猪白细胞干扰素的研制(1)
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
素, 并表现出了良好的诱生能力。本试验也得 到相同结果。
5. 诱导病毒加量对诱生结果的影响 见 表 5。
表 5 诱导病 毒对诱生干扰素的影响
诱生病毒加量( 血凝单位)
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
0
0
0
50
4180
4180
100
7160
7286
200
6920
7010
素效价测定, 采用 W ISH ～VSV 系统细胞病 变抑制法, 并以 PK- V SV 系统对照。
结果与分析
一、氯化铵处理次数对白细胞诱生能力的影
响 见表 1。
表 1 氯化铵处理次数对白细胞诱生能力的影响
干扰素效价( u/ m l) 处理次数 白细胞悬液外观 干扰素外观
WISH ～VSV P K- V SV
紫色, 革兰氏阴性, 附在红细胞上的小体有 1 ～6 个多至 20 多个。附红体在血浆中运动 时, 附着红细胞上就停止活动。其形态呈球 状、环状和杆状等多形态。其大小直径为 0. 3 ～1. 3Lm, 一般为 0. 5Lm。在光学显微镜下小 体呈淡蓝色, 中央有明亮的折光圈, 其周边呈 褐色致密边缘, 少数红细胞呈空壳, 视野里可 见异常红细胞及单核细胞增多。经四环素类
[ 2] 杨云楼等. 病毒学杂志, 1989
[ 3] 李芷芬等. 全国第 五次干扰素学 术会议论 文集. 西安.
1985
[ 4] Cart er et al. , Int erferon Rev. , 5∶( 376～381) , 1965 [ 5] K enn et t et al . , In terf eron Rev. , 12∶( 193～198) , 1972
一、感染率
在 9、10 月份先后在峡口、小坝部分地区 及屠宰场和养猪、养羊、养奶牛专业大户中对
畜体进行耳尖采血涂片, 用瑞氏和姬姆萨两 种染色法, 用光学显微镜检查, 对重点病例用 鲜血生理盐水稀释后悬滴镜检, 人间调查对 象是饲养员和住院、门诊病人。总计人检血样 96 份, 阳性 16 份, 阳性率 16. 8% ; 畜间检查 淘 汰 羊 血 样 51 份, 阳 性 14 份, 阳 性 率 27. 45% ; 牛 血 样 15 份, 阳 性 3 份, 阳 性 率 20% ; 猪 血 样 52 份, 阳 性 17 份, 阳 性 率 32. 7% 。1994 年 10 月份检查结果比 1981 年
— 18 —
中国兽医杂志 1996 年( 第 22 卷) 第 10 期
猪白细胞干扰素的研制
丁敦志
( 四川省乐至县畜牧中心, 641500)
李品齐 王 劲 邓秀兰
( 四川乐至世红生物制品公司)
干扰素是一种广谱抗病毒药物, 其疗效 在医学临床上已得到普遍肯定[ 1] 。目前, 猪病 毒性传染病发病率较高, 严重地阻碍着养猪 业的发展[ 2] 。研制有效的防治猪病毒性传染
培养方式 静置
培养现象 白细胞沉淀
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
3000
3450
搅拌 白细胞沉淀
7412
7856
作为在体外培养产生干扰素的白细胞, 其生存条件应与体内一致, 即保持环境温度 37℃, 并在一 定范围内移动, 以保持游 离状 态。用搅拌培养, 水溶 37℃加温方法就能较 好地达到这个目的, 从而产生较高效价的干 扰素。
相似的结果。采用原代猪肾细胞作为检定细
胞, 其结果是不稳定的, 该细胞在方瓶和微孔 板上的生长情况与 PK 细胞的制备关系甚大。 采用简便易行的 W ISH - VSV 系统( 代替 PK 细胞) 进行效价测定, 在保证真实反映该制备 抗病毒活性的基础上, 提高了测定结果的稳定 性。
结 论
猪白细胞干扰素是在一定条件下产生的 一种抗病毒蛋白。猪白细胞含量为 1～5×107
4. 起动干扰素对诱生结果的影响 见表 4。
表 4 起动干扰素对诱生干扰素的影响
起动干扰素加量( u / m l)
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
0
0
0
50
3200
3200
100
5600
5000
200
4840
4840
1000
5050
5050
李芷芬等的试验表明[ 3] , 制备猪干扰素 时可用人干扰素作起动, 这种用人干扰素诱 导的猪白细胞干扰素可作为下一次起动干扰
病的药物是十分必要和迫切的。本试验摸索
了猪白细胞干扰素诱生条件, 小批量试制, 取 得了满意的结果, 介绍如下。
材料与方法
一、诱生病毒 为 NDV -F , 来自中国预 防医科院病毒所。
二、健康猪抗凝血 无菌采集。
RP MI-1640, MEM ～ Eagle's 日 本 水 制药株式会社。
三、诱导培养装置 自制。
1
有较多红细胞残留 溶血
5028
5400
2
有较少红细胞残留 无溶血
6824
6440
3
有较少红细胞残留 无溶血
5000
5000
氯化铵作为一种红细胞裂解剂, 在细胞 分离过程中主要用于破坏红细胞。如果红细
胞处理不彻底, 则在培养诱导过程中会发生 溶血现象, 影响了白细胞的生长和干扰素的 产生。反之, 若氯化铵处理次数过多, 则会影 响白细胞活力, 也会影响分泌干扰素。一般经
1000
5880
5880
中国兽医杂志 1996 年( 第 22 卷) 第 10 期
— 19 —
人õ畜õ附õ红õ细õ胞õ体õ感õ染õ的õ初õ步õ调õ查
张汝勇 曹 林 李春莹 赵振林 ( 宁夏青铜峡市畜牧兽医站, 751600) 李国兴 汤文银 张福绥 蒋爱国 王玉宏 ( 青铜峡市卫生防疫站)
马兴华 王克敬 贾自力 ( 青铜峡市人民医院)
白细胞产生干扰素, 需要一种诱导剂来诱 生, 这已是公认的事实。本试验中, 发现猪白细 胞干扰素诱生病毒, 最适量在 100 血凝单位/ ml 左右。
6. 白细胞浓度对诱生结果的影响 见表
6。
表 6 白细胞 浓度对诱生干扰素的影响
白细胞浓度( 个/ ml )
干扰素效价( u/ ml) WISH - VS V PK- VS V
四、猪白细胞干扰素诱导 参照 Cart er 等人报道的方法, 设立 6 个比较试验: 1. 白细 胞分离过程中, 氯化铵处理次数的比较; 2. 两
种诱导温度( 30℃、37℃) 的比较; 3. 静置培养 与 搅拌培养( 80rpm ) 的比较; 4. 超 动干扰素 的加量比较; 5. 诱生病毒加量的比较; 6. 白细 胞浓度对诱生干扰素的影响。猪白细胞干扰
附红细胞体病( Ep eryt hr oz oonosis) 是附 着在红细胞表面以及游离在血浆中的一种病 原体- 附红细胞体( Ep ery t hroz oon) ( 以下简 称附红体) 。目前已有 20 多个国家报道此病 发生。笔者也曾报道。1986 年 Punt aric 报道 了 1 例人的附红体病[ 3,4] 。在国内 1994 年杜 跃峰报道了内蒙从人群中查到附红体病[ 5] 。
0. 5×107
1660
1824
1×107
3040
3412
5×107
8600
8600wk.baidu.com
10×107
1086
2260
在一定体积的培养液中, 白细胞浓度对干 扰素的产生有很大影响。白细胞过少, 产量低, 反之, 若白细胞过多, 其生存环境( 如营养成
分, pH , CO 2 , O 2 的浓 度等) 在较 短时间 内恶
个/ ml, 营养血清浓度为 5% , 搅拌水浴( 37℃) 培 养, 需要干扰素作起动( 100u/ m l) , 需 要病 毒诱导( 100 血凝单位/ ml ) 。按本试验研究提 出的程序与参数制备的猪白细胞干扰素, 效价 可达 5000～8600u/ ml。
参考文献
[ 1] 杜 平等. 医用干扰素, 1984
化, 最终影响白细胞活力, 导致干扰素产量的 降低。本试验表明, 猪白细胞诱生干扰素的最 佳浓度为 1～5×107 个/ ml 。
1989 年, 杨云楼等人用 WISH 细胞和 PK ( 猪肾原代细胞) 对比测定了猪脾细胞干扰素
活性, 发现测定 结果 很接近, 1979 年, Cart er 等人也有相同的报道[ 4] 。本试验结果也获得了
7、8 月份阳性率低。
二、发病情况调查
( 一) 人附红体病: 1982 年 8 月在我市家 畜病院实习的某院校学生 14 人, 教师 2 人, 住在有饲养种马、种羊的一个大院里, 在实习 中常与病畜 接触, 几天内 先后 14 名学 生, 2 名老师感到乏力, 发烧、食欲不振, 出现黄疸, 当时误认为感冒, 经医院化验肝功为肝炎。同 时从院内种马、种羊血中查到附红体, 并在鲜 血悬滴镜检中, 见到血浆中和红细胞周围作 翻转运动的附红体。血片瑞氏染色附红体呈
过两次处理就能达到理想的效果。
二、两种温度下的诱导结果 见表 2。
表 2 温度 对诱生干扰素的影响
诱导温度 干扰素外观
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
37℃
正常
5847
5847
30℃
正常
3064
3824
三、静置培养与搅拌培养对诱生培养的影响
见表 3。
表 3 培养方 式对诱生干扰素的影响
5. 诱导病毒加量对诱生结果的影响 见 表 5。
表 5 诱导病 毒对诱生干扰素的影响
诱生病毒加量( 血凝单位)
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
0
0
0
50
4180
4180
100
7160
7286
200
6920
7010
素效价测定, 采用 W ISH ～VSV 系统细胞病 变抑制法, 并以 PK- V SV 系统对照。
结果与分析
一、氯化铵处理次数对白细胞诱生能力的影
响 见表 1。
表 1 氯化铵处理次数对白细胞诱生能力的影响
干扰素效价( u/ m l) 处理次数 白细胞悬液外观 干扰素外观
WISH ～VSV P K- V SV
紫色, 革兰氏阴性, 附在红细胞上的小体有 1 ～6 个多至 20 多个。附红体在血浆中运动 时, 附着红细胞上就停止活动。其形态呈球 状、环状和杆状等多形态。其大小直径为 0. 3 ～1. 3Lm, 一般为 0. 5Lm。在光学显微镜下小 体呈淡蓝色, 中央有明亮的折光圈, 其周边呈 褐色致密边缘, 少数红细胞呈空壳, 视野里可 见异常红细胞及单核细胞增多。经四环素类
[ 2] 杨云楼等. 病毒学杂志, 1989
[ 3] 李芷芬等. 全国第 五次干扰素学 术会议论 文集. 西安.
1985
[ 4] Cart er et al. , Int erferon Rev. , 5∶( 376～381) , 1965 [ 5] K enn et t et al . , In terf eron Rev. , 12∶( 193～198) , 1972
一、感染率
在 9、10 月份先后在峡口、小坝部分地区 及屠宰场和养猪、养羊、养奶牛专业大户中对
畜体进行耳尖采血涂片, 用瑞氏和姬姆萨两 种染色法, 用光学显微镜检查, 对重点病例用 鲜血生理盐水稀释后悬滴镜检, 人间调查对 象是饲养员和住院、门诊病人。总计人检血样 96 份, 阳性 16 份, 阳性率 16. 8% ; 畜间检查 淘 汰 羊 血 样 51 份, 阳 性 14 份, 阳 性 率 27. 45% ; 牛 血 样 15 份, 阳 性 3 份, 阳 性 率 20% ; 猪 血 样 52 份, 阳 性 17 份, 阳 性 率 32. 7% 。1994 年 10 月份检查结果比 1981 年
— 18 —
中国兽医杂志 1996 年( 第 22 卷) 第 10 期
猪白细胞干扰素的研制
丁敦志
( 四川省乐至县畜牧中心, 641500)
李品齐 王 劲 邓秀兰
( 四川乐至世红生物制品公司)
干扰素是一种广谱抗病毒药物, 其疗效 在医学临床上已得到普遍肯定[ 1] 。目前, 猪病 毒性传染病发病率较高, 严重地阻碍着养猪 业的发展[ 2] 。研制有效的防治猪病毒性传染
培养方式 静置
培养现象 白细胞沉淀
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
3000
3450
搅拌 白细胞沉淀
7412
7856
作为在体外培养产生干扰素的白细胞, 其生存条件应与体内一致, 即保持环境温度 37℃, 并在一 定范围内移动, 以保持游 离状 态。用搅拌培养, 水溶 37℃加温方法就能较 好地达到这个目的, 从而产生较高效价的干 扰素。
相似的结果。采用原代猪肾细胞作为检定细
胞, 其结果是不稳定的, 该细胞在方瓶和微孔 板上的生长情况与 PK 细胞的制备关系甚大。 采用简便易行的 W ISH - VSV 系统( 代替 PK 细胞) 进行效价测定, 在保证真实反映该制备 抗病毒活性的基础上, 提高了测定结果的稳定 性。
结 论
猪白细胞干扰素是在一定条件下产生的 一种抗病毒蛋白。猪白细胞含量为 1～5×107
4. 起动干扰素对诱生结果的影响 见表 4。
表 4 起动干扰素对诱生干扰素的影响
起动干扰素加量( u / m l)
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
0
0
0
50
3200
3200
100
5600
5000
200
4840
4840
1000
5050
5050
李芷芬等的试验表明[ 3] , 制备猪干扰素 时可用人干扰素作起动, 这种用人干扰素诱 导的猪白细胞干扰素可作为下一次起动干扰
病的药物是十分必要和迫切的。本试验摸索
了猪白细胞干扰素诱生条件, 小批量试制, 取 得了满意的结果, 介绍如下。
材料与方法
一、诱生病毒 为 NDV -F , 来自中国预 防医科院病毒所。
二、健康猪抗凝血 无菌采集。
RP MI-1640, MEM ～ Eagle's 日 本 水 制药株式会社。
三、诱导培养装置 自制。
1
有较多红细胞残留 溶血
5028
5400
2
有较少红细胞残留 无溶血
6824
6440
3
有较少红细胞残留 无溶血
5000
5000
氯化铵作为一种红细胞裂解剂, 在细胞 分离过程中主要用于破坏红细胞。如果红细
胞处理不彻底, 则在培养诱导过程中会发生 溶血现象, 影响了白细胞的生长和干扰素的 产生。反之, 若氯化铵处理次数过多, 则会影 响白细胞活力, 也会影响分泌干扰素。一般经
1000
5880
5880
中国兽医杂志 1996 年( 第 22 卷) 第 10 期
— 19 —
人õ畜õ附õ红õ细õ胞õ体õ感õ染õ的õ初õ步õ调õ查
张汝勇 曹 林 李春莹 赵振林 ( 宁夏青铜峡市畜牧兽医站, 751600) 李国兴 汤文银 张福绥 蒋爱国 王玉宏 ( 青铜峡市卫生防疫站)
马兴华 王克敬 贾自力 ( 青铜峡市人民医院)
白细胞产生干扰素, 需要一种诱导剂来诱 生, 这已是公认的事实。本试验中, 发现猪白细 胞干扰素诱生病毒, 最适量在 100 血凝单位/ ml 左右。
6. 白细胞浓度对诱生结果的影响 见表
6。
表 6 白细胞 浓度对诱生干扰素的影响
白细胞浓度( 个/ ml )
干扰素效价( u/ ml) WISH - VS V PK- VS V
四、猪白细胞干扰素诱导 参照 Cart er 等人报道的方法, 设立 6 个比较试验: 1. 白细 胞分离过程中, 氯化铵处理次数的比较; 2. 两
种诱导温度( 30℃、37℃) 的比较; 3. 静置培养 与 搅拌培养( 80rpm ) 的比较; 4. 超 动干扰素 的加量比较; 5. 诱生病毒加量的比较; 6. 白细 胞浓度对诱生干扰素的影响。猪白细胞干扰
附红细胞体病( Ep eryt hr oz oonosis) 是附 着在红细胞表面以及游离在血浆中的一种病 原体- 附红细胞体( Ep ery t hroz oon) ( 以下简 称附红体) 。目前已有 20 多个国家报道此病 发生。笔者也曾报道。1986 年 Punt aric 报道 了 1 例人的附红体病[ 3,4] 。在国内 1994 年杜 跃峰报道了内蒙从人群中查到附红体病[ 5] 。
0. 5×107
1660
1824
1×107
3040
3412
5×107
8600
8600wk.baidu.com
10×107
1086
2260
在一定体积的培养液中, 白细胞浓度对干 扰素的产生有很大影响。白细胞过少, 产量低, 反之, 若白细胞过多, 其生存环境( 如营养成
分, pH , CO 2 , O 2 的浓 度等) 在较 短时间 内恶
个/ ml, 营养血清浓度为 5% , 搅拌水浴( 37℃) 培 养, 需要干扰素作起动( 100u/ m l) , 需 要病 毒诱导( 100 血凝单位/ ml ) 。按本试验研究提 出的程序与参数制备的猪白细胞干扰素, 效价 可达 5000～8600u/ ml。
参考文献
[ 1] 杜 平等. 医用干扰素, 1984
化, 最终影响白细胞活力, 导致干扰素产量的 降低。本试验表明, 猪白细胞诱生干扰素的最 佳浓度为 1～5×107 个/ ml 。
1989 年, 杨云楼等人用 WISH 细胞和 PK ( 猪肾原代细胞) 对比测定了猪脾细胞干扰素
活性, 发现测定 结果 很接近, 1979 年, Cart er 等人也有相同的报道[ 4] 。本试验结果也获得了
7、8 月份阳性率低。
二、发病情况调查
( 一) 人附红体病: 1982 年 8 月在我市家 畜病院实习的某院校学生 14 人, 教师 2 人, 住在有饲养种马、种羊的一个大院里, 在实习 中常与病畜 接触, 几天内 先后 14 名学 生, 2 名老师感到乏力, 发烧、食欲不振, 出现黄疸, 当时误认为感冒, 经医院化验肝功为肝炎。同 时从院内种马、种羊血中查到附红体, 并在鲜 血悬滴镜检中, 见到血浆中和红细胞周围作 翻转运动的附红体。血片瑞氏染色附红体呈
过两次处理就能达到理想的效果。
二、两种温度下的诱导结果 见表 2。
表 2 温度 对诱生干扰素的影响
诱导温度 干扰素外观
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
37℃
正常
5847
5847
30℃
正常
3064
3824
三、静置培养与搅拌培养对诱生培养的影响
见表 3。
表 3 培养方 式对诱生干扰素的影响