植物组织石蜡切片的制作
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植物组织石蜡切片的制作
• 一、实验目的 • 1．熟练掌握石蜡切片的方法。 • 2．掌握永久制片的制作过程，为研究植 物的内部结构奠定基础。 • 3．学会植物内部结构的比较研究方法。
• 二、实验器具与试剂 • 1．器具 • 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养 皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖 玻片等。 • 2．试剂 • 10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配 制）、酒精（100%、95%、80%、70%、 50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
• 实验二 3、石蜡切片技术—切片、粘片、 脱蜡、透明、封藏
Leabharlann Baidu
• 一、实验目的： • 掌握制作石蜡切片中切片、粘片、脱蜡、透明、 封藏的基本操作技术。 • 二、实验用品： • 1．实验试剂： 95%酒精、100%酒精、二甲苯、 蒸馏水、加拿大树胶。 • 2．实验器具：切片机、烤片机、解剖器、载 玻片、盖玻片、酒精灯、木筷、染色缸。
• ⑦开始切片。右手握旋转轮的手柄，摇 动一转就可切下一片，切下的蜡片粘在 刀口上，待第二片切下时粘在一起，所 以连续摇动就可将切下的蜡片连成一条 蜡带。这时左手就可持毛笔将蜡带提起， 边摇边移动蜡带。转速为每分钟40-50为 宜。
• ⑧切成的蜡带到20-30厘米时，即以右手 用另一只毛笔轻轻将蜡带挑起，平放在 黑电光纸上。靠刀的一面较光滑，应向 下，较皱的一面向上。 • ⑨切下的蜡片是否良好，此时应先行检 查。 • ⑩切片工作结束后，仍将刀片用具擦拭 干净。
• ⑤再将解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，放在 刚才固定的石蜡四周。此时，解剖刀再 加温，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平。 使石蜡块牢固地粘在台木上。 • ⑥修石蜡块上下面平行，是切成的蜡带 呈一直线，不弯曲。每个切片中组织的 距离接近。
• 2．切片的方法： • ①准备下列用具：毛笔、黑色亮光纸 • ②将已固着和整修好的石蜡块和台木装 在切片机的夹物部分.
• 3．贴片：贴附牢固，在染色时不易脱落； 是皱褶的蜡片伸展平整。 • 用具：载玻片、粘片剂、解剖刀、蒸馏 水、展片机及铐片机。
• 材料切成薄片后，须将切片粘在玻璃片上，加 热展开，这叫粘片。 • 所用载玻片必须清洁才能使用。粘片时，需把 胶液(或称粘贴剂)置簿玻片上，再取切片，浮 置胶液上，然后置烘片台上，使切片展开烫平， 材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用 滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编 号，放入温箱中烘干，温度30～40℃约1小时 即干。常用的胶液有下列三种：
• (1) 明胶液：这是粘片最常用的胶液，简便优良，配法 是100毫升纯水中，加明胶4毫克，加热熔化，过滤即 得。 • (2) 梅氏蛋白质： • 鸡蛋清 50ml • 甘 油 50m1 • 水杨酸纳 1g • 用蛋白与甘油搅拌，同时加入水杨酸纳，调匀过滤， 应用时以滤液15滴，放入纯水50毫升中即得。 • (3) Land氏液： • 阿拉伯胶 1克 • 重铬酸钾 0.2克 • 纯 水 100毫升
• ③安装切片刀，将刀片夹在刀夹上，并调整好 刀的角度。刀的斜度，非常重要，最好先切除 的蜡块试刀，以确定刀的斜度，一经调度适合 后，就不要随便变动，以免每次试刀的麻烦。 • ④移动刀片固定器，使夹刀部与夹物部之间的 距离调整好，以石蜡块的表面刚贴近刀口为度， 在旋紧切片固定器的螺旋。
• ⑤调整石蜡块与刀口之间的角度与位置。 修整蜡块，将刀片移近蜡块，使小蜡块 的下边与刀锋平行，如不平行，可调夹 物部上的螺旋。然后把它固定，再转下 蜡块．呈矩形才行。只有平整的蜡块， 才能切出平整的蜡带。 最后根据需要，调整控制切片厚度的机 制。调度后，把它固定下来。上述四步 骤完成后，就可进行切片，
• 若分染需再经酒精入水中，而后染色， 其顺序如下： 二甲苯→1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100% 酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精 →50％酒精→30％酒精→水→染色 以上各级约需5～10分钟。 • 5.滴加加拿大树胶封藏。 • 6．镜检：
石蜡切片的异常及处理
• 一张理想佳良的切片，除组织固定适当 和染色清晰之外，还应具备：薄、平整， 无皱褶压缩，无裂损抓迹及擦痕，同时 贴片排列密集，整齐位置适当，透明度 好，封片用胶适量，盖玻片端正，无气 泡等。
• 实验二 2、石蜡切片技术—脱水、透明、 浸蜡、包埋
• 一、实验目的： • 掌握制作石蜡切片中脱水、透明、浸蜡、 包埋的基本操作技术。
• 二、实验用品： • 1．实验试剂：35%酒精、50%酒精、 70%酒精、83%酒精、95%酒精、100%酒 精、二甲苯、石蜡。 • 2．实验器具：电光纸、电热恒温箱、烤 片机、解剖器、盆。
• 四、实验步骤： • 1．取材：依据生物组织取材的各项注意 事项。 • 2．固定：卡诺固定液、FAA固定液固定 24小时。 • 3．复水：卡诺固定液（1h）→50%酒精 （1h）→爱氏苏木精染液 • FAA固定液→爱氏苏木精染液
• 4．染色（整染）：爱氏苏木精染液染色， 染色时间视材料不同而有所不同，总之 使材料最后染指红棕色为止，且内外均 染色均匀。对于染不好的材料，可加长 染色时间，还可通过负压，超声波加注 浸剂等方法提高染色效率。时间为1-2天。
• 4．包埋：先提升恒温箱的温度至60℃， 换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、 牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上， 倒入材料，摆放好材料，把标签（正面 向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻 轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆 中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干， 也可在凉水盆中放置过夜。
• 将蜡带轻轻移到涂有水的载玻片上，蜡 片光面应向下贴在载玻片上，依次排列 整齐。留出右端贴标签处。 • ⑤材料展平后，从展片机上取下，稍稍 倾斜留出多余的水分，用吸水纸吸干背 面及周围多余水分，放于烤片机（35℃） 上烤干水分。
• 4.脱蜡：玻片烘干后，须将蜡脱去，才能 染色，脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片 放于盛二甲苯的染缸中纯二甲苯(5-10min) →纯二甲苯(5-10min)
• 5．返蓝：染好的材料，用自来水冲洗， 加2% 氨水使材料变为蓝色，时间也因材 料的不同而有所不同，好返蓝的材料用 水一洗就蓝。
• 附：分染：番红与固绿色法 番红用l％的水溶液，固绿用0.5％的酒精 液(用95％的酒精配制)，染色步骤如下：
• 讨论和注意点： • (1) 用番红和固绿这个组合染成的切片，木化、 栓化和角质的细胞壁，被番红染成鲜红色，纤 维素的细胞璧，被固绿成绿色。就维管束来讲， 木质部染红，韧皮部染绿，区别极清楚。 • (2) 在50％酒精中脱色，需经实践，如脱色不 够，绿色难得染好，脱色太过分，做出来的切 片，红色太淡，甚至于全是绿色，失掉了二色 染法的用意。
石蜡切片中的异常及原因和处理 方法
• 〔注〕：切制石蜡切片遇到障碍大多数 是：（1）刀钝或刀刃受损。（2）蜡块 或切片刀的调整螺旋或是紧固螺旋拧不 紧。因此，有经验的切片者在开始切制 切片之前应习惯地反复核查（1）（2） 这两点。
• 实验二 1、石蜡切片技术—固定、染色
• 一、实验目的： • 掌握制作石蜡切片中固定、染色、返蓝 的基本操作技术
• 二、实验原理： • 石蜡切片法：是用石蜡浸透到组织中， 并包埋组织，然后用旋转切片机将蜡块 切成切片。只是切片中最常用的一种方 法。
• 三、实验用品： • 1．实验材料：瓜叶菊叶柄，长寿花幼茎。 • 2．实验试剂：卡诺固定液、FAA固定液、35% 酒精、50%酒精、70%酒精、83%酒精、95%酒 精、100%酒精、二甲苯、中性树胶、2% 氨水、 爱氏苏木精染液。 • 3．实验器具：解剖器，双面刀片，青霉素小 瓶。
• 三、实验材料 • 幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。
• 四、实验内容与方法 • 石蜡切片法是显微技术上最重要、最常 用的一种方法。它是把材料封埋在石蜡 里面，用旋转切片机切片，可以切出很 薄的切片。凡是精细的工结构，大都用 石蜡切片。全都过程如下：
• 1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒 精 2．封埋 6．切片 7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封
• 三、实验步骤： • 1．修块、粘块、整修的步骤： • ①选取所要切片的材料，从包埋的石蜡块上用 单面刀片切割下来，注意不可损伤包埋的组织。 • ②确定切面的方位，用刀片将石蜡块的四面作 初步的整修。保证材料四周都有石蜡包围。但 不可太多。切面的上、下边平行。
• ③点燃酒精灯，并准备一把旧的解剖刀。 • ④左手大拇指与食指间持整修好的石蜡 块，材料向上用其余三指夹住台木。此 时将解剖刀在酒精灯上加温后，即放在 台木与石蜡块之间，因解剖刀已加温， 遇上两面的石蜡都会融化，可立即将解 剖刀抽出，石蜡块迅速压在台木上。
方法
• ①将展片机温度调整到35℃，保持恒定。 • ②在载玻片上涂蛋白甘油粘片剂。其法是用细 玻璃棒蘸取一小滴粘片剂，加在载玻片的中央， 然后用洗净的手指（无名指）加以涂抹，范围 不要太广，也不要太多，以能贴足够的蜡片为 度。蛋白甘油粘片剂的配方：（不适宜用作蛋 白观察）
• ③将涂粘片剂的载玻片放在展片机上， 滴加蒸馏水数滴，此时若发现水不均匀 分散而聚成滴状，即表示玻片不清洁， 有残留油脂等物在上面。 • ④用解剖刀将蜡带切成小段，每段的长 度应以盖玻片的长度为准，一般应比盖 玻片短约1/5-2/5。分片应从蜡带交界处 分。
• 三、实验步骤： • 1．脱水：35%酒精→50%酒精→70%酒精 →83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。 每级1-2h。70%酒精处可长期保存。 • 2．透明：1/2二甲苯+1/2100%酒精 (1-2h) →纯 二甲苯(1h) →纯二甲苯(1h) • 3．浸蜡：石蜡先置于60℃的温箱中，倒入含 二甲苯及材料的小瓶中置于38℃温箱中，放置 2-4小时。
• 一、实验目的 • 1．熟练掌握石蜡切片的方法。 • 2．掌握永久制片的制作过程，为研究植 物的内部结构奠定基础。 • 3．学会植物内部结构的比较研究方法。
• 二、实验器具与试剂 • 1．器具 • 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养 皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖 玻片等。 • 2．试剂 • 10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配 制）、酒精（100%、95%、80%、70%、 50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。
• 实验二 3、石蜡切片技术—切片、粘片、 脱蜡、透明、封藏
Leabharlann Baidu
• 一、实验目的： • 掌握制作石蜡切片中切片、粘片、脱蜡、透明、 封藏的基本操作技术。 • 二、实验用品： • 1．实验试剂： 95%酒精、100%酒精、二甲苯、 蒸馏水、加拿大树胶。 • 2．实验器具：切片机、烤片机、解剖器、载 玻片、盖玻片、酒精灯、木筷、染色缸。
• ⑦开始切片。右手握旋转轮的手柄，摇 动一转就可切下一片，切下的蜡片粘在 刀口上，待第二片切下时粘在一起，所 以连续摇动就可将切下的蜡片连成一条 蜡带。这时左手就可持毛笔将蜡带提起， 边摇边移动蜡带。转速为每分钟40-50为 宜。
• ⑧切成的蜡带到20-30厘米时，即以右手 用另一只毛笔轻轻将蜡带挑起，平放在 黑电光纸上。靠刀的一面较光滑，应向 下，较皱的一面向上。 • ⑨切下的蜡片是否良好，此时应先行检 查。 • ⑩切片工作结束后，仍将刀片用具擦拭 干净。
• ⑤再将解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，放在 刚才固定的石蜡四周。此时，解剖刀再 加温，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平。 使石蜡块牢固地粘在台木上。 • ⑥修石蜡块上下面平行，是切成的蜡带 呈一直线，不弯曲。每个切片中组织的 距离接近。
• 2．切片的方法： • ①准备下列用具：毛笔、黑色亮光纸 • ②将已固着和整修好的石蜡块和台木装 在切片机的夹物部分.
• 3．贴片：贴附牢固，在染色时不易脱落； 是皱褶的蜡片伸展平整。 • 用具：载玻片、粘片剂、解剖刀、蒸馏 水、展片机及铐片机。
• 材料切成薄片后，须将切片粘在玻璃片上，加 热展开，这叫粘片。 • 所用载玻片必须清洁才能使用。粘片时，需把 胶液(或称粘贴剂)置簿玻片上，再取切片，浮 置胶液上，然后置烘片台上，使切片展开烫平， 材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用 滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编 号，放入温箱中烘干，温度30～40℃约1小时 即干。常用的胶液有下列三种：
• (1) 明胶液：这是粘片最常用的胶液，简便优良，配法 是100毫升纯水中，加明胶4毫克，加热熔化，过滤即 得。 • (2) 梅氏蛋白质： • 鸡蛋清 50ml • 甘 油 50m1 • 水杨酸纳 1g • 用蛋白与甘油搅拌，同时加入水杨酸纳，调匀过滤， 应用时以滤液15滴，放入纯水50毫升中即得。 • (3) Land氏液： • 阿拉伯胶 1克 • 重铬酸钾 0.2克 • 纯 水 100毫升
• ③安装切片刀，将刀片夹在刀夹上，并调整好 刀的角度。刀的斜度，非常重要，最好先切除 的蜡块试刀，以确定刀的斜度，一经调度适合 后，就不要随便变动，以免每次试刀的麻烦。 • ④移动刀片固定器，使夹刀部与夹物部之间的 距离调整好，以石蜡块的表面刚贴近刀口为度， 在旋紧切片固定器的螺旋。
• ⑤调整石蜡块与刀口之间的角度与位置。 修整蜡块，将刀片移近蜡块，使小蜡块 的下边与刀锋平行，如不平行，可调夹 物部上的螺旋。然后把它固定，再转下 蜡块．呈矩形才行。只有平整的蜡块， 才能切出平整的蜡带。 最后根据需要，调整控制切片厚度的机 制。调度后，把它固定下来。上述四步 骤完成后，就可进行切片，
• 若分染需再经酒精入水中，而后染色， 其顺序如下： 二甲苯→1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100% 酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精 →50％酒精→30％酒精→水→染色 以上各级约需5～10分钟。 • 5.滴加加拿大树胶封藏。 • 6．镜检：
石蜡切片的异常及处理
• 一张理想佳良的切片，除组织固定适当 和染色清晰之外，还应具备：薄、平整， 无皱褶压缩，无裂损抓迹及擦痕，同时 贴片排列密集，整齐位置适当，透明度 好，封片用胶适量，盖玻片端正，无气 泡等。
• 实验二 2、石蜡切片技术—脱水、透明、 浸蜡、包埋
• 一、实验目的： • 掌握制作石蜡切片中脱水、透明、浸蜡、 包埋的基本操作技术。
• 二、实验用品： • 1．实验试剂：35%酒精、50%酒精、 70%酒精、83%酒精、95%酒精、100%酒 精、二甲苯、石蜡。 • 2．实验器具：电光纸、电热恒温箱、烤 片机、解剖器、盆。
• 四、实验步骤： • 1．取材：依据生物组织取材的各项注意 事项。 • 2．固定：卡诺固定液、FAA固定液固定 24小时。 • 3．复水：卡诺固定液（1h）→50%酒精 （1h）→爱氏苏木精染液 • FAA固定液→爱氏苏木精染液
• 4．染色（整染）：爱氏苏木精染液染色， 染色时间视材料不同而有所不同，总之 使材料最后染指红棕色为止，且内外均 染色均匀。对于染不好的材料，可加长 染色时间，还可通过负压，超声波加注 浸剂等方法提高染色效率。时间为1-2天。
• 4．包埋：先提升恒温箱的温度至60℃， 换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、 牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上， 倒入材料，摆放好材料，把标签（正面 向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻 轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆 中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干， 也可在凉水盆中放置过夜。
• 将蜡带轻轻移到涂有水的载玻片上，蜡 片光面应向下贴在载玻片上，依次排列 整齐。留出右端贴标签处。 • ⑤材料展平后，从展片机上取下，稍稍 倾斜留出多余的水分，用吸水纸吸干背 面及周围多余水分，放于烤片机（35℃） 上烤干水分。
• 4.脱蜡：玻片烘干后，须将蜡脱去，才能 染色，脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片 放于盛二甲苯的染缸中纯二甲苯(5-10min) →纯二甲苯(5-10min)
• 5．返蓝：染好的材料，用自来水冲洗， 加2% 氨水使材料变为蓝色，时间也因材 料的不同而有所不同，好返蓝的材料用 水一洗就蓝。
• 附：分染：番红与固绿色法 番红用l％的水溶液，固绿用0.5％的酒精 液(用95％的酒精配制)，染色步骤如下：
• 讨论和注意点： • (1) 用番红和固绿这个组合染成的切片，木化、 栓化和角质的细胞壁，被番红染成鲜红色，纤 维素的细胞璧，被固绿成绿色。就维管束来讲， 木质部染红，韧皮部染绿，区别极清楚。 • (2) 在50％酒精中脱色，需经实践，如脱色不 够，绿色难得染好，脱色太过分，做出来的切 片，红色太淡，甚至于全是绿色，失掉了二色 染法的用意。
石蜡切片中的异常及原因和处理 方法
• 〔注〕：切制石蜡切片遇到障碍大多数 是：（1）刀钝或刀刃受损。（2）蜡块 或切片刀的调整螺旋或是紧固螺旋拧不 紧。因此，有经验的切片者在开始切制 切片之前应习惯地反复核查（1）（2） 这两点。
• 实验二 1、石蜡切片技术—固定、染色
• 一、实验目的： • 掌握制作石蜡切片中固定、染色、返蓝 的基本操作技术
• 二、实验原理： • 石蜡切片法：是用石蜡浸透到组织中， 并包埋组织，然后用旋转切片机将蜡块 切成切片。只是切片中最常用的一种方 法。
• 三、实验用品： • 1．实验材料：瓜叶菊叶柄，长寿花幼茎。 • 2．实验试剂：卡诺固定液、FAA固定液、35% 酒精、50%酒精、70%酒精、83%酒精、95%酒 精、100%酒精、二甲苯、中性树胶、2% 氨水、 爱氏苏木精染液。 • 3．实验器具：解剖器，双面刀片，青霉素小 瓶。
• 三、实验材料 • 幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。
• 四、实验内容与方法 • 石蜡切片法是显微技术上最重要、最常 用的一种方法。它是把材料封埋在石蜡 里面，用旋转切片机切片，可以切出很 薄的切片。凡是精细的工结构，大都用 石蜡切片。全都过程如下：
• 1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒 精 2．封埋 6．切片 7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封
• 三、实验步骤： • 1．修块、粘块、整修的步骤： • ①选取所要切片的材料，从包埋的石蜡块上用 单面刀片切割下来，注意不可损伤包埋的组织。 • ②确定切面的方位，用刀片将石蜡块的四面作 初步的整修。保证材料四周都有石蜡包围。但 不可太多。切面的上、下边平行。
• ③点燃酒精灯，并准备一把旧的解剖刀。 • ④左手大拇指与食指间持整修好的石蜡 块，材料向上用其余三指夹住台木。此 时将解剖刀在酒精灯上加温后，即放在 台木与石蜡块之间，因解剖刀已加温， 遇上两面的石蜡都会融化，可立即将解 剖刀抽出，石蜡块迅速压在台木上。
方法
• ①将展片机温度调整到35℃，保持恒定。 • ②在载玻片上涂蛋白甘油粘片剂。其法是用细 玻璃棒蘸取一小滴粘片剂，加在载玻片的中央， 然后用洗净的手指（无名指）加以涂抹，范围 不要太广，也不要太多，以能贴足够的蜡片为 度。蛋白甘油粘片剂的配方：（不适宜用作蛋 白观察）
• ③将涂粘片剂的载玻片放在展片机上， 滴加蒸馏水数滴，此时若发现水不均匀 分散而聚成滴状，即表示玻片不清洁， 有残留油脂等物在上面。 • ④用解剖刀将蜡带切成小段，每段的长 度应以盖玻片的长度为准，一般应比盖 玻片短约1/5-2/5。分片应从蜡带交界处 分。
• 三、实验步骤： • 1．脱水：35%酒精→50%酒精→70%酒精 →83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。 每级1-2h。70%酒精处可长期保存。 • 2．透明：1/2二甲苯+1/2100%酒精 (1-2h) →纯 二甲苯(1h) →纯二甲苯(1h) • 3．浸蜡：石蜡先置于60℃的温箱中，倒入含 二甲苯及材料的小瓶中置于38℃温箱中，放置 2-4小时。