复方丹参滴丸及其主要成分丹参、三七对缺血再 - 天

复方丹参滴丸及其主要成分丹参、三七对缺血再灌注引起的

大鼠肠系膜微循环障碍的多环节改善作用∗

北京大学医学部天士力微循环研究中心 北京100083

韩晶岩** （北京大学基础医学院中西医结合教研室 北京100083)

日本庆应义塾大学医学部消化内科 日本东京160-8582

秋叶保忠 崛江义则 永田博司 石井裕正 日比纪文

（日本庆应义塾大学医学部消化内科 日本东京 l60-8582）

三浦总一郎

（日本防卫医科大学内科 日本琦玉 359-8513)

摘要：目的 本研究探讨复方丹参滴丸（cardiotonic pill,CP）及其主要成分丹参、三七对（ischemia/reperfusion,I/R）引起的大鼠肠系膜微循环障碍的改善作用。方法 用连接于彩色摄影机、高敏感摄影机的倒置生物显微镜观察和纪录Wistar雄性大鼠肠系膜微循环的动态。将肠系膜动静脉同时结扎10min，然后解除结扎，建立I/R模型。假手术组（Sham）不做I/R处理。I/R处理60分前，Sham和I/R组灌胃给予生理盐水。CP+I/R组、丹参＋I/R组、三七＋I/R组分别灌胃给予CP、丹参水提物和三七水提物（各0.4g/Kg）。结果 丹参水提物可以抑制白细胞的粘附，抑制细静脉血管壁过氧化物，抑制FITC标记白蛋白的漏出。三七水提物可以抑制白细胞的粘附、肥大细胞脱颗粒。CP可以抑制白细胞的粘附、细静脉血管壁过氧化物、肥大细胞脱颗粒和FITC标记白蛋白的漏出。结论 CP多环节改善缺血再灌注引起的微循环障碍的作用是其所含有的丹参水提物和三七水提物相互作用的结果。

关键词 复方丹参滴丸 缺血再灌注 过氧化物 细胞黏附 肥大细胞 白蛋白漏出

一、引言

介入疗法、溶栓疗法和血管扩张剂的临床应用挽救了部分心血管疾病患者的生命，但是，仍有30%的患者，在血管再通后继发了严重的心律失常、心衰和再梗塞等心血管事件。缺血再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）引起的微循环障碍是血管再通后心血管事件发生的病理基础，所以，预防I/R引起的微循环障碍有着重要的临床意义。

I/R引起的微循环障碍是复杂的病理变化过程。I/R产生的过氧化物一方面直接损伤血管[l]，另一方面又可促进血管内皮粘附分子ICAM-l[2]、白细胞粘附分子CDllb/CD18的表达[3]，引起白细胞与血管内皮细胞粘附［4］。黏附于血管内皮的白细胞进一步释放过氧化物和蛋白酶[5-6]，损伤血管内皮细胞和血管基底膜，引起血浆白蛋白的外漏[1]。I/R后血管外肥大细胞脱颗粒[1]释放肿瘤坏死因子（TNF-α）、组织胺、5羟色胺等促炎性因子和血管活性物质从血管外攻击血管[7-9]。过氧化物产生、白细胞与血管内皮细胞黏附、

∗国家科技部中医药国际合作专项（2006DFA32340)：复方丹参滴丸的国际合作研究，负责人：郭治昕，韩晶岩。

**联系人：韩晶岩，教授，医学博士，主要研究方向：脏器微循环的可视化研究、中药复方作用原理的多环节动态分析、缺血再灌注损伤，Tel:010-8280-2862, E-mail：hanjingyan@。

肥大细胞脱颗粒是I/R引起的微循环早期障碍的重要环节。改善I/R引起的微循环障碍需要对其进行多环节干预。

复方丹参滴丸（cardiotonic pill , CP）是由丹参、三七和冰片组成的中药复方制剂，已经广泛地用于心血管疾病的预防和治疗，且取得了良好的临床疗效。丹参及其水溶性成分可以抑制过氧化物的产生、抑制血管内皮细胞黏附分子ICAM-1[10]和粒细胞黏附分子CDllb/CD18的表达[11-12]。三七及其主要成分可以血管内皮细胞黏附分子ICAM-l[13]和粒细胞黏附分子CD1lb/ Cdl8的表达，抑制肥大细胞脱颗粒[14]。我们以往的研究已经证明了CP对I/R引起的心脏、肝损伤有保护作用[15]，但是，尚不清楚CP及其主要成分丹参、三七能否改善I/R引起的微循环障碍及其改善了哪些环节。为此，本研究用可视化微循环观察系统，用I/R引起的大鼠肠系膜微循环障碍模型，探讨CP对I/R引起的微循环障碍的改善作用，解析CP及其主要成份丹参和三七的作用环节。

一、实验方法

1．实验动物

取庆应义塾大学实验动物中心的Wistar雄性大鼠（200～220g），按庆应义塾大学实验动物中心处理规定，自由进食饮水，单笼饲养，温度22℃，相对湿度40%, 12h切换灯源（早晨7点开灯）。实验前12h开始禁食给水。

2. I/R模型的建立及给药方法

I/R组：在I/R处理60分前．灌胃给予生理盐水2mL。按30mg/kg的用量，取苯巴比妥钠施腹腔麻醉。在大鼠的左侧颈静脉插人3号聚乙烯静脉注射管，并留置。沿腹正中线切开20-30mm，轻柔地将近回盲部的回肠取出腹外，展开至有载玻片的观察台上。用37℃的Krebs-Ringer缓冲液连续地在展开的肠系膜上滴加。肠系膜微循环动态用置于37℃恒温箱的倒置生物显微镜（Diaphot TMD-2S, Nikon，东京，日本），在12V, 100W 的条件下观察。用20倍物镜选择观察部位，用有时间显示的录像系统，将观察内容用S-VHS录像带纪录保存。选择的观察部位为直径在25-35μm之间的细静脉非分枝部（长度在200μm以上）的微循环血管床。经过10min的基础观察之后，用聚乙烯管结扎观察部环流前的肠系膜动静脉10min，再解除结扎，将时间调至0处，连续观察同一视野的微循环动态30min[16]。

假手术组（Sham）：将大鼠麻醉开腹，不作I/R处理。在假手术处理60分前，灌胃给予生理盐水2mL。

丹参＋IR组：在I/R处理前60分，按0.4g/kg的给药量，将丹参水提物（由天津天士力制药股份有限公司提供）溶于2mL生理盐水的灌胃。

三七＋I/R组：在I/R处理前60分，按0.4g/kg的给药量，将三七水提物（由天津天士力制药股份有限公司提供）溶于2ml的生理盐水灌胃。

CP+l/R组：在I/R处理前60分，按0.4g/kg的给药量，将CP（由天津天士力制药股份有限公司提供）溶于2mL的生理盐水灌胃。

3．微循环动态的观察