血涂片、红细胞形态

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红细胞形状异常
球形红细胞 靶形红细胞 镰形红细胞 皱缩红细胞 裂片细胞
椭圆形红细胞 口形红细胞 棘形红细胞 泪滴形红细胞 红细胞形态不整
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血红蛋白充盈度与着色异常
1.低色素性(hypochromic)：红细胞的生理性 中心淡染区扩大,染色淡薄，甚至为环形红细 胞，提示血红蛋白含量明显减少，常见于缺铁 性贫血（IDA）、珠蛋白合成障碍性贫血、铁 幼粒细胞性贫血（SA）和某些血红蛋白病。
推片角度
厚薄适宜，头体尾分明， 细胞分布均匀，边缘整齐， 两边和两端留有一定空隙。
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血滴越大，推片角度越大，速度越快， 血液粘度越高，则血膜越厚。 血滴越小，推片角度越小，速度越慢， 血液粘度越低，则血膜越薄。
如果取血量较少，在推血片时应如何才能使血膜 的厚薄合适？ 对于严重贫血患者，应如何推制血片？
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推制适当的血膜
角度大, 速度快, 太厚, 太短
推片不光滑，呈毛刷状
用力不均，呈搓板状
血量过多，无尾
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玻片油腻，有空泡
1.灰白层涂片法 抗凝血离心，取灰白层涂片。 用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑 狼疮细胞(LEC)检查。
2.厚血涂片法 用于疟原虫、微丝蚴的检查
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血涂片的染色
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红细胞形状异常
7．皱缩红细胞：也称钝锯齿形红细胞（echinocyte）， 主要由于高渗、制片不当等原因造成，红细胞周边呈钝 锯齿状排列紧密，大小相等，长短一致。
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皱缩红细胞
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红细胞形状异常
8．泪滴形红细胞（tear drop cell）：形如 泪滴或梨状，正常人偶见。多见于骨髓纤维化。
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卡波环
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红细胞内出现异常结构
4．寄生虫。如疟原虫的环状体。
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红细胞内出现异常结构
嗜碱性点彩红细胞 豪焦小体 卡波环 寄生虫
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红细胞排列异常
1．红细胞缗钱状形成（rouleaux formation）： 当血浆纤维蛋白原和球蛋白含量增高时，可使红 细胞表面负电荷降低，减弱红细胞之间的相互排 斥力而互相连接呈缗钱状。常见于多发性骨髓瘤。
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嗜多色性（polychromic）
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பைடு நூலகம்
血红蛋白充盈度与着色异常
4．细胞着色不一（anisochromia）：红细胞着色 不一致，血红蛋白充盈度偏离较大，如同时出现 低色素性和正常色素性红细胞，常见于铁粒幼细 胞性贫血（SA） 。
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血红蛋白充盈度与着色异常
低色素性(hypochromic) 高色素性（hyperchromic） 细胞着色不一（anisochromia） 嗜多色性（polychromic）
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红细胞内出现异常结构
2．豪焦小体（howell-jollys body）：又称染色 质小体。位于成熟或幼红细胞的胞质中，圆形， 有1～2μm大小，染成紫红色，有1至多个，是核 的残余物。常见于巨幼细胞贫血、溶血性贫血、 脾切除后和白血病。
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豪焦小体
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红细胞内出现异常结构
3．卡波环（Cabot ring）：胞质内变性脂蛋白所 致。位于成熟或幼稚红细胞的胞质中，呈圆形或8 字形的细线圈状结构。见于脾切除后或巨幼细胞 性贫血。常与豪周小体并存 。
1.新玻片上有游离碱质，须清洗后使用。 2.用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去 染料和油污。 3.使用时切勿用手触及玻片表面。
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＊ 手工推片法
薄血涂片法 灰白层涂片法 厚血涂片法
＊ 自动血液涂片法
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手工薄血推片法
推片
手持玻片推制血膜
用推片从血滴前方接触血滴
吸附血液成一线
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推完血片，迅速干燥
1.血膜正面朝上，干透后再染色。 2.染色时间与染液浓度、室温和细胞多少有关。
3.染色过程中防止蒸发沉淀。
4.冲洗时应以流水冲洗，冲洗时间不能太久。
5.若有染料残渣，可用少量甲醇溶解，并立即 用流水冲洗。
6.复染时应先加缓冲液再加染液，或加染液与 缓冲液的混合液。
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1．载玻片要清洁。 2．制备良好的血涂片。 3．选择抗凝剂。 4．处理白细胞浓度较低的标本。 5．血细胞比容与涂片关系。 6．新配置染液的处理。 7．染色过深、过浅的处理。
外周血细胞形态学检验
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1.血涂片的制备：手工推片法 2.血涂片的染色：瑞氏染色法 3.红细胞的形态检查
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将血标本均匀地涂抹在清洁干燥的载 玻片上，经染色后在显微镜下检查，是血液 细胞形态学检查的基本方法，临床应用广泛， 特别是对于各种贫血及血液病的诊断和鉴别 诊断具有重要价值。
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低色素性(hypochromic)
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血红蛋白充盈度与着色异常
2．高色素性（hyperchromic）：红细胞的生理性 中心淡染区消失，整个红细胞着色较深，而且胞 体也大，区别于球形红细胞，MCH增高。最常见于 巨幼红细胞性贫血（MA）。
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高色素性（hyperchromic）
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靶形红细胞
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红细胞形状异常
4．口形红细胞（stomatocyte）：红细胞中央苍 白区呈扁平状，颇似张开的嘴巴或鱼口。血涂片 中口形红细胞增多，见于遗传性口形红细胞增多 症（HST），常>10%。也可见于酒精中毒、小儿 消化系统疾病引起的贫血等。
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口形红细胞
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红细胞形状异常
油镜观：察红细胞形态。
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正常红细胞形态
双凹圆盘形，淡桔红色，中央 1/3为生理性淡染区，呈正常色素性。红 细胞直径为6.7～7.7μm，平均直径 7.2μm左右，厚约2μm。无核，胞质内无 异常结构。除健康人外，还见于急性失血、 再生障碍性贫血和部分白血病。
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正常红细胞 形态
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红细胞内出现异常结构
1．嗜碱性点彩红细胞（basophilic stippling cell）：简称点彩红细胞。在瑞氏染色条件下， 胞质内出现嗜碱性灰蓝色点状物的红细胞。属于 未完全红细胞，其颗粒大小不一、数量不等。重 金属中毒者增多，常作为铅中毒的诊断筛选试验。
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嗜碱性点彩红细胞
异常红细胞形态
红细胞大小异常 红细胞形状异常 血红蛋白充盈度与着色异常 红细胞内出现异常结构 红细胞排列异常 有核红细胞
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红细胞大小异常
1．小红细胞( microcyte )：直径<6μm。血 片中出现大量的染色过浅的小红细胞，提示血 红蛋白生成障碍，常见于缺铁性贫血（IDA）、 珠蛋白生成障碍性贫血。遗传性球形红细胞增 多症（HS），血红蛋白充盈良好，生理性中心 淡染区消失。
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红细胞形态检查
在贫血或其他血液系统疾病时 红细胞除有数量变化外，往往伴有形态 改变，表现在红细胞大小、形状、染色 性质和内涵物的异常。因此，红细胞形 态检查对贫血的诊断和鉴别诊断有重要 的临床价值。
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制备血涂片 染色 镜检
检查区域：体尾交界处，细胞分布均匀， 红细胞紧密排列但不
重叠低。倍镜：估计细胞分布和染色情况，浏 览全片是否存在异常细胞。
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小红细胞( microcyte )
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红细胞大小异常
2．大红细胞( macrocyte)：直径>10μm。 最常见于缺乏叶酸和维生素B12所致的巨幼 细胞性贫血（MA）。也可见于溶血性贫血 （HA）、骨髓增生异常综合症（MDS）。
3．巨红细胞(megalocyte)：直径>15μm。 常见于巨幼细胞性贫血（MA）和骨髓增生 异常综合症（MDS）。
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红细胞形状异常
1．球形红细胞(spherocyte)：直径小于正常， 厚度增加大于2μm。无中心淡染区。常见于遗 传性球形红细胞增多症（HS）和伴有球形细胞 增多的其他溶血性贫血如AIHA、HDN等。
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球形红细胞
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红细胞形状异常
2．椭圆形红细胞（elliptocyte）：细胞呈卵 圆形、杆状，长度可大于宽度3～4倍。这类红 细胞成熟后在高渗、等渗、低渗及正常血清内， 其椭圆形保持不变。常见于遗传性椭圆形红细 胞增多症（HE），可高达25%～75%（正常人为 1%）。也见于巨幼细胞贫血。
5．镰形红细胞（sickle cell）：呈狭长形，形 如镰刀，两端尖锐，正常情况下少见。主要见于 HbS病，是由于红细胞内存在异常HbS所致。在缺 氧的情况下，异常HbS溶解度降低，形成狭长的 结晶体，使红细胞变形。
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镰形红细胞
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红细胞形状异常
6．棘形红细胞（acanthocyte）：红细胞表面有 针状或指状突起，间距不规则，突起的长度和宽 度可不一。在β-脂蛋白缺乏症病人的血涂片中出 现较多。也可见于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾 病、尿毒症、溶性性贫血及重金属中毒。应与皱 缩红细胞区别。
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红细胞缗钱状形成
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红细胞排列异常
2．红细胞自凝现象（self－agglutinating）： 血涂片上红细胞出现聚集、凝集成堆或成团现象， 多见于冷凝集素综合症和自身免疫性溶血性贫血 等。注意与血涂片较厚引起的红细胞堆积相区别， 真正的红细胞自凝在涂片较薄处也存在 。
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血红蛋白充盈度与着色异常
3．嗜多色性（polychromic）：属于尚未成熟的 红细胞，呈淡灰蓝色或灰红色，胞体大，相当于 活体染色的网织红细胞。由于胞质中含有多少不 等嗜碱性物质RNA与血红蛋白并存，因此呈嗜多色 性。嗜多色性红细胞增多提示骨髓增生活跃，见 于急性失血性贫血和溶血性贫血。
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红细胞形状异常
10．红细胞形态不整（poikilocyte）：指红 细胞形态发生无规律的明显改变。如泪滴状、 梨形、棍棒形及新月形。最常见于具有巨幼细 胞性贫血（MA）。可能是由于贫血严重而造血 原料不足，在骨髓内粗制滥造所致。也可能是 红细胞脆性较大，在推片时碎裂所致 。
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红细胞形态不整
染色的目的是使细胞膜、细胞浆、 胞浆中颗粒及细胞核等主要结构染上特定 的颜色，以便于显微镜下观察与识别。
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一、瑞氏染色法（Wright’s stain）
对胞浆和中性颗粒染色较好，对胞核稍差。
二、吉姆萨染色法（Giemsa’s stain）
对胞浆和中性颗粒染色较差，对胞核和寄 生虫着色较好。
三、瑞氏-吉姆萨复合染色法
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1.用玻璃笔在血膜两端划线。 2.瑞氏染液覆盖血膜，染 0.5～1min。 3.加等量或稍多的缓冲液，混匀，
染5～10min。 4.流水冲去染液，干燥后镜检。
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正常血膜外观为淡紫红色。 镜下RBC和嗜酸性颗粒染粉红色，嗜碱 性颗粒染紫黑色，中性颗粒染淡紫红 色，细胞核染紫红色。
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泪滴形红细胞
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红细胞形状异常
9．裂片细胞（schistocyte）：为红细胞碎片 或不完整的红细胞，系红细胞通过管腔狭小的 微血管受牵拉、挤压所致。有各种形态如刺形、 盔形、三角形及扭转形等。正常人血片中裂片 红细胞<2%。增多见于弥散性血管内凝血 （DIC）、微血管病性溶血性贫血（MHA）。
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椭圆形红细胞
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红细胞形状异常
3．靶形红细胞（target cell）：红细胞中心部 位染色较深，其周围为苍白区域，而细胞边缘又 深染，形如射击之靶。常见于各种低色素贫血 （主要是地中海贫血，珠蛋白生成障碍性贫血）。 可能因HbA含量贫乏而又分布不均所致。应注意 与在血涂片制作中未及时固定而引起的改变相区 别。
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大红细胞 巨红细胞
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红细胞大小异常
4．红细胞大小不均(anisocytosis)：指 红细胞之间直径相差一倍以上。见于严重 的增生性贫血的血涂片中。巨幼细胞性贫 血尤为明显，与骨髓造血紊乱有关。
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红细胞大小不均
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红细胞大小异常
小红细胞( microcyte ) 大红细胞( macrocyte) 巨红细胞(megalocyte) 红细胞大小不均 (anisocytosis)
2 .嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性美兰 结合，染成紫色或蓝色，称为嗜碱性物质。
3.中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合，染 成紫红色，称为中性物质。
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pH对细胞染色的影响
在酸性环境中染色偏红；在 碱性环境中染色偏蓝。因此要求用磷 酸盐缓冲液，使染色环境维持在 6.4～6.8之间，以达到满意的染色效 果。
取二者之长，染色效果好。
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瑞氏染色法
染料：酸性染料伊红和碱性染料美兰（亚甲蓝） 的复合染料。亚甲蓝氧化为次级染料天
青。 溶剂：甲醇。溶解 + 固定。 磷酸盐缓冲液（PBS）：pH6.4～6.8
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染色原理
1 .血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，与酸性伊红 结合染成粉红色，称为嗜酸性物质。