非那雄胺片人体药代动力学及生物等效性研究

非那雄胺片人体药代动力学及生物等效性研究

摘要：目的：建立口服单剂量非那雄胺片后血药浓度经时过程的研究方法，进行生物等效性评价：方法：采用高效液相色谱法测定血浆中药物的血药浓度，选择21名健康志愿者分别单剂量口服非那雄胺片受试制剂和口服参比制剂各30 mg进行试验，采用自身交叉试验方法。结果单剂量口服非那雄胺片受试制剂与参比制剂的血药浓度－时间曲线基本一致。结论：本法简便、准确，切两种制剂均具有生物等效性。

关键词：非那雄胺片生物等效性药代动力学高效液相

非那雄胺是一种合成4－氮甾体激素化合物，它是睾酮代谢成为二氢睾丸酮过程中的新一类的5α－还原酶特异性抑制剂，能够有效减少血液和前列腺内的二氢睾丸酮。主要用于良性前列腺增生的治疗。本文采用高效液相色谱法测定非那雄胺的血药浓度，并采用自身交叉试验方法进行生物等效性研究。

1、仪器、试药及试剂

1.1仪器

Agilentl 100高效液相色谱仪；G2170AA色谱工作站(安捷伦科技有限公司)；G1314A可变波长检测器。SPD－10A型紫外可见分光光度检测器，TGL－16G 型高速台式离心机；多利斯BPZn－D分析天平；ASl0200B型超声波清洗仪(天津奥特赛思斯仪器有限公司)，YKH－Ⅱ型液体快速混合器。

1.2对照品

非那雄胺对照品(由中国药品生物制品检定所提供)。

1.3试剂与试药

受试制剂非那雄胺片(规格为5mg/片，湖南正清制药集团股份有限公司)；参比制剂非那雄胺片(规格为5mg／片，杭州默沙东制药有限公司)；水为二次蒸馏水，甲醇、乙腈为色谱纯(美国天力)；其他试剂均为分析纯。

2、方法与结果

2.1含量测定色谱条件

色谱柱选择奥泰公司C18色谱柱(250mm x 4.6mm，5 μm)；流动相为乙腈－甲醇－水(48：12：40)；流速是1.0ml.min-1；检测波长为310nm;进样量：20μL。

2.2血浆供试品的制备

精密吸取血浆样品1.0mL置具塞离心管中，加入饱和的硫酸铵2mL，放入震荡器中，涡旋振荡90s后离心10min(4000r.mL-1)，吸取上清液，用氯仿10mL 提取两次，合并提取液，将其用60℃氮气流吹干，加入流动相50 μL使溶解，即得。

2.3对照品溶液的制备

精密称取非那雄胺对照品适量，加入甲醇溶解并稀释至2 μg.mL-1，摇匀，即得对照品溶液，置冰箱中冷藏备用。

2.4阴性干扰试验

照上述供试品溶液的制备方法制成空白样品，色谱条件如2.1项下所述，进行测定，记录色谱图，通过与空白样品添加标准品色谱图比较，结果表明，空白样品不受内源性物质的干扰，并确证非那雄胺色谱峰是9.816min的色谱峰。在柴葛根素出峰处，阴性溶液无色谱峰出现，表明对含量测定无干扰，具有较强的专属性。

3、含量测定的方法学考察

3.1仪器精密度试验

依法配制浓度分别为70.0，286.7，733.9ng.mL-1的非那雄胺血浆模拟样品，照2.2项下供试品的制备方法处理，分别在1d内和1周内精密吸取进行20 μL 注入高效液相色谱仪5次进行测定。结果日内精密度的RSD分别为4.08％，2.03％，1.91％(n=5)，日间精密度的RSD分别为3.71％，2.11％，1.62％(n=5)，结果表明：本品含量测定方法精密度良好。

表明方法精密度良好。

3.2对照品的线性关系考察

分别精密取空白血浆1.0mL5份置具塞离心管中，加入2.3项下非那雄胺对照溶液，制成浓度分别为733.9，458.7，286.7，179.2，112.0，70.0ng-mL-1的非那雄胺血浆溶液，照2.2项下血浆供试品的制方法处理后测定，以非那雄胺峰面积(Y)为纵坐标、质量浓度(X)为横坐标，进行回归计算，得到的回归方程为Y=452.08X-367.05，r=0.9995。结果表明，非那雄胺血浆溶液在浓度70.0-733.9ng.mL-1范围内，质量浓度与峰面积呈良好的线性关系。最低定量限为70.0ng.mL-1。

3.3回收率试验

向空白血浆中加入适量的对照品溶液，配制成质量浓度为，70.0，286.7，

733.9ng.mL-1的系列对照品血浆，照2.2项下的方法处理并按2.1项下的色谱条件进样分析，计算回收率。

结果表明，本检测方法具有较好的回收率。

4、生物等效性试验

4.1受试者选择

选择21名健康男性在校大学生为志愿受试者，体重为60.57±6.43kg，年龄20.32±0.78岁，身高为172.88±3.05cm。受试者经过体检证明其心、肝、肾功能均正常。

4.2试验方案

21名男性健康志愿者受试者禁食过夜后，于清晨7：00空腹口服受试制剂6片或参比制剂6片，用200mL温开水送服。两组受试者分别于服药前、后0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，24.0h采肘静脉血5.0mL。将采集的血样置于含肝素抗凝剂的离心试管中，离心5min(4000r.mL-1)进行分离血浆测试，受试者在服药后4h统一进低脂肪标准餐。在用药期间和用药后，受试者均未出现任何不良反应。

4.3药代动力学参数

分别对21名健康志愿受试者的血药浓度

时间数据进行有关药物动力学参数计算，以梯形法求算血药浓度

时间曲线下面积(AUC)，根据对数血药浓度

时间曲线末端直线部分的斜率求算消除半衰期(tl／2)。结果表明受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数无明显差别。

4.4相对生物利用度

依据21名健康志愿受试者单剂量口服受试制剂或参比制剂的AUC0－24估算，非那雄胺受试制剂的相对生物利用度为(99.21±7.87)％。

4.5生物等效性评价

经方差分析结果表明，两种制剂的峰浓度(Cmax)和达峰时间(Tmax)，AUC0－24，AUC0－∞在剂型间、个体间和周期间均无显著性差异。用双单侧检验法和置信区间法对受试制剂与参比制剂进行生物等效性评价，结果表明受试制剂与参比制剂生物等效。