食品微生物学检验致病菌的检验

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沙门氏菌的检验
XLD平板
科玛嘉沙门氏菌显色培养基平板
沙门氏菌的检验
初筛微生物
菌落颜色
沙门氏菌 柠檬酸杆菌属
变形杆菌
紫色(直径约 1mm)
蓝色(直径约 1mm)
无色或被抑制
沙门氏菌的检验
赖氨酸脱羧酶 尿素分解
甘露醇 山梨醇 卫茅醇 丙二酸盐
关键特征

靛基质


氰化钾(KCN) -

硫化氢产生


ONPG


水扬苷


沙门氏菌A-F“O” +
多价血清凝集
三糖铁
分解葡萄糖产酸不产气,不发酵乳糖, 产生硫化氢
沙门氏菌的检验
斜面红色,底面黄 色
培养基全黄色
制好的 培养基
斜面、底 部黄色, 并产生 H2S
对照管
斜面红色,底部黄 色,产生H2S
TSI试验
底面黄色,并产生CO2
沙门氏菌的检验
靛基质(吲哚)试验
食品微生物学检验 致病菌的检验
食品药品检验所
食品微生物学检验 致病菌的检验
食品安全国家标准 微生物常规检验技术
致病菌的检验
食品安全国家标准
GB 4789.1-2010 GB 4789.2-2010 GB 4789.3-2010 GB 4789.4-2010 GB 4789.5-2012 GB/T 4789.7-2008 GB 4789.10-2010 GB/T 4789.11-2003 GB 4789.15-2010 GB 4789.18-2010 GB 4789.30-2010 GB 4789.35-2010 GB/T 4789.36-2008 GB 4789.40-2010
红色化合物 (立刻或数分钟内)
阳性
阴性
微生物常规检验技术
糖发酵实验:分解糖产酸,PH值下降,使培养基的酸碱指 示剂发生变化。
阳性:产酸产气
阴性 阳性
微生物常规检验技术
氧化发酵实验(O/F实验) : 有些微生物分解葡萄糖必须有氧参加,此种细菌称为氧
化型; 有些细菌有氧无氧均可分解葡萄糖,称发酵型; 有些细菌任何条件都不能分解葡萄糖,称产碱型。
灭菌琼脂(厌氧)
阴性
微生物常规检验技术
甲基红实验(MR实验)原理 :一些细菌分解葡萄糖产生丙 酮酸,丙酮酸可被进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸 而使培养基的pH值下降到4.5以下,加入甲基红指示剂出现 红色反应。
微生物常规检验技术
V-P实验原理:一些细菌分解葡萄糖为丙酮酸,进一步脱羧 产生乙酰甲基甲醇,乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的 氧氧化成二乙酰丁二酮,进而与培养基内蛋白胨中所含的精 氨酸的胍基发生反应生成红色化合物。
食品安全国家标准
环境:
• 实验室环境应不影响检测结果的准确性。 • 实验室的工作区域应与办公室区域明显分开。 • 实验室工作区域面积和总体布局应能满足从事检测工作
需求,实验室布局应采用单方向工作流程,避免交叉污 染。 • 实验室内温度、湿度、照度、噪声和洁净度等应符合工 作要求。
食品安全国家标准
(1) (2) (3)
微生物常规检验技术
血清学实验:抗原与抗体在体外发生的特异性结合反应叫血 清学试验。
抗原:能在体内引起免疫反应的物质 抗体:抗原刺激产生的物质
玻片凝集实验
Ag+Ab Ag+生理盐水(对照)
微生物常规检验技术
生化试验 靛基质试验 甲基红试验 VP试验 尿素酶分解试验 硫化氢产生试验 苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用试验
的枸橼酸铁的二价铁离子发生反应,形成黑色化合物。
微生物常规检验技术
石蕊牛奶实验原理: 细菌对牛奶的利用分为: • 产酸及酸凝固 • 产碱 • 胨化作用 • 凝乳酶凝固 • 石蕊还原
微生物常规检验技术
三糖铁实验(TSI): 成分:牛肉膏、蛋白胨(氮源)
三糖:葡萄糖0.1%、乳糖1%、蔗糖1% 硫酸亚铁 琼脂 pH值调到7.4 培养基摆成高层斜面
微生物常规检验技术
革兰氏染色:
1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立。革兰染色法可将 所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-) 两大类,是细菌学上最常用的鉴别染色法。
微生物常规检验技术
革兰氏染色: G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且
肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类 脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合 物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经石炭酸复红复染后就 成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高,类脂质含量少, 经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小,通透性降低, 因此细菌仍保留初染时的颜色。
微生物常规检验技术
革兰氏染色:
微生物常规检验技术
革兰氏染色:
微生物常规检验技术
细菌的运动性观察:
微生物常规检常规检验技术
设计生化实验的原则:
易于污染的高危食物:畜禽肉类、蛋、奶及其制品。沙门 菌在肉类中不分解蛋白质,不产生靛基质,所以当食品污染了 沙门菌后,通常没有感官性状的改变。
沙门氏菌的检验
沙门氏菌的检验
菌体短杆状,革兰氏染色阴性,无芽孢。
沙门氏菌的检验
BS培养基
菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色, 菌落周围培养基可呈黑色 或棕色;有些菌株形成灰绿色的菌落, 周围培养基不变。
阴性 阳性
微生物常规检验技术
柠檬酸盐实验(枸橼酸盐实验)原理: 一些微生物可以以铵盐作为唯一的氮源,以柠檬酸盐作
为唯一的碳源,在柠檬酸盐培养基上生长,分解柠檬酸盐生 成碳酸盐,使培养基变成碱性,酸碱指示剂变色。
阴性 阳性
微生物常规检验技术
丙二酸钠实验原理:
一些微生物可以以丙二酸钠作为唯一碳源,分解丙二 酸钠生成碳酸钠,使培养基变成碱性,酸碱指示剂变色。
鸟氨酸脱羧酶
精氨酸双水解 酶 邻位硝基苯 β-D半乳糖苷
鼠伤寒沙门氏菌 或粘质沙雷氏菌
鼠伤寒沙门氏菌 或奇异变形杆菌
鼠伤寒沙门氏菌 或阴沟肠杆菌
大肠埃希氏菌
普通变形杆菌 普通变形杆菌 普通变形杆菌 奇异变形杆菌
微生物常规检验技术
生化试验
阳性对照菌株
明胶液化试验
铜绿假单胞菌
硝酸盐还原试验
铜绿假单胞菌
凝固酶试验(兔血浆) 金黄色葡萄球菌
触酶试验
金黄色葡萄球菌
胆盐溶菌试验
肺炎链球菌
七叶苷分解试验
肠球菌
6.5%氯化钠肉汤
肠球菌
阴性对照菌株 硝酸盐阴性杆菌 硝酸盐阴性杆菌
表皮葡萄球菌 肺炎链球菌 绿色链球菌 溶血性链球菌 溶血性链球菌
微生物常规检验技术
生化试验
阳性对照菌株
氧化酶试验
铜绿假单胞菌
氰化钾抑制试验 产气肠杆菌
指示剂酚红
黄 砖红色 红色
pH<6 pH=7(大约) pH>7
接种:(1)穿刺接种 (2)斜面划线接种 36oC培养18--24小时
微生物常规检验技术
三糖铁实验(TSI):观察结果。 (1)分解葡萄糖、乳糖、蔗糖:斜面产酸变为黄色(阳性), 底层产酸变为黄色(阳性)。 (2)分解乳糖、蔗糖,不分解葡萄糖:斜面、底层都产酸变 为黄色(阳性)。 (3)分解葡萄糖、不分解乳糖、蔗糖: 斜面:产碱显红色 (阴性) 底层:产酸显黄色 (阳性) (4)分解含硫氨基酸 产硫化氢 硫化氢与Fe2+生成黑色沉淀, 培养基变黑(FeS)。 (5)分解糖类产气,培养基中有气泡。
实验室要准备好足够种类和数量的参考菌株,满足培 养基、试剂盒和试剂质量测试的需要。
食品安全国家标准
食品安全国家标准
食品安全国家标准
食品安全国家标准
微生物常规检验技术
平板划线分离:
微生物常规检验技术
形态结构观察:
染色特性 形状 大小 排列方式 细胞结构(包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、
芽孢等)
阴性
阳性
微生物常规检验技术
马尿酸盐实验原理: 一些细菌可以水解马尿酸生成苯甲酸和甘氨酸,苯甲酸
和Fe3+反应生成有色的苯甲酸盐沉淀。
阳性
微生物常规检验技术
明胶液化实验原理: 一些细菌可产生胞外酶,使明胶蛋白分解为氨基酸,而
失去明胶的凝固能力。
苯丙氨酸脱氨酶实验原理: 一些细菌有苯丙氨酸脱氨酶,可以使培养基
Dnase试验
粘质沙雷氏菌
杆菌肽试验
A群链球菌
阴性对照菌株 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 阴沟肠杆菌 B群链球菌
致病菌的检验
沙门氏菌的检验:沙门氏菌是与肠杆菌科中形态和培养特征, 生化反应及抗原结构相似,被O1噬菌体裂解的一群革兰氏阴性 杆菌。广泛存在于自然环境中,通过沙门氏菌病患者或健康带 菌的人和动物的排泄物污染环境和食品。
乳白色 浑浊带
微生物常规检验技术
脱氢酶实验原理: 一些微生物有脱氢酶,可使氯化三苯四氮唑(TTC)还
原,由无色变为红色。
阳性
微生物常规检验技术
硫化氢实验原理: 一些微生物分解含硫氨基酸(胱氨酸或半胱氨酸),产
生硫化氢与二价铁盐或铅盐生成黑色沉淀。
阳性
微生物常规检验技术
七叶苷水解实验原理: 一些细菌能分解七叶苷生成七叶素,七叶素与培养基中
沙门氏菌的检验
尿素酶试验
沙门氏菌的检验
ONPG试验 左为阳性(黄) 右为阴性
沙门氏菌的检验
血清学分型鉴定:有条件可进行血清学分型鉴定。 根据生化试验和血清学分型鉴定结果,报告检验结果。
志贺氏菌的检验
志贺氏菌的检验:
需氧或兼性厌氧。营养要求不高,能在普通培养基上生长, 最适温度为37℃,最适pH为6.4-7.8。37℃培养18-24小时后菌 落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐,直径 约2nm,能分解葡萄糖,产酸不产气。不发酵乳糖,靛基质产 生不定,甲基红阳性,VP试验阴性,不分解尿素,不产生H2S。 根据生化反应可进行初步分类。
环境:
一般样品检测应在洁净区域(包括超净工作台或洁净 实验室)进行,洁净区域的应有明显标示。
病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安全实验室 (Biosafety level 2 BSL-2) 进行(超净工作台不能替代 生物安全柜)。
食品安全国家标准
BSL-2实验室
食品安全国家标准
菌种:
参考菌株可以从国际菌种保藏中心如ATCC、国内具资 质菌种保藏中心或室间质控活动中获得,准确鉴定过的分 离株也可使用。
阳性
阴性
微生物常规检验技术
细胞色素氧化酶实验原理:
细胞色素C 细胞色素氧化酶 氧化型细胞色素C +对苯二胺
+ --奈酚
靛酚兰(蓝色)
阳性: 2分钟内生成蓝色为阳性; 阴性:无变化。
阳性
阴性
微生物常规检验技术
氰化钾实验: 阳性: 不抑菌,变混浊 阴性:抑菌
微生物常规检验技术
硝酸盐还原实验原理: KNO3 还原酶 KNO2 KNO2+对氨基苯磺酸+ -萘胺
食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验 食品微生物学检验
总则 菌落总数测定 大肠菌群计数 沙门氏菌检验 志贺氏菌检验 副溶血性弧菌检验 金黄色葡萄球菌检验 溶血性链球菌检验 霉菌和酵母计数 乳与乳制品检验 单核细胞增生李斯特 氏菌检验 乳酸菌检验 大肠埃希菌O157: H7/NM检验 阪崎肠杆菌检验
在实验中加入某些 化学物 质,使细菌代谢途径中分解 代谢产物与加入的化学物质发生反应,产生某些变化或出现 某种特征。
微生物常规检验技术
过氧化氢酶及过氧化物酶实验原理:
2H2O2 过氧化氢酶
2H2O+O2
阳性
过氧化物酶:RH2+H2O2 过氧化物酶 R+2H2O
阳性:细菌变为黑褐色,有气泡产生; 阴性: 不变色。
微生物常规检验技术
靛基质实验(吲哚实验)原理:一些细菌具有色氨酸酶,可 以分解蛋白胨的色氨酸,产生靛基质,靛基质可与对二甲氨 基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚而成红色。
阴性 阳性
微生物常规检验技术
ONPG实验( 检测-半乳糖苷酶)原理:
邻硝基苯--D-吡喃半乳糖苷 -半乳糖苷酶 邻硝基苯酚+ -D半乳糖
阴性
阳性
微生物常规检验技术
淀粉酶实验原理: 一些细菌可产生淀粉酶将淀粉分解为双糖或单糖,加入
碘不变色。
接种菌,可 产生淀粉酶
微生物常规检验技术
卵磷脂酶实验原理:一些梭状芽孢杆菌产生卵磷脂酶,经钙 离子作用,能分解卵黄或血清中的卵磷脂产生混浊沉淀状的 甘油酯和水溶性的磷酸胆碱,在菌落周围形成一个乳白色的 沉淀或浑浊带。
中的苯丙氨酸脱氨 生成苯丙酮酸,其与FeCl3反应 产生蓝绿色 。
阳性
微生物常规检验技术
氨基酸脱羧酶实验原理:
一些细菌可以产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱酸, 产生胺类物质,使培养基变碱,酸碱指示剂变色。
阴性
阳性
微生物常规检验技术
脲酶实验原理: 一些细菌能产生脲酶(尿素酶),可催化尿素分解为氨
和二氧化碳,使pH变高,培养基变为碱性,酚红指示剂变 为红色。
阳性对照菌株 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 阴沟肠杆菌 奇异变形杆菌 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 肺炎克雷伯菌或亚 利桑那沙门氏菌
阴性对照菌株 产气肠杆菌 产气肠杆菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 宋内氏痢疾杆菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌
微生物常规检验技术
生化试验
阳性对照菌株
阴性对照菌株
赖氨酸脱羧酶
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