厌氧细菌和古菌样品采集
微生物标本采集规范
（4）要收集足够量的标本，量少可能导 致假阴性结果。 （5）在每份标本上注明患者的姓名、标 本来源、采集体位、采集的时间、采集 者的姓名。
（6）标本运输工具应兼顾保证病原体的 生存、无漏和无潜在安全性问题。
标本的拒收
下列情况应对标本进行拒收：
不正确的运输温度 不正确的运输工具 延长的运输时间 未贴标签或贴错标签的标本 标本有泄漏 容器被压碎或有破裂 有明显污染的标本 干涸的拭子标本 对某种检验不适合的标本 已经固定的标本 标本量不足 24小时内的重复标本（血培养除外）
常见标本的采集规范
一、下呼吸道标本操作规范
痰液：
包括咳出的痰和导出的痰 其他种类的标本: 气管吸出物、支气管刷取物、支气管灌洗 液、支气管肺泡灌洗液
【痰的采集方法】:
清晨病人深咳收集第一口痰(TB) 采集前瞩病人漱口,有假牙的病人应先取 下假牙. 用密闭无菌杯收集
【运送】:
标本直接放入标本杯,旋紧杯盖,防止泄漏
Hale Waihona Puke 1次/ 天无菌防漏 的容器
未冷藏：≤0.5h, 冷藏： ≤24h
≤ 24h,4℃
1次/ 天
三、粪便标本操作规范
1、粪便标本虽然含有多种杂菌，但应尽量使用无菌容器， 采集新鲜粪便作培养。 2、标本最好在用药前采集。 3、腹泻病人应尽量在急性期采集标本（3d以内），以提 高阳性率。 4、采集脓血或粘液部分的新鲜粪便23g。液状粪便应挑 取絮状物23ml。 5、不易获得粪便时，可采用直肠拭子采样，即用无菌棉 拭子经生理盐水湿润后，插入肛门内45cm（幼儿 23cm）处，轻轻转动后取出，插入运送培养基内或无 菌试管内。
1.用70%的酒精消毒道管的采集部分。 内导 2.用针管或注射器无菌采集5 到10 ml 管 尿。 （45） 3.将尿转入无菌拭管或容器中。
厌氧菌标本的采集与送检
厌氧菌标本的采集与送检厌氧菌标本采集与送检必须注意两点：标本绝对不能被正常菌群所污染；应尽量避免接触空气。
1.采集：采集标本须注意：不被正常菌群污染，并尽量避免接触空气。
采集深部组织标本时，需用碘酒消毒皮肤用注射器抽取，穿刺针头应准确插入病变部位深部，抽取数毫升即可，抽出后可排出一滴标本于酒精棉球上。
若病灶处标本量较少，则可先用注射器吸取1ml还原性溶液或还原性肉汤，然后再抽取标本。
在紧急情况下，可用棉拭取材，并用适合的培养基转送。
厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长医.学教育网搜集整理。
用于厌氧菌培养的标本不同于一般的细菌培养，多采用特殊的采集方法，如针筒抽取等，应严格无菌操作，严禁接触空气。
不同部位标本采集方法也各有不同特点。
2.送检方法与处理标本送到实验室后，应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h，以防止标本中兼性厌氧菌过度繁殖而抑制厌氧菌的生长。
如不能及时接种，可将标本置室温保存（一般认为，冷藏对某些厌氧菌有害，而且在低温时氧的溶解度较高）。
1）针筒运送：一般用无菌针筒抽取标本后，排尽空气，针头插入无菌橡皮塞，以隔绝空气，立即送检。
这种方法多用于液体标本的运送，如血液、脓液、胸腹水、关节液等医.学教育网搜集整理。
2）无菌小瓶运送：一般采用无菌的青霉素小瓶，瓶内加一定量的培养基和少量氧化还原指示剂，用橡皮盖加铝盖固定密封，排除瓶内空气，充以C02气体。
同时先观察瓶内氧化还原指示剂的颜色，以判断瓶内是否为无氧环境，如合格将用无菌注射器将液体标本注入瓶中即可。
3）棉拭子运送一般不采用棉拭子运送，如果使用该方法，一定使用特制运送培养基，确保无氧环境，确保不被污染，确保快速送检。
4）厌氧罐或厌氧袋运送将厌氧罐或厌氧袋内装入可有效消耗氧气的物质，确保无氧环境。
该方法一般用于运送较大的组织块或床边接种的培养皿等。
1。
厌氧菌培养标本处理标准操作程序
厌氧菌培养标本处理标准操作程序1 检验目的检测是否为厌氧菌感染。
2 原始样本要求各类标本。
3 采样容器厌氧菌运送培养拭子、血培养瓶。
4 试剂革兰染液、厌氧发生袋。
5 检验程序5.1 标本采集标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、无菌体液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。
肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜，将取样刷剪下，可放入运送培养基或床边接种。
已破溃脓肿，用无菌拭子擦去表面脓液，取深部分泌物。
5.2 标本运送和处理a) 血、脑脊液和腹水标本可注入厌氧血培养瓶，在血培养仪中直接进行培养。
b) 如临床有要求，也可床边接种。
不能床边接种的标本，用运送培养基送检。
c) 标本送达实验室后，立即接种相应培养基，放入厌氧袋内进行培养，同时应放入氧消耗剂和厌氧指示卡，迅速密封培养。
5.3. 阳性处理若怀疑有厌氧菌生长，将接种于厌氧袋内的血琼脂平板上的菌落或生长于硫乙醇酸钠肉汤管底的菌或厌氧瓶内的菌涂片后革兰染色，初步分成革兰阴性球菌、革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌和革兰阳性杆菌。
5.4 耐氧试验厌氧环境培养 48 小时后，将可疑菌接种于两个血平板，分别放入有氧、无氧环境中培养 48 小时，如都能生长为兼性厌氧菌；如有氧环境不生长，而在无氧环境生长则为专性厌氧菌。
5.5 初步分群5.5.1 菌落形态对菌落的大小、形态、颜色、有无斑点、透明与否、是否为黏液样菌落进行分类。
5.5.2 色素产黑素拟杆菌-不解糖拟杆菌群孵育 2～10 天可产生黄褐色至黑色色素；龋齿放线菌在室温孵育 3～4 天后产生粉红色菌落；内氏放线菌延长孵育时间可产生黄褐色色素。
5.5.3 溶血产气荚膜梭菌在血平板上形成双溶血环，许多梭杆菌在空气中暴露30min 后菌落周围变绿色。
5.5.4 荧光产黑素拟杆菌、不解糖拟杆菌或韦荣球菌发生红色荧光，梭杆菌常发生黄绿色荧光，艰难梭菌发生绿色荧光。
5.5.5 触酶厌氧革兰阴性杆菌中大部分脆弱拟杆菌、多形拟杆菌、吉氏拟杆菌和腐败拟杆菌触酶阳性；梭菌属、双歧杆菌属、乳杆菌属和消化链球菌属触酶阳性；消化球菌属中某些菌株和丙酸杆菌触酶阳性，真杆菌亦可能为阳性。
厌氧培养简介标本采集和运送和鉴定
钢末法：将钢丝绒、钢末浸入酸性硫酸铜
溶液中，其表面形成一层金属铜，这种铜 铁结合物极易吸收氧而被氧化。使罐内无 氧。 以上有指示剂美蓝，无氧为白色，有 氧为蓝色。
气袋法：其原理与厌氧罐雷同。
厌氧手套箱法：是一种特制的操作培
养箱 其它培养法：在一些基层单位，缺乏 特殊仪器设备，提供一些简易方法。如平 皿焦性没食子酸法、生物耗氧法、疱肉培 基法、液体培养法、高层琼脂培养法。 大多厌氧菌初代培时间长，至少48hr.放 线菌72~96hr。
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临床意义
由厌氧菌感染在人类感染疾病中占相 当大的比例，如脑脓肿，牙周脓肿，口腔 脓肿80%以上由厌氧菌引起，可以是单独， 也可与兼性厌氧菌或需氧菌混合感染。
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（一）厌氧菌感染的条件 • 组织缺氧或氧化还原电势降低均可造成 厌氧菌生长繁殖的适宜环境，易遭受厌氧菌 感染，原因很多，如局部组织供血障碍，见 于血管损伤，肿瘤压迫，烧伤，动脉硬化， 组织水肿，梗死，有异物。大面积烧伤，刺 伤亦可。
在正常情况下厌氧菌可寄生于皮肤和粘膜 ，不一定是真正的致病菌，下列标本无送检价 值，不宜做厌氧培养： （1）鼻咽拭子 （2）齿龈拭子 （3）痰和 气管抽取物 （4）胃和肠道内容物，肛拭 （5）接近皮肤和黏膜分泌物 等。
经皮肤粘膜采集标本时，局部消毒，多 使用针管抽取，减少与空气接触的机会，抽取 时穿刺针头应消毒刺入病变部位，一般抽 3~4ml,若病变液体少，先抽取还原液或还原肉 汤注入病变部位，再抽取。
性感染，造成局部组织氧化还原电势降低，
细菌繁殖产生毒素，细菌本身不侵入血流。 该毒素对脊髓前角运动细胞有高度的亲和力
，与神经节苷脂结合，封闭了脊髓抑制触突
，从而阻止了抑制性触突未端释放抑制性冲
厌氧菌培养标本采集程序
厌氧菌培养标本采集程序1.概述：厌氧菌感染是一种内源性感染，病种遍及临床各科，人体的各个部位。
各种器官和组织都可以发生厌氧菌感染，大部分是与需氧菌混合感染。
故开展厌氧菌的检验对感染的诊断、治疗都有重要意义。
常规细菌培养阴性，很有可能是厌氧菌感染。
即使常规细菌培养阳性，也不能排除厌氧菌混合感染的可能性。
2.目的：规范厌氧菌标本采集程序，以保证厌氧菌标本的正确采集方法。
3.范围：临床医务人员。
4.程序：4.1厌氧菌感染指征4.1.1感染的局部产生气体：这是厌氧菌感染的重要特征。
大多数厌氧菌都能在感染的局部产生气体，产气荚膜梭菌可造成局部组织的气性坏疽。
胸膜腔可有大量气体，皮下有捻发音。
4.1.2分泌物呈恶臭气味，或为暗红色，并在紫色光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。
发红色荧光的分泌物，可能有产黑色素普雷沃菌和不解糖紫单胞菌；分泌物或脓汁中有硫磺颗粒，为放线菌感染.4.1.3发生在粘膜附近的感染：口、鼻、咽、消化道及女性生殖道等粘膜寄生着大量厌氧菌，这些部位有破损或炎症时，容易引起厌氧菌感染，并可进一步侵入血流，引起菌血症或深部脓肿。
4.1.4常规血培养阴性的细菌性心内膜炎，并发脓毒症血栓性静脉炎，伴有黄疸的菌血症等，应考虑可能有厌氧菌感染。
4.1.5长期使用氨基糖苷类抗菌药物无效的病例，可能有厌氧菌感染。
4.1.6深部外伤如枪伤后，人被动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。
4.1.7最近有流产史，以及胃肠手术后发生的感染。
4.1.8标本直接涂片细菌染色不均，镜检可见细菌,需氧培养无细菌生长。
4.2．标本采集：标本的采集和运送是否合格，对厌氧菌检验结果影响很大。
标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、胸腔液、腹腔液、心包液、关节液、胆汁、脑脊液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。
用特殊技术或方法采取的标本，采集部位与方法如下。
4.2.1肺部：肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜，带有保护取样刷不被正常菌群污染的套管，将取样刷剪下，可放入运送培养基或床边直接接种。
厌氧菌培养标本的采集
厌氧菌培养标本的采集
厌氧菌是对氧气敏感的一类细菌，在有氧气的环境中不能生存或生存极差，而且多数厌氧菌是机体内正常菌群的一部
分。
因此怀疑厌氧菌感染时标本的采集需要特别注意：①应尽量避免接触空气；②不被正常菌群污染。
采集厌氧菌培养标本原则上应从无正常菌群寄居的部位采取，对穿刺点进行消毒后，无菌操作抽取血液、关节液、心包液、腹、胸腔积液和膀胱穿刺液等标本；封闭性脓肿用注射器抽取；可通过纤维支气管镜保护性毛刷或支气管肺泡灌洗从支气管、肺中获取呼吸道分泌物或经支气管肺活检获取肺活组织；子宫腔分泌物采用双套管官腔镜采取。
采集的标本应立即排空注射器内的空气（应在针头上包裹酒精棉球），立即将注射器针头插入无菌橡皮塞中以隔绝空气，运送至实验室；最好将标本立即注入密封的无氧小瓶中，瓶中装有0. 5ml厌氧培养基，并含有氧气指示剂刃天青，无氧气时不显色，小瓶内液体呈现淡黄色或无色。
小瓶内液体显示粉红色表示有氧气，不能使用。
也可在床边直接接种至预还原的培养基中，放人厌氧袋，打开气体发生装置，密封后运送至实验室。
以下标本不宜做厌氧菌培养：鼻咽拭子、咳出的痰液及气管抽取物、胃和肠道内容物、肛拭子、自行排出及导出的尿液、阴道及子宫拭子、前列腺分泌物、褥疮溃疡及粘膜层表面拭子、皮肤和粘膜拭子等。
厌氧菌的采集送检培养分离鉴定及注意事项
厌氧菌的采集送检培养分离鉴定及注意事项厌氧菌是一类在缺氧或无氧条件下生长的微生物。
由于其独特的代谢方式和生长环境的要求，厌氧菌的采集、送检、培养分离和鉴定需要特殊的注意事项。
下面将详细介绍厌氧菌的采集、送检、培养分离和鉴定的方法及注意事项。
一、厌氧菌的采集方法：1.采集样品时应尽量避免与空气接触，以防止厌氧菌暴露于氧气中而失活。
2.采集厌氧菌的样品应尽快送检，以确保其最佳生长环境。
常见的厌氧菌采集样品包括：创伤分泌物、组织切片、血液、体液、粪便等。
二、厌氧菌的送检和保存：1.送检时应明确注明样品为厌氧菌的检测，以便实验室作出相应的处理。
2.采样后，尽量将样品封存，避免与氧气接触，以确保厌氧菌生长环境的完整性。
3.若无法封存样品，应尽快送检至实验室。
三、厌氧菌的培养方法：1. 使用厌氧培养基来提供适宜的生长环境，如：血寒胁素琼脂培养基、Schaedler琼脂培养基等。
2.培养瓶或培养皿密封完好，以维持厌氧条件。
3.培养培养基时，应将其加热至48-50℃，以刺激厌氧菌的孢子萌发。
4.培养温度通常为35-37℃。
四、厌氧菌的分离方法：1.采用分离培养基，在含有抗生素的培养基上分离厌氧菌。
2.厌氧菌通常会在培养基上产生特殊的形态特征，如：斑点、颜色变化等。
3.通过剖析菌落形态特征，并进行细胞的染色观察来鉴定培养物中的厌氧菌。
五、厌氧菌的鉴定方法：1.根据厌氧菌的生物学特征进行初步鉴定，如：形态特征、生理特性等。
2.利用生化试验对厌氧菌进行进一步的鉴定，如：糖、氨基酸、营养盐的利用能力等。
3.利用分子生物学方法，如PCR、16SrRNA测序等进行鉴定。
六、厌氧菌的注意事项：1.在操作过程中应严格遵守无菌操作的要求，以避免外源性菌的污染。
2.在培养过程中要注意保持相应的厌氧环境，如密封培养瓶或培养皿，避免与氧气接触。
3.在采集和送检过程中要注意样品的完整性和新鲜度，以提高厌氧菌的培养成功率。
4.在菌落鉴定过程中要仔细观察形态特征和生物学特性，以确保鉴定结果的准确性。
常见微生物标本采集方法
常见微生物标本采集方法第一篇：常见微生物标本采集方法常见微生物标本采集方法一、基本原则1、发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查，二、三级医院微生物标本送检率不应低于70%。
2、尽量在抗菌药物使用前采集标本。
3、标本采集时应严格执行无菌操作，减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。
4、标本采集后应立即送至实验室。
床边接种可提高病原菌检出率。
5、以棉拭子采集的标本如咽拭、肛拭或伤口拭子，宜采用插入运送培养基送检。
6、混有正常菌群的标本如咳痰、尿液、伤口拭子，不可置肉汤培养基内送检。
7、盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂。
8、送检标本应注明来源和检验目的，使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境。
二、常见感染标本采集与送检方法（一）、血液及骨髓1、通常采血部位为肘静脉。
疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。
2、采血部位的局部皮肤应严格消毒。
将采集的血液注入血培养基前，应列换针头或过火消毒针头。
3、每次采血量成人5-10ml，婴幼儿1-2ml，培养基与血液之比以10∶1为宜，以稀释血液中的抗生素、抗体等杀菌物质。
4、怀疑菌血症庆尽早采血，体温上升阶段采血可提高阳性率，但要防止因等待而延误时机。
对已用抗菌药物而不能停药者，可在下次用药前采血。
5、对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人，在病灶或者髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1 ml作增菌培养。
（二）、尿液1、中段尿：女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及阴部及尿道口；男性翻转包皮冲洗，用0.1%新洁尔灭消毒尿道口，灭菌纱布擦干后，收集标本。
2、导尿管导尿采样可减少污染。
对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液；或拔去闭式引流的集尿袋，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。
不可从集尿袋的下端管口留取标本。
3、尿厌氧菌培养，或婴幼儿中段尿采集困难，或培养结果与病情不符时，可经耻骨上皮肤穿刺采集无污染的膀胱内尿液。
厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
厌氧培养标本的采集和运送规范
厌氧培养标本的采集和运送规范首先，我们应当知道厌氧菌感染可能性比较高的疾病类型以及厌氧菌感染的特征性表现。
厌氧菌引起的感染病主要包括封闭脓肿如肝脓肿、腹膜炎、腹腔感染、糖尿病足等感染，还可以引起血流感染、中枢神经系统感染，有些感染一般不考虑厌氧菌。
厌氧菌感染特征性表现1.局部有气体产生；2.发生在黏膜附近的感染；3.深部外伤，如枪伤、人或动物咬伤后的继发感染；4.分泌物有恶臭或暗红色或在紫外灯下发出红色荧光，或脓汁中有硫磺颗粒考虑放线菌感染；5.某些抗菌药物治疗无效的感染；6.革兰染色着色不均、形态奇特、呈明显多形性；或镜检见细菌而需氧培养为阴性者。
其次，要明确厌氧菌培养的一般原则1、采集、运送过程中要避免与空气接触；7•采集部位因很多地方有厌氧菌定植，所以只有特殊部位才可以取材；8.床旁厌氧接种最好；9.活检或针头抽吸物，置于无空气的注射器或厌氧转运环境送至微生物室;10无菌拭子一般不建议送厌氧培养，因暴露于空气；11所有标本都要做革兰染色找细菌；12立即送检，并置于厌氧环境运送；13不能冷藏，需室温保存。
最后，要知道可接受和不可接受的标本范围1可接受的标本：抽吸物（用注射器）、胆汁、血液、骨髓、支气管镜下保护性毛刷、后穹窿穿刺术、输卵管、子宫内装置检查放线菌、卵巢、剖宫时的胎盘、鼻窦抽吸物、粪便查艰难梭菌、外科组织、外科厌氧转运拭子、经气管抽吸物、经耻骨上穿刺的尿液、子宫内膜抽吸物、正常无菌部位的体液、正常无菌部位的外科活检标本、脓液、深部伤口的抽吸物，眼部标本（泪道/结膜等结石、房水、前房液（穿刺）、玻璃体洗液（术中采集）。
14不可接受的标本：无保护的支气管肺泡灌洗液、宫颈分泌物、被污染的宫颈内拭子、气管抽吸物、恶露、鼻咽拭子、会阴分泌物、前列腺液或精液、痰液、诱导痰、粪便标本查非梭菌类厌氧菌、咽拭子、支气管造口抽吸物、尿道分泌物、中段尿或导管尿、阴道拭子或外阴拭子、一切被定植厌氧菌污染的标本、浅表伤口拭子等。
（完整版）临床常见微生物标本的采集与运送
（完整版）临床常见微生物标本的采集与运送临床常见微生物标本的采集与运送唐玉英正确的标本采集，运送，保存和处理对于微生物检验工作质量至关重要，为了准确检出病原菌，避免漏检与误诊，临床医护人员和实验室工作人员应掌握微生物标本的选择，采集，运送，保存及处理的一般原则。
一标本采集的一般原则1.早期采集采集时间最好在病程早期，急性期，且必须在使用抗菌药物之前采集，确保病原菌的检出。
2.无菌操作采集标本时应尽量减少或避免感染部位附近或皮肤黏膜正常菌群的污染，使病原菌与正常菌群混淆，造成临床误诊。
采集的标本应存放在无菌容器内，容器不能使用消毒剂处理，标本中也不能添加防腐剂，以免降低病原菌的检出。
3.适量的标本标本量过少可能导致假阴性结果。
4.适当的采集方法对于厌氧菌，需氧菌或兼性厌氧菌的采集方法是不同的，用于厌氧菌培养的标本应尽量用注射器采集抽取物，室温保存，不能冷藏和冷冻。
5.盛放标本的容器采集标本应存放在无菌，防漏，应带有螺旋盖的容器内。
二标本的运送1.标本采集后立即送检，若有延迟也应在2小时内送到实验室，否则会影响病原菌的检出，一般性的细菌培养标本若需延迟送检时，应置于4度冰箱保存，且不能超过24小时。
2.临床标本最佳运送时间取决于标本的量，少量液体（小于1ml）或组织（小于1cm3）应在15~30分钟内送到实验室，较多量的标本置于运送培养基中可放12~24小时，厌氧培养标本原则上是床边接种，如延迟送检，需保存在厌氧运送培养基中，室温保存，不得超过24小时。
三不同标本的采集，运送（一）血液标本采集，运送1.血培养指针当患者出现：发热（大于38度）或低温（小于36度），寒战，白细胞增多,皮肤黏膜出血，休克，多器官衰竭，血压降低，c反应蛋白升高及呼吸加快，血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，具备上述一种或几种体征时，临床怀疑菌血症应采集血液标本进行血培养，对入院危重感染患者应在未使用抗菌药物治疗前，及时做血培养。
微生物检验标本的正确采集
微生物检验标本的正确采集、运送及处理，与细菌的培养、鉴定结果有十分密切的关系，医生、护士、检验人员均应重视微生物标本的正确采集的有关问题，并有责任向患者及家属进行正确采集标本的宣传和指导。
标本采集应严格执行无菌操作。
采集标本的容器必须经灭菌处理，不可用消毒剂
尽量在抗生素应用前采集标本、以提高阳性检出率和避免漏检。
为了提高阳性率，应在抗生素治疗前，病人寒战或高热时严格无菌静脉采血后注入血培养瓶。
（2）于已用抗生素不能停用时，可于48小时内分别于下次用抗生素之前，采取3份血液标本(要求双管双侧）立即送检，如不能立即送检，应放置室温保存，但不能超过8-9小时。
2h内送至实验室，特殊标本应立即送检（如脑脊液、厌氧菌等）
专人运送，注意生物安全（旋紧瓶盖！）。
特殊标本注意保温（脑脊液、血培养）
暂存:一般标本
4℃，不超过24h,
特殊标本
25℃,如脑脊液、血培养,不超过8h
细菌耐药性：是细菌抵抗抗菌药物杀菌、抑菌作用的一种防御能力，一种生物学的表型。
天然耐药（固有耐药）：耐药性为某种细菌固有的特点称细菌的天然或固有耐药性。
天然耐药非常稳定，据此就可预测某一细菌或可能存在的细菌对某种抗生素是否耐药。
获得性耐药：由于细菌获得耐药基因，使原来敏感的细菌变为耐药称细菌的获得性耐药。
获得性耐药是目前临床面临的最主要的耐药问题。
由天然敏感菌基因突变或获得一段基因片段，使其基因型改变而产生耐药。
获得性耐药不断在变化（其变化频率与抗生素应用相关），不能预测，需要做药敏试验。
细菌和真菌标本的采集指南
八细菌和真菌标本的采集指南标本类型采集时间和温度重复采样限制说明原则装置和最小量转运储存脓肿用无菌盐水或70％乙醇拭去表面渗出物组织或体液优于拭子标本，如必须用拭子，采集2个，1个培养，1个做革兰氏染色。
开放性尽可能抽取或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样拭子送捡系统≤2h，常温≤24h，常温1/d/来源从脓肿底部或脓肿壁的取样，结果最好封闭性用针及注射器抽吸脓肿壁，将所有物质无菌转入厌氧转运装置厌氧送捡系统≥1ml≤2h，常温≤24h，常温1/d/感染来源取样时，可能会带入与感染过程无关的定植细菌咬伤见脓肿不要培养≤12h的动物咬伤伤口（通常不能分离到感染性病原体，除非位于脸上或手上，或有感染的指征存在）血培养培养瓶的消毒：加70％异丙基乙醇到橡胶塞1min细菌：血培养瓶≤2h，常温≤24h，常温或按说明3套/24h急性脓毒病：10min内从不同部位采2－3套成人，5-10ml/套急性心内膜：1－2h内从3个不同部位采3套首先触摸静脉婴儿，3－5ml/套亚急性心内膜炎：从3个分离部位采3套，间隔≥15min，如24h内为阴性，要再采3套型采样限制说明原则装置和最小量转运储存血培养静脉穿刺消毒：1.用70％乙醇清洗采集体位2.使用蘸碘拭子，次女嘎中心开始呈同心圆式涂抹3.让碘制剂晾干4.不要触摸该点5.采血6.穿刺后，用乙醇将皮肤上的碘除去原因不明发热：从不同部位采2－3套，间隔≥1h，如24h内为阴性，要再采3套骨髓对穿刺一侧准备同外科切口接种血培养瓶≤24h，常温，≤24h，常温1/d少量骨髓可直接接种培养基烧伤标本采集前，先清洗和清创烧伤伤口将组织放入有旋帽的容器内用拭子取渗出物≤2h，常温≤24h，常温1/d/感染只需进行需氧培养，烧伤表面的培养可能会有误导导管1.用乙醇清洗导管周围的皮肤2.将导管末端距夹子5cm无菌移入无菌管3.直接转运微生物实验室，以防干燥无菌或有旋帽的管或杯≤15min，常温≤24h，4℃无对半定量培养，导管是可以接受的，如静脉导管（Maki法）：中心的、CVP、Hickman、Broviac、外周的、动脉的、Foley 由于培养物代表尿道末端的菌群，不要培养要求培养是不能接受的型采样限制说明原则装置和最小量转运储存蜂窝组织炎1.用无菌生理盐水或70%乙醇擦拭2.用细针头和注射器抽吸发炎的区域（一般是中心而不是边缘）3.往注射器吸入少量无菌生理盐水，将标本抽入无菌旋帽管无菌管（不要用注射器转运）≤15min，常温≤24h，常温无只有25－30%可产生潜在的致病菌CSF 1.用2%碘酒消毒采集体位2.用带L3－L4，L4－L5或L5－S1通管丝的针头插入3.进入蛛网膜下腔后，移去通管丝，采集1－2ml液体，分别放入3个防漏管无菌旋帽管所需的最小量：细菌，≥1ml真菌，≥2ml细菌：不要冷冻；≤15min，常温≤24h，常温无也可采血进行培养。
常见微生物标本的采集
常见微生物标本的采集、处理与检测标本采集的基本原则：尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守无菌操作、正确保存和运送。
容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。
1.血液标本正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入时可引起严重的菌血症或败血症。
一般情况下在患者发热初期或发热高峰时采集；持续性菌血症可随时采集；间歇性菌血症，应预测其体温上升期进行采血。
一般在使用抗生素前采集2~3次；多部位采集，如两侧肘静脉或动、静脉同时采取；对于已使用抗生素而无法停止的患者，也应在下次用药前采取。
在感染局部的附近血管中采血，可提高阳性率。
采血量成人一般5~10ml，婴幼儿1~2ml。
采集的血液标本注入培养瓶中先进行增菌培养，培养基和血液标本量的比例应>10：1，将血液中的各类杀（抑）菌物质充分稀释。
需氧菌常用培养基有胰酪蛋白大豆胨肉汤和葡萄糖酚红肉汤等，常加入对氨基苯甲酸（PABA）50μg/ml中和磺胺类，青霉素酶2单位/ml破坏青霉素类，硫酸镁中和链霉素、四环素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗生素。
加入0.03~0.05%的聚茴香磺酸钠（sodium polyanethol sulfonate, SPS）可抑制血清中的抗菌物质，并对氨基糖苷类和多肽类抗生素有灭活效果。
并加入Ⅹ、Ⅴ因子等生长因子。
培养瓶每天观察一次。
如发现①培养瓶内液体浑浊；②血球层上面出现颗粒状的生长物，并且有自下而上的溶血；③有明显的凝块；④液体表面有菌膜，培养液清晰或浑浊等，表明有细菌生长。
直接进行涂片染色初步报告。
同时分别接种血平板、巧克力（色）平板，普通培养和5%CO2 35℃培养。
也可直接进行体外药敏试验。
无细菌生长迹象的培养瓶孵育至第7d，接种血平板、巧克力（色）平板，分别进行普通培养和5%CO2环境35℃孵育24h。
为了提高检出的速度，在培养的第2~3d时应移种一次。
有厌氧菌感染时，同时注入需氧瓶和厌氧瓶，厌氧培养基通常用硫乙醇酸盐培养基、牛心脑浸液肉汤等；培养液中有刃天青，无氧时无色，有氧时呈红色。
微生物培养标本的采集指南(采集容器：用红色盖子的无菌采集杯)
微生物培养标本的采集（采集容器：用红色盖子的无菌采集杯）(一)痰培养标本的采集1.应尽可能在用抗生素药物之前采集标本。
以清晨第二口痰为佳,采集标本前应在刷牙后反复用生理盐水漱口,有假牙者应取下假牙。
用力咳出呼吸道深部的痰,痰液直接吐在无菌杯中,标本量应≥1ml 。
咳痰困难者可用雾化吸入3%-5%的生理盐水5ml，5分钟后留取痰液。
2.小儿取痰法:用弯压舌板向后压舌,将拭子伸入咽部,小儿经压舌刺激咳嗽时,可喷出肺部或气道分泌物粘在拭子上送检及其他更有效的方法。
3.真菌培养的标本不能及时送检应4℃保存，以免杂菌生长。
（二）尿培养标本的采集1.通常采集晨起第一次尿液, 尿液应保证在膀胱内停留4h以上。
2.采样前应用0.1%的肥皂水清洗外阴和尿道口，然后不中断排尿，取中段尿液，将尿液收集在无菌杯内5-10ml。
3.睡前少饮水,以免尿液稀释。
（三）粪便培养标本的采集1.住院超过3天或入院诊断不是肠炎患者不常规做粪便培养。
2.取有液体状、脓血或糊状粪便5-10g，对排便困难的患者可用直肠拭子采集法。
3.不能采集便盆或坐池的粪便作送检标本。
（四）分泌物及脓液（主要指伤口、创面脓液等）标本的采集1.对采集标本部位为了防止皮肤表面污染菌混入影响检验结果，应首先清除污垢，再以无菌生理盐水彻底清洗后取深部脓液，盛放于无菌器皿中立即送检。
2.封闭性脓肿：病灶局部消毒后，以无菌干燥注射器穿刺抽取．将采集的脓液注入灭菌试管．对疑似厌氧菌的脓液，抽取脓液后立即排出注射器内的空气，同时将针头插入灭菌橡皮塞，防止空气进入。
3.开放性脓肿及脓性分泌物：先做局部消毒再用无菌棉拭子采取脓液及病灶深部分泌物，并置无菌容器内送检。
（五）眼、耳、鼻、咽拭子培养标本的采集1.采集眼分泌物：先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭子拭干，再用无菌棉拭子采集分泌物。
2.采集咽分泌物：先用清水撤口．用压舌板将舌向下向外压，将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，切勿接触口腔和舌粘膜。
分离厌氧微生物的方法
分离厌氧微生物的方法一、引言厌氧微生物是一类在缺氧环境下生长的微生物，它们对于生态系统的平衡和生物地球化学循环起着重要作用。
分离厌氧微生物是研究其生理特性、代谢途径和应用潜力的基础工作。
本文将介绍几种常用的分离厌氧微生物的方法。
二、选择适当的培养基选择适当的培养基是分离厌氧微生物的关键。
常用的培养基有液体培养基和固体培养基两种。
液体培养基适用于需要大量微生物生长的情况，而固体培养基则适用于分离某一特定菌株。
三、采集样品采集样品是分离厌氧微生物的前提。
样品可以来自于土壤、沉积物、沉水植物等厌氧环境。
采集样品后，应尽快将其转移到无氧条件下，避免氧气的影响。
四、制备稀释液将采集的样品与缓冲液混合，并进行适当的稀释，以获得合适的微生物浓度。
稀释液的配制应根据不同的样品类型和目的进行调整。
五、分离培养将制备好的稀释液均匀涂布在固体培养基上，然后将培养基置于无氧条件下培养。
可以通过各种方法如滴液法、铺平法等将菌落分离开来，以获得纯净的菌株。
六、传代培养分离得到的菌株需要进行传代培养，以获得稳定的菌株纯系。
传代培养需要定期更换培养基，并进行相应的菌株筛选。
七、生理特性鉴定分离得到的菌株可以通过一系列生理特性鉴定来确定其属于哪一类微生物。
常用的鉴定方法包括形态观察、生化试验、生长特性等。
八、分子生物学鉴定为了更准确地确定菌株的分类和亲缘关系，可以利用分子生物学方法进行鉴定。
常用的方法包括16S rRNA基因序列分析、扩增子测序等。
九、保存和应用经过鉴定和筛选后，可以将分离得到的厌氧微生物保存在冷冻库或液氮中，以备后续的研究和应用。
分离得到的厌氧微生物可以应用于生物修复、生物能源等领域。
十、总结分离厌氧微生物是一项重要的研究工作，对于了解微生物的多样性和功能具有重要意义。
通过选择适当的培养基、采集样品、制备稀释液、分离培养、传代培养、生理特性鉴定、分子生物学鉴定以及保存和应用等步骤，可以有效地分离厌氧微生物，并为其后续研究提供基础。
厌养菌采集操作流程
厌养菌采集操作流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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厌氧细菌和古菌样品采集、分离、培养技术规程起草单位：中国科学院微生物研究所目次前言 (3)厌氧细菌和古菌样品采集、分离、培养技术规程 (4)1 范围....................................... (4)2 术语和定义................................. .. (4)3 样品采集................ (4)4 样品分离..................... .. (5)5 分离菌种的培养 (6)参考文献 (7)前言对于厌氧细菌和古菌，在进行取样、分离和培养的各个环节均必须注重这类微生物的特性，采用相适应的方法，使采集的样品具有代表性，尽可能保持其在原生境的种类和数量，并通过分离和培养将其反映和显示出来，同时取得所需的试验菌种。
本规程规定了厌氧细菌和古菌样品采集、分离、培养的方法和要求。
厌氧细菌和古菌样品采集、分离、培养技术规程1 范围本规程规定了厌氧细菌和古菌样品采集的要求及根据样品量的大小所应采取的采样方法；规定了厌氧细菌、古菌样品分离和培养的具体方法。
本规程适用于不同生境中厌氧细菌和古菌样品的采集；以及各类厌氧细菌和古菌的分离培养。
2 术语和定义本规范采用下列术语和定义。
2.1 厌氧细菌和古菌 Anaerobic Bacteria and Archaea厌氧细菌和古菌如梭菌属（Clostridium）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）、甲烷杆菌属（Methanobacterium）等，是指要求在没有分子氧条件下才能生活的各种细菌和古菌。
本文所指厌氧细菌和古菌为专性厌氧细菌和古菌，2.2 Hungate厌氧技术 Hungate methodHungate厌氧技术是美国微生物学家Hungate于1950年发明的一套有效的用于厌氧菌分离和培养的技术，它包括培养基预还原和在无氧环境中进行的菌株分离和培养操作技术。
利用该技术，许多严格厌氧细菌和古菌的分离、培养获得了成功。
2.3 厌氧手套箱 Anaerobic chamber (glove box)厌氧手套箱利用预置在箱内的钯催化剂，催化氢气与氧结合生成水，从而达到除去箱内氧气的目的。
它包括操作室和交换室两部分。
操作室用于厌氧分离、培养，交换室用于操作室内外物品的传递。
3 样品采集采集厌氧细菌和古菌样品时，应尽可能避免将样品较长时间暴露于空气中,尽快将采集的样品带回实验室。
根据放置样品所用容器的不同，可将样品的采集方法分为：厌氧试管法、厌氧罐或厌氧袋法、棉拭子法三种，采集时应视具体情况，选择其中一种方法。
3.1 厌氧试管法3.1.1 仪器和用具3.1.1.1厌氧试管带丁基胶塞的可密封的试管、小瓶，或其他容器。
可通入无氧气（O2）的氮气（N2）、二氧化碳气体（CO2）、或氮气、二氧化碳气体和氢气的混合气体（CO2、N 2和H2），以置换管内空气，创造厌氧条件。
3.1.1.无菌注射器。
3.1.2 稀释液常用磷酸盐缓冲液做为稀释液（NaCl 0.85g，Na2HPO40.25g， NaH2PO40.56g，蒸馏水 100ml）。
3.1.3 取样对于土壤、污泥等可大量获得的样品，可将样品直接装入灭菌的厌氧试管中，直至装满，塞上胶塞，拧紧螺口胶盖。
对于从动物肠道、口腔等部位采集的少量样品，直接将样品迅速装入灭菌的、盛有预还原稀释液的厌氧试管内，立即塞上胶塞，拧紧螺口胶盖。
对于液体样品应用无菌注射器抽取样品，取样后立即排除多余空气，将样品注射进灭菌的厌氧试管中。
3.2 厌氧罐或厌氧袋法3.2.1 仪器和用具3.2.1.1厌氧罐或厌氧袋可以密封的容器。
利用化学方法，去除容器中的氧气，创造厌氧环境。
3.2.1.2灭菌的平皿、三角瓶或试管3.2.2 取样将样品尽快装入灭菌的平皿、三角瓶或试管等器皿中，然后放入厌氧罐或厌氧袋内。
3.2.3 棉拭子法采取临床样品时常用此法。
3.3.1 仪器和用具3.3.1.1厌氧试管同4.1.1.1。
3.3.1.2棉拭子无菌棉拭子，装在厌氧试管中。
3.3.1.3半固体琼脂培养基去除氧气的半固体培养基，分装在厌氧试管中。
3.3.2 取样用棉拭子采样后，直接插入装有半固体培养基的厌氧试管内。
4 样品分离厌氧细菌和古菌样品的分离，通常采用系列稀释滚管法或平皿涂布法。
对于样品中含量很少的微生物如光合细菌，应先用富集培养基对其进行富集培养，然后利用选择性培养基进行分离。
4.1 滚管法4.1.1 仪器和用具4.1.1.1 厌氧试管同3.1.1.1。
4.1.1.2振荡器4.1.1.3无菌注射器、弯头毛细管、乳胶管4.1.1.4盛有冰块的托盘或滚管机4.1.1.5显微镜4.1.2 稀释液同4.1.2。
4.1.3 滚管分离4.1.3.1样品稀释取1g或1mL（混合均匀的液体）样品，置于装有9mL或4.5mL预还原稀释液的厌氧管内,在振荡器上振荡均匀，用无菌注射器取1mL或0.5mL样品稀释液加至另一装9mL或4.5mL的稀释液的试管内。
按此操作依次制备成10-1—10-9的样品稀释液，备用。
4.1.3.2滚管将盛有无氧无菌琼脂培养基的试管加热至100℃，使琼脂熔化，并保温在50℃左右的水浴中，备用。
用无菌注射器取至少3个稀释度的样品稀释液0.1-0.2mL，加入盛有溶化的预还原培养基的厌氧试管内，将试管平放于盛有冰块的盘中或放在特制的滚管机上迅速滚动，培养基在试管内壁立即凝固成一薄层。
适温培养后，在琼脂层内或表面形成菌落。
滚管前最好用显微镜观察待分离的样品，了解样品中的细菌或古菌形态类型及其浓度，作为分离样品的参考。
4.1.3.3分离培养挑取单菌落时，将形成单菌落的试管和一支盛有无菌、厌氧培养液的试管固定在适当的支架上，去掉试管的胶塞，插入灭菌的注射器针头，通入气流速度适当的、无菌的、高纯氮气。
将无菌弯头毛细管小心插入形成单菌落的试管内，轻轻吸取预先作好标记的单菌落，转移至盛有厌氧培养液的试管内，塞上胶塞，拧紧螺口胶木盖，适温培养。
形成的菌落需及时进行单菌落的挑取和移植，镜检其形态及纯度。
如尚未获得纯培养物，需再次稀释、滚管，并再次挑取单菌落，直至获得纯培养物为止。
分离的单菌落也可在厌氧手套箱内挑取。
4.2 平皿涂布法4.2.1 仪器和用具4.2.1.1厌氧罐或厌氧手套箱4.2.1.2玻璃刮刀4.2.2 涂布分离根据5.1.3.1中所述方法对样品进行稀释，于厌氧手套箱中，取一定稀释度的样品稀释液0.2-0.5mL置于琼脂平板上，用玻璃刮刀涂抹均匀，置于厌氧罐或厌氧手套箱中，适温培养。
待形成菌落后，及时在厌氧环境中进行单菌落的挑取和移植。
5 分离菌种的培养分离得到的厌氧细菌或古菌，应接种在适宜其生长的厌氧培养基中，置于厌氧环境中，适温培养。
5.1 仪器和用具5.1.1 厌氧试管同4.1.1.1。
5.1.2 厌氧手套箱、厌氧罐，或厌氧袋5.1.3 细口圆底烧瓶5.2 厌氧培养基的制备5.2.1 制备采用煮沸法去除培养基中的氧气。
将盛有已熔化的培养基（已加入氧化还原电位指示剂—刃天青（Resazurin））的细口圆底烧瓶，在酒精灯上加热，煮沸培养基，同时通入纯度为99.99%的高纯氮气，氧气已被完全去除后，培养基从红色变为无色，此时加入规定用量的半胱氨酸。
5.2.2 分装制备厌氧培养基的同时，将纯度为99.99%的高纯氮气通入空的试管中。
去除试管中的氧气。
将上述无氧培养基分装进厌氧试管中，塞上胶塞，拧紧胶木盖，灭菌备用。
5.3 厌氧细菌和古菌的培养将分离得到的厌氧细菌或古菌接种在适宜的厌氧培养基中，直接在厌氧试管中进行培养，或者在可获得厌氧环境的装置中进行培养，如厌氧手套箱、厌氧罐或厌氧袋等。
参考文献[1] 凌代文, 东秀珠. 1999. 乳酸细菌分类鉴定及试验方法. 北京：中国轻工业出版社. 1-176[2] 王祖农等. 1990. 微生物学词典. 北京: 科学出版社[3] Sutter, V.L.,Citron, D.M.et al. 1980. Wadsworth AnaerobicBacteriology Manual, 3rd ed. C.V.Mosby Company.[4] Holdeman, L.V., Cato, E. P. & Moore, W. E. C. (1977). AnaerobeLaboratory Manual, 4th edn. Blacksburg, VA: Virginia Polytechnic Institute and State University.厌氧微生物的分离与培养一、实验目的熟练掌握Hungate厌氧操作技能，了解和掌握厌氧微生物的培养基配制，并进行分离纯化。
二、实验用具装有分压表的氮气钢瓶，氢气钢瓶，调压变压器，铜柱和铜柱固定架，高压灭菌锅，厌氧管（15ml）,厌氧瓶(50ml)，异丁烯橡胶塞、电炉、圆底烧瓶（500ml、1000ml）、各种规格的定量注射器（1ml、2ml，5ml），18#针头，酒精灯，酒精棉等。
三、实验操作(一)、高纯无氧N2的制备1、接通电源：把输出电压缓缓从0伏分级升到50～90伏之间（调电压的过程持续大约2-3s就可以了）。
大约20分钟后，铜柱温度能达到350℃左右（输出电压禁止长时间超过90V 以上，否则会导致铜玻璃柱变形直至破裂，甚至发生安全事故）。
2、待铜柱温度升至350℃左右时，加热套触摸起来比较烫，开启氢气钢瓶并形成气流，使铜柱内的铜丝还原（反应速率很快，几秒钟见效，还原与否可以从铜丝颜色的变化看到，同时柱内会产生水蒸气，氧化铜与氢气反应所致；通氢气的时候最好打开窗户，一定熄灭操作台边上所有明火，包括酒精灯和电炉）。
3、待铜丝被氢气还原呈现纯紫铜铮亮色，同时把里面的水蒸气也排出完全后，关闭氢气钢瓶，压力表指针降为零；打开氮气钢瓶，气流大小以把针头对准操作者手背5cm距离明显感觉到气流为宜，并随时注意气流是否足够。
4、使用完毕后，先关紧氮气钢瓶，使压力表的指示针回至零位，接着关闭电源，使调压变压器调节指示回至0伏处。
(二)、无氧无菌水的配制1.将500ml一定浓度的NaCl水溶液（防止稀释时细胞涨破）沿玻璃棒倒入固定在铁架台上的1000ml圆底烧瓶中（选择合适的圆底烧瓶，水不可太满，否则水沸腾时容易溅出），最好放入几个防爆玻璃珠。
向500ml水中加入终浓度为0.001‰的刃天青（resazurin），即加入0.5ml 的1‰刃天青母液（W/V），并加入0.25g半胱氨酸（L-Cysteine）(终浓度0.5‰)。
在烧瓶外壁溶液水平面处划一刻度后，加入适量水（因为蒸发会损失部分水分）。
煮沸5-10min （视所加水总量而定），刃天青会根据水中含氧量的下降经历紫色-红色-无色的颜色变化，当溶液变为无色后，再煮沸5min，然后通高纯氮气1-2min（赶走空气）。