科研专用嘌呤霉素介绍
【国家自然科学基金】_mir-122_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29
科研热词 mir-122 锁核酸 过表达 转基因小鼠 表达载体 荧光素酶报告基因 脂肪酸氧化 胆固醇稳态 肝特异性 肝炎病毒,乙型 肝损伤 癌,肝细胞 甘油三脂代谢 报告基因 微小rna 循环mirna 小鼠肝脏 实时荧光定量pcr 启动子 免疫印迹 克隆测序 sensor reporter poly(a)加尾法 micrornas hepg2.2. 15 hdl hbv dna印迹
科研热词 推荐指数 微小rna 4 mir-122 3 稳定转染 2 慢病毒表达载体 2 mirna 2 microrna-122 2 microrna 2 hepg2细胞 2 骨骼肌 1 靶基因 1 非酒精性脂肪性肝病 1 过表达 1 载体构建 1 转基因小鼠 1 表达谱 1 表达 1 表观遗传学 1 血清 1 绒山羊 1 氟尿嘧啶 1 慢病毒 1 差异表达 1 基因芯片 1 基因 1 原核表达 1 分子间相互作用 1 凋亡 1 中孕期 1 rna调控 1 rna结合蛋白trbp 1 bel-7402细胞 1 bel-7402/氟尿嘧啶细胞 1 bel-7402/fu细胞 1 bcl-xl 1 bcl-2 1 21-三体综合征 1
推荐指数 4 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36
【国家自然科学基金】_podocin_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140730
2014年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32
科研热词 推荐指数 足细胞 4 糖尿病肾病 3 podocin 3 阿霉素 2 蛋白尿 2 糖原合成酶激酶-3 2 β -catenin 2 nephrin 2 高脂饮食 1 青蒿素 1 阿霉素肾病 1 逆转录聚合酶链反应 1 足细胞损伤 1 蛋白表达 1 肾病 1 肾小球肥大 1 肾功能 1 肥胖相关性肾小球病 1 肥胖 1 维甲酸受体 1 糖尿病 1 益气养阴,消牴通络中药 1 瘦素 1 生化分析仪 1 左归降糖益肾方 1 小鼠 1 姜黄素 1 大鼠 1 信号通路 1 五味子科 1 wt1 1 mkr小鼠 1
推荐指数 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号
科研热词 1 足细胞 2 蛋白尿 3 alpo 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
2011年 科研热词 podocin 足细胞 糖尿病肾病 nephrin 黄芪多糖 表达载体 蛋白尿 祛风通络方 基因重组 六味地黄丸 nphs2 hek293细胞 推荐指数 3 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1
2013年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
2013年 科研热词 podocin nephrin 阿霉素 足细胞 蛋白尿 肾纤维化 糖尿病大鼠 真武汤 益气养阴消癥通络中药 嘌呤霉素氨基核苷肾病 srt1720 推荐指数 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7
科研热词 足细胞 裂孔膜蛋白 细胞凋亡 嘌呤霉素 v型狼疮性肾炎 podocin nephrin
嘌呤霉素盐酸盐58-58-2
14.3 运输危险类别
欧洲陆运危规 : 6.1
国际海运危规 : 6.1
国际空运危规 : 6.1
14.4 包裹组
欧洲陆运危规 : III
国际海运危规 : III
国际空运危规 : III
14.5 环境危害
欧洲陆运危规 :否
国际海运危规 海运污染物 :否
国际空运危规 : 否
14.6 对使用者的特别预防
无数据资料
6.2 环境预防措施
丢弃处理请参阅第160节
6.3 抑制和清除溢出物的方法和材料
避免接触皮肤和眼睛。避免形成粉尘和气溶胶。在有粉尘生成的地方,提供合适的排风设备。
7 安全操作与储存
7.1 安全操作的注意事项
无数据资料
7.2 安全储存的条件,包括任何不兼容性
无数据资料
7.3 特定用途
避免与皮肤、眼睛和衣服接触。休息前和操作本品后立即洗手。Aldrich-D60400页码4的7
4.2 最重要的症状和影响，急性的和滞后的
主要症状和影响，急性和迟发效应
4.3 及时的医疗处理和所需的特殊处理的说明和指示
如必要的话,戴自给式呼吸器去救火。
5 消防措施
5.1 灭火介质
火灾特征
https:// 1/4
化学品安全技术说明书
无数据资料 灭火方法及灭火剂 碳氧化物,氮氧化物,氯化氢气体,氢氰酸
吸入 可能引起眼睛刺激。 吞咽 无数据资料 皮肤 无数据资料 眼睛 无数据资料 接触后的征兆和症状 无数据资料 附加说明 无数据资料
https:// 3/4
化学品安全技术说明书
12 生态学资料
12.1 毒性
无数据资料
12.2 持久存留性和降解性
细胞筛选一嘌呤霉素
细胞筛选一嘌呤霉素(一) 确定最优筛选浓度当用于筛选特定细胞的嘌呤霉素合适浓度未知时，需进行滴定，或制定针对那种细胞的嘌呤霉素杀菌曲线。
一般而言，嘌呤霉素浓度范围在2-10微克/毫升时是足以杀灭大多数未转染的哺乳动物细胞系。
1. 培养待转染（而不是转染后）的细胞。
（筛选的目的是杀灭未转染的细胞）2. 取对数生长期的细胞（一般在铺满培养器皿底部的70%~80%时），用新鲜无抗无血清的培养基制成1.5×105 个/ml 的细胞悬液。
3. 向96孔培养板中加细胞悬液，每孔100微升（使每孔细胞数在1.5×104个），然后向每孔加新鲜无抗无血清的培养基适量，培养箱中静置培养过夜。
（这样做是为了保证在固定细胞密度下确定最佳G418药物筛选浓度。
） 4. 第二天用嘌呤霉素浓度分别为0, 2, 4, 6, 8, 10微克/毫升的新鲜无抗无血清培养基溶液替换各孔中的旧的培养基。
（每个浓度可用两个复孔，相当于每个浓度测定三次）。
（注意：对于多数细胞种类而言，过量的嘌呤霉素能引起许多非必需的表型的反应。
） 5. 每日检查细胞活力，根据细胞活力，每三天( 即每隔两天)更换含嘌呤霉素的新鲜无抗无血清培养基溶液一次。
如细胞生长过快，可以缩短换液时间（每隔一天）。
6. 在正常的实验操作规程时，一种细胞最优筛选浓度的确立时间随细胞的生长率和一般生存时间而定，大概需3到14天。
在所需时间之后，嘌呤霉素的导致所有细胞死亡的最小浓度就是应该用于该细胞和该实验的浓度。
最优浓度为在3-5天内杀死所有细胞的浓度。
(二) 转染细胞 1. 第一天：在60mm培养皿内种植细胞，细胞密度为能使第二天细胞融合能达到70%-80%的密度，CO2孵箱过夜培养。
2. 第二天：准备3ml无抗生素无血清培养基，加入Polybrene使其终浓度为8μg/ml。
将已经制备的病毒颗粒0.5 ml加至上述培养基，轻吹混匀。
去除60mm培养皿内的旧的培养基，加入含病毒培养基。
刺激响应性嘌呤霉素前药和嘌呤霉素衍生物的合成及生物应用
刺激响应性嘌呤霉素前药和嘌呤霉素衍生物的合成及生物应用刺激响应性嘌呤霉素前药和嘌呤霉素衍生物的合成及生物应用引言：嘌呤霉素及其衍生物作为一类重要的生物活性化合物，在药物研究中具有广泛的应用价值。
然而，其使用受到一些限制，例如生物毒性和非特异性靶点作用。
为了克服这些限制，近年来研究人员开始关注刺激响应性嘌呤霉素前药和嘌呤霉素衍生物的合成及其在生物应用中的潜在作用。
本文将探讨近年来相关研究的进展，总结刺激响应性嘌呤霉素前药和嘌呤霉素衍生物的合成方法及其在生物应用中的应用前景。
一、刺激响应性嘌呤霉素前药的合成刺激响应性嘌呤霉素前药是指在特定的刺激条件下释放出活性嘌呤霉素的化合物。
目前，常见的刺激响应性嘌呤霉素前药包括pH响应性、氧气响应性和酶响应性。
它们的合成方法主要包括化学合成和生物合成两种。
1.1 pH响应性嘌呤霉素前药合成pH响应性嘌呤霉素前药利用环境pH的变化释放活性嘌呤霉素，从而实现药物的靶向释放。
一种常用的方法是利用草酸或磷酸等可溶性的前药，通过酸碱中和反应，使其在酸性条件下转变为不溶性的嘌呤霉素，从而实现药物的局部释放。
另外，也有研究人员通过引入具有响应性的侧链，利用酸碱介质的变化，实现前药转变为活性嘌呤霉素的释放。
1.2 氧气响应性嘌呤霉素前药合成氧气响应性嘌呤霉素前药是指在低氧环境中释放活性嘌呤霉素的化合物。
该类化合物的合成方法主要包括利用氧气敏感的配体和载体、利用氧气传感器和利用氧气酶等方面。
例如，利用氧气敏感的配位化合物可以实现氧气信号的转换，从而使前药在低氧环境中释放嘌呤霉素。
1.3 酶响应性嘌呤霉素前药合成酶响应性嘌呤霉素前药是指在特定酶的作用下释放出活性嘌呤霉素的化合物。
常用的方法是将酶的底物与嘌呤霉素偶联，通过酶的催化作用，底物被酶催化分解，进而释放出活性的嘌呤霉素。
此外，利用特定的酶的识别序列，也可实现酶响应性嘌呤霉素前药的合成。
二、刺激响应性嘌呤霉素衍生物的生物应用刺激响应性嘌呤霉素前药和衍生物在生物应用中具有重要的作用。
嘌呤霉素筛选细胞原理
嘌呤霉素筛选细胞原理
嘌呤霉素是一种广泛用于细胞生物学研究的抗生素，它通过特异性地抑制蛋白
质合成而对细胞产生影响。
嘌呤霉素筛选细胞原理主要是利用其对细胞的影响来筛选出对嘌呤霉素敏感或耐药的细胞株，从而为进一步研究细胞的生物学特性提供重要的工具和方法。
嘌呤霉素的作用机制是通过与细胞内的核糖体结合，阻止蛋白质的合成。
在细
胞中，核糖体是蛋白质合成的重要场所，而嘌呤霉素的结合会引起核糖体的功能受损，从而影响细胞的正常生物学活动。
因此，对嘌呤霉素敏感的细胞在其作用下会出现生长受抑制甚至死亡的现象，而对嘌呤霉素耐药的细胞则能够继续生长并繁殖。
在进行嘌呤霉素筛选细胞的实验中，首先需要将待筛选的细胞种植在含有嘌呤
霉素的培养基中，然后观察细胞的生长情况。
对于对嘌呤霉素敏感的细胞，其生长将受到明显的抑制，甚至会出现细胞死亡的现象；而对于对嘌呤霉素耐药的细胞，则会继续生长并形成细胞克隆。
通过这种方式，可以筛选出对嘌呤霉素敏感或耐药的细胞株，为后续的细胞生物学研究提供了重要的实验材料。
嘌呤霉素筛选细胞的原理不仅在细胞生物学研究中具有重要意义，同时也在药
物筛选和耐药机制研究中发挥着重要作用。
通过对细胞对嘌呤霉素的敏感性进行评估，可以为药物研发提供重要参考，同时也有助于深入了解细胞对抗生素的耐药机制，为临床治疗提供理论基础。
总的来说，嘌呤霉素筛选细胞的原理是基于其对细胞的特异性影响，通过观察
细胞在其作用下的生长情况来筛选出对嘌呤霉素敏感或耐药的细胞株。
这一原理不仅在细胞生物学研究中具有重要意义，同时也在药物研发和耐药机制研究中发挥着重要作用，为进一步的科学研究和临床治疗提供了重要的实验基础和理论支持。
磷霉素在呼吸科的应用原理
磷霉素在呼吸科的应用原理1. 介绍磷霉素是一种广泛应用于呼吸科领域的药物，其应用原理有助于治疗一系列呼吸道疾病。
本文将介绍磷霉素在呼吸科中的应用原理，并对其机制进行详细阐述。
2. 磷霉素的概述2.1 定义磷霉素是一种鸟嘌呤核苷类似物，常用于呼吸科领域的治疗。
它通过调节嘌呤代谢的相关途径，起到抗炎、解痉、免疫调节等作用。
2.2 特点磷霉素具有以下特点：•高效：磷霉素在呼吸道疾病中表现出卓越的疗效。
•安全：磷霉素的使用相对安全，副作用较少。
•方便使用：磷霉素可以通过口服、注射等方式给药。
3. 磷霉素的应用原理磷霉素在呼吸科的应用原理主要涉及以下几个方面：3.1 抗炎作用磷霉素通过抑制炎症介质的释放，调节细胞因子的产生，从而具有显著的抗炎效果。
它可以减轻呼吸道疾病引起的炎症反应，改善患者的症状。
3.2 解痉作用磷霉素还可以通过调节平滑肌的收缩，缓解呼吸道的痉挛。
这对于治疗哮喘、支气管炎等疾病具有积极的作用。
3.3 免疫调节作用磷霉素能够调节免疫系统的功能，增强机体对抗病原体的能力。
它可以提高机体的免疫水平，降低疾病复发的风险。
3.4 其他作用除了上述作用，磷霉素还具有促进细胞再生、改善呼吸道黏液排出、减少痰液黏稠度等作用，有助于呼吸道疾病的康复。
4. 磷霉素的临床应用磷霉素广泛应用于呼吸科领域，常见的临床应用包括但不限于：•哮喘：磷霉素可通过抗炎、解痉作用，减轻哮喘发作时的症状。
•支气管炎：磷霉素可缓解支气管炎引起的炎症和痉挛现象，改善患者的咳嗽、喘息等症状。
•慢性阻塞性肺疾病（COPD）：磷霉素可减轻COPD患者的气道炎症，改善肺功能。
除此之外，磷霉素还可用于治疗肺部感染、支气管扩张等呼吸道疾病。
5. 总结磷霉素是一种广泛应用于呼吸科的药物，其应用原理主要与抗炎、解痉、免疫调节等作用有关。
其疗效显著，安全性高，能有效改善患者的呼吸道疾病症状。
在临床实践中，磷霉素被广泛应用于治疗哮喘、支气管炎、COPD等疾病。
嘌呤霉素筛选浓度 (2)
未知驱动探索，专注成就专业
嘌呤霉素筛选浓度
嘌呤霉素（Puromycin）是一种常用的抗生素，可用于筛选经过质粒转染的细胞中是否有成功表达了融合蛋白或其他感兴趣的基因。
嘌呤霉素的浓度应根据具体实验的需求和细胞的特性来进行确定。
一般来说，嘌呤霉素的浓度可以在0.5-10 μg/ml范围内进行筛选。
初始筛选通常使用较高浓度（如2-10 μg/ml），以确保只有成功表达了目标基因的细胞能够存活下来。
随后，可以逐渐降低嘌呤霉素的浓度，以获得高达100%的筛选效率。
在实验过程中，可以通过处理并荧光显微镜观察细胞的存活情况，或者进行细胞增殖和生存率的测定，从而确定最佳的嘌呤霉素筛选浓度。
实验者也可以参考文献或嘌呤霉素的使用说明来选择适当的浓度。
1。
【国家自然科学基金】_嘌呤霉素_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731
推荐指数 3 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
科研热词 rna干扰 卵母细胞 颈静脉给药 逆转录病毒 胚胎发育 胃癌 细胞系 细胞增值 筛选 激活方法,小鼠 慢病毒载体 慢病毒 慢性肾脏病 尾静脉追加 小鼠 孤雌激活 大鼠模型 嘌呤霉素氨基核苷 原核 化学激活 p53 hrb2 gw112基因
推荐指数 3 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2008年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48
科研热词 足细胞 嘌呤霉素 卵母细胞 rna干扰 黏附 逆转录病毒载体 软骨 转化 表达 蛋白尿 胚胎培养 胚胎 肾小球 细胞培养 细胞凋亡 组织构建 端粒酶催化亚基 猪瘟病毒 猪 潮霉素 浓度 永生化猪血管内皮细胞 永生化 水牛 氨基核苷嘌呤霉素肾病 核移植 杜氏利什曼原虫 成纤维细胞 微小病变肾病 干细胞 巨噬细胞移动抑制因子 孤雌发育 增殖 基因沉默 四甲基偶氮唑蓝法 凋亡 体外成熟 伸展 人骨髓间充质干细胞 中间丝蛋白质类 timp-1 sv40t sh-sy5y细胞 nestin kle细胞 f10基因 e2基因 cd2相关蛋白
【国家自然科学基金】_药品不良反应_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140730
2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49
科研热词 推荐指数 药品不良反应 5 不良反应 3 风险管理 2 莲必治注射液 2 细胞 2 临床应用 2 鱼腥草注射液 1 非哺乳动物 1 陡脉冲 1 超说明书用药 1 课程 1 计量学 1 药物警戒 1 药物毒理学 1 自发呈报系统 1 脑卒中 1 肿瘤 1 肝细胞/病理学 1 系统生物学 1 神经学 1 皮肤损害 1 生物标记物 1 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 1 氧化应激 1 毒性试验 1 模型 1 条目筛选 1 未经许可用药 1 易感个体 1 数据挖掘 1 患者报告结局 1 影响因素 1 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1 1 培养的 1 咪喹莫特 1 发育障碍 1 动物替代实验 1 凋亡 1 关节炎 1 儿童 1 倾向性评分匹配法 1 人用药品注册技术规范国际协调会1 丹参注射液/药理学 1 丹参注射液/毒性 1 risk management 1 lianbizhi injection 1 clinical application 1 adverse drug reactions 1
2008年 序号 1 2 3 4 5
科研热词 原核表达 胆固醇酯转运蛋白 抗血清 磷脂转移蛋白 抗体
推荐指数 3 2 2 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35
puro筛选细胞原理
puro筛选细胞原理在细胞生物学的世界里，有一种神奇的工具，叫做puro筛选。
听起来是不是有点高大上？其实它就是一个聪明的小助手，帮助科学家们找出那些优秀的细胞。
想象一下，如果细胞是一群舞者，puro筛选就像是评委，挑选出最会跳舞的那几个，剩下的就被淘汰掉。
哎呀，别以为细胞就这么简单，它们可比你我想象的复杂多了。
细胞里有DNA、RNA，各种小器官，每个细胞都有自己独特的个性，像极了我们身边形形色色的人。
有的细胞勤奋工作，有的则像个“混日子”的小家伙，真是让人哭笑不得。
现在说说这个puro，它其实是嘌呤霉素的简称。
别看它名字古怪，它可是细胞筛选界的明星。
使用这个小家伙，科学家们可以给细胞添加嘌呤霉素，然后看哪些细胞能活下去，哪些则无缘“舞台”。
为什么呢？因为嘌呤霉素可不是温柔的角色，它会攻击那些不够强壮的细胞，让它们彻底“下场”。
就像舞台上那些跳得不好的选手，被直接请出了舞台。
留下来的细胞，就是最优秀的那几位，真是“千里挑一”啊！这个过程其实还蛮有趣的。
科学家们先把“演员们”放在一个特定的环境中，给他们提供营养，就像给舞者提供舒适的排练空间。
嘌呤霉素就登场了，开始了它的“淘汰赛”。
这些细胞为了生存，拼尽全力，努力抵抗这种攻击。
而那些能力不足的，慢慢就会被“淘汰”掉。
最终，能活下来的细胞，就像是通过了层层考验的舞者，展现出最优秀的表现。
这就让人想起了职场中的竞争，谁能留下来，谁又会被“淘汰”？很多时候，我们也是在和周围的环境作斗争，有的人努力拼搏，最终获得成功，而有的人则可能会因为各种原因而被迫离开舞台。
细胞的选择其实也反映了生存竞争的残酷，但也正因如此，才能让最强大的生命力展现出来。
puro筛选不仅仅是为了筛选细胞，它在科学研究中还起到极大的作用。
科学家们利用这些经过筛选的细胞，来研究疾病的机制、药物的反应等等。
哇，简直就是科研界的“秘密武器”。
这种方法让科学家们能更深入地探讨细胞的各种特性，就像在挖掘宝藏一样，越挖越深，最终可能会找到那颗闪闪发光的“真理”。
Hela-EGFP稳转细胞株说明书
干冰运输细胞： 1、 37℃水浴融化细胞冻存液，间或摇动冻存管以加速融化
过程。待细胞冻存液完全融化后，用 70%乙醇消毒细胞 冻存管外壁。 2、 室温 200g 离心 5 分钟收集细胞。吸去上清。 3、 用 1ml 培养基重悬细胞。 4、 将细胞接种到 6mm 培养皿或 25cm 培养瓶中，补加 5ml 培养基，37℃ 5%CO2 培养。
细胞冻存： 1、 将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶和冻存液温浴到 37℃。 2、 冻存的细胞应为状态好，生长旺盛的细胞。 3、 按细胞传代方法消化细胞，用适量细胞培养液终止消化，
重悬细胞。 4、 室温 200g 离心 10 分钟收集细胞，用冻存液重悬细胞，
并调节浓度至大约 1×10^6 个细胞/ml。分装到细胞冻 存管。 5、 将细胞冻存管放入程序降温盒，‐80℃过夜。 6、 将冻存的细胞转入液氮中。
5、 第二天观察细胞贴壁情况，换液去除未贴壁细胞，继续 培养。
6、 细胞生长后及时消化传代，尽早冻存 1~2 支。
细胞传代： 1、 传代前将细胞培养液、PBS 和胰蛋白酶温浴到 37℃。 2、 吸去细胞培养液。 3、 用 PBS 漂洗一次。 4、 加入适量胰蛋白酶，轻轻晃动细胞瓶，使胰蛋白酶均匀
覆盖细胞。吸去胰蛋白酶，将培养瓶放置在细胞培养箱 中，37 摄氏度消化。在倒置显微镜下观察，看到细胞分 开及稍微变圆即可，过度消化可能导致细胞贴壁困难。 5、 加入 5ml 细胞培养基，用吸管轻柔吹打分散细胞。 6、 按 1:3 到 1:5 接种细胞。
培养基：DMEM 高糖培养基+10%胎牛血清 消化液：0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA 冻存液：50%胎牛血清，40%DMEM，10%DMSO 培养条件：37℃，5% CO2
【国家自然科学基金】_piggybac_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729
科研热词 转基因 家蚕细胞 家蚕核型多角体病毒 rna干扰 piggybac转座子
推荐指数 1 1 1 1 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
科研热词 转座子 转基因昆虫 转基因家蚕 转化家蚕细胞 胰岛素样生长因子 昆虫基因组 家蚕核型多角体病毒 基因载体 培养细胞 rna干扰 ptggybac piggybac转座子 piggybac
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
科研热词 转基因 转染 转座子 转基因昆虫 胸苷激酶 生殖器肿瘤,女(雌)性 拯救细胞系 应用 家蚕生物反应器 发光蛋白质类 单纯疱疹病毒属 包涵体 piggybac转座子 piggybac转座 piggybac dna可移植因子
2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
科研热词 piggybac转座子 转染 序列分析 基因长期表达 基因治疗 克隆 亚洲玉米螟 tol2转座子 so-rb50细胞 rb基因 piggybac
推荐指数 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2013年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
推荐指数 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
2011年 科研热词 转基因 家蚕 转座子 piggybac 表达特征 脂肪体 糖蛋白 滞育解除 插入突变 实用品种 唾液酸合酶 共转染 丝腺生物反应器 sleeping beauty piggybac转座子 piggybac(pb) n-糖基化途径 ipcr cmp-唾液酸合成酶 bmlsp启动子 推荐指数 5 4 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1荐指数 piggybac转座子 2 陕北白绒山羊 1 载体构建 1 转座酶 1 转座效率 1 稳定转染 1 猪肾细胞系(pk15细胞) 1 嘌呤霉素 1 刚地弓形虫 1 microrna-124(mir-124) 1 fgf5s 1
嘌呤霉素(Puromycin)筛选稳定细胞株的步骤及方法
嘌呤霉素（Puromycin）筛选稳定细胞株的步骤及方法Puromycin 是来源于Streptomyces alboniger 的一种氨基核苷类抗生素，中文名为嘌呤霉素，常用于筛选能够表达pac 基因（puror）的细胞。
pac 基因表达嘌呤霉素N-乙酰转移酶(Puromycin N-acetyl-tranferase)，如果该基因表达，就会对嘌呤霉素产生抗性，这一特性目前普遍应用于筛选表达pac 基因的哺乳动物稳定细胞株。
目前，很多商业化的慢病毒载体都携带pac 基因(一般在质粒图谱上标记为puror)，可以利用嘌呤霉素的筛选，得到特定基因稳定表达的细胞株。
嘌呤霉素也可以用来筛选表达pac 基因的大肠杆菌菌株、酵母菌株等。
Puromycin 不仅能用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。
Puromycin 的作用特点是快速作用于细胞，一般2 天内可以杀死99%的不表达pac 基因的细胞。
本产品浓度为10mg/ml，已过滤除菌，可以直接用于细胞培养。
使用说明：一、推荐工作浓度：推荐的作用于哺乳动物细胞的嘌呤霉素浓度一般为1-10μg/ml，但最佳工作浓度需要通过剂量反应曲线来确定。
二、嘌呤霉素剂量反应曲线的确定( 以shRNA ）转染或者慢病毒感染为例）：：嘌呤霉素的有效筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。
为了筛选到稳定表达的shRNA或感染病毒的细胞株，确定杀死未转染/感染细胞的最低浓度嘌呤霉素非常重要。
对于初次使用的细胞，一般需要通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线(dose-response curve or kill curve)。
1、第一天：24 孔板中以5~8×10 4 cells/孔的密度接种细胞，接种够量的孔以便进行后续的剂量梯度实验。
细胞培养箱内培养过夜。
2、第二天：在培养过夜后的细胞中更换新鲜配制的筛选培养基，该筛选培养基为含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0、1、2.5、5、7.5、10μg/ml 等)，更换培养基后在细胞培养箱中继续培养。
嘌呤霉素筛选原理
嘌呤霉素筛选原理嘌呤霉素（puromycin）是一种广泛应用于生物学实验室的抗生素，主要用于筛选高效表达外源基因的细胞。
嘌呤霉素通过其独特的机制选择性杀死转染外源基因的细胞，从而筛选出成功表达目标基因的细胞。
下面将详细介绍嘌呤霉素筛选原理。
嘌呤霉素是一种氨基糖苷类抗生素，由Streptomyces alboniger产生。
其结构与核苷酸有一定的相似性，因此可以与核酸结合。
嘌呤霉素的分子结构中包含有嘌呤环和氨基糖苷环两个部分。
嘌呤环可以与核酸中的同源嘌呤碱基形成氢键，而氨基糖苷环则可以与RNA中的A位点形成酯键。
嘌呤霉素的筛选原理主要利用了细胞中的转运机制以及它对细胞翻译的作用。
当目标基因通过适当载体引入到细胞中后，该载体通常带有一个与嘌呤霉素敏感基因连在一起的表达序列。
这个敏感基因通常是某种转录因子，其缺失将导致细胞死亡。
当细胞中成功表达目标基因时，其编码的蛋白质与嘌呤霉素的作用机制相互配合，从而导致细胞的死亡。
具体来说，目标基因的编码蛋白质与细胞内的核糖体结合时，嘌呤霉素的氨基糖苷环与目标基因的A位点形成酯键，导致核糖体解聚，细胞翻译过程终止，从而导致细胞死亡。
然而，嘌呤霉素对细菌、真核生物和原核生物都具有一定的毒性。
为了更好地筛选出真正成功表达目标基因的细胞，通常在培养基中添加一定浓度的嘌呤霉素。
这样一来，只有那些真正成功表达目标基因的细胞才能够在相对高浓度的嘌呤霉素下存活，而其他未表达目标基因的细胞则会因为对嘌呤霉素的敏感性而死亡。
通过嘌呤霉素的筛选原理，可以有效地检测和筛选出成功表达目标基因的细胞，为进一步的实验和研究提供了基础。
另外，嘌呤霉素还可以作为选择性筛选工具，用于分离和培养特定表达基因的细胞系，为生物医学研究和基因工程领域提供了有力的支持。
总结起来，嘌呤霉素筛选原理是通过其结构与核酸的结合，干扰细胞翻译过程，从而选择性杀死未成功表达目标基因的细胞。
该筛选方法提供了一种快速、简便、有效的方法，可以帮助科研人员筛选出成功表达目标基因的细胞，为生命科学研究提供了重要的手段。
嘌呤霉素筛选细胞原理
嘌呤霉素筛选细胞原理
嘌呤霉素是一种广泛用于筛选细胞的抗生素，其作用原理是通过抑制细胞内蛋白质合成来阻止细胞生长。
这种抗生素能够与细胞内的30S亚基结合，从而干扰核糖体的功能，阻止tRNA 与mRNA的结合，进而抑制蛋白质的合成。
嘌呤霉素的结构类似于天然核苷酸腺苷，能够与30S亚基上的16S rRNA发生特异性相互作用。
这种相互作用导致核糖体的构象发生变化，阻止A位和P位之间的正确配对，从而阻碍了多肽链的延伸。
此外，嘌呤霉素还可以诱导mRNA的解聚，导致阅读框架错位，进一步干扰蛋白质的合成。
嘌呤霉素选择性地抑制细菌的蛋白质合成，而对哺乳动物细胞的影响较小。
这是因为细菌和哺乳动物细胞的核糖体结构存在差异，使得嘌呤霉素更容易与细菌的核糖体结合。
这种选择性作用使得嘌呤霉素成为一种常用的细胞筛选工具，尤其适用于筛选抗生素耐药基因以及研究蛋白质合成等相关领域。
综上所述，嘌呤霉素通过干扰细菌细胞内的蛋白质合成过程，阻止细胞的生长和分裂。
其选择性靶向细菌核糖体，使其成为一种常用的细胞筛选工具。
嘌呤霉素筛选原理
嘌呤霉素筛选原理
嘌呤霉素是一种广泛用于抗生素生产的重要药物，其筛选原理是指通过一系列
的实验手段，从大量的微生物菌株中筛选出产生嘌呤霉素的高产菌株。
嘌呤霉素的筛选原理主要包括以下几个方面：
首先，要准备含有对嘌呤霉素敏感的微生物菌株的培养基。
这种培养基中需要
加入一定浓度的嘌呤霉素，以使对嘌呤霉素敏感的菌株能够生长，而对嘌呤霉素不敏感的菌株则被抑制生长。
其次，将采集到的微生物菌株接种在含有嘌呤霉素的培养基上，进行培养。
经
过一定时间的培养后，观察培养皿上是否有生长圈。
对于能够生长的菌株，说明其对嘌呤霉素具有一定的耐受能力，而不能生长的菌株则可能具有产生嘌呤霉素的潜力。
接着，对于能够生长的菌株，需要进行进一步的筛选。
可以采用各种生化方法，如高效液相色谱法、质谱法等，对这些菌株进行分析，找出其中产生嘌呤霉素的高产菌株。
最后，对于筛选出的高产菌株，需要进行进一步的培养和鉴定。
通过优化培养
条件、提高发酵产量等手段，最终得到高效生产嘌呤霉素的菌株。
总的来说，嘌呤霉素的筛选原理是通过对大量微生物菌株进行培养和分析，筛
选出具有高产嘌呤霉素能力的菌株，并最终实现对嘌呤霉素的高效生产。
这一过程需要多方面的实验手段和技术手段的支持，是一项复杂而又关键的工作。
通过不断的研究和改进，相信在未来会有更多高效的筛选方法出现，为嘌呤霉素的生产提供更好的技术支持。
嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病中文名称之商榷
嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病中文名称之商榷
欧周罗
【期刊名称】《中国科技术语》
【年(卷),期】2005(007)001
【摘要】给大鼠注射puromycin aminonucleoside(PAN)所建立的肾病模型应该称为嘌呤霉素氨基核苷肾病(PAN肾病),但在国内却多被误为"嘌呤霉素肾病".本文就嘌呤霉素与嘌呤霉素氨基核苷的区别、嘌呤霉素氨基核苷肾病英文缩写的不同解读等予以辨析,并强调纠正这一流传多年的错误有助于开展国际学术交流.
【总页数】2页(P35-36)
【作者】欧周罗
【作者单位】复旦大学肿瘤医院
【正文语种】中文
【中图分类】R692
【相关文献】
1.1,25(OH)2D3抑制嘌呤霉素氨基核苷诱导的肾病大鼠TRPC6的表达 [J], 肖厚勤;费沛;陈新河;胡兆雄;张永;刘双信;史伟
2.嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠模型的病理机制研究进展 [J], 文玉敏;李平
3.黄葵胶囊对氨基核苷嘌呤霉素诱导的大鼠慢性肾病的作用研究 [J], 董晞;罗月会;赵世萍;张浩军;郭景珍;李平
4.嘌呤霉素氨基核苷肾病肾脏中RANK-RANKL的表达 [J], 冯仲林;章斌;王文健;刘艳辉;梅平;徐丽霞;马建超;夏运风;刘双信;史伟;肖厚勤;梁馨苓;刘晓颖;叶智明;王素
霞;梁永正
5.Rac1及Cdc42在肾上腺髓质肽(AM)缓解嘌呤霉素氨基核苷(PAN)所诱导足细胞损伤中作用机制的初步探讨 [J], 覃乔静;常凯利;孟利霞;董楠;赵仲华;刘学光
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嘌呤霉素掺入检测蛋白合成的原理
嘌呤霉素掺入检测蛋白合成的原理嘌呤霉素（Puromycin）是一种结构类似于氨基acyl-tRNA （aminoacyl-tRNA）的化合物，可以与正在依赖蛋白合成的细胞中的核糖体结合，并停止新的肽链合成。
因此，嘌呤霉素被广泛用于研究细胞蛋白合成过程。
嘌呤霉素的分子结构包括氨基酸残基和核糖苷，其中氨基酸残基部分类似于水解的氨基acyl-tRNA，并具有一个氨基酰化作用。
当嘌呤霉素进入依赖蛋白合成的细胞中时，它会与细胞内的核糖体A位点结合，加入正在合成的肽链中，并与C位点的tRNA结合，形成肽酰-tRNA嘌呤霉素（peptidyl-tRNA-puromycin）复合物。
该肽酰-tRNA嘌呤霉素复合物与正在合成的蛋白质相似，因此它可以与细胞内的蛋白合成机制相互作用。
一方面，它可以与肽酰转移酶结合，通过类似于天冬酰-tRNA合成酶的酶活性，将嘌呤霉素从tRNA释放出来，从而停止新的肽链的合成。
另一方面，它还可以通过与核糖体A位点的结合阻碍后续tRNA结合，导致肽链的中断和终止。
一种常见的应用是通过免疫组化分析检测细胞或组织的蛋白质合成活性。
在这种实验中，细胞或组织被暴露在含有嘌呤霉素的培养基中，使其进入蛋白质合成过程。
嘌呤霉素将被核糖体识别和结合，未合成完整的肽链将停留在嘌呤霉素处。
然后，使用抗体特异性地探测嘌呤霉素和肽链的复合物。
通过将抗体标记为荧光分子或与酵素结合，可以通过荧光显微镜或酶标仪观察到嘌呤霉素与肽链的复合物的位置和分布情况。
这提供了评估蛋白质合成活性的直观方法，并可以用来研究细胞或组织之间的差异。
此外，还可以利用嘌呤霉素的特性进行蛋白质合成的定量分析。
通过使用放射性标记的嘌呤霉素，可以测量嘌呤霉素与肽链的复合物的数量，从而得出细胞或组织中蛋白质合成的水平。
这种方法通常用于研究蛋白质合成的动态变化，例如在不同条件下的响应或在发育过程中的变化。
总而言之，嘌呤霉素掺入检测蛋白合成的原理是利用嘌呤霉素与正在合成的肽链相互作用的特性。
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嘌呤霉素Puromycin
北京华越洋生物嘌呤霉素Puromycin
作用机制：嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，嘌呤霉素Puromycin通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。
嘌呤霉素Puromycin某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。
嘌呤霉素Puromycin作为氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。
但是嘌呤霉素同A
位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素Puromycin抗性基因：对嘌呤霉素的抗性取决于编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)的 Pac基因，遗传工程研究使用的Pac基因分离自嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger。
嘌呤霉素Puromycin最普遍应用：1）嘌呤霉素如今普遍应用于筛选和维持培养含Pac基因的哺乳动物稳定转染细胞。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。
2）在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
化学特性：化学名称：3 (a -Amino-p-methoxyhydro cinnamamido)- 3–deoxy- N,N–dimethyladenosine·2HClCAS No.：58-58.2，分子式：C22 H29 N7 O5 .2HCl，分子量：544.43 g/mol纯度：＞98%（HPLC）,易溶于水5-50mg/mL，-20度保存。
嘌呤霉素Puromycin应用浓度：哺乳动物细胞的推荐使用浓度为1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定。
LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。
使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH 值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
嘌呤霉素Puromycin使用步骤：（哺乳动物细胞筛选）
►嘌呤霉素杀灭曲线的确定（shRNA稳定转染细胞株，仅作参考）
嘌呤霉素Puromycin为了筛选到稳定表达待研究shRNA的细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。
所以初次做实验的客户一定要建立适合自己体系的杀死曲线（kill curve）。
（1）24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。
细胞孵育过夜；
（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；（3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞；
（4）约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
（5）每日监测细胞观察存活细胞比例。
嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
（6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。
►嘌呤霉素Puromycin筛选稳定转染细胞
（1）day 0：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，孵育过夜；
（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度嘌呤霉素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养基；
（3）day 1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量MOI的病毒颗粒；（加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。
）（4）病毒转导后约6-8h，再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双抗。
）到细胞内，然后孵育过夜；（5）病毒转导后48h，使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。
孵育。
（6）约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基；（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP表达的水平及所占比例。
在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。
嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。
注：病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。
在做嘌呤霉素筛选时，需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。
调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞，但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立的最低浓度。
嘌呤霉素Puromycin储存方法和稳定性：
嘌呤霉素稳定性高，可以常温运输，收到产品后4℃存放；嘌呤霉素在室温条件下可存放3个月，4℃条件下保质期一年。
为了达到最理想的稳定状态和最长的保质期，最好存放于-20°C，保质期为2年。
嘌呤霉素Puromycin应用文献：
1.为了说明Parp1基因和ADP核糖多聚体位于Dnmt1启动子上和说明Parp1能够保护自己的非甲基化状态，向培养基中加入2μg/mL的嘌呤霉素筛选稳转株，质粒为 pBabe-puro（Addgene公司）；
2.为了研究生化信号通路能够在嘈杂的分子环境下传递信息，采用6ug/mL的puromycin进行细胞筛选。
3.为了研究IRP2（离子调控蛋白2）特定的73个氨基酸插入与该蛋白致瘤特性的关系，采用2µg/ml 的嘌呤霉素筛选稳定转染的人H1299肺癌细胞系。
4.为了证实在p53缺失的细胞中，被O-GlcNAc修饰的IKKβ的催化活性有所增强，使用了1μg/ml的嘌呤霉素来筛选感染腺病毒（载体为pBabe HA-IKKβ wild type）的细胞。
5.为研究跨膜交互作用在KAI1/CD82介导的对癌症侵入和转移的抑制作用中所发挥的角色，使用2μg/ml的嘌呤霉素用于筛选稳定的Du145-sh2和-sh3转导子，并用1μg/ml的嘌呤霉素维持培养（pSIREN-RetroQ 逆转录病毒转染）。
6.为了研究Per1在调节肝脏对四氯二苯并-p-二恶英反应中的作用，使用了4μg/ml的嘌呤霉素筛选稳定感染腺病毒的 Hepa1c1c7细胞，腺病毒载体为 pSilencer 5.1-U6 Retro Vector (Applied Biosystems/Ambion)。
7.为了证实蛋白激酶PKR可以诱导细胞凋亡和抑制缺乏C蛋白的麻疹病毒亚型的生长，使用 1μg/ml 嘌呤霉素来筛选稳定转染的HeLa细胞，载体为pSUPER.retro.puro Vector。
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