乳酸菌活菌数量检测方法--菌落计数法
乳酸菌检验
食品中乳酸菌检验a.乳酸菌检测的意义：当益生菌占优势时（占总数的80%以上），人体则保持健康状态，否则处于亚健康或非健康状态。
长期科学研究结果表明，以乳酸菌为代表的益生菌是人体必不可少的且具有重要生理功能的有益菌，它们数量的多和少，与人的健康与长寿非常重要。
人体肠道内乳酸菌拥有的数量，随着人的年龄增长会逐渐减少，当人到老年或生病时，乳酸菌数量可能下降100至1000倍，直到老年人临终完全消失。
在平时，健康人比病人多50倍，长寿老人比普通老人多60倍。
因此，人体内乳酸菌数量的实际状况，已经成为检验人们是否健康长寿的重要指标。
b.实验原理：乳酸菌为一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。
乳酸菌主要为乳杆菌属（Lactobacillus)、双岐杆菌属(Bifidobacterium)和嗜热链球菌属(Streptococcus）。
c.实验材料：食品检样（酸奶)培养基：MRS 培养基、莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS培养基、MC培养基，无菌生理盐水其它：超净工作台、无菌培养皿、移液枪、10ml离心管和恒温培养箱等。
d.实验步骤：1、样品处理：以无菌操作取检样15mL，放于135mL灭菌生理盐水，经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。
吸取1mL1:10的稀释液依次做10倍梯度稀释，共10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6 共6个稀释度。
2、乳酸菌计数:2.1乳酸菌总数乳酸菌总数计数培养条件的选择及结果说明见表1。
2.2双歧杆菌计数根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2~3个连续适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。
稀释液移入平皿后，将冷却至48°℃的莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良的MRS培养基倾注入平皿约15mL，转动平皿使混合均匀。
37℃厌氧培养72h，培养后计数平板上的所有菌落数。
2.3嗜热链球菌计数根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1mL样品匀液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
产酸活力及发酵酸度检验方法活菌总数检验方法
产酸活力及发酵酸度检验方法活菌总数检验方法1.实验材料和仪器-pH计-电热水浴器-试管、培养皿和培养基-乳酸菌培养物2.培养基配制-将适量的培养基加入适量的蒸馏水中，混合均匀。
-蒸煮20分钟，冷却到适宜的温度。
-转移到试管或培养皿中。
3.显微观察-取一个培养基试管，将待检测菌株接种到培养基中。
-用无菌技术操作，将试管放入电热水浴中，保持在适宜的温度下。
-在一定时间间隔内，取出试管，用显微镜观察菌株的酸化能力和酸度水平。
4.酸度测定-取一定量的培养基，用pH计测定其初始酸度。
-将菌株接种到培养基中，培养一定的时间。
-每隔一段时间，取一定量的培养基，用pH计测定培养基的酸度变化。
5.数据分析-根据测定的酸度变化数据，计算并比较不同菌株的酸化能力。
-评估菌株的产酸活力和发酵酸度水平。
活菌总数检验是一种常用的微生物检验方法，用于确定菌群的数量和活性水平。
这种方法通常用于食品和医药行业，以评估产品的卫生质量和稳定性。
1.实验材料和仪器-培养基-试管和培养皿-灭菌的吸铬棒或其他工具-电热灭菌器-pH计或比色计2.培养基配制-根据需要，选择适合的培养基，如平板培养基、液体培养基或加入一些选择性物质的培养基。
-按照制定的方案和菌株需求配制培养基。
3.样品处理-将待测样品进行适当的处理，如加热、稀释等。
-可以根据需要，将样品分成不同部分，进行不同的处理。
4.培养和计数-将准备好的培养基加入试管或培养皿中。
-将样品分配到培养基中，用吸铬棒均匀涂布。
-将培养皿密封好，预培养一段时间。
-在一定的时间后，观察并计数菌落的数量。
-根据计数的结果，计算样品中活菌的总数。
5.数据分析-根据计数结果，计算并比较不同样品中的活菌总数。
-评估样品的卫生质量和稳定性。
总结产酸活力及发酵酸度检验方法和活菌总数检验方法是常用的微生物检验方法，用于评估菌株酸化能力和样品中活菌的数量。
这些方法对于食品和饮料工业以及医药行业中产品质量的评估非常重要。
乳酸菌检测方法_综述_
中图分类号 :R15 ; TS20116 文献标识码 : E 文章编号 :1004 - 8456 (2002) 01 - 0047 - 07
乳酸菌检测方法 (综述)
张一凡 冉 陆 罗雪云 (卫生部食品卫生监督检验所 北京 100021)
乳酸菌是一类能利用可发酵糖产生大量乳酸的 细菌总称 ,这个名称就细菌分类学而言是一非正式 、 非规范的名称 。目前在自然界已发现的这类菌在细 菌分类学上划分出至少 23 个属 ,涉及到的有关属则 更多 ,包括乳杆菌属 、双歧杆菌属 、链球菌属 、肠球菌 属等 。而相当多的乳酸菌对人 、畜的健康起着有益 的作用 。近年来 ,随着微生态学研究的不断发展 ,越 来越多的实验证明有益细菌对人体健康的重要作 用 ,微生态制剂也因此应运而生 。目前我国微生态 制剂利用的益生菌近 10 种 ,其中除了乳杆菌和乳酸 链球菌有国家的标准检验方法外 ,大部分菌种均无 统一的标准方法 ,难于对该类产品进行质量控制 ,保 证其安全性 。故急需建立规范的标准检验方法 ,以 便对微生态制剂进行监督管理 ,保障其功能 、安全性 及质量 ,以保护消费者的健康和利益 。本文即对目 前国内外用于乳酸菌检测的方法做一综述 。
离子色谱法和气相色谱法从分析厌氧菌的代谢 产物结果来看 ,在总体上无明显差异 ,但离子色谱法 具有以下优点 :[4]
微生物的常规检验技术--乳酸菌的检验
四、乳酸菌的检验
４ 检验程序
四、乳酸菌的检验
５ 操作步骤--样品制备 ➢ 样品制备无菌操作程序： ➢ 第一步：冷冻样品 可先使其在2~5℃条件下解冻，时间不超过18h,也可在温度不超 过45℃的条件下解冻，解冻时间不超过15min； ➢ 第二步：固体和半固体食品 以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的 无菌均质杯内，8000 ~ 10 000 r/min均质1 ~ 2min，制成1:10样品匀液； ➢ 第三步：液体样品 应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生 理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇,制成1:10的样 品匀液； ➢ 第四步：用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水 的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹 打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液； ➢ 第五步：另取1mL无菌吸管，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液,每递增稀释一次， 即换用1次1mL灭菌吸管。
➢ 双歧杆菌培养:根据待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度，每个稀
释度吸取0.1mL样品匀液于莫匹罗星锂盐改良 MRS琼脂平板，表面涂布，每稀释度做
两个平板。36℃±1℃，厌氧培养48h ±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释
到平板涂布要求在15min内完成；
➢ 嗜热链球菌培养:根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2~3个连续的适宜稀释度,每
培养皿1 培养皿2 平均数
酸乳中乳酸菌的测定
实验乳及乳制品中乳酸菌的测定一、目的1、解酸乳中乳酸菌分离原理2、学习并掌握酸乳中乳酸菌菌数的检测方法。
二、原理活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
三、材料1、培养基改良MC培养基（MRS培养基，改良CHALMERS培养基，M17培养基）。
2、仪器和器具无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器，恒温培养箱。
四、流程酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数五、方法1、样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
2、制平板选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1ml 置于平皿内，每个稀释度作2个重复。
然后用溶化冷却至45℃左右的MC培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
3、培养和计数将平皿倒置于37℃恒温箱内培养72h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
六、结果1、指示剂显色反应乳酸菌的菌落很小，1~3mm，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂呈酸性显色反应。
2、镜检形态必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。
保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。
乳酸菌检测方法
一、乳酸菌检测方法植物乳杆菌的检验1原理植物乳杆菌能在相应的厌氧培养条件下，于MRS培养基表面生长成白色、细密、圆形光滑突起的菌落，根据长出的菌落数和稀释倍数，计算出活菌数。
2仪器与试药2.1 仪器超净工作台、高压蒸汽灭菌器、恒温干燥箱、电冰箱、恒温培养箱（60℃±1℃）、恒温水浴锅、显微镜（10x—100x）、架盘天平（0—500g，精确至0.5g）、250ml锥形瓶、250ml 盐水瓶、灭菌吸管：1ml(具0.01ml刻度）、10ml(具0.1ml刻度）、灭菌平皿（直径90mm）、灭菌试管（15mm×160mm）、灭菌L型玻璃棒等。
2.2 试药酪蛋白胨、牛肉浸膏、酵母提取物、琼脂等均为生化试剂；无水乙酸钠、柠檬酸三胺、硫酸镁、硫酸锰、葡萄糖、磷酸氢二钾、碳酸钙、吐温-80、氯化钠等均为分析纯；水为双蒸馏水，其他化学试剂均为分析纯。
2.3 MRS琼脂培养基的组成与制备2.3.1培养基的组成酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母提取物5g、葡萄糖20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺3g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.2g、磷酸氢二钾2.0g、碳酸钙20g、吐温-801ml、琼脂15g、蒸馏水1000ml。
2.3.2培养基制备将上述的各组分在80～90℃加热使溶解，校正pH6.2，加蒸馏水至1000ml中，摇匀，分装于盐水瓶，每瓶100ml。
在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
2.4营养琼脂平板的制备取冷至45℃左右的MCA琼脂培养基，在无菌的条件下倒入无菌的培养皿中，每平皿各约15ml，待冷却凝固后，备用。
2.5无菌生理盐水的制备称取氯化钠9.0g，用蒸馏水溶解并定容于1000ml量瓶中，摇匀，分装于250ml三角瓶中，每瓶装90ml. 在121℃高压灭菌20分钟，冷却后备用。
3供试品溶液的制备以无菌操作法取检品10.0g，加入盛有90ml无菌生理盐的三角瓶中，充分振荡10分钟，制成1﹕10样品悬液。
乳酸菌饮料活菌数符合度鉴定及温度对乳酸菌的影响
分析检测乳酸菌饮料活菌数符合度鉴定及温度对乳酸菌的影响曹晓玉1，王绪晶2*（1.岳阳职业技术学院 生物环境工程学院，湖南岳阳 414000；2.浙鳌高级中学，浙江温州 325400）摘 要：活性乳酸菌饮料是一种含有活乳酸菌的发酵乳饮料，在饮料市场中受到消费者的喜爱。
本实验以4种市售活性乳酸菌饮料为研究对象，检验其乳酸菌活菌数符合度和不同保藏温度对活菌数的影响。
结果表明，4种品牌的乳酸菌饮料的活菌数均达到其宣传数，不存在虚假宣传的现象。
在保藏温度为20 ℃时，4种品牌乳饮料的活菌数含量均为0，无显著性差异；而在保藏温度为4 ℃时，4种品牌饮料中B乳酸菌活菌数最多，且远大于D品牌，与其他品牌之间差异无统计学意义。
建议消费者购买活性乳酸菌饮料时，挑选在保质期内的低温保藏产品，并在未饮用前放置于低温冷藏。
关键词：乳酸菌饮料；活菌数；温度Identification of Conformity Degree of Lactobacillus Viable Count in Beverage and The Effects of Temperature on ItCAO Xiaoyu1, WANG Xujing2*(1.Yueyang V ocational Technical College, Yueyang 414000, China; 2.Zheao High School, Wenzhou 325400, China)Abstract: Active lactic acid bacteria beverage is a kind of fermented milk beverage containing live lactic acid bacteria, which is popular among consumers in beverage market. In this experiment, four kinds of commercially available beverages with active lactic acid bacteria were used as research objects to test the compatibility degree of viable bacterial count of lactic acid bacteria and the influence of different storage temperatures on viable bacterial count. The results showed that the viable bacteria count of the four brands of lactobacillus drinks reached the advertised number, and there was no false propaganda phenomenon. When the storage temperature was 20 ℃, the content of viable bacteria of four kinds of milk drinks was 0, and there was no significant difference. When the storage temperature was 4 ℃, the number of viable lactic acid bacteria in B of the four brands was the largest, and far greater than that of D, with no statistical significance between the four brands and other brands. Consumers are advised to buy active lactic acid bacteria drinks, select products stored at low temperature within the shelf life, and put them in cold storage before drinking.Keywords: lactobacillus beverage; number of active bacteria; temperature随着人们对食品营养和功能性的需求越来越大，饮食习惯逐渐转向符合人们需求的食品——发酵食品。
实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验
引言概述：乳酸菌饮料是一种富含乳酸菌的食品，乳酸菌在食品工业中广泛应用于酸奶、乳饮料等产品中。
本文将详细介绍乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法。
正文内容：一、样品采集和制备1.确定样品采集时机：乳酸菌饮料中的乳酸菌数量会随着储存时间的增加而增加或减少，因此需要在存储时间稳定的情况下进行采集。
2.采集样品方法：使用无菌技术采集样品，避免外部微生物的污染。
3.样品制备：将采集到的样品进行均匀搅拌，以保证样品的均匀性。
二、总菌数检验方法1.琼脂平板法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，在琼脂平板上涂布，经过一定孵育时间后，根据菌落的数量计算总菌数。
2.膜过滤法：将样品通过膜过滤器过滤，将过滤后的膜放置在琼脂平板上孵育，根据菌落的数量计算总菌数。
三、乳酸菌检验方法1.培养基选择：根据乳酸菌的生长特性选择适合的培养基，常见的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。
2.乳酸菌的分离：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在选定的培养基上。
经过一定孵育时间后，可以观察到乳酸菌形成的菌落。
3.鉴定乳酸菌：使用形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法等进行乳酸菌的鉴定。
四、活菌数检验方法1.孵育培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，均匀涂布在含有乳酸菌生长所需营养物质的培养基上。
经过一定孵育时间后，观察活菌的生长情况，计算活菌数。
2.阻碍培养基法：将样品制备成一定稀释倍数的悬浮液，与含有抑制剂的培养基混合。
通过观察生长情况，计算活菌数。
五、质量指标评价方法1.pH值测定：使用pH计或试纸对乳酸菌饮料中的pH值进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
2.乳酸浓度测定：使用乳酸测定仪器或化学试剂对乳酸菌饮料中的乳酸浓度进行测定，根据标准范围评价产品的质量。
3.品尝评价：通过专业的品尝人员进行品尝评价，评估乳酸菌饮料的口感和风味。
总结：乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验方法包括样品采集和制备、总菌数检验、乳酸菌检验、活菌数检验和质量指标评价方法。
乳酸菌测试方法
食品微生物学检测乳酸菌检测方法设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1.1恒温培养箱：36℃±1℃1.2冰箱：2℃~5℃1.3均质器及无菌均值袋、均质杯或灭菌乳钵1.4天平：感量0.1g1.5无菌试管：18mm⨯180mm、15mm⨯100mm1.6菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.01mL刻度）或微量移无液器及吸头1.7无菌锥形瓶：500mL、250mL1.样品制备2.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。
2.2冷冻样品可先使其在2℃~5℃条件下解冻，时间不超过8h，也可在温度不超过45℃的条件下解冻，时间不超过15min。
2.3固体和半固体食品：以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min~10000r/min均质1min~2min，制成1:10样品匀液；或置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min制成1:10样品匀液。
2.4液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:10的样品匀液。
操作步骤3.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用1支无菌试管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。
3.2另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。
2.乳酸菌总数：根据待检样品活菌总数的估计，选择2个~3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板，使用L形棒进行表面涂布。
36℃±1℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上所有菌落数。
乳酸菌活菌数量检测方法--菌落计数法
乳酸菌活菌数量检测方法--菌落计数法本方法适用于乳酸菌制剂及配合饲料中有效活菌数和杂菌率的测定。
按照国家标准GB/T 14699.1进行抽样，获得样品200g，分装于两个无菌、干燥的玻璃瓶中，贴上标签，注明产品名称、批号、取样日期等信息。
一瓶供检验用，一瓶密封保，以备复查。
一、测定原理：乳酸肠球菌用肠球菌琼脂培养基，杂菌用营养琼脂培养基；培养后利用平板菌落计数法进行计数。
二、培养基与缓冲液配方：（1）营养琼脂培养基，每L蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g 氯化钠 5.0g 琼脂 18.0g 水稀释至1000ml PH 7.0~7.4（2）肠球菌琼脂培养基，每L蛋白胨 20.0g蔗糖 5.0g 葡萄糖 5.0g 乳糖 5.0g 酵母膏 5.0g氯化钠 4.0g 乙酸钠 1.5gVc 0.5g 琼脂 17.0g 水稀释至1000mlPH 6.5~7.0（3）PH6.8磷酸缓冲液配制方法取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀即得。
三、样品处理：（1）乳酸菌纯品制剂样品测定乳酸菌纯品制剂时，取样量为1g，溶解到100ml缓冲液中，缓冲液与样品的比例为100:1。
（2）配合饲料样品测定饲料样品时，取样量为25g，溶解到225ml缓冲液中，缓冲液与样品的比例为10:1。
四、有效活菌数、杂菌数的测定：（1）本方法采用平板菌落计数法（2）操作方法：1．取磁力搅拌棒装入500ml三角瓶中，再量225ml PH6.8的磷酸缓冲液一并装入三角瓶中灭菌备用。
纯品制剂量取缓冲液100ml。
2．取25g饲料样品放入三角瓶中，在磁力搅拌器中震荡混匀5min后，再放到摇床上37℃，150转/分，充分震荡45min，混匀成1：10稀释液。
纯品制剂样品量为1g，混匀成1：100稀释液。
3．在超净工作台内用灭菌的1.5ml离心管，按10倍比稀释法稀释。
用移液器吸取上述混悬液100ul，注入含有900ul缓冲液的离心管内，并在液体中反复吹打5次，在漩涡振荡器上震荡30s混匀（注意每次稀释时更换枪头及充分震荡混匀）。
乳酸菌的培养检测方案
品质管理检测项目细菌形态学分类一乳酸杆菌乳酸杆菌的基本属性：乳酸菌为一群可发酵碳水化合物以获取能量，并生成大量乳酸的一类细菌的总称。
利用发酵技术保藏食品，最典型的是通过乳酸菌的发酵。
这在发酵乳工业中已经得到广泛的应用。
利用天然的或经筛选的乳酸菌发酵，已经生产出多种不同类型的发酵乳。
因而分离和鉴定乳酸菌对人类的生产和生活都具有非常重要的意义。
无芽孢，革兰氏染色呈阳性。
微好氧，厌氧发酵，最适温度30~40摄氏度，最适PH值为5.5~6.2，在微酸环境下可以生长，中性或者偏碱性环境中则生长速率下降。
在固体培养基上培养时，通常厌氧条件或者减少氧气压力和充有体积分数为5%~10%的CO2可以增加其表面生长物，有些菌株在分离时就是厌氧的。
（一）实验仪器和试剂：实验仪器：现有的仪器：欠缺的仪器：培养基和试剂：①培养基：BCP培养基、MRS培养基和SL培养基BCP培养基：酵母膏2 5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，溴甲酚紫0.04g，琼脂15g，蒸馏水lO00ml，pH7 0；MRS培养基（可以培养包括双岐乳杆菌、嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌）：重量(g) 牛肉蛋白粉10 ，鱼肉汁10 ，酵母浸出汁粉5 ，葡萄糖20 ，醋酸钠5 ，柠檬酸二铵 2 ，吐温80 0.1 ，硫酸镁0.58 ，硫酸锰0.28 ，蒸溜水1 000ml ，备注：用高压锅在121℃灭菌15min，调节pH6.2～6.4 。
乳酸杆菌选择性琼脂SL：酪蛋白水解物10g；酵母提取物5g；柠檬酸二铵2g；乙酸钠（CH3COONa？3H2O）25g；MgSO4？7H2O 0.58g；琼脂15g；葡萄糖20g；吐温80 1.0ml；磷酸氢二钾6g；FeSO4？7H2O 0.03g；MnSO4？4H2O 0.15g。
以上用量为1000ml培养基的用量。
溶解琼脂在500ml的沸水中，溶解其他组分在500ml的水中，用冰醋酸调pH=5.4，并混合已融化的琼脂，进一步煮沸5分钟，倾倒平板或此热的培养基适量分装入灭菌的试管，这样无需进一步灭菌，避免重复融化和冷却。
实验一酸奶中乳酸菌总活菌数的检验
实验一酸奶中乳酸菌总活菌数的检验一、实验目的（一）学习酸奶中乳酸菌的组成，以及储藏条件对酸乳中乳酸菌总活菌数的影响。
通过对酸奶中乳酸菌总活菌数的检测，包括培养基的制备，样品的处理，梯度稀释样品和倒平板等内容，综合训练食品卫生检验的基本技能。
（二）掌握酸奶中乳酸菌总活菌数的检测方法。
二、实验原理活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
三、实验器材生化培养箱、恒温水浴锅、超净工作台、微量移液器（1mL、100μL）、高压蒸汽灭菌锅、酸度计、天平、酒精灯、三角瓶、烧杯、量筒、培养皿、试管（20-30mL）四、实验试剂蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、K2HPO4、柠檬酸二铵、乙酸钠、葡萄糖、蒸馏水、吐温80、NaCl 五、实验内容（一）操作步骤酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数（二）配制生理盐水生理盐水（0.9%）：称取0.9克NaCl，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100mL，121℃高压灭菌15min，备用。
（三）培养基的配置按照MRS固体培养基的配方（见表1）称取相应的试剂于烧杯或三角瓶中，加少量蒸馏水溶解后，用量筒定容至相应刻度，分装于小三角瓶中，用高压灭菌锅121℃高压灭菌15min。
灭菌完后，将其至于60℃的恒温水浴箱中，备用。
表1 1000mLMRS培养基配方（四）酸奶样品的稀释、制平板1.样品选择酸奶样品分两类，一类是室温放置一周的酸奶，一类是4℃存放的酸奶。
对两类酸奶的样品处理均一致。
2.样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用移液器取1mL酸奶样品于9mL的灭菌生理盐水试管中，充分摇匀，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，连续稀释至10-9。
乳酸菌检验的方法要点
乳酸菌检验的方法要点乳酸菌不是分类学上的名称，它是指一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳糖产生乳酸、需氧和兼性厌氧、多数无动力、过氧化氢酶阴性、革兰氏阳性的无芽孢杆菌和球菌。
这类细菌在自然界分布广泛，可栖居在人和各种动物的口腔、肠道等器官内，在土壤、食品、饲料、水及一些临床标本中都有乳酸菌的存在。
乳酸菌在工业、农业和医药等与人类生活密切相关的领域应用价值很高，相当多的乳酸菌对人、畜的健康起着有益的作用，但个别菌种能对人畜致病，乳酸菌主要包括23个属的细菌。
乳酸菌的检测流程：1、乳酸菌悬液的制备：将待检测的样品，准确称取0.5克，量取99.5mL无菌生理盐水稀释，（此次稀释了200倍，即0.5克样品，稀释到了100克水溶液），再加入灭菌玻璃珠20～30粒于250mL三角瓶中，置于振荡器或摇床上剧烈摇晃30分钟以上，目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散从而分散开来。
2、稀释到适当倍数：根据所待检测的样品可能的乳酸菌含量，进行适当的稀释操作，例如如果估计样品的含乳酸菌活菌数为200亿/克左右，则建议稀释2亿倍，这样将来在90mm平板上培养时会长出大约100个乳酸菌落，比较便于计数，总之控制平板培养皿上的乳酸菌落数量在30～300个的范围内，比较便于计数。
3、倒制平板即“接种”：倒制平板在超净工作台上进行，养殖户可使用一盏简单的酒精灯和一个干净的操作台就可操作。
即事先配制好并灭菌处理的检测用琼脂培养基，在水浴锅内保持50℃的温度，使琼脂培养基呈溶解状态，置于操作台旁边备用。
（养殖户可先不从压力锅中取出，在压力锅维持一定的温度，从而也不会凝固。
）取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿（也叫平板）若干、1mL移液管若干，置于操作台上备用。
（养殖户的培养皿平板可在压力锅中进行蒸汽灭菌处理。
）在无菌条件下（打开超净工作台无菌风，或养殖户点上酒精灯），将稀释了2亿倍的乳酸菌液，用移液管移取1mL，于培养皿中，再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右（倒培养基时，估计能覆盖满平皿的液体量即可），然后，盖好培养皿盖，轻轻转动平皿，原地转几圈，使培养基液与乳酸菌液混合均匀，等数分钟后，待培养基凝固后，可移入培养箱中进行培养；4、在培养箱中进行培养：将前面倒制好的平板倒转（即盖子在下面），放于培养箱中于33℃温度下培养2～3天，待培养皿平板中长出比较明显的带有透明圈的菌落时，即可进行计数得出检测结果。
统计活菌数目的方法
统计活菌数目的方法统计活菌数目是微生物学实验中非常重要的一项工作，它可以帮助我们了解细菌、真菌或其他微生物在某种环境条件下的生长情况，对于药物研发、食品加工、环境监测等领域都具有重要意义。
因此，掌握准确、可靠的统计活菌数目的方法对于微生物学研究人员来说至关重要。
首先，我们来介绍一种常用的方法——菌落计数法。
这是一种通过将微生物样品在适当培养基上培养并形成可见的菌落，然后进行计数的方法。
具体操作步骤如下，首先，将样品进行适当稀释，以保证每个菌落之间有足够的空间进行生长；然后，将稀释后的样品均匀涂布在培养基表面；接着，将培养皿放入恒温培养箱中，在适当的温度下进行培养；最后，观察培养皿上形成的菌落，利用计数器进行菌落计数。
这种方法简单易行，且结果准确可靠，因此被广泛应用于微生物学研究中。
除了菌落计数法，还有一种常用的方法是荧光染色计数法。
这是一种利用荧光染色剂将微生物标记后，通过荧光显微镜或荧光计数仪进行计数的方法。
具体操作步骤如下，首先，将样品进行适当稀释；然后，加入荧光染色剂，使微生物样品中的细胞产生荧光信号；接着，利用荧光显微镜或荧光计数仪对样品中的荧光细胞进行计数。
这种方法操作简便，且能够实现对微生物的快速、准确计数，因此在微生物学实验中得到广泛应用。
另外，还有一种方法是膜过滤法。
这是一种通过将微生物样品过滤到膜上，然后将膜培养在适当的培养基上进行培养，最后进行菌落计数的方法。
具体操作步骤如下，首先，将样品进行适当稀释；然后，将稀释后的样品通过膜过滤装置过滤到膜上；接着，将膜培养在适当的培养基上进行培养；最后，观察膜上形成的菌落，进行菌落计数。
这种方法操作简单，且能够避免培养基中的其他微生物对结果的干扰，因此在微生物学实验中也得到了广泛应用。
综上所述，统计活菌数目的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在进行微生物学实验时，我们应根据具体的实验要求和条件选择合适的方法，以确保获得准确可靠的结果。
运用OD值法快速进行乳酸菌活菌计数的研究
doi：10.9369/ki.2095—9737.2021.03.002运用OD值法快速进行乳酸菌活菌计数的研究白长胜"，崔毅，刘德会，李莉，刘秀玲，尹君伊，王佳辉，赵金波（黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院，黑龙江齐齐哈尔161005）摘要：通过测定乳杆菌RS26和片球菌RS33菌液不同稀释度的OD值，结合平板菌落计数结果，建立了两种试验菌OD值一活菌数回归方程：乳杆菌RS26y=3.167x+0.314,B=0.998；片球菌RS33y=2.075x+0.070,r z=0.997。
结果表明：可以通过OD值进行乳酸菌活菌计数,并且具有迅速、简便、准确等优点。
关键词：OD值；乳杆菌；片球菌；平板计数；回归方程中图分类号：TS207.4文献标识码:A文章编号：2095—9737（2021）03—0004—02 Rapid Counting of Viable Lactic Acid Bacteria Using OD Value AssayBai Changsheng*,Cui Yi,Liu Dehui,Li Li,Liu Xiuling,Yin Junyi,Wang Jiahui,Zhao Jinbo（Animal Husbandry and Veterinary Medicine Branch of HeilongjiangAcademy of Agricultural Sciences«Qiqihar Heilongjiang161005,China）Abstract：Through the optic density(OD)value assay of culture with vary dilution ratio,and combined with plate counting，two straightline regressive equations between OD value and the number of living bacteria were established as follows:Lactobacillus RS26y=3.167x+0.314，2=0.998；Pediococcus RS33y=2.075x+0.070,r2=0.997.The results indicated that using ODvalueHocounHlivelacicacidbacHeriahadHheadvanHagesofrapidiHy，convenience，accuracy.Key words:OD value；Lactobacillus；Pediococcus；Plate counting；Straightline regressive equation饲用微生态制剂是根据微生态理论，将益生菌通过特殊工艺制成的活菌饲料添加剂，其具有增强动物免疫力、防病治病、提高生产性能的作用&乳酸菌是益生菌中最为重要的一类，目前农业部发布《饲料添加剂品种目录（2013）》中明确列出了我国畜牧生产中允许使用的微生物有34种，其中22种属于乳酸菌&乳酸菌制剂在畜牧生产中应用广泛，其中乳杆菌和片球菌应用较多&乳酸菌制剂作为饲料发酵剂用于青贮、微贮、发酵饲料或直接饲喂畜禽&作为活菌制剂，其中所含的活菌总数是影响使用效果的最主要因素。
乳酸菌计算活菌数培养基国标
乳酸菌计算活菌数培养基国标乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，具有很高的益生作用。
在食品工业中，乳酸菌被广泛应用于发酵食品的制作中，如酸奶、乳酸菌饮料等。
为了保证发酵食品的品质和安全性，需要对乳酸菌进行活菌数的检测。
而乳酸菌活菌数的检测方法和标准在我国被统一为《乳酸菌活菌数测定方法》（GB 4789.38-2016）。
乳酸菌活菌数的测定方法主要包括直接计数法和间接计数法两种。
直接计数法是通过显微镜观察乳酸菌在培养基上的菌落数来进行活菌数的估计。
间接计数法则是通过测定乳酸菌产生的酸度或气体量来间接反映活菌数。
在进行乳酸菌活菌数测定之前，首先需要准备好培养基。
培养基的选择对乳酸菌的生长和繁殖起着至关重要的作用。
常用的培养基有MRS培养基、LBS培养基等。
这些培养基能提供乳酸菌所需的营养物质，并且能够抑制其他细菌的生长。
接下来是乳酸菌的接种和培养。
将待测样品接种到培养基上，并且在适宜的温度下进行培养。
乳酸菌的适宜生长温度一般在35℃左右。
在培养的过程中，乳酸菌会利用培养基中的营养物质进行生长和繁殖，最终形成可见的菌落。
乳酸菌活菌数的测定可以通过直接计数法进行。
将培养基上的菌落取出，制备菌悬液后，使用显微镜观察菌落中的乳酸菌数量。
在显微镜下观察时，可以使用乳酸菌特异性染色剂来染色，以便更好地观察和计数。
通过计算所观察到的菌落数和稀释倍数，最终可以得出乳酸菌活菌数的估计值。
除了直接计数法，间接计数法也是一种常用的测定乳酸菌活菌数的方法。
其中，酸度测定法是一种常用的间接计数法。
乳酸菌在发酵过程中会产生乳酸，从而使培养基的酸度增加。
通过测定培养基的酸度变化，可以间接反映出乳酸菌的活菌数。
利用酸度计或pH计进行测定，可以得到乳酸菌活菌数的近似值。
乳酸菌活菌数的测定方法在GB 4789.38-2016中还规定了一些其他的注意事项。
比如，在进行直接计数法时，要求在菌落形成之前进行计数，以避免菌落过大或过小对计数结果的影响。
活菌技术的检测方法有几种
活菌技术的检测方法有几种活菌技术在许多领域中都得到了广泛的应用，如食品工业、药物发展和环境监测等。
然而，确保活菌技术的质量和效果是非常重要的，因此需要使用有效的检测方法来评估活菌技术的效果。
那么，活菌技术的检测方法有几种呢？首先，最常见的检测方法之一是菌落计数法。
这种方法是通过将待测样品分离在富含营养物质的培养基上，然后培养一段时间，观察并计算在培养基上形成的菌落数量。
通常，菌落计数法可以提供可靠的结果，并且可以根据需要进行量化。
然而，这种方法需要一定的时间，可能需要几天或更长时间才能获得结果。
其次，光学显微镜方法也是常用的活菌技术检测方法之一。
这种方法主要通过使用显微镜观察待测样品中的活菌。
通过放大和观察细胞的形态特征、运动和活力等特征，可以判断细菌是否仍然活跃。
然而，这种检测方法需要具备一定的显微镜操作技能，并且对样品的处理也需要一定的专业知识。
另外，分子生物学方法也被广泛用于活菌技术的检测中。
例如，聚合酶链式反应（PCR）可以通过扩增目标DNA片段来检测特定菌株的存在。
这种方法可以检测出非常低浓度的菌落，并且具有高度灵敏性和特异性。
此外，还有流式细胞术和荧光染色等分子生物学技术可用于活菌技术的检测，并且在速度和准确性方面具有优势。
最后，生物传感器也是一种新兴的活菌技术检测方法。
生物传感器利用活细胞作为传感器元件，通过检测细胞对目标物质的特异性响应来实现检测功能。
这种方法具有操作简单、快速响应和高灵敏度等优势。
然而，生物传感器的开发和应用仍处于起步阶段，需要进一步的研究和改进。
总之，活菌技术的检测方法有多种，包括菌落计数法、光学显微镜方法、分子生物学方法和生物传感器等。
不同的方法具有各自的特点和适用场景。
在实际应用中，应根据需要综合考虑多种方法，以评估活菌技术的质量和效果。
随着科学技术的不断发展，相信在未来会有更多更高效的活菌技术检测方法被引入和应用。
乳酸菌检测国标方法
乳酸菌检测国标方法乳酸菌检测方法1 适用范围本方法适用于清谷田园食品有限公司系列产品及原料中的乳酸菌的检测。
2 设备和仪器2.1 恒温培养箱：36±1℃2.2 天平：感量为0.01g2.3 无菌吸管：1 ml、2ml、10ml2.4 无菌锥形瓶：500ml2.5 无菌培养皿：直径为90mm2.6 无菌试管：18×180mm2.9 酒精灯2.10 立式蒸汽压力灭菌器2.11 超净工作台2.12 厌氧缸3试剂3.1 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
3.2 MRS（Man Rogosa Sharpe）培养基3.2.1 成分蛋白胨 10.0g牛肉粉 5.0g酵母粉 4.0g葡萄糖 20.0g吐温80 1.0mLK2HPO4.7H2O 2.0g醋酸钠.3H2O 5.0g柠檬酸三铵 2.0gMnSO4.7H2O 0.2gMnSO4.4H2O 0.05g琼脂粉 15g3.2.2制法：将上述成分加于1000mL蒸馏水中，调节PH至6.2±0.2，加热煮沸溶解，分装于锥形瓶中，在121℃高压灭菌15-20min。
3.3莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）和半胱氨酸盐酸盐改良 MRS 培养基：3.3.1 莫匹罗星锂盐储备液制备：称取50mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。
3.3.2 半胱氨酸盐酸盐储备液制备：称取250mg莫匹罗星锂盐加入到50 mL 蒸馏水中，用0.22 mm微孔滤膜过滤除菌。
3.3.3 制法将A.1.1 成分加入到950 mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH，分装后121 ℃高压灭菌15 min～20 min。
临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至48 ℃，用带有0.22 mm微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐储备液及半胱氨酸盐酸盐储备液制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐的浓度为50 mg/mL，半胱氨酸盐酸盐的浓度为500 mg/mL。
微生物与人类健康实验报告——酸奶中的微生物
实验报告酸奶微生物的检测与计数实验目的：对酸奶中的乳酸菌进行初步分离和计数实验原理：酸奶主要以乳酸菌为发酵剂，乳酸菌是一类可发酵糖类，产生大量乳酸的细菌的通称，主要包括乳杆菌属、双歧杆菌属及链球菌属等。
典型的乳酸菌是革兰氏阳性菌，兼性厌氧或厌氧，营养要求严格。
酸奶中主要使用嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌为发酵剂，部分酸奶中还添加有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌等益生菌。
中国食品卫生标准规定，酸奶中乳酸菌含量应满足乳酸菌数≥106CFU/g（ml），其中CFU（菌落形成单位）指单位体积中的细菌群落总数，CFU/g指的是每克样品中含有的细菌菌落总数，CFU/ml指的是每毫升样品中含有的细菌菌落总数。
通过稀释涂布平板法，利用MRS培养基，分离得到超市可购酸奶样品中的乳酸菌，以肉眼可见菌落数代表样品活菌数，分析酸奶中乳酸菌含量CFU／g；通过菌落形态的观察，对酸奶中的乳酸菌进行初步分离和计数。
实验材料和用具：1、培养基乳酸细菌培养基（MRS）蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，七水硫酸镁0.58g，四水硫酸锰0.25g，琼脂15.0--20.0g，蒸馏水1000mL，pH6.2~6.6，121℃，灭菌15min2、样品光明风味发酵乳：添加保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、干酪乳杆菌；乳酸菌数≥ 1×106CFU/g达能碧悠风味发酵乳：添加乳双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌；乳双歧杆菌数≥4×107CFU/g养乐多：添加干酪乳杆菌，活菌数≥ 1×108CFU/g3、材料无菌1.5mlEP 管、无菌棉棒、mark 笔4、仪器超净工作台、37℃恒温培养箱、高压灭菌锅、电子天平、微量移液器实验方法与步骤：1) 在超净台中，以无菌操作称取0.1g 酸奶样品，至无菌1.5mLEP 管中，以无菌PBS 定容至1ml，以微量移液器轻轻反复吹打，使之充分混匀，制成1:10样品匀液；2) 以微量移液器吸取100uL1:10 样品匀液，转至装有900ul 无菌PBS 的1.5mLEP 管中，以微量移液器轻轻反复吹打，使之充分混匀，制成1:100 样品匀液；3) 根据步骤2)操作顺序，10 倍系列稀释，获得不同稀释度的样品溶液；4) 根据待测酸奶样品的活菌总数，选择2 个连续的适宜稀释度，各以0.1mL 加入到MRS 平板中进行涂布；5) 在MRS 平板上注明组别、样品、稀释度、姓名、日期，每组6 名同学共同完成3 种不同酸奶，各2 个连续稀释度的涂布；6) 于37℃恒温低氧倒置培养48h；7) 观察MRS 培养基表面菌落形态；8) 菌落计数，计算样品中的CFU/g。
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乳酸菌活菌数量检测方法--菌落计数法
本方法适用于乳酸菌制剂及配合饲料中有效活菌数和杂菌率的测定。
按照国家标准GB/T 14699.1进行抽样，获得样品200g，分装于两个无菌、干燥的玻璃瓶中，贴上标签，注明产品名称、批号、取样日期等信息。
一瓶供检验用，一瓶密封保，以备复查。
一、测定原理：
乳酸肠球菌用肠球菌琼脂培养基，杂菌用营养琼脂培养基；培养后利用平板菌落计数法进行计数。
二、培养基与缓冲液配方：
（1）营养琼脂培养基，每L
蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g 氯化钠 5.0g 琼脂 18.0g 水稀释至
1000ml PH 7.0~7.4
（2）肠球菌琼脂培养基，每L
蛋白胨 20.0g蔗糖 5.0g 葡萄糖 5.0g 乳糖 5.0g 酵母膏 5.0g
氯化钠 4.0g 乙酸钠 1.5gVc 0.5g 琼脂 17.0g 水稀释至1000ml
PH 6.5~7.0
（3）PH6.8磷酸缓冲液配制方法
取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀即得。
三、样品处理：
（1）乳酸菌纯品制剂样品
测定乳酸菌纯品制剂时，取样量为1g，溶解到100ml缓冲液中，缓冲液与样品的比例为100:1。
（2）配合饲料样品
测定饲料样品时，取样量为25g，溶解到225ml缓冲液中，缓冲液与样品的比例为10:1。
四、有效活菌数、杂菌数的测定：
（1）本方法采用平板菌落计数法
（2）操作方法：
1．取磁力搅拌棒装入500ml三角瓶中，再量225ml PH6.8的磷酸缓冲液一并装入三角瓶中灭菌备用。
纯品制剂量取缓冲液100ml。
2．取25g饲料样品放入三角瓶中，在磁力搅拌器中震荡混匀5min后，再放到摇床上37℃，150转/分，充分震荡45min，混匀成1：10稀释液。
纯品制剂样品量为1g，混匀成1：100稀释液。
3．在超净工作台内用灭菌的1.5ml离心管，按10倍比稀释法稀释。
用移液器吸取上述混悬液100ul，注入含有900ul缓冲液的离心管内，并在液体中反复吹打5次，在漩涡振荡器上震荡30s混匀（注意每次稀释时更换枪头及充分震荡混匀）。
4．按上述操作顺序，做10倍比稀释，纯品制剂推荐稀释到10-8，配合饲料推荐稀释到10-4。
5．选择4个适宜稀释度，吸取该稀释度的液体10 ul滴于灭菌平皿上，每个稀释度做3个平行。
（注意分三点滴，便于液体充分散开）
6．置于烛缸中37℃培养36 h后，计数菌落。
（3）计算公式：
1、有效活菌数：
a.计算出平皿同一稀释度3个平行组的菌落平均数。
b.产品活细胞数＝菌落平均数×稀释倍数×10
2、杂菌率①：杂菌率（%）= [杂菌数÷（有效活菌数+杂菌数）]×100%
注①只对乳酸菌纯品制剂进行评定，对配合饲料不采用这个指标。