技术以啮齿动物细胞体外培养制得。
除了被主管当局准许的，每批成品在出厂前均要进行下面的检验。
宿主细胞－蛋白：符合由主管当局批准的限度。
宿主细胞和载体-DNA: 符合由主管当局批准的限度。
性质外观：无色，澄清或微浑的液体。
鉴别A.在检验项描述的条件下化验，结果合格。
B.毛细管区带电泳（2.2.47）检测液用水将待测样品稀释至1mg/ml。
取0.25ml此溶液通过微量浓缩器进行脱盐，滤膜的截留分子量不得大于10000道尔顿。
加0.20ml水再脱盐。
再次重复以上脱盐过程。
用水将脱盐后样品调整至浓度为1mg/ml。
参照液以0.25ml 水溶解一支EPO BRP。
脱盐操作如检测液。
毛细管：-材料：未包被融合硅胶-规格：有效长度约100cm，直径50um。
温度：35℃。
CZE 浓缩缓冲液（0.1mol/L NaCl-0.1mol/L tricine-0.1mol/L NaAc）：分别称取0.584g NaCl,1.792g tricine 和 0.820g无水NaAc溶于水中并定容至100ml。
1mol/L putrescine 溶液：称取0.882g putrescine 溶于10ml水中。
以0.5ml进行等量分装。
CZE 缓冲液（0.01mol/L tricine-0.01mol/L NaCl-0.01mol/L NaAc-7mol/L urea-2.5mmol/L putrescine ）：称取21.0g尿素于30℃水浴加热条件下溶于25ml水中。
欧洲药典EP11.0-2.6.12非无菌产品总需氧活菌计数
EP2.6.12非无菌产品微生物检测：总需氧活菌计数(2)1.简介以下描述的检测方法可用于在有氧条件下生长的嗜温性细菌和真菌的定量计数。
本检测方法主要用来判定某物质或制剂是否符合微生物质量规定。
用于此目的时，可按如下规定确定取样数量和判定结果。
本法不适用于以活性菌作有效成分的产品。
可使用替代性的微生物检测程序（包括自动化方法），只要证明其与已经过论证的药典方法是等效的。
2.一般程序在设计用于避免供试品受外界微生物污染的规定条件下进行测定。
检测过程中防污染的措施必须不影响微生物的检出。
若供试品有抑菌性活性，必须尽可能的减少其抑菌性或中和。
如果使用了灭活剂，则必须证明灭活剂的有效性及对微生物的无毒性。
如果样品制备过程中使用了表面活性剂，则必须证明表面活性剂对微生物的无毒性和它与使用的灭活剂的相容性。
3.计数方法按规定使用薄膜过滤法或平板计数法。
MPN法通常是准确性最差的微生物的计数方法，但对微生物量很低的产品可以是最适用的方法。
方法的选择基于如药品特性、微生物限度等因素。
所选方法必需能通过检验足量样品来判定其符合规定。
方法的适用性必须验证。
4.生长促进检测与计数方法适用性和阴性对照4-1.总体考虑必须建立在有供试品存在条件下检测微生物的能力。
若检测操作或产品改变时，且这些改变可能会影响检测的结果，则须证实适用性。
4-2.测试菌株的制备采用稳定的标准测试菌株混悬液或按以下规定制备。
采用种子菌培养保持技术，确保原代菌连续传代不超过5次。
按表2.6.12.-1.的描述分别培养细菌株和真菌株。
采用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液或pH7.2的磷酸缓冲液制备供测试菌混悬液。
悬浮黑曲霉（A.brasiliensis）孢子时可加入0.05%的吐温80。
该混悬液在2小时内使用或在2-8℃贮存条件下24小时内使用。
作为制备并稀释新鲜黑曲霉（A.brasiliensis）和枯草芽孢杆菌营养细胞悬浮液的一种替代方法，可用适量体(2)本章已通过药典协调，见章5.8.药典协调积的稳定的孢子悬浮液作为供试菌接种。
胰蛋白酶 药典标准
胰蛋白酶药典标准胰蛋白酶是一种消化酶，被广泛应用于临床医学中治疗消化系统疾病，如胰腺炎、胰腺癌、胃肠手术后等。
药典标准是评定药品质量的重要参考，下面将详细介绍胰蛋白酶的药典标准。
胰蛋白酶的药典标准主要包括国际药典（比如美国药典、欧洲药典）和中国药典两个方面。
这些药典标准规定了胰蛋白酶的质量要求、生产工艺以及检测方法等方面。
以下是对其中几个重要药典标准的介绍：1.国际药典：美国药典和欧洲药典规定了胰蛋白酶的质量要求。
例如，美国药典规定了胰蛋白酶的单位活性应满足特定标准，比如1 USP单位相当于3.6微克胰蛋白酶，并规定了对其它微生物污染的限制。
2.中国药典：中国药典对胰蛋白酶的质量要求与国际药典接近，但有些细节的要求有所不同。
例如，中国药典规定了胰蛋白酶的酶活力不得低于10,000 USP单位/g，并规定了胰蛋白酶的酶活性测定方法。
药典标准还要求生产工艺和质量控制方面的要求。
生产工艺包括胰蛋白酶的提取、纯化、浓缩和干燥等，要求按照良好的制造规范进行操作。
质量控制方面要求对原辅材料进行严格检测，确保其质量符合标准，并要求对成品进行全面检测，确保其有效成分含量符合规定。
胰蛋白酶的标准化是确保其质量和疗效的关键。
通过遵循药典标准，可以保证不同厂家生产的胰蛋白酶具有相同的活性，并且可以使医生和患者更容易比较不同品牌或批次的胰蛋白酶的治疗效果。
总结起来，胰蛋白酶作为一种重要的消化酶，其药典标准规定了胰蛋白酶的质量要求、生产工艺和检测方法等方面。
通过遵循这些标准，可以确保胰蛋白酶在临床应用中的质量和疗效，促进患者的康复。
医生和患者可以放心使用符合药典标准的胰蛋白酶，获得更好的治疗效果。
蛋白含量测定及western步骤
蛋白的提取和定量肺组织用预冷1×TBS洗净后，加入含PMSF的RIPA buffer（冰上操作，310ul,决定未来的蛋白浓度和蛋白液体积）,50-60mg肺组织砸碎放入1.5ml离心管，冰上孵育1h，10000转4℃离心10min，转上清至新管。
裂解液分装后保存于-70℃蛋白质定量：BCA蛋白测定法①根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA 工作液，充分混匀。
BCA工作液室温24小时内稳定。
②完全溶解蛋白标准品(BCA试剂盒中，BSA原浓度2mg/mL),稀释到1mg/mL。
③将标准品按0，2，5，10，15，20，25 ul标准品孔中，加蒸馏水稀释标准品的溶液④加样品2uL加到96孔板的样品孔中，加蒸馏水23微升。
⑤各孔加入200微升BCA工作液，37o C放置30分钟。
同时打开酶标仪预热。
注：也可以室温放置2小时，或60o C放置30分钟。
BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。
并且显色反应会因温度升高而加快。
如果浓度较低，适量在较高温度孵育，或延长孵育时间。
⑥测定A570的波长，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
⑦计算调蛋白时所需TBS和RSB的体积（调所有样品浓度至3-5ug/ul）：总体积=蛋白体积*蛋白浓度/3（ul）RSB=1/5*总体积（ul）TBS=总体积-RSB-蛋白体积（ul）先加RSB（对蛋白有保护作用），后加TBS。
最后放于-70℃保存。
Western BlotSDS-PAGE1. 玻璃板：注意对齐、夹紧，防止漏出，短板朝前。
距绿线1cm左右，用dd水封顶，放置30－40min。
状况好时往往能观察到水与胶的界限。
4. 分离胶凝固后，配制浓缩胶。
将水倒掉，灌好浓缩胶，立刻插入梳子，等待40min。
在此期间，打开水浴锅（100℃）注：此步后可停止，将胶连同梳子放入4℃保存一夜，若保存时间较长，为防止水分流失，可加盖湿润的滤纸和保鲜膜。
总蛋白检查法(欧洲药典)
标题 :总蛋白检查法（EP）1 目的 Purpose建立《欧洲药典》总蛋白检查法的检验通则，为总蛋白的检验、方法的开发和建立提供参考依据。
2 范围 Scope适用于产品按《欧洲药典》总蛋白检查法进行总蛋白的检测。
3 职责Responsibility3.1 QC人员：负责本检验通则的起草。
3.2 质检部经理：负责本检验通则的审核。
3.3 质量负责人：负责批准本检验通则。
4 定义DefinitionNA5 内容 Procedure5.1 测定原理5.1.1 本试验采用Lowry法测定蛋白含量。
5.1.1.1 Lowry法系依据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合形成蛋白质-铜复合物，此复合物使福林-酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，同时在碱性条件下福林-酚试剂易被蛋白质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。
5.1.1.2 在一定范围内蓝色的深浅与蛋白质浓度呈正比，在750nm处有最大吸收，测定溶液在此波长的吸收度，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，测定供试品中蛋白质的含量。
5.1.2 福林-酚试剂主要与蛋白质中的酪氨酸残基作用，室温放置20～30min颜色达到最深，然后颜色逐渐变浅。
故本法采用加入福林-酚试剂后放置30min测定。
5.2 干扰因素5.2.1 此方法对干扰物质敏感，可采取对供试品进行蛋白质沉淀的方法去除干扰。
大部分干扰物质可使溶液颜色略变浅，洗涤剂可使溶液颜色加深，高盐度可使其形成沉淀。
不同蛋白质可形成不同响应强度的颜色，故参考物质和测试蛋白必须相同。
5.2.2 对待测样品进行蛋白质干扰物质的分离是很有必要的，按如下所述对测试溶液进行干扰物质的分离，干扰物质通过稀释达到最小浓度，且此浓度能保证蛋白的测量精确度。
5.3 操作步骤5.3.1 试药试液5.3.1.1 使用超纯水制备此方法中使用的缓冲液和试液。
5.3.1.2 硫酸铜试液：取硫酸酮100mg，酒石酸钠200mg，加水溶解并稀释至50mL，混匀；另取碳酸钠10g，加水溶解并稀释至50mL，混匀。
2020年智慧树知道网课《中药分析学(中国药科大学)》课后章节测试满分答案
第一章测试1【单选题】(10分)下列关于《中华人民共和国药典》的说法不正确的是：A.1988年10月，第一部英文版的《中国药典》1985年版正式出版。
B.自1963年版开始，将中药材和中药成方制剂收载于一部，成为中国药典的一大特色。
C.新中国成立以来，至2020年，共出版了11版药典。
D.第一版《中华人民共和国药典》出版于1963年。
2【多选题】(10分)新修订的《药品管理法》中也明确规定了假药的定义，主要包括：A.药品所含成分与国家药品标准规定的成分不符的；B.适用症或者功能主治超出规定范围的药品。
C.被污染的或过期的药品。
D.冒充的和变质的药品；3【单选题】(10分)（）是世界上第一部法定药典。
A.《佛罗伦萨药典》B.唐《新修本草》C.宋《太平惠民和剂局方》D.《丹麦药典》4【多选题】(10分)现行《中国药典》四部主要收载的内容有：A.制剂通则B.药用辅料C.通用检测方法D.指导原则5【单选题】(10分)下列关于《欧洲药典》的说法不正确的是：A.《欧洲药典》是由欧洲药典委员会编辑出版。
B.欧洲药典有英文和法文两种版本，分印刷版、USB版和在线版。
C.欧洲药典目前已被全球140多个国家和地区使用，是最具影响力的药典之一。
D.欧洲药典的附录是当今药典中最全面、最完善的。
6【多选题】(10分)取样是指从整批成品中按取样规则取出一部分代表性的供试样品的过程，下列关于取样的说法正确的是：A.取样必须具有科学性、真实性和代表性。
B.取样的基本原则是均匀和合理。
C.平均样品量一般不得少于实验所需要的5倍。
D.各类中药制剂取样量至少应满足3次检测的用量，贵重药可酌情取样。
7【单选题】(10分)下列不属于中药质量标准中的安全性检查项目的是：A.黄曲霉素检查。
B.农药残留量检查。
C.氯化物检查。
D.重金属及有害元素检查。
8【单选题】(10分)下列关于中药分析工作中检验记录书写的规定中不正确的是：A.不得随意删除、修改或增减数据。
欧洲药典蛋白含量测定方法
欧洲药典蛋白含量测定方法《欧洲药典》中蛋白含量的测定方法1. 《欧洲药典》第7版2.5.33，USP<1057>Biotechnology-derived articles-Total protein assay。
EP2.5.33收录了7种检测方法，即扫描法、Lowry 法、Bradford 法、BCA法、Biuret 法、荧光法和氮分析法。
1.1 扫描法：原理：依据蛋白质结构中含有芳香族氨基酸（如酪氨酸、色氨酸），其在280nm处有吸光值。
检测时，如果溶解蛋白质的溶剂也有高吸光度，则采用干扰对照液进行补偿消除。
但如果干扰对照液吸光值也很高，则检测结果误差大。
此外，低浓度蛋白质溶液会因蛋白质吸附至检测池上而影响浓度，后者可使用高浓度或用去离子去污剂处理样品。
待测品：蛋白质溶液浓度一般为0.2mg/mL~2 mg/mL。
对照品：选择合适的对照品，用溶解待测品蛋白质的溶剂配制，浓度与待测品溶液一致。
检测：检测过程中，将待测蛋白溶液、对照品溶液和干扰对照液保持在相同温度。
使用石英比色皿检测280nm处吸光值，并使用规定的溶液进行补偿。
溶液浓度应尽可能保持在适宜范围内以便获取准确结果。
光散射影响：样品引起的光散射会导致蛋白质检测结果准确度降低。
如果蛋白质溶液中存在颗粒大小与检测波长（250nm到300nm）相当的颗粒，光散射将导致样品的吸光值大大增加。
为了校正光散射引起的在280nm处的吸光值，则可检测待测样品在320nm、325 nm、330 nm、335 nm、340 nm和350 nm处的吸光值，以所得的吸光值对数值为纵坐标，以检测波长对数值为横坐标作图，并通过线性回归确定标准曲线，将曲线延伸到280nm，得到280nm处吸光值的对数，再通过反对数计算获得280nm处由光散射引起的吸光值。
从检测的总吸光值中扣除光散射引起的吸光值即为样品吸光值。
用0.2μm滤膜过滤或离心可减少光散射作用，特别是明显浑浊的蛋白溶液。
欧洲药典7.0-凡例(全)
07/2010:10000 1. 凡例1.1. 概述凡例的内容适用于各论和欧洲药典中的其它章节。
欧洲药典以英语和法语形式发行，欧洲药典委员会的签署国可将药典内容译成其它语言，但若发生争议，应以英语和法语版为权威。
在欧洲药典中，如无特殊规定，“药典”是指欧洲药典，官方缩写Ph. Eur.也指欧洲药典。
文章中如果引用了各论中的标题和副标题意味着文章内容符合相关各论的要求。
文章参考药典中各论内容时，以斜体的各论题目或相关数字表示。
制剂在有效期内必须性质稳定，明确的有效期或说明书应由权力机构批准。
任何各论的物质也必须服从其使用期限。
任何药品的有效期和有效期的计算由权力机构经稳定性研究的试验结果决定。
除凡例和各论中另有说明，各论中的说明为强制要求；除了特定的引用信息，如果各论引用总论中内容时，该总论要求为法定要求。
各论中描述的活性物质，赋形剂，药物制剂和其它项目都是人用和兽用的（除非明确限制不可使用）。
药品项目必须符合各论的要求，否则不符合药典质量。
但并不要求产品放行前，生产商要做各论中的每项试验以满足药典要求。
生产商可通过原始数据，例如生产过程验证，和中间体控制，确保药品是否符合药典要求。
公布的环境参数，权力机构可适当采信，但不排除故意满足药典要求的可能。
检测和试验方法应基于药典标准的官方方法。
经权利机构允许可采用其它替代的分析方法以达到控制目的，并证明该方法是否能达到各论各标准。
若出现争论或异议，应以药典方法为准。
药典各论中的某些物质有多个等级可满足各种需要，除各论中另有说明，要求适用于各等级。
在一些各论中，特别是赋形剂，一系列相关的功能特性都有介绍，其中给出了一些特性的检测方法。
质量体系：在适宜的质量体系架构下，产生有疑问的项目时，应以各论中的质量标准为法定标准。
通则：各论中介绍的药物和制剂也应符合通则中的相关要求。
交叉引用的通则在各论中不特别指出。
除非限定了适用条件，如规定适用于药典各论中的物质，通则的内容适用于各论定义范围内的所有药物和制剂。
0731 蛋白质含量测定法 - 国家药典委员会
0731蛋白质含量测定法1组成蛋白质的基本单位是氨基酸， 氨基酸通过脱水缩合形成肽链， 蛋白质是一条或多条 多肽链组成的生物大分子。
不同品种应针对自身蛋白质特性选择适宜的测定方法并做相应方 法学验证，同时应尽可能选用与待测定品种蛋白质结构相同或相近的蛋白质作对照品。
2 第一法 凯氏定氮法3本法系依据蛋白质为含氮的有机化合物， 当与硫酸和硫酸铜、 硫酸钾一同加热消化时使 蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。
然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后以 硫酸滴定液滴定，根据酸的消耗量算出含氮量，再将含氮量乘以换算系数，即为蛋白质的含 量。
本法灵敏度较低，适用于 0.2~2.0mg 氮的测定。
氮转化成蛋白质的换算系数因蛋白质中 所含氨基酸的结构差异会稍有区别。
供试品溶液的制备 照各品种项下规定的方法制备，生物制品按如下方法操作。
精密量取供试品（如供试品为冻干制剂或固体粉末时，应复溶后量取）适量，用 0.9%氯 化钠溶液稀释并定量制成每 1ml 中含氮量约 1mg 的溶液，精密量取 1ml，作为总氮供试品 溶液进行测定。
非蛋白氮供试品溶液的制备，除另有规定外，照附注项下钨酸沉淀法操作， 即得。
测定法 除另有规定外，按测定法(1)操作，生物制品按测定法(2)操作。
(1) 本测定法适用于不含无机含氮物质及有机非蛋白质含氮物质的供试品。
精密量取各 品种项下规定的供试品溶液适量，置凯氏定氮瓶中，照氮测定法(通则 0704 第二法)测定供 试品溶液的含氮量，除另有规定外，氮转换为蛋白质的换算系数为 6.25。
1中国药典 2010 年版一部无蛋白质测定的附录；二部附录Ⅶ M 中收载的蛋白质含量测定法，包括凯式定 氮法、福林酚法（Lowry 法） 、双缩脲法、2,2’-联喹啉-4,4’-二羧酸法（BCA 法） 、考马斯亮蓝法、紫外 －可见分光光度法共六种方法；三部附录Ⅵ B 中收载的蛋白质测定法，包括凯氏定氮法、Lowry 法和双缩 脲法三种方法。
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《欧洲药典》中蛋白含量的测定方法1.《欧洲药典》第7版2.5.33，USP<1057>Biotechnology-derived articles-Total protei n assay。
EP2.5.33收录了7种检测方法，即扫描法、Lowry 法、Bradford 法、BCA法、Biuret 法、荧光法和氮分析法。
1.1 扫描法：原理：依据蛋白质结构中含有芳香族氨基酸（如酪氨酸、色氨酸），其在280nm处有吸光值。
检测时，如果溶解蛋白质的溶剂也有高吸光度，则采用干扰对照液进行补偿消除。
但如果干扰对照液吸光值也很高，则检测结果误差大。
此外，低浓度蛋白质溶液会因蛋白质吸附至检测池上而影响浓度，后者可使用高浓度或用去离子去污剂处理样品。
待测品：蛋白质溶液浓度一般为0.2mg/mL~2 mg/mL。
对照品：选择合适的对照品，用溶解待测品蛋白质的溶剂配制，浓度与待测品溶液一致。
检测：检测过程中，将待测蛋白溶液、对照品溶液和干扰对照液保持在相同温度。
使用石英比色皿检测280nm处吸光值，并使用规定的溶液进行补偿。
溶液浓度应尽可能保持在适宜范围内以便获取准确结果。
光散射影响：样品引起的光散射会导致蛋白质检测结果准确度降低。
如果蛋白质溶液中存在颗粒大小与检测波长（250nm到300nm）相当的颗粒，光散射将导致样品的吸光值大大增加。
为了校正光散射引起的在280nm处的吸光值，则可检测待测样品在320nm、325 nm、330 nm、335 nm、340 nm和350 nm处的吸光值，以所得的吸光值对数值为纵坐标，以检测波长对数值为横坐标作图，并通过线性回归确定标准曲线，将曲线延伸到280nm，得到280nm处吸光值的对数，再通过反对数计算获得280nm处由光散射引起的吸光值。
从检测的总吸光值中扣除光散射引起的吸光值即为样品吸光值。
用0.2μm滤膜过滤或离心可减少光散射作用，特别是明显浑浊的蛋白溶液。
计算：应使用校正过的吸光值进行计算，按下列公式进行计算。
C U=C S (A U/A S)其中，C S为对照液浓度，A U、A S分别为单侧样品和对照液的校正后的吸光值。
1.2 Lowry 法：原理：此方法是依据蛋白质中的酪氨酸能将磷钼酸-钨酸混合物还原，还原后物质在750nm 处有最大吸收值。
室温下，其颜色在20~30min内最深，随后将随时间逐渐减弱。
这个方法干扰物质较多，因此可使用沉淀法处理蛋白样品。
多数的干扰物质产生较低颜色，一些去污剂可明显加深溶液颜色。
可使用高盐沉淀法提纯蛋白。
由于不同蛋白质的吸光强度不同，因此对照品应与待测品一致。
如果有必要除去干扰物质，则应在样品制备前按下述的方法处理。
干扰物质的作用也可通过稀释作用降低，前提是应保证样品溶度符合准确测定的浓度要求。
配制溶液和试剂的水至少为蒸馏水。
待测品：配制适当浓度的待测样品使其浓度处于标准曲线浓度线性范围内。
溶液的pH以1 0.0~10.5为宜。
对照液：用规定的缓冲液溶解适量的对照蛋白，并用同一种缓冲液稀释成不少于5个浓度溶液，其浓度适宜范围为5μg/ml~100μg/ml。
空白液：使用配制待测蛋白液和对照蛋白液的缓冲液。
硫酸铜试剂：取100mg硫酸铜和0.2g酒石酸钠，用水溶解并稀释至50ml。
取10g无水碳酸钠，用水溶解并稀释至50ml。
缓慢将碳酸钠溶液倒入硫酸铜溶液中，混匀。
24h内使用。
碱性铜试剂：取1体积硫酸铜试剂，2体积50g/L十二烷基硫酸钠溶液和1体积32g/L氢氧化钠溶液混合。
室温下储存，2周内使用。
稀磷钼酸-钨酸试剂：取5ml磷钼酸-钨酸试剂和55ml水，混匀。
储存在棕色瓶子中，室温保存。
（注：USP中规定取10ml福林酚试剂和50ml水混合。
）检测：取1.0ml各对照品溶液、待测品溶液、空白对照液，加入1.0ml碱性铜试剂，混匀，静置10min。
加入0.5ml稀磷钼酸-钨酸试剂，混匀，室温静置30min。
检测其750nm处吸光值，并以空白对照液作为补偿。
计算：一般情况下，蛋白质浓度与其吸光值关系并不是线性的，但是如果做标准曲线的浓度范围足够小，则其曲线是线性的。
以浓度为横坐标，对应的吸光值为纵坐标作图，通过线性回归得出标准曲线。
由标准曲线和待测蛋白样品的吸光值即可计算得到待测蛋白样品的浓度。
干扰物质：在检测前加入脱氧胆酸-三氯乙酸混合液，沉淀析出蛋白质，除去干扰物质。
这种技术也可用于由稀溶液浓缩的蛋白质。
具体操作流程如下：加1.5g/L的脱氧胆酸0.1ml 值1ml待测样品溶液。
漩涡振荡混匀，室温静置10min。
加入720g/L三氯乙酸0.1ml并漩涡振荡混匀。
3000g离心30min，倾析出上清液并用移液器除去剩余的溶液。
用1ml碱性铜试剂复溶蛋白质沉淀。
1.3 Bradford 法：原理：该法是基于酸性蓝90染料可结合于蛋白质上，并在470nm ~ 595 nm处具有吸光值。
酸性蓝90染料（USP中称为亮蓝G）主要结合蛋白质上得精氨酸和赖氨酸，而不同蛋白质上所含的精氨酸和赖氨酸不同导致对染料的反应差异，因此，对照蛋白应与被测蛋白一致。
该方法极少有干扰物质，但待测蛋白溶液中也应避免含有去污剂或两性电解质。
强碱性样品可能干扰酸性试剂。
配制溶液和试剂的水至少为蒸馏水。
待测品：配制适当浓度的待测样品使其浓度处于标准曲线浓度线性范围内。
对照液：用规定的缓冲液溶解适量的对照蛋白，并用同一种缓冲液稀释成不少于5个浓度溶液，其浓度适宜范围为0.1mg/ml~1mg/ml。
空白液：使用配制待测蛋白液和对照蛋白液的缓冲液。
酸性蓝90试剂：取0.10g酸性蓝90染料，用乙醇（96%）溶解并稀释至50ml。
加入100 ml磷酸，并用水稀释至1000ml，混匀。
溶液过滤（定量滤纸或Whatman 1号纸）后，室温下储存与棕色瓶中。
储存过程中慢慢出现沉淀，在使用前应过滤。
检测：取5ml酸性蓝90试剂，加入到0.100ml各对照蛋白溶液、待测蛋白溶液和空白对照溶液中，混合，翻转混匀。
混合时应避免产生泡沫，否则影响实验重复性。
检测其595nm 处吸光值，并以空白对照液作为补偿。
注意不要使用石英（二氧化硅）检测池，避免染料结合到这种材料上。
计算：见“Lowry 法计算”。
1.4 二喹啉二羧酸法（BCA法）：原理：该法是依据蛋白质可将Cu2+还原为Cu+，而二喹啉二羧酸酸可以检测Cu+。
该法干扰物质较少，可通过稀释减少干扰物质的影响，前提是保证蛋白质浓度足以满足要求；也可以使用Lowry法中蛋白沉淀法除去干扰物质。
因为不同蛋白种类反应颜色强度不同，因此对照蛋白应与待测蛋白一致。
配制溶液和试剂的水至少为蒸馏水。
待测品：配制适当浓度的待测样品使其浓度处于标准曲线浓度线性范围内。
对照液：用规定的缓冲液溶解适量的对照蛋白，并用同一种缓冲液稀释成不少于5个浓度溶液，其浓度适宜范围为10μg/ml~1200μg/ml。
空白液：使用配制待测蛋白液和对照蛋白液的缓冲液。
BCA试剂：取10g二喹啉二羧酸钠，20g一水合碳酸钠，1.6g酒石酸钠，4g氢氧化钠和9. 5g碳酸氢钠，用水溶解后，如有必要，用氢氧化钠溶液或碳酸氢钠溶液调节pH至11.25，用水稀释至1000ml并混匀。
铜-BCA试剂：取40g/L硫酸铜溶液1ml和50mlBCA试剂混匀。
检测：分别取各对照蛋白溶液、待测蛋白溶液和空白对照溶液0.1ml和2ml铜-BCA试剂，混匀。
于37℃孵育30min，记录时间并使混合液冷却到室温。
孵育结束后60min内，用石英检测池检测562nm处吸光值，并以空白对照液作为补偿。
当溶液冷却到室温后，溶液颜色逐渐加深。
计算：见“Lowry 法计算”。
1.5 双缩脲法（Biuret 法）：原理：该法是依据蛋白质在碱性溶液中可与Cu2+结合并在545nm处有吸光值。
用此法检测IgG和白蛋白结果差异很小。
将氢氧化钠和双缩脲试剂一起加入，或加入氢氧化钠后混合不足，或延长氢氧化钠和双缩脲试剂间隔时间会使IgG样品比白蛋白反应程度更强。
当待测蛋白样品中蛋白质含量小于500μg/ml时，前面所述的用三氯乙酸降低干扰物质影响的方法此方法中也可以使用。
配制溶液和试剂的水至少为蒸馏水。
待测品：取适量待测蛋白样品，溶于9g/L氯化钠溶液中，使其浓度处于标准曲线浓度线性范围内。
对照液：用9g/L氯化钠溶液溶解适量的对照蛋白，并用9g/L氯化钠溶液稀释成不少于5个浓度溶液，其浓度适宜范围为0.5mg/ml~10mg/ml。
（USP中规定为：除非另有规定，采用人血白蛋白为对照蛋白，其氮-蛋白质转换因子为6.25）空白液：9g/L氯化钠溶液。
双缩脲试剂（Biuret 试剂）：取3.46g硫酸铜溶于10ml热水中，冷却（A液）。
取34.6g 柠檬酸钠和20.0g无水碳酸钠溶于80ml热水中，冷却（B液）。
将A液和B液混合并用水稀释至200ml，6个月内使用（室温保存）。
如果混合液中出现任何沉淀或浑浊则不可使用。
检测：取1体积的待测溶液，加入等量60g/L氢氧化钠溶液，混匀。
立即加入0.4体积双缩脲试剂并快速混匀。
于15~25℃间某个温度下静置15min。
在加入双缩脲试剂90min内，检测545nm处吸光值，并以空白对照液作为补偿。
任何出现浑浊或沉淀的溶也均不可用于检测蛋白质浓度。
计算：在对照液规定的蛋白浓度范围内，蛋白质浓度与其吸光值关系基本上呈线性的，以蛋白质浓度为横坐标，对应的吸光值为纵坐标作图，通过线性回归得出标准曲线。
计算曲线的相关系数，相关系数应不小于0.99。
由标准曲线和待测蛋白样品的吸光值即可计算得到待测蛋白样品的浓度。