蛋白质的颜色反应
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
NH2 NH2 以及乙二酰二胺（O＝C——C＝O）等物质也有此反应。 NH3也干扰此反应，因为NH3与Cu2+可生成暗蓝色的络离 子Cu（NH3）42+。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都 有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质 或多肽。
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（一）双缩脲反应 2．试剂：
①尿素 ②10%氢氧化钠溶液 ③1%硫酸铜溶液 ④2%卵清蛋白溶液
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（一）双缩脲反应
3．操作：
➢ 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿 素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10%氢 氧化钠溶液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出 现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能 掩盖粉红色。
实验二实、验蛋二白、质蛋的白颜质色的反颜应色和反沉应淀反应
二、实验内容：
（一）双缩脲反应
1．原理：
尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分氨。双缩脲 在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩 脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生 此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。
实验二实、验蛋二白、质蛋的白颜质色的反颜应色和反沉应淀反应
二、实验内容：
（三）黄色反应
3．操作：
管号 材 料（滴）
1
鸡蛋清溶液 4
2
指甲 少许
3
头发 少许
4
0.5% 苯酚
4
浓硝酸（滴）
ຫໍສະໝຸດ Baidu
2
40
40
4
现象
5
0.3% 色氨酸
4
4
6
0.3% 酪氨酸
4
4
➢ 向6个试管中分别按上表加入试剂，观察各管出现的现象，有的 试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室 温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。
N O Na O
邻硝醌酸钠(橙黄色)
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸 不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（三）黄色反应 2．试剂：
①鸡蛋清溶液 将新鲜鸡蛋的蛋清 与水按1∶20混匀，然后用6层 纱布过滤。
②头发
③指甲
④ 0.5%苯酚溶液 ⑤浓硝酸溶液 ⑥ 0.3%色氨酸 ⑦ 0.3%酪氨酸溶液 ⑧ 10%氢氧化钠
实验二实、验蛋二白、质蛋的白颜质色的反颜应色和反沉应淀反应 二、实验内容：
（三）黄色反应 1．原理：
含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化 成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。
反应式如下：
反应式如下：
HO
+ HNO3
HO
NaOH O
NO2
硝基酚(黄色)
反应式如下：
反应式如下：
NH2 CO
NH2 NH2 CO NH2
180OC
NH2 CO
NH +
CO NH2
NH2
C
NH2 O
NH2
NH2 CO
NH2
Cu2+ OH-
OH
HO
2
CN N C
NH Cu
NH2
C HN N CH
OH
HO
双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含 有一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH— NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或— CHOHCH2NH2等基团
实验二、蛋白质的颜色反应 三、实验报告：
列表记录实验现象并加以分析。
唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均 有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨 基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。 ➢ 该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应， 是一种常用的氨基酸定量测定方法。 ➢ 茚水合三茚酮三反酮应分被还为原两步成还，原第一型茚步三是氨酮基；第酸被二氧步是化形所成形成CO的2、还N原H型3和茚醛三， 酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
反应机理：
•
此反应的
适宜pH为5~7，
同一浓度的蛋白
质或氨基酸在不
同pH条件下的
颜色深浅不同，
酸度过大时甚至
不显色。
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（二）茚三酮反应
2．试剂：
①蛋白质溶液 2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9） ②0.5%甘氨酸溶液 ③0.1%茚三酮水溶液 ④0.1%茚三酮-乙醇溶液
➢ 向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化钠溶液约2ml，摇匀，再 加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（二）茚三酮反应
1．原理： ➢ 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸
及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 ➢ β—丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿酸、二酮吡
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（二）茚三酮反应
3．操作： ➢ ①取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%
茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变 紫红色再变蓝。 ➢ ②在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴 0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（一）双缩脲反应 2．试剂：
①尿素 ②10%氢氧化钠溶液 ③1%硫酸铜溶液 ④2%卵清蛋白溶液
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（一）双缩脲反应
3．操作：
➢ 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿 素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10%氢 氧化钠溶液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出 现的粉红颜色。要避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能 掩盖粉红色。
实验二实、验蛋二白、质蛋的白颜质色的反颜应色和反沉应淀反应
二、实验内容：
（一）双缩脲反应
1．原理：
尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分氨。双缩脲 在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩 脲反应。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生 此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。
实验二实、验蛋二白、质蛋的白颜质色的反颜应色和反沉应淀反应
二、实验内容：
（三）黄色反应
3．操作：
管号 材 料（滴）
1
鸡蛋清溶液 4
2
指甲 少许
3
头发 少许
4
0.5% 苯酚
4
浓硝酸（滴）
ຫໍສະໝຸດ Baidu
2
40
40
4
现象
5
0.3% 色氨酸
4
4
6
0.3% 酪氨酸
4
4
➢ 向6个试管中分别按上表加入试剂，观察各管出现的现象，有的 试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室 温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。
N O Na O
邻硝醌酸钠(橙黄色)
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸 不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（三）黄色反应 2．试剂：
①鸡蛋清溶液 将新鲜鸡蛋的蛋清 与水按1∶20混匀，然后用6层 纱布过滤。
②头发
③指甲
④ 0.5%苯酚溶液 ⑤浓硝酸溶液 ⑥ 0.3%色氨酸 ⑦ 0.3%酪氨酸溶液 ⑧ 10%氢氧化钠
实验二实、验蛋二白、质蛋的白颜质色的反颜应色和反沉应淀反应 二、实验内容：
（三）黄色反应 1．原理：
含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化 成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。
反应式如下：
反应式如下：
HO
+ HNO3
HO
NaOH O
NO2
硝基酚(黄色)
反应式如下：
反应式如下：
NH2 CO
NH2 NH2 CO NH2
180OC
NH2 CO
NH +
CO NH2
NH2
C
NH2 O
NH2
NH2 CO
NH2
Cu2+ OH-
OH
HO
2
CN N C
NH Cu
NH2
C HN N CH
OH
HO
双缩脲反应不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含 有一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH— NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或— CHOHCH2NH2等基团
实验二、蛋白质的颜色反应 三、实验报告：
列表记录实验现象并加以分析。
唪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均 有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨 基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。 ➢ 该反应十分灵敏，1∶1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应， 是一种常用的氨基酸定量测定方法。 ➢ 茚水合三茚酮三反酮应分被还为原两步成还，原第一型茚步三是氨酮基；第酸被二氧步是化形所成形成CO的2、还N原H型3和茚醛三， 酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
反应机理：
•
此反应的
适宜pH为5~7，
同一浓度的蛋白
质或氨基酸在不
同pH条件下的
颜色深浅不同，
酸度过大时甚至
不显色。
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（二）茚三酮反应
2．试剂：
①蛋白质溶液 2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9） ②0.5%甘氨酸溶液 ③0.1%茚三酮水溶液 ④0.1%茚三酮-乙醇溶液
➢ 向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化钠溶液约2ml，摇匀，再 加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（二）茚三酮反应
1．原理： ➢ 除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸
及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。 ➢ β—丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿酸、二酮吡
实验二、蛋白质的颜色反应
二、实验内容：
（二）茚三酮反应
3．操作： ➢ ①取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%
茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1~2分钟，观察颜色由粉色变 紫红色再变蓝。 ➢ ②在一小块滤纸上滴一滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴 0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。