初始染菌校正因子测定操作规程

一次性使用医用高分子产品

初始染菌校正因子的测定操作规程××××××××公司

1、输液（血）器初始染菌数校正因子的测定

1.1内壁校正因子

1.1.1洗脱液的制备：取三套任意规格新制备的样品，在净化操作台上，分别注入15毫升生理盐水，将两端封闭后反复震荡，使盐水在管路内往复运行数十次以上。将冲洗液在无菌的状态下置入事先已经灭菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

1.1.2营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制（称取4.2克，加水100毫升，混匀后在电加热炉上煮开），然后在121℃高压灭菌20分钟，放入55℃左右的水浴中备用。

1.1.3接种：在净化操作台上，用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中，将约10-15毫升已融化的50℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

1.1.4培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于30-35℃恒温箱中培养48小时。

1.1.5菌落计数：记录各皿碟中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积（毫升）数，即得到洗脱液中的全部菌落数。

重复1.1.1-1.1.5步，分别进行第二次、第三次、第四次洗脱，收集各次洗脱菌落数，填入数据表中。

1.1.6内壁校正因子的计算：用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，去除率的倒数即为内壁校正因子。

1.2、外壁校正因子

1.2.1洗脱液的制备：在净化操作台上，用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭样品的外表面，然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

重复上述1.1.2-1.1.6操作。即得到外壁校正因子。

1.3、琼脂覆盖：在净化操作台上，将上述经过4次内壁外壁冲洗后的样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段，任取两段置入皿碟中，将25-30毫升50℃左右的营养琼脂培养基注入皿碟，覆盖在样品上，立即盖好。冷却后倒置，放入培养箱中培养，48小时后计数，每套样品做2个平行样，取平均数，乘以样品总长度（cm），再除以6，即得到全部样品的总琼脂覆盖菌落数。

表1输血器校正因子测定数据表

测定项目

第一次洗脱

第二次洗脱

第三次洗脱

第四次洗脱

琼脂覆盖

第一次洗脱

去除率%

平均去除率

校正因子

内壁：外壁：

表2输液器校正因子测定数据表测定项目

第一次洗脱

第二次洗脱

第三次洗脱

第四次洗脱

琼脂覆盖

第一次洗脱

去除率%

平均去除率

校正因子

内壁外壁：

检验：复核：日期：2006/1/14

2、穿刺针初始染菌数校正因子的测定

2.1内壁校正因子

2.1.1洗脱液的制备：选取1个批次新制备的穿刺针样品15套，分成三份，每份5套为一组样品。在净化操作台上，每组产品分别注入15毫升生理盐水，将两端封闭后反复震荡，使盐水在管路内往复运行数十次以上，然后将冲洗液置入事先已经灭菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

2.1.2营养琼脂培养基的制备：将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制（称取4.2克，加水100毫升，混匀后在电加热炉上煮开），然后在121℃高压灭菌20分钟，放入55℃左右的水浴中备用。

2.1.3接种：在净化操作台上，用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中，将约10-15毫升已融化的50℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

2.1.4培养：待上述培养基冷却凝固后，翻转平皿，使低面朝上，置于30-35℃恒温箱中培养48小时。

2.1.5菌落计数：记录各皿碟中的菌落数，取平均值，然后再乘以洗脱液总体积（毫升）数，即得到洗脱液中的全部菌落数。

重复2.1.1-2.1.5步，分别进行第二次、第三次、第四次洗脱，收集各次洗脱菌落数，填入数据表中。

2.1.6内壁校正因子的计算：用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数，得到第一次冲洗去除率，去除率的倒数即为内壁校正因子。

2.2、外壁校正因子

2.2.1洗脱液的制备：在净化操作台上，用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭每组样品的外表面，然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。

重复上述2.1.2-2.1.6操作。即得到外壁校正因子。

2.3、琼脂覆盖：在净化操作台上，将上述经过4次内壁外壁冲洗后的穿刺针样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段，任取两段置入皿碟中，将25-30毫升50℃左右的营养琼脂培养基注入皿碟，覆盖在样品上，立即盖好。冷却后倒置，放入培养箱中培养，48小时后计数，每套样品做2个平行样，取平均数，乘以样品总长度（cm），再除以6，即得到全部样品的总琼脂覆盖菌落数。

测定结果详见表3。

表3穿刺针校正因子测定数据表

测定项目

第一次洗脱

第二次洗脱

第三次洗脱

第四次洗脱

琼脂覆盖

第一次洗脱

去除率%

平均去除率内壁：外壁：

校正因子

内壁：外壁：

检验：复核：日期：2006/1/4

3、头皮针、采血针初始染菌数校正因子的测定

3.1内壁校正因子

3.1.1洗脱液的制备：选取三个批次的样品，每个批次各选10套（采血针20套）样品，在净化操作台上，去掉针套同时插在密闭的生理盐水瓶盖上，用力挤压，将挤出液收集到已事先灭菌的具塞三角瓶中，每批产品共收集15毫升洗脱液，立即盖好备用。