噬菌体展示-原创

这就是爷爷说的 欲擒故纵！！！
噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽 的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基 因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的 表达而表达，同时，外源蛋白随噬菌体的 重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。 该技术实现了表型与基因型的统一。随着 噬菌体展示技术的进一步发展，其优越性 被越来越多的实验室所认识，使得该技术 的使用范围不断扩展，也使该技术得以不 断的完善和发展。
1915年，Twort 在培养葡萄球菌过 程中，发现菌落上 出现了透明斑，用 接种针接触此透明 斑后再接触另一菌 落，结果后者也出 现了相同的透明斑 。
1917年d’Herelle发现含 有志贺痢疾杆菌的新鲜液体 培养物能被某种无菌的污水 滤液所溶解，并使混浊的液 体培养物变清，将此种澄清 液再过滤加到另一敏感菌株 的新鲜培养物中，得到相同 的结果。d’Herelle将这种能 使菌落形成透明斑以及使混 浊液体培养物变清的溶菌因 子称为噬菌体。
转导：由噬菌体将一个细胞的基因 传递给另一细胞的过程。 溶原性：指病毒可以整合到细菌基 因组内，并进行复制繁殖和分泌， 不会立刻裂解细菌。
英国细菌学家Twort和法国细菌学 家d’Herelle分别从葡萄球菌(1915年)和 痢疾志贺氏菌(1917年)的培养物中首先 发现这类特殊的病毒因能使细菌裂解， 故名噬菌体。
• 个体微小，可通过滤菌器 • 无细胞结构 • 具有严格的细胞内寄生性 • 分布广泛 • 宿主特异性 • 参与细菌变异：转导，溶原性转换
病毒有高度的寄生性，完全依赖 宿主细胞的能量和代谢系统，获取生 命活动所需的物质和能量，离开宿主 细胞，它只是一个大化学分子，停止 活动，可制成蛋白质结晶，为一个非 生命体，遇到宿主细胞它会通过吸附、 进入、复制、装配、释放子代病毒而 显示典型的生命体特征。所以病毒是 一类严格的细胞内寄生微生物。
随着噬菌体展示技术在寻找新药道路上 的不断成功，这种方法不仅限于人类医药的 发现，也可以用于植物病虫害的防治，畜牧 业病害的防治以及水产养殖业病害的防治， 特别是在水产养殖业中，可避免滥用抗生素 和化学药品，防止水体进一步地污染。 随着该技术的不断发展和创新，所获得 的信息越来越多，如果能与生物芯片技术以 及生物信息技术结合起来，其应用范围和能 力将会得到更大的发展。
Fra Baidu bibliotek
被展示的多肽或蛋白可以保持相对独立的空 间结构和生物活性，以利于靶分子的识别和结合。
非展示系统
展示系统
1.抗体 2.疫苗 3.多肽类药物 4.肿瘤药物导航载体 5.酶 6.底物与抑制剂 7.信息传递研究 8. DNA结合蛋白 9.蛋白质组学 10.水产养殖业 ……
1.在噬菌体展示过程中必须经过细菌转化、噬菌体包装，有的展示 系统还要经过跨膜分泌过程，这就大大限制了所建库的容量和分 子多样性。目前，常用的噬菌体展示文库中含有不同序列分子的 数量一般限制在109。 2.不是所有的序列都能在噬菌体中获得很好的表达，因为有些蛋白 质功能的实现需要折叠、转运、膜插入和络合，导致在体内筛选 时需外加选择压力。 3.噬菌体展示文库一旦建成，很难再进行有效的体外突变和重组， 进而限制了文库中分子遗传的多样性。 4.由于噬菌体展示系统依赖于细胞内基因的表达，所以，一些对细 胞有毒性的分子如生物毒素分子，很难得到有效表达和展示。
主角在这里！
不用怀疑，我就 你是谁？？ 是刚刚的大肠杆 菌
我？你亲戚 我来 啊，快过来 给我抱抱……
也！！
看我下个“蛋”！
你懂个甚，洒家这 叫………… 下好赶紧溜 ……
哎呀，兄弟，这么大 块肉，你不咬两口就 走啦！
兄弟 们， 集合 啦！
咋回事啊，上次见了 那个亲戚之后，怎么 吃都吃不饱！
• 蝌蚪形 • 微球形 • 细杆形
主要为六种主要形态： ①A型，dsDNA，蝌蚪状，收缩性尾 ②B型，dsDNA，蝌蚪状，非收缩性尾 ③C型，dsDNA，非收缩性尾 ④D型，ssDNA，球状，无尾，大顶衣 壳粒 ⑤E型，ssRNA，球状，无尾，小顶衣壳 粒 ⑥F型，ssDNA，丝状，无头尾
噬菌体入侵细菌的一般过程 过程分为五个阶段： ①吸附：特异性 ②侵入：核酸穿入 ③复制（生物合成） ④装配 ⑤释放（裂解）
1985年，Smith G P一次将外源基因 插入丝状噬菌体f1的基因Ⅲ，使目的基因 编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬 菌体表面，从而创建了噬菌体展示技术。 人们已开发出了单链丝状噬菌体展 示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展 示系统等数种噬菌体展示系统。
• 第一，淘选的高效率使得在极低的存在水平 下，挑选到高亲和力噬菌体成为可能； • 第二，所挑选到的噬菌体可在微量存在的情 况下，通过感染细菌得到富集； • 第三，展示的多肽或蛋白质与其包含在噬菌 体内部的基因密码的连接，使得结合肽或蛋白 质的序列分析既快速又简便。