猪白细胞干扰素的研制(1)
猪白细胞干扰素对乳猪疫病防治效果
健康养殖·防控畜牧业环境 2020.2372摘 要：本文对猪白细胞干扰素实验目的以及理论依据进行概述；对实验的药物注射和相关方法详细的分析；通过准确的实验数据对乳猪疾病的预防效果作出结论，希望能够给同行或者养殖用户带来一定的帮助。
关键词：猪白细胞；干扰素；乳猪疾病；防治效果1 实验研究的目的和主要依据1.1 实验目的通过对乳猪进行疾病预防注射后，进而有效的控制乳猪感染疾病的概率，最后探讨出降低乳猪疾病防治的相关措施，同时通过实验效果分析猪白细胞干扰素对乳猪疾病预防的影响，最后确定乳猪疾病预防药物的最佳周期。
1.2 实验依据猪白细胞干扰素是一种抗毒药物，其本身并不是直接对猪仔体内进行“抑杀”病毒，而是通过某种方式在乳猪体内产生适量的敏感细胞，并形成一种“抗病毒蛋白”，从而杀死病毒蛋白质等多类病菌。
经过实践证明，猪白细胞干扰素具有很强的机体免疫调节功能，可以明显的提高乳猪以及相关动物的抗感染能力，对病毒、细菌、衣原体、原生物以及立克次氏体具有很强的抗毒抑制作用。
2 应用的药物和实验方法2.1 实验1的药物应用 主要方法以及治疗分析2.1.1 药物剂量和相关规格。
使用15支20005u*的猪白细胞干扰素，生产兽药的生字为（2008）22028号。
2.1.2 实验方法。
将生长发育健全的乳猪在随机情况下分为对照组和实验组两个部分，对照组乳猪185头，实验组乳猪205头。
每个实验组的乳猪还应划分为三个成长阶段即生长周期分别为7d、15d以及30d。
将实验组的乳猪每日根据常规标准进行消毒防疫管理，并在颈部肌肉注射适量的药物，连续注射5d；反之，对照组不进行药物预防疾病控制，等到乳猪出现疾病等异常状态后，再进行猪白细胞干扰素药物治疗，在实验过程中，应保证两个实验组的乳猪生长环境相同，饲养方式基本一致。
2.1.3 药物治疗情况分析。
结合没有进行预防措施的对照组乳猪发病情况，以及相关临床病猪发病现象分析，可以初步确定具有病毒感染和混合病毒感染的乳猪白细胞干扰素2万/ d，在观察期内，将实验组乳猪注射44d后停止注射。
猪白细胞干扰素诱生条件的研究
猪白细胞干扰素诱生条件的研究
丁敦志;李品齐
【期刊名称】《四川畜牧兽医》
【年(卷),期】1996(000)001
【摘要】本试验研究建立的猪白细胞干扰素生产工艺，制备的猪白细胞干扰素，效价可达３．０×１０＾４～４．２×１０＾４，用目前尚无有效治疗药物的猪病毒病具有重要的临床意义，通过小试验临床应用，效果明显，现将猪白细胞干扰素诱和条件的试验情况报告于后。
【总页数】2页(P20-21)
【作者】丁敦志;李品齐
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S859.797
【相关文献】
1.金银花中氯原酸体外诱生白细胞α干扰素试验研究 [J], 胡克杰;王跃红;孙考祥
2.猪血,猪脾白细胞的培养及干扰素的诱生 [J], 曾仕廉;刘晓颖
3.对人白细胞干扰素几种诱生条件的初步探讨 [J], 单永红;陈金龙
4.人外源性干扰素的研究——Ⅰ.人全血细胞干扰素诱生条件的研究 [J], 童葵塘;徐美莲;何志明;王美娟
5.人白细胞γ-干扰素诱生条件的探讨 [J], 柏乃庆;秦来娣;谢如铎
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猪白细胞干扰素在兽医临床上的应用试验研究
实验 有 很 好 的效 果 ， 而 且 治 愈 率 一 点 都 不 高 。为 了 打 和抗 病毒 药物结合 治疗 的方 法也是有 效 的。 这 个 实 验 需 要 对 动 破 这个 传统 的治疗 方法 ， 现 在 要 开 展 有 关 猪 白 细 所 经 历 的 时 间 长 达 两 年 之 久 ，
胞 干扰 素 的实验 ， 实 验 研 究 可 以 向 众 人 表 明干 扰 物 体 内 的 情 况 进 行 不 断 的检 测 和 分 析 ，也 正 是 长 素 的 良好 治疗 效 果 ， 这 样 就 可 以对 疫 情 有 着 很 好 时 间 的 实 验 让 我 们 确 定 了猪 白细 胞 干 扰 素 是 否 可
不 同 的 组 要 注 射 不 同 的 物 质 。 第 一 组 直 接 注 射
体 内 自然 杀伤 细胞和 杀伤 细胞 的杀伤 活性 ， 只要
ｈ后 ， 这些 细胞 的杀伤 活 性就会 得 干扰 素 ， 第 二组 用抗 病毒 药物 治疗 ， 并且 把第 二 注 射干 扰素 ３ 速 度非 常 的快 。干扰 素还 有着 正 比 组作 为 第 一组 的对 照 组 。第三 组 的实验 则 是 要 到显 著增 强 ，
卖 的 普 通 的 抗 病 毒 药 物 比 如 病 毒 灵 、青 霉 素 、 抗
病毒 冲 剂等 等 。
体 内 的机 能 有 着 调 节 作 用 。详 细 的 来 说 ， 干 扰 素 对 免疫监 视功 能有着 调节 功能 ， 它 可 以 增 强 动 物
接 着把 实验对 象相对 平均 的 随机分 成 四组 ，
们 要 引进 猪 白细 胞 干 扰 素 ， 并且推广 这种干扰素 。 许 多年 以来 ， 有 很 多 人 对 于 治 疗 动 物 病 毒 性 疫病 有着 不 同的研 究 ， 但 现 在 对 于 治 疗 这 些 病 毒
猪白细胞干扰素预防乳猪疾病试验
致 的健 康仔 猪作 为试验 和对 照仔猪 。每 个组 又按 乳猪
三个 日龄阶段（ 日龄 、ｌ 日龄、３ 日龄） 分２ 小组， 即７ ５ ０ 划 个 对 照组仔 猪一 部份 从参试 窝 中分 出，一部 份整 窝选 作对 照组 。具体 分布 见表 １ 。
１ ． 注 射 方 法 及 用 量 试 验 组 乳 猪 按 常 规 消 毒 作 颈 部 ．２ ２
验 。探 索猪 白细胞干扰素对乳猪疾病 的预 防效果和预防用 药最佳 日龄 以及仔猪 出生至断奶的发病 、死亡情况 。 猪 白细胞 干 扰 素 是 一 种 高 活 性 、多 功 能 的 生 物 蛋
１ ． 仟猪 选择 和分组 ．１ ２
本试验 分 为二组 ，即猪 白细 胞
干扰 素预 防组（ Ｎ组） Ｉ Ｆ 和对 照组 ，选择饲 养重要 条件基 本
３ 试验结果及初步分析
３１ 试验结果 ．
以，应尽早 进行预 防注射 ，以７ 日龄 开始 进行预 防注射最 佳 。（ ）用 四川世红技 术有 限公 司生产 的猪 白细胞 干扰 ４
从试验 结果观察统计 表中看 出，试验组共３ ７ ，发 ０头
病８ ，治 愈８ ，发病率 ２ ％，治愈率 １０ 头 头 ． ６ ０ ％；对照 组共 ２ ８ ， 发 病 １６ ， 治 愈 １ １ ， 死 亡 ５ ，发 病 率 ５头 ６头 ６头 头 ６． ４３ ％，治 愈率９ ％，致 死率３ ７ ％。其 中７ 日龄试验组共 １２ ０
素 １ 头 ・ ，连 续注射３ ，用于预 防乳猪疾 病和 临床治 支／ ｄ ｄ
疗乳猪 疾病 ，特 别是一 些临床 难 于诊断 的疾病 ，效 果非 常显著 ，具有极大的推广应用价值 。 （ 收稿 日期：２ １ － ３ １ ） ０ ２ ０ — ２
猪白细胞干扰素的临床应用体会
２ 临床疗效及判断标准
２．１ 痊愈 治疗 １～２ 个疗程后，症状消失，食欲、精神、运
动、粪便、形体恢复正常。 ２．２ 有效
治疗 ２ 个疗程后，症状好转，粪便成形，食欲增
·禽流通渠 道的日益复杂，给畜禽疫病的综合防治带来了诸多 困难，尽管采取了多种防治措施，但病毒性疾病的危 害越来越严重。如温和型猪瘟、流行性感冒、流行性 腹泻、传染性胃肠炎等。为此，笔者将猪白细胞干扰 素试用于兽医临床治疗猪的多种病毒性疾病，取得 了比较满意的效果。
１ 材料与方法
１．１ 试验药物 猪白细胞干扰素，性状为类白色、海绵体状，易
溶于水。 １．２ 病例来源
２００７ 年 ３ 月至 ２００７ 年 ７ 月，在吉林农业科技 学院附属动物医院临诊的本地及周边地区养猪专业 户、农户饲养的各品种猪。其中经诊断为流行性感 冒 ３１８ 例、温和型猪瘟 ３８ 例、传染性胃肠炎 １９４ 例、 流行性腹泻 ８６ 例。 １．３ 试验方法
每瓶干扰素解冻后，加注射用水 ３ ｍＬ，溶解后 肌肉注射，每日 ２ 次。乳猪 ５ ０００ ＩＵ／（头·次）；仔猪 １０ ０００ ＩＵ／（头·次），育肥猪 ２０ ０００ ＩＵ／（头·次）。对 继发感染者 肌 肉 注 射 庆 大 霉 素 ，每 日 ２ 次 ，每 次 １ ５００ ＩＵ／（ｋｇ 体重）；内服氟哌酸，每日 ３ 次，每次 ４ ｍｇ／（ｋｇ 体重）。加强管理，给予充足的饮水，对脱 水严重的良种猪予以静脉注射糖盐水、ＶＣ、能量合 剂、５％碳酸氢钠等综合性辅助治疗措施。对体温高 者（≥４０℃）适当肌肉注射解热镇痛药。以上治疗方 法 ３ ｄ 为 １ 个疗程。
加，精神、运动、形体基本恢复正常。 ２．３ 无效
治疗 ２ 个疗程后，症状无明显好转，甚至加重， 改用其他方法治疗或死亡者。
乳猪专用猪白细胞干扰素(冻干型)防治乳猪疾病临床试验
每天１ ， 次 连续 注 射 ３ 。另 一 半 乳 猪 不 次 注 射 药 品 作 为对 照 组 ， 验 组 和 对 照 组 试 在 相 同 的饲 养 条 件 下 观 察２ 。 ０ｄ （ ） 疗 组 ： ． 窝 乳 猪 全 部 发 病 ２治 Ａ整 治疗 组 ， 窝 ，７ 。 主要 临床 症 状 表 共４ ３ 头 现 为拉 黄 白痢 ， 温 升 高 ， 神 萎 顿 ， 体 精 吃 不饱 奶 ； 的呕 吐 、 烈 水 样 腹 泻 ， 色 有 剧 颜 为乳 白色 或 黄绿 色 不 等 ， 带 有 未 消 化 且 的凝 乳 块 ， 恶 臭 。用 乳 猪 专 用 猪 白细 有 胞 干 扰 素 产 品 ，每 瓶 用 注 射 用 水 ６ｍ Ｌ 稀 释 ，肌 肉 注 射 ｌｍＬ （ ・） ／ 头 ｄ ，每 天 １ 次 ， 续 注 射 ３ ， 重 者用 量加 倍 。Ｂ 连 次 病 ． 整 窝 乳 猪 部 分 发 病 治 疗 组 ，共 ６ ，ｌ 窝 ４
繁 自养 的猪 ， 检查 确 定 为 无 猪 支 原 体 经 肺 炎 后 用 猪 支 原 体 肺 炎 疫 苗 进 行 免 疫
维普资讯
ＬＶＥ ｜ ｓ ｏｃＫ Ａ ＮＤ ｏＵＬ ＲＹ ｜ＤＵ ＲＹ Ｎ １ ９ Ｐ Ｔ Ｎ ｓＴ ｏ．９
愈 率 达 １０ ０ ％。 支 原净 是 一 种 具 有 较 强
作 用 的抗 菌 素 ， 产 生 抗 药 性 ， 有 效 不 能
防 治猪 痢 疾 、 支 原体 肺 炎 等 疾 病 。配 猪 合 土霉 素 的应 用 ，能 提 高 杀 菌能 力 、 促
进 种猪 应 隔 离 检 查 ， 引 进 的种 猪 和 自 对
窝 ，共 ｌ３ 。 每 窝 乳猪 随 机各 分 成 一 １头 半 ， 半乳 猪 用 世 红 生 物 技 术有 限公 司 一 的乳 猪 专 用 产 品 ，用 注 射 用 水 ６ｍＬ 稀
猪a-干扰素单克隆抗体的制备及其特性鉴定
猪a-干扰素单克隆抗体的制备及其特性鉴定猪a-干扰素单克隆抗体的制备及其特性鉴定一、引言干扰素（Interferon，IFN）是一类重要的细胞因子，能够调节免疫反应、抗病毒、抗肿瘤等功能。
IFN在生物医药领域有着广泛的应用价值。
猪(a)-干扰素（Pα-IFN）是猪体内主要的IFN类型之一，其特性和生物学活性需要进行深入的研究。
本文旨在介绍猪a-干扰素单克隆抗体（mAb）的制备方法及特性鉴定过程。
二、猪a-干扰素单克隆抗体制备（一）制备抗原采用基因工程技术，将猪a-干扰素的基因导入表达载体，经化学处理转化至大肠杆菌（Escherichia coli）中进行基因表达和纯化。
可选用Purification Kit进行蛋白纯化，得到高纯度的猪a-干扰素。
（二）小鼠免疫与脾细胞融合将制备好的猪a-干扰素注射到小鼠体内，通过间隔一定时间多次免疫，使小鼠产生充分的免疫应答。
采集小鼠的脾细胞，进行细胞融合。
融合细胞可采用PEG法。
（三）筛选与克隆将融合细胞悬浮液加入含有无限稀释小鼠骨髓瘤细胞的培养基中，形成杂交瘤细胞。
培养杂交瘤细胞并筛选，在选择性培养基上进行软琼脂糖酶抗原特异性筛选，获得纯化的蛋白。
三、猪a-干扰素单克隆抗体的特性鉴定（一）蛋白电泳采用SDS-PAGE方法，对制备的猪a-干扰素单克隆抗体进行电泳分析。
结果表明，猪a-干扰素单克隆抗体具有较高的纯度和一定的分子量。
（二）Western blot利用Western blot技术，对猪a-干扰素单克隆抗体的特异性进行检测。
将猪a-干扰素样品进行蛋白电泳，将分离的蛋白转移到膜上，然后使用猪a-干扰素单克隆抗体进行识别。
结果显示，猪a-干扰素单克隆抗体能够特异结合猪a-干扰素。
（三）ELISA采用ELISA技术，测定猪a-干扰素单克隆抗体的亲和力。
将猪a-干扰素样品固定在酶标板上，加入猪a-干扰素单克隆抗体溶液，随后加入辣根过氧化物酶标记的二抗，最后加入显色底物进行测定。
猪白细胞干扰素对猪流行性腹泻病毒的干扰试验
S i y a n g t i a n d e猪白细胞干扰素对猪流行性腹泻病毒的干扰试验陈磊前言：目前，对于猪白细胞干扰素的应用方面对于猪的流行性腹泻病毒的干扰强度还是蛮大的。
众所周知，猪白细胞干扰素的免疫功能是对于相对应的病毒才会起反应的，所以猪白细胞干扰素相对应的病毒则是猪流行性腹泻病毒。
本研究主要针对猪白细胞干扰素，对猪流行性腹泻病毒的干扰试验进行研究，并对其中所存在的问题进行讨论，从而做出适当的改善措施。
1. 猪白细胞干扰素的总体介绍1.1猪白细胞干扰素的定义与其他干扰素不同的是，猪白细胞干扰素不是针对于人类所感染的病毒而言的，而是对于猪流行性腹泻病毒而言的。
从本质上来说，猪白细胞干扰素是一种蛋白质，它是由DNA的表达所呈现出来的，所以本质上所呈现出来的与人类身体里所出现的干扰素是类似的，因此，猪白细胞干扰素是一种蛋白质，它具有免疫功能，并且可以抑制某些病毒的增长，从而减少疾病的发生。
1.2猪白细胞干扰素的产生及特点与作用机理猪本身就可以产生猪白细胞干扰素，这也是大部分的情况下，猪不会因为流行性腹泻而生病。
当然猪白细胞干扰素的产生也有一部分来自于人工生产，人们只要掌握猪白细胞干扰素的产生机理就可以生产足量的猪白细胞干扰素用于猪流行性腹泻的治疗。
对于猪白细胞干扰素的生产机理，是需要先了解到相应病毒的活动范围与方式，然后对病毒开始进行治理，在一次次的阻挠病毒的过程中，发现猪白细胞干扰素的作用机理，从而投入大量的生产。
猪白细胞干扰素的第一个特点就是专一性。
不像其他的抗体一样，可以攻击许多病毒，猪白细胞干扰素只会对猪流行性腹泻病毒进行抑制作用，所以猪白细胞干扰素是专一的。
猪白细胞干扰素的第二个特点就是抑制作用显著，猪白细胞干扰素对于猪流行性腹泻病毒的抑制作用是极强的，但是在抑制作用期间是有一些方面是需要注意的。
在猪白细胞干扰素对猪流行性腹泻病毒进行抑制作用时，大量的干扰素对流行性腹泻病毒进行攻击，将流行性腹泻病毒包裹起来，然后进行消灭，所以，猪白细胞干扰素对猪流行性腹泻病毒的抑制作用是极强的。
猪白细胞干扰素在兽医临床上的应用研究
当前，养殖行业全都面临一个重要的难题，即牲畜在患病后，无法得到及时有效的治疗，从而给养殖业造成巨大的经济损失。
养殖行业传统的预防牲畜感染疾病的方式是接种疫苗，但使用这种方式却无法有效的预防动物病毒性疾病，所以必须采取新的手段和措施，改善这一局面。
猪白细胞干扰素是一种有效治疗病毒性疫病动物的药物，对患病动物的治愈率较高，在实际应用中取得了良好的效果，本文将很对猪白细胞干扰素在兽医临床上的应用进行实验研究。
一、猪白细胞干扰素的研究方式与结果（ ）实验研究法为验证猪白细胞干扰素在治疗养殖动物病毒性疾病方面的效果，进行一下实验。
首先，需要先行选择一定数量的患病动物，作为实验的主体对象。
同时准备好足量的猪白细胞干扰素和普通药店购买的抗生素类药物，例如青霉素、病毒灵和抗病冲剂等。
然后，需要将患病的动物按照病情和月份大小相对均匀的划分成四个小组，对不同小组的患病动物注射或使用不同药物。
例如，在第一组患病动物中注射猪白细胞干扰素，第二组动物则使用抗病毒类的药物进行治疗，二组动物作为一组动物的参照，同时，第三组动物选择猪白细胞干扰素和抗病毒药物联合治疗方式，第四组作为对照组，与第二组的治疗方式相同。
（ ）实验研究结果通过对实验的观察，每组进行比对，得到以下实验结果。
在患病动物的治愈率方面，第三组使用猪白细胞干扰素和抗生素类药物联合治疗的动物明显要高于其他组别的动物。
相对于单纯注射猪白细胞干扰素的动物治愈率进行分析，明显联合治疗的效果更好。
通过实验结果分析可以得出，将猪白细胞干扰素联合普通抗病毒药物进行动物传染类疾病的质量，能够显著的控制养殖动物疫情，并且治疗效果较好，基本患病动物都可痊愈。
通过对实践的总结还可以发现，这种治疗方式不单单对一种类型的家禽有效，将这种治疗方法应用在其他类型动物身上，都能有效的控制和治疗传染类疾病。
（ ）针对实验结果的研究上述实验在操作步骤上具有科学性，所以实验结果具有高度的可信赖性，通过多次实践数据显示，使用猪包细胞干扰素对动物流行性疾病进行治疗，能够得到良好的效果。
一种猪白细胞干扰素注射剂及其制造方法[发明专利]
![一种猪白细胞干扰素注射剂及其制造方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1c5fbdc55901020206409c81.png)
专利名称：一种猪白细胞干扰素注射剂及其制造方法专利类型：发明专利
发明人：姚家和,江开全,吴永林,苏朝云,丁敦志
申请号：CN95111427.1
申请日：19950708
公开号：CN1123698A
公开日：
19960605
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种治疗猪病毒性疾病的猪白细胞干扰素注射剂及其制造方法，注射剂包括有白细胞悬液、猪血清、启动干扰素、病毒液和培养液，经原料制备→混和→水浴搅拌诱导培养→离心收获→灭活病毒→解冻除菌→分装→成品包装工序制成，其功能是作为一种广谱抗病毒，治疗猪瘟，猪病毒性腹泻，猪病毒性感冒等病毒性疾病。
田间控制和推广治疗试验总治愈率为91.7％，人工控制治疗猪瘟和猪病毒性腹泻总治愈率为73.3％和100％。
申请人：四川省乐至世达生物技术开发公司
地址：641500 四川省乐至县天池镇厂区一路38号
国籍：CN
代理机构：内江市专利事务所
代理人：张新
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中国兽医杂志 1996 年( 第 22 卷) 第 10 期
— 19 —
人õ畜õ附õ红õ细õ胞õ体õ感õ染õ的õ初õ步õ调õ查
张汝勇 曹 林 李春莹 赵振林 ( 宁夏青铜峡市畜牧兽医站, 751600) 李国兴 汤文银 张福绥 蒋爱国 王玉宏 ( 青铜峡市卫生防疫站)
马兴华 王克敬 贾自力 ( 青铜峡市人民医院)
附红细胞体病( Ep eryt hr oz oonosis) 是附 着在红细胞表面以及游离在血浆中的一种病 原体- 附红细胞体( Ep ery t hroz oon) ( 以下简 称附红体) 。目前已有 20 多个国家报道此病 发生。笔者也曾报道。1986 年 Punt aric 报道 了 1 例人的附红体病[ 3,4] 。在国内 1994 年杜 跃峰报道了内蒙从人群中查到附红体病[ 5] 。
4. 起动干扰素对诱生结果的影响 见表 4。
表 4 起动干扰素对诱生干扰素的影响
起动干扰素加量( u / m l)
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
0
0
0
50
3200
3200
100
5600
5000
200
4840
4840
1000
5050
5050
李芷芬等的试验表明[ 3] , 制备猪干扰素 时可用人干扰素作起动, 这种用人干扰素诱 导的猪白细胞干扰素可作为下一次起动干扰
[ 2] 杨云楼等. 病毒学杂志, 1989
[ 3] 李芷芬等. 全国第 五次干扰素学 术会议论 文集. 西安.
1985
[ 4] Cart er et al. , Int erferon Rev. , 5∶( 376～381) , 1965 [ 5] K enn et t et al . , In terf eron Rev. , 12∶( 193～198) , 1972
过两次处理就能达到理想的效果。
二、两种温度下的诱导结果 见表 2。
表 2 温度 对诱生干扰素的影响
诱导温度 干扰素外观
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
37℃
正常
5847
5847
30℃
正常
3064
3824
三、静置培养与搅拌培养对诱生培养的影响
见表 3。
表 3 培养方 式对诱生干扰素的影响
0. 5×107
1660
1824
1×107
3040
3412
5×107
8600
8600
10×107
1086
2260
在一定体积的培养液中, 白细胞浓度对干 扰素的产生有很大影响。白细胞过少, 产量低, 反之, 若白细胞过多, 其生存环境( 如营养成
分, pH , CO 2 , O 2 的浓 度等) 在较 短时间 内恶
一、感染率
在 9、10 月份先后在峡口、小坝部分地区 及屠宰场和养猪、养羊、养奶牛专业大户中对
畜体进行耳尖采血涂片, 用瑞氏和姬姆萨两 种染色法, 用光学显微镜检查, 对重点病例用 鲜血生理盐水稀释后悬滴镜检, 人间调查对 象是饲养员和住院、门诊病人。总计人检血样 96 份, 阳性 16 份, 阳性率 16. 8% ; 畜间检查 淘 汰 羊 血 样 51 份, 阳 性 14 份, 阳 性 率 27. 45% ; 牛 血 样 15 份, 阳 性 3 份, 阳 性 率 20% ; 猪 血 样 52 份, 阳 性 17 份, 阳 性 率 32. 7% 。1994 年 10 月份检查结果比 1981 年
白细胞产生干扰素, 需要一种诱导剂来诱 生, 这已是公认的事实。本试验中, 发现猪白细 胞干扰素诱生病毒, 最适量在 100 血凝单位/ ml 左右。
6. 白细胞浓度对诱生结果的影响 见表
6。
表 6 白细胞 浓度对诱生干扰素的影响
白细胞浓度( 个/ ml )
干扰素效价( u/ ml) WISH - VS V PK- VS V
相似的结果。采用原代猪肾细胞作为检定细
胞, 其结果是不稳定的, 该细胞在方瓶和微孔 板上的生长情况与 PK 细胞的制备关系甚大。 采用简便易行的 W ISH - VSV 系统( 代替 PK 细胞) 进行效价测定, 在保证真实反映该制备 抗病毒活性的基础上, 提高了测定结果的稳定 性。
结 论
猪白细胞干扰素是在一定条件下产生的 一种抗病毒蛋白。猪白细胞含量为 1～5×107
素, 并表现出了良好的诱生能力。本试验也得 到相同结果。
5. 诱导病毒加量对诱生结果的影响 见 表 5。
表 5 诱导病 毒对诱生干扰素的影响
诱生病毒加量( 血凝单位)
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
0
0
0
50
4180
41200
6920
7010
化, 最终影响白细胞活力, 导致干扰素产量的 降低。本试验表明, 猪白细胞诱生干扰素的最 佳浓度为 1～5×107 个/ ml 。
1989 年, 杨云楼等人用 WISH 细胞和 PK ( 猪肾原代细胞) 对比测定了猪脾细胞干扰素
活性, 发现测定 结果 很接近, 1979 年, Cart er 等人也有相同的报道[ 4] 。本试验结果也获得了
7、8 月份阳性率低。
二、发病情况调查
( 一) 人附红体病: 1982 年 8 月在我市家 畜病院实习的某院校学生 14 人, 教师 2 人, 住在有饲养种马、种羊的一个大院里, 在实习 中常与病畜 接触, 几天内 先后 14 名学 生, 2 名老师感到乏力, 发烧、食欲不振, 出现黄疸, 当时误认为感冒, 经医院化验肝功为肝炎。同 时从院内种马、种羊血中查到附红体, 并在鲜 血悬滴镜检中, 见到血浆中和红细胞周围作 翻转运动的附红体。血片瑞氏染色附红体呈
四、猪白细胞干扰素诱导 参照 Cart er 等人报道的方法, 设立 6 个比较试验: 1. 白细 胞分离过程中, 氯化铵处理次数的比较; 2. 两
种诱导温度( 30℃、37℃) 的比较; 3. 静置培养 与 搅拌培养( 80rpm ) 的比较; 4. 超 动干扰素 的加量比较; 5. 诱生病毒加量的比较; 6. 白细 胞浓度对诱生干扰素的影响。猪白细胞干扰
1
有较多红细胞残留 溶血
5028
5400
2
有较少红细胞残留 无溶血
6824
6440
3
有较少红细胞残留 无溶血
5000
5000
氯化铵作为一种红细胞裂解剂, 在细胞 分离过程中主要用于破坏红细胞。如果红细
胞处理不彻底, 则在培养诱导过程中会发生 溶血现象, 影响了白细胞的生长和干扰素的 产生。反之, 若氯化铵处理次数过多, 则会影 响白细胞活力, 也会影响分泌干扰素。一般经
素效价测定, 采用 W ISH ～VSV 系统细胞病 变抑制法, 并以 PK- V SV 系统对照。
结果与分析
一、氯化铵处理次数对白细胞诱生能力的影
响 见表 1。
表 1 氯化铵处理次数对白细胞诱生能力的影响
干扰素效价( u/ m l) 处理次数 白细胞悬液外观 干扰素外观
WISH ～VSV P K- V SV
紫色, 革兰氏阴性, 附在红细胞上的小体有 1 ～6 个多至 20 多个。附红体在血浆中运动 时, 附着红细胞上就停止活动。其形态呈球 状、环状和杆状等多形态。其大小直径为 0. 3 ～1. 3Lm, 一般为 0. 5Lm。在光学显微镜下小 体呈淡蓝色, 中央有明亮的折光圈, 其周边呈 褐色致密边缘, 少数红细胞呈空壳, 视野里可 见异常红细胞及单核细胞增多。经四环素类
培养方式 静置
培养现象 白细胞沉淀
干扰素效价( u/ ml)
WISH - VS V PK- VS V
3000
3450
搅拌 白细胞沉淀
7412
7856
作为在体外培养产生干扰素的白细胞, 其生存条件应与体内一致, 即保持环境温度 37℃, 并在一 定范围内移动, 以保持游 离状 态。用搅拌培养, 水溶 37℃加温方法就能较 好地达到这个目的, 从而产生较高效价的干 扰素。
个/ ml, 营养血清浓度为 5% , 搅拌水浴( 37℃) 培 养, 需要干扰素作起动( 100u/ m l) , 需 要病 毒诱导( 100 血凝单位/ ml ) 。按本试验研究提 出的程序与参数制备的猪白细胞干扰素, 效价 可达 5000～8600u/ ml。
参考文献
[ 1] 杜 平等. 医用干扰素, 1984
病的药物是十分必要和迫切的。本试验摸索
了猪白细胞干扰素诱生条件, 小批量试制, 取 得了满意的结果, 介绍如下。
材料与方法
一、诱生病毒 为 NDV -F , 来自中国预 防医科院病毒所。
二、健康猪抗凝血 无菌采集。
RP MI-1640, MEM ～ Eagle's 日 本 水 制药株式会社。
三、诱导培养装置 自制。
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中国兽医杂志 1996 年( 第 22 卷) 第 10 期
猪白细胞干扰素的研制
丁敦志
( 四川省乐至县畜牧中心, 641500)
李品齐 王 劲 邓秀兰
( 四川乐至世红生物制品公司)
干扰素是一种广谱抗病毒药物, 其疗效 在医学临床上已得到普遍肯定[ 1] 。目前, 猪病 毒性传染病发病率较高, 严重地阻碍着养猪 业的发展[ 2] 。研制有效的防治猪病毒性传染