马属抗菌肽hepcidin在酵母系统中的表达与鉴定

摘要 ： 根据 Ｇ ｎ ａ ｋ Ｌ马 属 抗 菌 肽 ｈ ｐ ｉｉ ｅＢｎ ｅ ｃ ｎ的氨 基 酸 序 列 ， 计 并 合 成 全 长 ２ ９ ｂ ｄ 设 ７ ｐ的 ＾ ｉ ｉ ｄ ｎ基 因 ， 该 摹 将 因插 入 ｐ Ｉ Ｚ Ａ 中 构建 真 核 表 达 载 体 ， Ｃ 鉴 定 的 阳 性 质 粒 电 转 化 毕 赤 酵 母 菌 ｘ ３ ， 不 同浓 度 Ｚ ｏ ｉ 选 高 ＰＣ ａ Ｐ Ｒ ３ 用 ｅｃ ｎ筛 拷 贝 阳性 重 组 菌 ， 醇诱 导 表 达 ， 达 上 清 液 经 超 滤 膜 纯 化 后 ， 用 Ｓ Ｓ Ｐ ＧＥ电 泳 和 抑 菌 试 验 进 行 鉴 定 ． 果 表 甲 表 利 Ｄ Ａ 结 明 ：Ｃ Ｐ Ｒ检 测 和 基 因测 序 表 明 ｈ ｐ ｉ ｉ 因 合 成 正 确 ， 功 构 建 真 核 表 达 载 体 ｐ Ｉ Ｚ Ａ ｈ ｐ ｉｉ ； Ｄ Ａ ｅ ｃ ｎ基 ｄ 成 Ｐ Ｃ ａ ｅ ｃ ｎ Ｓ Ｓ Ｐ ＧＥ电 泳 ｄ 显 示 ， 导 表 达 ｈ ｐ ｉｉ 白分 子 质 量 约 １ ｕ 超 滤 纯 化 后 蛋 白浓 度 达 ｌ ７ ８ ｍｇ・Ｉ ； 菌 结 果 表 明 ． 表 达 产 诱 ｅ ｃ ｎ蛋 ｄ Ｏｋ ， ７ ． 抑 该
物 ， 有 抗 细 菌 、 菌 、 毒 及 抑 杀 肿 瘤 细 胞 等 作 具 真 病 用 ｌ ． 菌 肽 的分 子 质 量 较 小 ， 含 疏 水 氨 基 酸 和 碱 】抗 ｊ 富
根 据 Ｇｅ Ｂ ｎ ｎ ａ ｋ上 马 属 抗 菌 肽 ｈ ｐ ｉｉ ｅ ｃｄｎ的 氨 基 酸 序歹 ： Ｕ ＭＡＩ ＮＴＮＩ ＲＡＡ Ｌ Ｌ Ｌ Ｌ Ｇ ＶＬ ＣＬ Ｌ Ｌ ＡＳ ＴＳ Ｓ —
适合 在 毕 赤 酵 母 中 表 达 的 ｈｐｉｉ ｅ ｃｄ ｎ基 因 ， 北 京 由 Ｉｖｔｏ ｅ ｎ ｉ ｇ ｎ公 司合 成 ． ｒ １ ３ 弓 物 的 设 计 与 合 成 ． ｌ 根据 人 工合 成 ｈｐｉｉ ｅ ｃｄ ｎ基 因 设 计 并 合 成 １对 引 物 ： Ｈ ： ５＿ Ｃ Ｔ ＧＡＧ ， ＧＧ Ｃ Ｃ ＡＴＧ Ｔ Ｔ ＧＣ Ｃ ＧＡＡＣ
７ ０ ５ Ｃｈｎ ； ． ｅｊ ｇ Ｙａ ｇ ｕ ｎＡｎｍａ Ｐｈ ｒ ｃ ， ｉｎ ０ ０ ， ｉａ ３ ０ ０， ｉａ ３ Ｂ ｉｎ ｎ ｙ ａ ｉ ｌ ａ ｍａ ｅ Ｂｅ ｉｇ １ １ ０ Ｃｈｎ ； ｉ ｊ ３ ４ Ｂ ｉｎ ａ ｃ ｉｔｃ ｎ ｌｇ ｏ Ｌｔ Ｂ ｉｎ ０ ０ ５ Ｃ ｉａ ． ｅｊ ｇ Ｔｉｎ Ｔｅ ｈ Ｂｏ ｅｈ 。ｏ ｙＣ ｄ， ｅｊ ｇ １ ０ ８ ， ｈ ｎ ） ｉ ｉ
Ａ ＣＧ Ａ Ａ ＣＡ ＴＣ一 ； Ｈ ２： ５ 一 ３ ＣＧ ＣＴＣＴＡ Ｇ Ａ ＴＣＡ Ｇ—
脏 合成并 富 含 半 胱 氨 酸 的抗 菌 肽 ， 防御 素 家 族． 属
ｈ ｐ ｉｉ 蛋 白结 构 在 不 同 物 种 问 高 度 保 守 ， 蛋 ｅ ｅ ｎ的 ｄ 其
白结构 富含精 氨酸 、 赖氨 酸等带 正 电的氨基 酸残基 ， ８个半 胱氨 酸形成 ４个 二硫 键 ， 成发 夹 结构 ， ４和 第 第 ５个半 胱氨 酸在 发 夹 的 拐角 处 形 成 １个 二 硫键 ， 在磷 酸缓 冲液 中形成 稳 定 的 ｆ折 叠 结 构 ］ 与 许 多 ３ ． 富含半胱 氨 酸 的 抗 菌 肽类 似 ， ｅ ｃ ｉ ｈ ｐ ｉ ｎ具 有 抑 制 细 ｄ
ｏ ｉ ｌ＆ Ｖｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｐ ａ ｍ ａ ｅ ｔ ｓ Ｓ ｉｎ ｅ ， ｉ ｅ ｅ Ａｃ ｄ ｍｙ ｏ ｒ ｕ ｔ ｒ ｌＳ ｉｎ ｅ ， ｎ ｈ ｕ ｆＡｎ ｍａ ｔ ｒ ｒ ｈ ｒ ｃ ｕ ｉ ｃｅ ｃ ｓ Ｃｈ ｎ ｓ ａ ｅ ｆＡｇ ｉ ｌ ａ ｃｅ ｃ ｓ Ｌａ ｚ ｏ ｎ ｃ ｃ ｕ
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无 明显 毒副作 用 ， 致 畸作 用 ， 易 产 生蓄 积 中 毒 ， 无 不 是 一类理 想 的新型 “ 色” 菌 药物． 绿 抗 抗 菌 肽 Ｈｅ ｃ ｉ ｐｉ ｎ是 ２ ０ ｄ ０ ０年 被 发 现 的 一 种 在 肝
酵母 密码 子偏 嗜性 ， 在Biblioteka 改 变氨基 酸 的条件下 ， 设计
Ｐ ＱＴＲＱＬＡＤＬＱＴＱＤＡＡＧＭ ＡＧＡＡＡＧＬ Ｐ Ｈ Ｍ ＧＬＨ ＱＬＲＲＲＤＴＨＦＰ ＣＴＬＣＣ Ｉ ＧＣＣ ＫＱＫＣＧＷ ＣＣＫＴ ， Ｎ
性 氨基 酸 ， 多带 正 电荷 ， 高温 ， 酸碱 ， 定 性 强． 耐 耐 稳 对 比抗 生素 ， 菌肽 的抗 菌谱 更 广［ ］ 抗 菌 肽 杀 菌 抗 ２． 。 机 理独 特 ， 易产 生耐 药 菌 ， 用 专 一 ， 正 常 细 胞 不 作 对
ｅ ｅ ｔ ｏ ｏｒ ｔ ｄ ｉ ｔ ｈ ａ ｔｓ ｒ ｉ ３３， ｈｅ ｈ ｇｈ ｃ ｐｙ ｉ ｓ ｒ ｓ ｗｅ ｅ ｓ ｌ ｃ ｅ ｆ ｅ ｅ ｄ ｓ ｏ ｉ ｌｃ ｒ ｐ ａ ｅ ｎ ｏ ｔ ｅ ｙｅ ｓ ｔａ ｎ Ｘ一 ｔ ｉ ｏ ｎ ｅ ｔ ｒ ｅｅ ｔ ｄ ｂｙ ｄｉｆ ｒ ｎｔ ｏ ｅ ｏｆＺｅ ｃｎ．
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Ｓ ＯＮＧ ｎ ， Ｕ ｉｘ ｎ ＺＨＡ ＮＧ ｉｙ 。 ＸＵ ｎ 。 Ｓ Ｎ Ｑｉ ｎ ｓ ｅ ｇ ， Ｎａ Ｗ Ｐｅ— ｉ ｇ ， Ｊ— ｕ ， Ｌｉ ｇ ， Ｕ ａ ｈ ｎ 。
ｌｒｗｅｇ ｔｏ ０ ｕ，ｎ ｉ ｈ ｓ ｘ ｒｓ ｉｎ ｌｖ ｌｏ ｒ ｔ ｉ ｅ ｃ ｏ １ ７ ８ ／ Ｔｈ ｅ ｏ ｉ ａ ｔｈ ｐ ｉｉ ａ ｉｈ ｆ１ ｋ ａ ｄ ｈｇ ｅ ｔｅ ｐ ｅ ｓｏ ｅ ｅ ｆｐ ｏ ｅｎ ｒａ ｈ ｔ ． ｍｇ Ｉ． ｅｒ ｃ ｍｂｎ ｎ ｅ ｃｄｎ ７
宋 楠 吴 培 星 张 继 瑜 徐 玲。 孙 茜 胜。 李 纯 玲 伏 小 平 ， ， ， ， ， ，
（ ． 肃 农 业 大 学 动 物 医学 院 ， 肃 兰 州 ７ ０ ７ ； ． 国农 业 科 学 院 兰 州 畜 牧 与 兽 药 研 究 所 ， 肃 兰 州 ７ ０ ５ １Ｈ 甘 ３００２ 中 甘 ３００ ３ 北 京 养 元 兽 药有 限公 司 ， 京 １ １ ０ ； ． 京 天 之 泰 生 物 科 技 有 限公 司 ， 京 １ ０ ８ ） ． 北 ０３０４北 北 ０ ０ ５
甘 肃 农 业 大 学 学 报
抗 菌 肽 （ｎ ｉａｔｒ ｌｐ ｐｉｅ 于 １ ７ ａ ｔ ｃｅｉ ｅ ｔ ） ｂ ａ ｄ ９ ２年 首 次
超 滤 膜 购 自 Ｍｉ ｉ ｏ ｅ公 司 ． ｌｐ ｒ ｌ １ ２ 基 因 设 计 与 合 成 ．
在 昆虫体 内分 离获 得 ， 由生 物体 免 疫 系统 在 受 到 是 外 界病 原体侵 袭时 产生 的一类 非特异 性免疫 应答 产
２１ Ｏ １年 ２月
甘
肃
农
业
大
学
学
报
第 ４ ６卷
双 月 刊
第 ｌ ５ ９ 期 ～
Ｊ ＯＵＲＮＡＩ ＯＦ ＧＡＮＳ ＡＧＲＩ Ｕ ＣＵＩ ＴＵＲＡＩ ＵＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ Ｉ
马 属 抗 菌 肽 ｈ ｐ ｉｉ 酵 母 系 统 中 的 表 达 与 鉴 定 ｅ ｃｄｎ在
物 对 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、 草 芽 孢 杆 菌 、 乳 链 球 菌 均 有 较 好 的抗 菌 活 性 ． 枯 无
关 键 词 ： 菌肽 ｈ ｐ ｉｉ ； 赤 酵 母 ； 达 抗 ｅｅ ｎ毕 ｄ 表
中 图分 类 号 ： ５ ． Ｓ８ ２ ６ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ ３ ５ ２ １ ） １０ ０ ５ ０ ３４ １ （ ０ １ ０ ０ ５ ０
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ａ ｃ ｏ ｄｉ ｇ ｔ ｈｅ ｓ ｑｕ ｎ ｅ ｓ ｒ ｃ ： ｃ ｒ ｎ ｏ ｔ ｅ ｅ ｃ ｓｐｕｂ ｉ ｈ ｄ ｉ ｎＢａ ｌｓ ｅ ｎ Ｇｅ ｎｋ， Ｎ Ａ ｅ ｕｅ ｅ ｑ ｎ ｅ ｉ ｉ ｓ ａＤ ｓ ｑ ｎｃ ｓ ｏｆｅ ｕｉ ｅ ｈ ｐｃｄ ｎ ｗａ ｄｅ ｉ ｄ ａ ｓ ｎ ｈｅ ｉｅ ．Ｔ ｈ ｎ， ｈｅ ａ ｇ ｔ ｅ ｗ ａ ｃｏ ｄ ｎｔ ｔ ｅ ｓｇｎｅ ｎｄ ｙ ｔ ｓｚ ｄ ｅ ｔ ｔ ｒ ｅ ｇ ｎｅ ｓ ｌ ｎｅ ｉ ｏ ｈ Ｐ ｉｈｉ ｃ ａ ｐａｓｏ ｉ ｅ ｒ ｓ ｉ ｎ ｅ ｔ ｒ ｔ ｒ ｓ ｘｐ ｅ ｓｏ ｖ ｃ ｏ ｐＰＩ ＣＺａ ｔ ｏ ｔ ｕ ｔ ｔ ｅ ｏｍ ｂｉ ｎ ｌ ｓ ｉ ． ｆ ｅ ｏｎ ｉｍ ｅ Ａ ｏ ｃ ｎｓ ｒ ｃ ｈｅ ｒ ｃ ｎａ ｔ ｐ ａ ｍ ｄ Ａ ｔ ｒ ｃ ｆｒ ｄ ｂｙ ＰＣＲ ｔ ｃ ｉ ｎ， ｏｓｔｖ ａ ｍ ｉ ｅ ｅ ｄｅ ｅ ｔｏ ｐ ｉｉ ｅ ｐｌ ｓ ｄｓ ｗ ｒ
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作 者 简 介 ： 楠 （ １） 女 ， 士研 究生 ， 究 方 向为 兽 医 微 生 物 学 与 免疫 学 ． — ｉ ｊ ｎ ｊ ｎ — １ ２ １ ６ Ｃ Ｉ 宋 １８ ， 硕 ９ 研 Ｅ ｍａｌ ｉ ｇｉ ｇ ｌ ０ ＠ ２ ． Ｏ Ｉ ：ａ ａ Ｉ 通 信 作 者 ： 小平 ， ， 教 授 ， 要 从 事 兽 医微 生物 学 和免 疫 学 的 研 究 ． — ｉ： ｘ ＠ ｇ ａ ． ｄ ． ｎ 伏 男 副 主 Ｅ ｍａｌ｛ ｐ ｓ ｕ ｅ ｕ ｃ ｕ 收 稿 日期 ：０ ０ ０ — ６ ２ １ — ３ １ ；修 回 日期 ：Ｏ Ｏ Ｏ １ ２ １ ４ ２
ｄ ｓ ａ ｅ ｉ ｆｃ ｎｔａ ｔｂ ｃ ｅ ｉ ｌａ ｔｖ ｔ ｇａ ｎ ｔ ｎｐｈ ￡ ｃ ｃ ｕｓａ ｅ ｓ， ａ ｉｌ ｓｓ ｂ ｉｉ ｎｄ Ｓｔ ｅ ｏ ｏ ｉｐｌ ｙ ｄ ｓｇｎｉｉａ ｎ ｉ ａ ｔ ｒａ ｃ ｉ ｉｙ ａ ｉ ｓ ｓｔ Ｏ Ｏ ｃ ｕｒ ｕ Ｂ ｃ ｌ ｕ ｕ ｔｌ ｓ ａ ｒ ｐｔ ｃ ｅ 一
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