枯草芽孢杆菌的活性与环境因子的相关性研究_阎斌伦
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参考文献
[ 1] 江河 , 汪留全 , 等 . 益生菌制剂 在河蟹养殖 中的应用 研究 . 水利 渔 业 , 2003, 23( 5) : 46~ 48 [ 2] 吕军仪 , 等 . 有益微生物在大海马健康养殖中的应用研究 . 中国水 产科学 . 2003, 10( 1) : 40~ 49 [ 3] 周德庆 . 微生物学教程 . 北京 : 高等教育出版社 . 1991, 193~ 199 [ 4] 熊宗贵 . 发酵工艺学原理. 北京 : 中国中医药科技出版社 . 1991
值在 7 5~ 8 5 之间, 以利于枯草芽孢杆菌发挥最大 的效力。 3 5 从药敏试验中可以看出, 大部分常用的抗菌素 对枯草芽孢杆菌都有较强的抑制作用, 因此在使用 微生态制剂后, 应注意纠正以往在水体、 饵料中添加 抗生素防病的做法 , 如果疾病已经发生, 必须用抗菌 素治疗 , 应在使用抗生素后 4~ 5 d, 再重新投放一次 初始剂量的微生态制剂 , 以确保枯草芽孢杆菌在水 体中的绝对优势地位。 3 6 本实验仅观察了实验室条件下单一环境因素 的变化对芽孢杆菌生长的影响, 而在实际的养殖水 体中, 是多个环境因子共同作用 , 对枯草芽孢杆菌的 影响将更加复杂多变 , 对其中更多的问题有待以后 作进一步的研究。
-
地鱼池的水型。正是盐碱地土壤的影响 , 使黄河的 碳酸水变成了氯化水。不仅如此 , 实验还表明, 在盐 碱地一个确定的池塘, 水型是确定的 , 不随盐度的周 年变化而变化。黄河下游 Cl 型与 Cl 型的盐碱地 鱼池均有利于发展水产养殖。
参考文献
[ 1] 任曰达 , 樊国平 , 等 . 低洼盐碱 地渔业开发 利用技术 研究 . 齐鲁 渔 业 , 2000, 17( 2) : 11~ 12 [ 2] 薄学峰 , 张汉文 , 等 . 盐碱地低 盐水养殖南 美白对虾 技术 . 齐鲁 渔 业 , 2004, 21( 3) : 23~ 24 [ 3] 洪楠 , 林爱华 , 等 . S PSS f or Windows 统计分析教程 . 北京 : 电子 工 业出版社 , 2000. 203~ 320 [ 4] 湛江水产专科学校 . 淡水养殖水化学 . 北京 : 农业出版社 , 1980. 35 ~ 250 [ 5] 雷衍之 , 于淑敏 , 等 . 无锡市河 1983, 7( 3) : 185~ 199 [ 6] 雷衍之 , 董双林 , 等 . 碳酸盐碱 度对鱼类毒 性作用的 研究 . 水产 学 报 , 1985, 9( 2) : 171~ 183 [ 7] 朱学宝 , 施正蜂 . 中国鱼池生 态学研究 . 上 海 : 上海科 学技术出 版 社 , 1995. 184~ 198 [ 8] 刘建康 . 高级水生生物学. 北京 : 科学出版社 , 1999. 13~ 51 [ 9] 胡传林 , 黄祥飞 . 保 安湖渔 业生态 和渔业 开发技 术研究 文集 . 北 京 : 科学出版社, 1991. 16~ 30 口高产鱼池水质研究 . 水产学报 ,
淡水渔业 2005 年第 35 卷第 1 期
枯草芽孢杆菌的活性与环境因子的相关性研究
阎斌伦
1
王笃彩
1
李士虎
1
徐家涛
1
戴
岩
2
徐国成
1
时冬晴
1
( 1 江苏省海洋生物技术重点建设实验室 , 淮海工学院, 连云港 222005; 2 江苏省赣榆县海洋源水产苗种有限公司 222110)
摘 要 通过改变水体的盐度、温度、 pH 值等环境因子的药物敏感试验 , 观察环境 因子的改 变及不同抗
生素对枯草芽孢杆菌生长的影响。结果表明 , 枯草芽孢杆 菌的活性 受环境 因子及抗 生素的 影响较 大 , 酸性环 境、低温及多种常用抗 生 素对 芽 孢杆 菌 有明 显 的 抑制 作 用 , 其 最 适生 长 环境 是 : pH 7 5 ~ 8 5, 温 度 6~ 30 , 而盐度对枯草芽孢杆菌的生长影响较小。 关键词 枯草芽孢杆菌 , 活性 , 环境因子 , 抗生素
图2
温度对枯草芽孢杆菌生长的影响
从图 2 可以看出 , 温度对芽孢杆菌的生长影响 比较明显。因为温度是影响微生物生长的最重要因 素之一 , 具体表现在温度的高低与发酵中的酶反 应速率、 氧在培养液的溶解度和传递速率等密切相 14
[ 3]
Leabharlann Baidu
抑菌直径 ( mm ) 0( R) 0( R) 34( S ) 36( S ) 26( S ) 12( M ) 10( M ) 26( S ) 26( S ) 22( S ) 12( M )
( 上接第 24 页) 和钾需要量较大 , 即使由干旱造成 的盐度增加 , 但这三种离子仍不能随盐度的增加而 增加。另外 , HCO3 在 这个季节 , 还需要消耗 一部 分用于调节 pH 值 , 所以它与盐度的负相关 系数达 到- 0 856。 3 3 SO 4 2- 、 Ca 2+ 、 Mg 2+ 与亚硝酸氮都有较高的负 相关系数, 使得该池塘的亚硝酸氮一直处于一个较 低的水平。即使铵氮、 硝酸氮处于较高的水平 , 亚硝 酸氮仍然很低, 这一性能对摄食人工配合饲料的高 产水生生物来说无疑是一有利条件 , 增加了提高产 量的潜在能力。
注 : S: 表示敏感 ( d > 15 mm) R: 不敏感 ( d < 10 mm)
M : 中度敏感 ( 15 mm> d > 10 mm )
从表中可以看出, 除青霉素、 氨苄青霉素、 复方 新诺明、 四环素对芽孢杆菌的生长无影响外, 大部分
常用的抗生素对芽孢杆菌均有抑制作用, 其中氧哌 嗪青霉素、 先锋霉素 V 、 先锋孟多、 菌必治、 先锋必、 新生霉素、 红霉素、 螺旋霉素、 环丙沙星对芽孢杆菌 的生长有强大的抑制作用。 3 讨论 3 1 由本实验可知, 枯草芽孢杆菌的生长受温度、 盐 度、 pH 值及抗生素等外界因素的影响明显 , 其作用的 发挥并不完全取决于枯草芽孢杆菌自身的数量及活 性, 要想最大限度地发挥其修复和保持微生态环境平 衡的作用, 使用时一定要扬长避短, 趋利避害。 3 2 枯草芽孢杆菌是一种广盐性菌群 , 无论淡水海 水均可生长, 在海水中生长繁殖更快, 因此淡水养殖 时, 可以适当增加枯草芽孢杆菌的使用量。 3 3 建议在春初不用枯草芽孢杆菌。原因是 : 一方 面 20 以下的水温对枯草芽孢杆菌的生长不利, 即 使使用也很难发挥应有的作用 ; 另一方面, 此阶段多 处于养殖初期, 养殖动 物个体较小 , 投饵及残 饵均 少, 再加上水温低、 沉积的有机物不易腐败变质 , 水 环境的平衡尚能自我保持。 3 4 加强水体中 pH 值的监测, 及时调整, 确保 pH
从图 1 可以看出 , 芽孢杆菌对盐度的适应范围 很广, 在 0~ 35 的盐度范围内均可生长, 但当盐 度超过 35 时芽孢杆菌的生长受到抑制。 2 2 温度对枯草芽孢杆菌生长的影响
药敏试验结果
抗菌药物 新生霉素 强力霉素 复方新诺明 乙酰螺旋霉素 红霉素 四环素 氟哌酸 环丙沙星 利福平 氟嗪酸 抑菌直径 ( mm) 26( S) 20( S) 0( R ) 28( S) 36( S) 0( R ) 16( S) 24( S) 20( S) 18( S)
图1 盐度对枯草芽孢杆菌生长的影响
中营养物质的离子化程度 , 从而影响微生物对营养 物质的吸收, 而且还影响了代谢反应中各种酶的活 性[ 3] 。 2 4 枯草芽孢杆菌对抗菌素的敏感程度
表1
抗菌药物 青霉素 G 氨苄青霉素 氧哌嗪青霉素 先锋霉素 V 先锋孟多 头孢噻吩 头孢呋肟 菌必治 先锋必 链霉素 妥布霉素
- 2
关 , 从而影响菌体生产和产物的合成 。从图 2 可 以看出 , 低温不利于芽孢杆菌的生长与繁殖; 当温度 为 22~ 34 时芽孢杆菌的生长速率明显加快, 而以 26~ 30 增长最快 , 说明 26~ 30 是芽孢杆菌的 最适宜生长温度; 当温度超过 34 后, 生长速率明 显下降 , 迟滞期延长, 可见过高的水温对芽孢杆菌的 生长也将产生抑制作用。此外, 从图中还可以看出 随着时间推移, 芽孢杆菌的增长速率放缓 , 可能是培 养基中营养物质逐渐被消耗 , 以及细菌在代谢过程 中分泌出更多的物质, 从而抑制了自身的活性。 2 3 pH 值对枯草芽孢杆菌生长的影响
收稿日期 : 2004- 11- 02 项目资助 : 江苏省教育厅高校高新技术产业发展项目 ( JH02- 061) 。
13
7 5、 8 0 、8 5、 9 0、 9 5, 把培养基放入三角烧 瓶进行高温灭菌 , 待冷却后, 每个烧瓶中分别接入 2 108 个 / mL 枯草芽孢杆菌, 放入 25 恒温培养 箱中振荡培养, 每 3 h 进行一次芽孢杆菌记数, 每 个 pH 值 梯度记录 2 次, 取平均值 , 连续观 察 24 h。 1 2 4 抗生素对芽孢杆菌生长的影响 取 500 mL 三角烧瓶一个, 加 2216E 液体培养 基 250 mL , 经高温灭菌后, 接入 2 108 个/ m L 的 枯草芽孢杆菌 , 25 10
图 3 pH 值对枯草芽孢杆菌生长的影响
从图 3 中可以看出 , 当培养基初始 pH 值 < 6 5 时细菌数明显减少 , pH 值在 7 5~ 8 5 之间时, 细菌 增长迅速, 而当 pH 值> 9 时 , 细菌生长又受到抑制, 可见芽孢杆菌较适宜在弱碱性环境中生长 , 据此可 以认为 pH 值对芽孢杆菌的生长, 能产生较明显的 影响。主要是由于培养基中的 pH 值影响了培养基
随着细菌耐药性的不断增加, 对付频繁暴发的 各种疾病 , 抗生素已显得力不从心 , 人们认识到对 养殖水体进行掠夺式的开发, 使养殖水体的微生态 环境遭受毁灭性的破坏, 是导致疾病发生的根本原 因, 并开始反思集约化、规模化养殖的得与失。修 复、保持微生态 环境的平衡 , 成为防病的首 要任 务。微生态制剂正是基于这样的目的才研制开发出 来的, 并且在养殖生产中取得了良好的效 果 。 人们在欣喜找到克敌致胜的法宝时 , 却很少有人关 注微生态制剂自身的弱点 , 微生态制剂是由一种或 数种有活性的细菌组成 , 并非是无坚不摧的利器 , 其自身活性受多种环境因子的制约。鉴于此 , 本试 验系统地观察了养殖水体的盐度、温度、 pH 值及 抗生素对微生态制剂之一的枯草芽孢杆菌活性的影 响, 以期为微生态制剂在水产养殖生产中的合理使 用提供理论依据。 1 材料与方法 1 1 实验材料 实验用活菌生物净水剂由市场购得 , 生产批号
为 601216305516, 产 品性状为黄色 片剂, 其主 要 成分为枯草芽孢杆菌 , 有效菌总数 > 1 1012 个/ g 。 基础培养基为 2216E 海水细菌培养基 , 配方 : 蛋白胨 5 0 g 、酵母 浸膏 粉 10 g 、磷 高铁 0 1 g 、 pH 7 2~ 7 6、海水 1000 mL , 实验所用培养基根 据需要在此基础上进行调整。
[ 4]
培养 15 h 后取出, 做 10- 1 、 、 10
- 5
、10
- 3
、 10
- 4
、 10
- 6
稀 释度 , 取 10
- 6
稀释液 1 mL 注入 2216E 固体无菌平板中 , 无菌涂 布, 共做 5 个同样的平板 , 然后在培养基表面贴上 0 5 cm 0 5 cm 的各种抗菌素药敏试纸 , 将培养 皿放入 25 的恒温箱中培养, 24 h 后取出, 测量 各种抗菌素抑菌圈的大小 , 并记录。 2 结果 2 1 盐度对枯草芽孢杆菌生长的影响
[ 1, 2]
药敏试纸由杭州天和微生物试剂有限公司生产。 实验仪器: 三角烧瓶, 培养皿 , 恒温培养箱, 盐度 计 , pH 计, 计数板 , 计数器, Olympus 显微镜。 1 2 实验方法和步骤 试验中枯草芽孢杆菌的计数采用细菌直接计数 ( DVC) 方法。 1 2 1 不同盐度梯度对芽孢杆菌生长的影响 取 8 个容积为 500 mL 的三角烧瓶, 分别加入 已配制好的 2216E 液体培养基 ( 纯海水由蒸馏水和 NaCl 代替 ) , 培养基盐度 梯度分别设置 为 0 、 5、 10、 15 、 20、 25、 30、 35, 并进行高温灭菌, 冷却后 , 并每个 三角烧瓶中分别接入 2 108 个 / mL 的枯草芽孢杆 菌 , 将三角烧瓶放入 25 的恒温培养箱 中, 每 3 h 对枯草芽孢杆菌记数一次, 每个盐度计数 2 次, 取平 均值, 连续观察 24 h。 1 2 2 温度对芽孢杆菌生长的影响 取 5 个 500 m L 三 角 烧瓶 , 加入 已 配 制好 的 2216E 液体培养基 , 进行高温灭菌。冷却后, 每个烧 瓶中分别接入 2 108 个 / mL 的枯草芽孢杆菌 , 置于 恒温箱中振荡培养, 温度分别设置为 18 、 22 、 26 、 30 、 34 , 每小时进行一次芽孢杆菌记数, 每个温度记录 2 次 , 取平均值, 连续观察 24 h。 1 2 3 pH 值对芽孢杆菌生长的影响 配制 2216E 液体培养基, 用 H Cl 和 NaOH 调 节 pH 值 , 将 pH 值 梯度 设 置为 6 0、 6 5、 7 0、
[ 1] 江河 , 汪留全 , 等 . 益生菌制剂 在河蟹养殖 中的应用 研究 . 水利 渔 业 , 2003, 23( 5) : 46~ 48 [ 2] 吕军仪 , 等 . 有益微生物在大海马健康养殖中的应用研究 . 中国水 产科学 . 2003, 10( 1) : 40~ 49 [ 3] 周德庆 . 微生物学教程 . 北京 : 高等教育出版社 . 1991, 193~ 199 [ 4] 熊宗贵 . 发酵工艺学原理. 北京 : 中国中医药科技出版社 . 1991
值在 7 5~ 8 5 之间, 以利于枯草芽孢杆菌发挥最大 的效力。 3 5 从药敏试验中可以看出, 大部分常用的抗菌素 对枯草芽孢杆菌都有较强的抑制作用, 因此在使用 微生态制剂后, 应注意纠正以往在水体、 饵料中添加 抗生素防病的做法 , 如果疾病已经发生, 必须用抗菌 素治疗 , 应在使用抗生素后 4~ 5 d, 再重新投放一次 初始剂量的微生态制剂 , 以确保枯草芽孢杆菌在水 体中的绝对优势地位。 3 6 本实验仅观察了实验室条件下单一环境因素 的变化对芽孢杆菌生长的影响, 而在实际的养殖水 体中, 是多个环境因子共同作用 , 对枯草芽孢杆菌的 影响将更加复杂多变 , 对其中更多的问题有待以后 作进一步的研究。
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地鱼池的水型。正是盐碱地土壤的影响 , 使黄河的 碳酸水变成了氯化水。不仅如此 , 实验还表明, 在盐 碱地一个确定的池塘, 水型是确定的 , 不随盐度的周 年变化而变化。黄河下游 Cl 型与 Cl 型的盐碱地 鱼池均有利于发展水产养殖。
参考文献
[ 1] 任曰达 , 樊国平 , 等 . 低洼盐碱 地渔业开发 利用技术 研究 . 齐鲁 渔 业 , 2000, 17( 2) : 11~ 12 [ 2] 薄学峰 , 张汉文 , 等 . 盐碱地低 盐水养殖南 美白对虾 技术 . 齐鲁 渔 业 , 2004, 21( 3) : 23~ 24 [ 3] 洪楠 , 林爱华 , 等 . S PSS f or Windows 统计分析教程 . 北京 : 电子 工 业出版社 , 2000. 203~ 320 [ 4] 湛江水产专科学校 . 淡水养殖水化学 . 北京 : 农业出版社 , 1980. 35 ~ 250 [ 5] 雷衍之 , 于淑敏 , 等 . 无锡市河 1983, 7( 3) : 185~ 199 [ 6] 雷衍之 , 董双林 , 等 . 碳酸盐碱 度对鱼类毒 性作用的 研究 . 水产 学 报 , 1985, 9( 2) : 171~ 183 [ 7] 朱学宝 , 施正蜂 . 中国鱼池生 态学研究 . 上 海 : 上海科 学技术出 版 社 , 1995. 184~ 198 [ 8] 刘建康 . 高级水生生物学. 北京 : 科学出版社 , 1999. 13~ 51 [ 9] 胡传林 , 黄祥飞 . 保 安湖渔 业生态 和渔业 开发技 术研究 文集 . 北 京 : 科学出版社, 1991. 16~ 30 口高产鱼池水质研究 . 水产学报 ,
淡水渔业 2005 年第 35 卷第 1 期
枯草芽孢杆菌的活性与环境因子的相关性研究
阎斌伦
1
王笃彩
1
李士虎
1
徐家涛
1
戴
岩
2
徐国成
1
时冬晴
1
( 1 江苏省海洋生物技术重点建设实验室 , 淮海工学院, 连云港 222005; 2 江苏省赣榆县海洋源水产苗种有限公司 222110)
摘 要 通过改变水体的盐度、温度、 pH 值等环境因子的药物敏感试验 , 观察环境 因子的改 变及不同抗
生素对枯草芽孢杆菌生长的影响。结果表明 , 枯草芽孢杆 菌的活性 受环境 因子及抗 生素的 影响较 大 , 酸性环 境、低温及多种常用抗 生 素对 芽 孢杆 菌 有明 显 的 抑制 作 用 , 其 最 适生 长 环境 是 : pH 7 5 ~ 8 5, 温 度 6~ 30 , 而盐度对枯草芽孢杆菌的生长影响较小。 关键词 枯草芽孢杆菌 , 活性 , 环境因子 , 抗生素
图2
温度对枯草芽孢杆菌生长的影响
从图 2 可以看出 , 温度对芽孢杆菌的生长影响 比较明显。因为温度是影响微生物生长的最重要因 素之一 , 具体表现在温度的高低与发酵中的酶反 应速率、 氧在培养液的溶解度和传递速率等密切相 14
[ 3]
Leabharlann Baidu
抑菌直径 ( mm ) 0( R) 0( R) 34( S ) 36( S ) 26( S ) 12( M ) 10( M ) 26( S ) 26( S ) 22( S ) 12( M )
( 上接第 24 页) 和钾需要量较大 , 即使由干旱造成 的盐度增加 , 但这三种离子仍不能随盐度的增加而 增加。另外 , HCO3 在 这个季节 , 还需要消耗 一部 分用于调节 pH 值 , 所以它与盐度的负相关 系数达 到- 0 856。 3 3 SO 4 2- 、 Ca 2+ 、 Mg 2+ 与亚硝酸氮都有较高的负 相关系数, 使得该池塘的亚硝酸氮一直处于一个较 低的水平。即使铵氮、 硝酸氮处于较高的水平 , 亚硝 酸氮仍然很低, 这一性能对摄食人工配合饲料的高 产水生生物来说无疑是一有利条件 , 增加了提高产 量的潜在能力。
注 : S: 表示敏感 ( d > 15 mm) R: 不敏感 ( d < 10 mm)
M : 中度敏感 ( 15 mm> d > 10 mm )
从表中可以看出, 除青霉素、 氨苄青霉素、 复方 新诺明、 四环素对芽孢杆菌的生长无影响外, 大部分
常用的抗生素对芽孢杆菌均有抑制作用, 其中氧哌 嗪青霉素、 先锋霉素 V 、 先锋孟多、 菌必治、 先锋必、 新生霉素、 红霉素、 螺旋霉素、 环丙沙星对芽孢杆菌 的生长有强大的抑制作用。 3 讨论 3 1 由本实验可知, 枯草芽孢杆菌的生长受温度、 盐 度、 pH 值及抗生素等外界因素的影响明显 , 其作用的 发挥并不完全取决于枯草芽孢杆菌自身的数量及活 性, 要想最大限度地发挥其修复和保持微生态环境平 衡的作用, 使用时一定要扬长避短, 趋利避害。 3 2 枯草芽孢杆菌是一种广盐性菌群 , 无论淡水海 水均可生长, 在海水中生长繁殖更快, 因此淡水养殖 时, 可以适当增加枯草芽孢杆菌的使用量。 3 3 建议在春初不用枯草芽孢杆菌。原因是 : 一方 面 20 以下的水温对枯草芽孢杆菌的生长不利, 即 使使用也很难发挥应有的作用 ; 另一方面, 此阶段多 处于养殖初期, 养殖动 物个体较小 , 投饵及残 饵均 少, 再加上水温低、 沉积的有机物不易腐败变质 , 水 环境的平衡尚能自我保持。 3 4 加强水体中 pH 值的监测, 及时调整, 确保 pH
从图 1 可以看出 , 芽孢杆菌对盐度的适应范围 很广, 在 0~ 35 的盐度范围内均可生长, 但当盐 度超过 35 时芽孢杆菌的生长受到抑制。 2 2 温度对枯草芽孢杆菌生长的影响
药敏试验结果
抗菌药物 新生霉素 强力霉素 复方新诺明 乙酰螺旋霉素 红霉素 四环素 氟哌酸 环丙沙星 利福平 氟嗪酸 抑菌直径 ( mm) 26( S) 20( S) 0( R ) 28( S) 36( S) 0( R ) 16( S) 24( S) 20( S) 18( S)
图1 盐度对枯草芽孢杆菌生长的影响
中营养物质的离子化程度 , 从而影响微生物对营养 物质的吸收, 而且还影响了代谢反应中各种酶的活 性[ 3] 。 2 4 枯草芽孢杆菌对抗菌素的敏感程度
表1
抗菌药物 青霉素 G 氨苄青霉素 氧哌嗪青霉素 先锋霉素 V 先锋孟多 头孢噻吩 头孢呋肟 菌必治 先锋必 链霉素 妥布霉素
- 2
关 , 从而影响菌体生产和产物的合成 。从图 2 可 以看出 , 低温不利于芽孢杆菌的生长与繁殖; 当温度 为 22~ 34 时芽孢杆菌的生长速率明显加快, 而以 26~ 30 增长最快 , 说明 26~ 30 是芽孢杆菌的 最适宜生长温度; 当温度超过 34 后, 生长速率明 显下降 , 迟滞期延长, 可见过高的水温对芽孢杆菌的 生长也将产生抑制作用。此外, 从图中还可以看出 随着时间推移, 芽孢杆菌的增长速率放缓 , 可能是培 养基中营养物质逐渐被消耗 , 以及细菌在代谢过程 中分泌出更多的物质, 从而抑制了自身的活性。 2 3 pH 值对枯草芽孢杆菌生长的影响
收稿日期 : 2004- 11- 02 项目资助 : 江苏省教育厅高校高新技术产业发展项目 ( JH02- 061) 。
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7 5、 8 0 、8 5、 9 0、 9 5, 把培养基放入三角烧 瓶进行高温灭菌 , 待冷却后, 每个烧瓶中分别接入 2 108 个 / mL 枯草芽孢杆菌, 放入 25 恒温培养 箱中振荡培养, 每 3 h 进行一次芽孢杆菌记数, 每 个 pH 值 梯度记录 2 次, 取平均值 , 连续观 察 24 h。 1 2 4 抗生素对芽孢杆菌生长的影响 取 500 mL 三角烧瓶一个, 加 2216E 液体培养 基 250 mL , 经高温灭菌后, 接入 2 108 个/ m L 的 枯草芽孢杆菌 , 25 10
图 3 pH 值对枯草芽孢杆菌生长的影响
从图 3 中可以看出 , 当培养基初始 pH 值 < 6 5 时细菌数明显减少 , pH 值在 7 5~ 8 5 之间时, 细菌 增长迅速, 而当 pH 值> 9 时 , 细菌生长又受到抑制, 可见芽孢杆菌较适宜在弱碱性环境中生长 , 据此可 以认为 pH 值对芽孢杆菌的生长, 能产生较明显的 影响。主要是由于培养基中的 pH 值影响了培养基
随着细菌耐药性的不断增加, 对付频繁暴发的 各种疾病 , 抗生素已显得力不从心 , 人们认识到对 养殖水体进行掠夺式的开发, 使养殖水体的微生态 环境遭受毁灭性的破坏, 是导致疾病发生的根本原 因, 并开始反思集约化、规模化养殖的得与失。修 复、保持微生态 环境的平衡 , 成为防病的首 要任 务。微生态制剂正是基于这样的目的才研制开发出 来的, 并且在养殖生产中取得了良好的效 果 。 人们在欣喜找到克敌致胜的法宝时 , 却很少有人关 注微生态制剂自身的弱点 , 微生态制剂是由一种或 数种有活性的细菌组成 , 并非是无坚不摧的利器 , 其自身活性受多种环境因子的制约。鉴于此 , 本试 验系统地观察了养殖水体的盐度、温度、 pH 值及 抗生素对微生态制剂之一的枯草芽孢杆菌活性的影 响, 以期为微生态制剂在水产养殖生产中的合理使 用提供理论依据。 1 材料与方法 1 1 实验材料 实验用活菌生物净水剂由市场购得 , 生产批号
为 601216305516, 产 品性状为黄色 片剂, 其主 要 成分为枯草芽孢杆菌 , 有效菌总数 > 1 1012 个/ g 。 基础培养基为 2216E 海水细菌培养基 , 配方 : 蛋白胨 5 0 g 、酵母 浸膏 粉 10 g 、磷 高铁 0 1 g 、 pH 7 2~ 7 6、海水 1000 mL , 实验所用培养基根 据需要在此基础上进行调整。
[ 4]
培养 15 h 后取出, 做 10- 1 、 、 10
- 5
、10
- 3
、 10
- 4
、 10
- 6
稀 释度 , 取 10
- 6
稀释液 1 mL 注入 2216E 固体无菌平板中 , 无菌涂 布, 共做 5 个同样的平板 , 然后在培养基表面贴上 0 5 cm 0 5 cm 的各种抗菌素药敏试纸 , 将培养 皿放入 25 的恒温箱中培养, 24 h 后取出, 测量 各种抗菌素抑菌圈的大小 , 并记录。 2 结果 2 1 盐度对枯草芽孢杆菌生长的影响
[ 1, 2]
药敏试纸由杭州天和微生物试剂有限公司生产。 实验仪器: 三角烧瓶, 培养皿 , 恒温培养箱, 盐度 计 , pH 计, 计数板 , 计数器, Olympus 显微镜。 1 2 实验方法和步骤 试验中枯草芽孢杆菌的计数采用细菌直接计数 ( DVC) 方法。 1 2 1 不同盐度梯度对芽孢杆菌生长的影响 取 8 个容积为 500 mL 的三角烧瓶, 分别加入 已配制好的 2216E 液体培养基 ( 纯海水由蒸馏水和 NaCl 代替 ) , 培养基盐度 梯度分别设置 为 0 、 5、 10、 15 、 20、 25、 30、 35, 并进行高温灭菌, 冷却后 , 并每个 三角烧瓶中分别接入 2 108 个 / mL 的枯草芽孢杆 菌 , 将三角烧瓶放入 25 的恒温培养箱 中, 每 3 h 对枯草芽孢杆菌记数一次, 每个盐度计数 2 次, 取平 均值, 连续观察 24 h。 1 2 2 温度对芽孢杆菌生长的影响 取 5 个 500 m L 三 角 烧瓶 , 加入 已 配 制好 的 2216E 液体培养基 , 进行高温灭菌。冷却后, 每个烧 瓶中分别接入 2 108 个 / mL 的枯草芽孢杆菌 , 置于 恒温箱中振荡培养, 温度分别设置为 18 、 22 、 26 、 30 、 34 , 每小时进行一次芽孢杆菌记数, 每个温度记录 2 次 , 取平均值, 连续观察 24 h。 1 2 3 pH 值对芽孢杆菌生长的影响 配制 2216E 液体培养基, 用 H Cl 和 NaOH 调 节 pH 值 , 将 pH 值 梯度 设 置为 6 0、 6 5、 7 0、