实验一细菌基因组DNA的提取
实验一 大肠杆菌基因组提取
实验一大肠杆菌基因组提取简介大肠杆菌(Escherichia coli)是一种常见的肠道菌，其基因组结构简单，可以用于实验室中的基因工程。
本实验将介绍如何从大肠杆菌中提取基因组DNA，并进行后续的测序和分析。
材料- 大肠杆菌菌株- SDS（1%）- NaCl(5M)- EDTA(0.5M)- 三氯乙酸(CTAB)细胞裂解缓冲液（含Tris-HCl,pH8.0、NaCl、CTAB和EDTA）- 氯仿- 异丙醇- TE缓冲液（pH8.0）- 75%酒精- 100%酒精步骤1. 建立大肠杆菌沙门氏菌联合培养通过将大肠杆菌菌株与沙门氏菌菌株联合培养，可以使大肠杆菌更具韧性，可以在更苛刻的条件下生存。
因此，在进行基因组提取前，可以将大肠杆菌与沙门氏菌一同培养。
具体步骤如下：1.1 从大肠杆菌与沙门氏菌培养基中选择处于对数生长期的菌株；1.2 筛选出同步菌种进行接吻结合；1.3 将大肠杆菌沙门氏菌接种于 LB 培养基中，进行生长，收集状态良好的菌落。
2. 细胞裂解收集培养的大肠菌细胞，经过洗涤后，加入细胞裂解缓冲液中。
在催化剂SDS的作用下，细胞质膜溶解，使DNA释放到缓冲液中。
2.1 用洗液洗细菌达到OD600为0.6时离心6000g， 10分钟；2.2 将上清液倒掉，沉淀用NaCl水洗涤后，离心6000g， 10分钟；2.3 将沉淀重悬于 Tris-HCl 缓冲液中，加入 SDS 、 NaCl和 EDTA，并在65℃下进行快速震荡混匀，直到完全均匀混合。
3. 蛋白酶和RNA酶的处理使用丙酮和氯仿的混合物沉淀DNA，过滤掉蛋白酶和RNA酶。
3.1 向上清液中加入等体积异丙醇，避免产生气泡，盖紧座析管盖，冰上静置10min 。
3.2 离心12000g 10min，弃取上清层。
将沉淀重悬于 TE 缓冲液中，加入20ug/ml RNase 处理，65℃将体系涡旋5min；3.3 加入等体积氯仿，振荡10min，然后离心12000g 10min ，弃取上清液。
细菌培养及菌体收集
基因工程实验流程参考图：细菌培养及菌体收集挑取单菌落于5 ml 2216E培养基中，8℃培养，100 rpm转速，振荡120 h后，12 000 rpm 离心15 min。
弃去上清液，加入10 ml TE洗涤离心后，用10 ml TE溶解菌体，混匀，–20℃保存备用。
实验一：菌株基因组DNA的提取（CTAB 方法）CTAB/NaCL溶液配制：CTAB/NaCL溶液(10% CTAB，0.7M NaCL 4.1gNaCL 溶于80ml 水中，缓慢加入10gCTAB，加热溶解)；原理：采用溶菌酶破碎细菌细胞壁，加入去污剂CTAB和EDTA消化细胞，可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。
最后得到DNA。
操作流程：取3.5 ml菌悬液，加入184 μl 10% SDS，混匀，溶菌酶浓度为2mg/ml，37℃温育1 h。
加入740 μl 5 M NaCl，再加入512 μl CTAB/NaCl，混匀，65℃温育10 min。
加入等体积氯仿/异戊醇（24:1），混匀，10 000 rpm离心5 min，吸取上清液。
上清液中加入等体积苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)，混匀，10 000 rpm离心5 min，吸取上清液。
加入0.6倍异丙醇，混匀，10 000 rpm离心5 min，收集DNA沉淀，用70%乙醇洗涤DNA沉淀。
用1 ml TE溶解DNA，加入终浓度为20 μg/ml RNaseA，4℃溶解过夜，–20 ℃保存。
实验二：DNA电泳鉴定1．目的学会常用的DNA琼脂糖凝胶电泳、。
2．原理DNA双螺旋分子骨架两侧带有含负电荷的磷酸根，在电场中会向正极方向移动。
不同长度的DNA由于受到凝胶介质的阻力不同，表现为不同的迁移率而被分开。
3．器材电泳仪，水平凝胶电泳槽和梳子及其制胶模块，250ml三角瓶，微波炉，台式离心机，旋涡混合器，凝胶成像系统，分光光度计，微量移液取样器，1.5ml离心管，双面微量离心管架，试管架等。
基因组dna提取实验报告
基因组dna提取实验报告基因组 DNA 提取实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取高质量的基因组DNA，以便进行后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等。
通过本次实验，掌握基因组 DNA 提取的基本原理和操作方法，了解影响 DNA 提取质量的因素，并对提取的 DNA 进行质量检测和分析。
二、实验原理基因组DNA 提取的基本原理是利用细胞裂解液破坏细胞膜和核膜，使细胞内的物质释放出来，然后通过蛋白酶 K 消化蛋白质，去除 RNA 等杂质，再利用酚/氯仿等有机溶剂抽提，将蛋白质、多糖等杂质去除，最后通过乙醇沉淀或异丙醇沉淀得到纯净的基因组 DNA。
三、实验材料与试剂（一）实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）2、植物叶片3、细菌培养物（二）实验试剂1、细胞裂解液（含 TrisHCl、EDTA、NaCl、SDS 等）2、蛋白酶 K3、酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）4、无水乙醇5、 70%乙醇6、 RNA 酶 A7、 3M 醋酸钠（pH 52）8、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、紫外分光光度计5、电泳仪及电泳槽四、实验步骤（一）动物组织基因组 DNA 提取1、取约 01g 新鲜的动物组织，放入 15ml 离心管中，加入 1ml 细胞裂解液，用剪刀将组织剪碎，然后在冰上放置 10min。
2、向离心管中加入20μl 蛋白酶 K（20mg/ml），充分混匀，在 55℃水浴锅中孵育过夜，直至组织完全消化。
3、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），轻轻颠倒离心管10min，使溶液充分混匀。
4、 12000rpm 离心 10min，将上清液转移到新的离心管中。
5、重复步骤 3 和 4 一次。
6、向上清液中加入 1/10 体积的 3M 醋酸钠（pH 52）和 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。
细菌基因组dna提取原理
细菌基因组dna提取原理
细菌基因组DNA提取是通过一系列化学和物理方法将细菌细
胞中的DNA分离出来的过程。
以下是细菌基因组DNA提取
的原理：
1. 细胞破碎：首先，细菌细胞需要被破碎以释放DNA。
这可
以通过物理方法（如超声波处理或振荡器震荡）或化学方法（如细菌细胞壁消化酶的作用）来实现。
2. DNA溶解：破碎的细胞中，DNA需要被从其他细胞组分
（如蛋白质、RNA等）中分离出来。
加入适当的缓冲液可以
帮助DNA在水中溶解，并防止其被降解。
3. 蛋白质去除：细胞溶液中的蛋白质可通过加入蛋白酶K等
蛋白酶来消化。
蛋白酶可以将蛋白质分解为小片段，使其易于去除。
4. RNA去除：通过加入DNase酶，可将RNA降解为核苷酸
单元，并与其配体结合。
随后，加入酸性酚和氯仿，RNA可
在其中分配到的有机相中离心沉淀，从而与DNA分开。
5. DNA沉淀：通过加入醇（如乙醇或异丙醇）和盐（如乙酸
钠或氯化钠），DNA可以沉淀出来。
醇可以使DNA不溶于溶液中，盐可以中和溶液中的带电颗粒，如离子。
6. 洗涤：沉淀的DNA需要被洗涤以去除残留的盐和其他杂质。
这可以通过使用酒精洗涤和离心步骤来实现。
7. 重溶：最后，沉淀的DNA会在某种缓冲液中重溶，以便进行后续的实验操作，如PCR扩增、测序等。
通过以上步骤，我们可以从细菌中高纯度地提取出基因组DNA，为后续分子生物学研究提供基础。
细菌基因组DNA的提取
二、实验原理
核酸制备的一般原则
分离纯化核酸总的原则： (1)应保证核酸一级结构的完整性 (2)排除其他分子的污染
核酸纯化应达到的要求： (1)核酸样品中不应该存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高 浓度的金属离子： (2)其他生物大分子的污染应降低到最低程度 (3)排除其他核酸分子的污染
三、核酸制备的步骤
破碎细胞
提取 纯化
裂解液的制备 将DNA结合 加入漂洗液 加入洗脱
到吸附柱上
缓冲液
获得DNA 溶液
四、实验步骤
（1）取细菌培养液 1ml，10000r/min离心1min，尽量吸净上清。 （2）向菌体沉向管中加入20μl Proteinase K溶液，混匀。 （4）加入220μl缓冲溶液GB,振荡15s，70℃放置10min，溶液变清亮，简短离心去除管盖内壁的水珠。 （5）加220μl无水乙醇，充分振荡混匀15s，此时可能会出现沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。 （6）将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离 心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 （7）向吸附柱CB3中加入500μl缓冲溶液GD（使用前先检查是否加入无水乙醇），12000rpm离心 30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 （8）向吸附柱CB3中加入600μl 漂洗液PW（使用前先检查是否加入无水乙醇），12000rpm离心30s， 倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。 （9）重复操作步骤8。 （10）将吸附柱CB3放回收集管中，12000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数 分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 （11）将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μlTE,室温放置 2-5min，12000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中。
细菌基因组DNA的提取
四、注意事项——核酸分离、纯化
四、注意事项——核酸沉淀、溶解
当沉淀时间有限时，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀，沉淀会更充分 沉淀时加入1/10体积的NaAc（pH5.2，3M），有利于充分沉淀 沉淀后应用70％的乙醇洗涤，以除去盐离子等 晾干DNA，让乙醇充分挥发（不要过分干燥） 若长期储存建议使用TE缓冲液溶解 TE中的EDTA能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase pH值为8.0，可防止DNA发生酸解
原因
02
材料不新鲜或反复冻融 未很好抑制内源核酸酶的活性 提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断 外源核酸酶污染 反复冻融
尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融 液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液 在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量 细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔 所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌 将DNA分装保存于缓冲液中，避免反复冻融
01
小心吸出上清液转入新的eppendorf管，用预冷的两倍体积的无水乙醇沉淀，放置－20℃冰箱30min，然后13000rpm离心15min，可见白色丝状沉淀物。
02
小心吸出液体，弃上清液，用预冷的400µl 70％乙醇洗涤2次，室温干燥后，用50µlTE （含20µg/ml的Rnase）溶解DNA，－20℃冰箱放置备用。
核酸制备的步骤： 破碎细胞
01
一、实验原理
核酸酶的抑制和抑制剂 降低温度，改变pH及盐的浓度，都利于对核酸酶活性的抑制，但均不如利用核酸酶抑制剂更有利，当然，几个条件并用更好。 对于DNA，抑制DNase活力很容易，但防止机械张力拉断则更重要。 对于RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断，但抑制RNase活力较难，故在RNA提取中设法抑制RNase更重要。
(一)细菌基因组DNA的提取
（一）细菌基因组DNA的提取1.试剂1）CTAB/NaCl溶液：4.1g NaCl溶解于80mL H2 O,缓慢加入10g CTAB,加水至100mL。
2）其它试剂：氯仿:异戊醇(24:1)，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，异丙醇，70% 乙醇，TE，10% SDS，蛋白酶K (20mg/mL或粉剂)，5mol/L NaCl。
2.操作步骤：1）100mL 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。
2）加9.5mL TE悬浮沉淀, 并加0.5 mL 10% SDS, 50 μL 20mg/mL(或1mg干粉)蛋白酶K, 混匀, 37℃保温1小时。
3）加1.5mL 5mol/L NaCl, 混匀。
4）加1.5mL CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。
5）用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管。
6）用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。
7）加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，沉淀DNA。
8）用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1mL TE, -20℃保存。
如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。
（二）细胞基因组DNA的提取Each sample + TNES buffer 500 μL +proteinase K 25 μL → 55 °C, 750 rpm, 2hr →+150 μL 6M NaCl, vortex → spin 5 min, Max, romm temperature (RT) →isolate supernatant + 600 μL cold ethanol (95%), vortex → spin 5 min, Max, RT→ precipitation + 75% ethanol, RT, Vortex → spin 5 min, Max, RT →precipitation+50 μL TE buffer (10× stock solution), keep in 4 °C.（三）Chelex法抽提DNA1.用无菌棉签取双侧颊粘膜拭子，室温下自然干燥过夜，在无菌容器中保存。
细菌dna的提取实验报告
细菌dna的提取实验报告
《细菌DNA的提取实验报告》
实验目的：通过提取细菌DNA，掌握DNA提取的基本原理和方法，以及了解
细菌DNA的结构和特点。
实验材料：
1. 大肠杆菌样品
2. 细菌培养基
3. 离心管
4. 离心机
5. 离心管架
6. 琼脂糖
7. 蒸馏水
8. 离心管架
9. 乙醇
10. 磷酸缓冲液
11. 离心管架
12. DNA提取试剂盒
实验步骤：
1. 取一支含有大肠杆菌的培养基样品，将其转移到离心管中，并进行离心分离。
2. 将上清液倒掉，留下菌体沉淀。
3. 加入磷酸缓冲液，将菌体彻底悬浮。
4. 加入琼脂糖，将菌体再次离心分离。
5. 倒掉上清液，留下菌体沉淀。
6. 加入DNA提取试剂，彻底溶解菌体。
7. 加入乙醇，使DNA沉淀出来。
8. 用蒸馏水洗涤DNA沉淀，最终得到纯净的细菌DNA。
实验结果：
经过提取实验，成功得到了纯净的细菌DNA。
在电泳实验中，观察到明显的DNA条带，证明提取得到的DNA质量较高。
实验结论：
通过本次实验，我们掌握了细菌DNA提取的基本原理和方法，了解了细菌DNA的结构和特点。
同时，也加深了对DNA提取技术的理解，为今后的实验和研究打下了坚实的基础。
细菌DNA的提取实验是生物学和分子生物学领域中的重要实验之一，它不仅可以帮助我们了解细菌的遗传信息，还可以为基因工程和生物技术的发展提供重要的实验数据。
希望通过这篇实验报告，能够对细菌DNA提取实验有一个更深入的了解，为相关领域的学习和研究提供帮助。
细菌基因组实验报告心得
一、实验背景随着生物技术的发展，细菌基因组研究已成为微生物学领域的重要研究方向。
通过对细菌基因组进行深入研究，我们可以了解细菌的遗传信息、生物学特性以及与人类健康的关系。
本实验旨在通过提取细菌基因组DNA，进行PCR扩增、测序和生物信息学分析，探讨细菌的基因组结构和功能。
二、实验过程1. 细菌基因组DNA提取实验中，我们选取了常见的细菌菌株作为研究对象，采用酚-氯仿法提取细菌基因组DNA。
具体步骤如下：（1）将细菌培养至对数生长期，收集菌液。
（2）加入适量的SDS和蛋白酶K，充分混匀，进行细胞裂解。
（3）加入酚-氯仿，混匀，离心分离。
（4）取上清液，加入等体积的异丙醇，混匀，离心沉淀。
（5）用75%乙醇洗涤沉淀，干燥，溶解于TE缓冲液中。
2. PCR扩增为了获得细菌基因组中的特定基因片段，我们采用PCR技术进行扩增。
具体步骤如下：（1）设计特异性引物，用于扩增目标基因。
（2）配制PCR反应体系，包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq酶等。
（3）进行PCR扩增，包括预变性、变性、退火、延伸等步骤。
（4）扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。
3. 基因组测序将PCR扩增产物进行纯化，然后进行测序。
测序结果经过比对和组装，得到细菌基因组的完整序列。
4. 生物信息学分析利用生物信息学软件对测序结果进行注释、比较和分析，了解细菌基因组的结构和功能。
三、实验心得1. 实验过程中，我们充分认识到细菌基因组研究的重要性。
通过对细菌基因组的深入研究，我们可以揭示细菌的生物学特性、进化关系以及与人类健康的关系。
2. 在实验操作中，我们学会了酚-氯仿法提取细菌基因组DNA、PCR扩增、测序和生物信息学分析等关键技术。
这些技术为今后的研究奠定了基础。
3. 实验过程中，我们遇到了一些问题，如DNA提取效率低、PCR扩增产物不稳定等。
通过查阅文献、请教老师和同学，我们找到了解决问题的方法，提高了实验成功率。
4. 实验过程中，我们深刻体会到团队协作的重要性。
实验一基因组DNA的提取
实验十菌落PCR筛选阳性重组子【实验目的】学习利用菌落PCR技术筛选阳性重组子的方法【实验原理】细菌细胞内的重组DNA以裸露状态存在。
在高温条件下，细菌细胞破裂，细胞内DNA暴露并因高温的作用而变性成为单链状态的DNA，此时该DNA可作为模板用于PCR，进而检测该DNA中是否含有重组的外源DNA序列。
【仪器、材料与试剂】1 仪器生化培养箱，超净工作台，离心机，PCR仪，电泳仪，电泳槽，连续可调移液器，凝胶成像系统2 材料含待检测菌的阳性筛选平板，PCR试剂盒，引物1（primer 1）和引物2（primer 2），PCR管，移液器枪头，ddH2O，电泳级琼脂糖，Tris碱，硼酸。
3 试剂PCR试剂盒：10X PCR buffer，MgCL2或MgSO4，dNTPs，DNA聚合酶；primer 1和primer 2：均配成10μmol的使用液；DNA Marker：根据PCR产物大小确定。
【实验步骤】1 配制25μL的PCR反应体系10×buffer 2.5 μLMgCL2或MgSO4 1.5～2.5μL（若buffer里有，则可不加或少加）dNTPs（2µmol） 2.5μLprimer 1 (10µmol ) 1μLprimer 2 (10µmol ) 1μLTaq 酶（或其他用于PCR扩增的DNA聚合酶）1UddH2O 补至25μL最后用移液器挑取筛选平板中的待检测菌落，放入上述反应体系中。
2 PCR程序配制好反应体系后，将其放入PCR仪中。
然后根据最初设计引物时的相关数据，设定PCR程序中的每一步的反应条件。
通常设计的反应条件如下：94℃预变性3～5min；94℃变性30sec～1min50～60℃退火1min 30～35个循环72℃延伸2min72℃最终延伸8～10min设定好程序后，即可开始运行程序，进行PCR。
3 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测见实验六PCR完成后，取5～8μL PCR产物与适宜的上样缓冲液（loading buffer ）混匀后，加样电泳。
细菌dna的提取实验报告
细菌dna的提取实验报告细菌DNA的提取实验报告引言：DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内的遗传物质，携带着生命的基本信息。
对于细菌来说，DNA的提取是研究其遗传特性和进化过程的重要手段。
本实验旨在通过提取细菌DNA，了解其结构和功能。
材料与方法：1. 细菌培养物：选择一种常见的细菌菌株，如大肠杆菌。
2. 细菌培养基：含有必需营养物质的培养基。
3. 细菌培养器具：培养皿、试管、移液器等。
4. 提取试剂：细胞裂解缓冲液、蛋白酶K、异丙醇等。
步骤：1. 准备培养基：按照说明书将培养基溶解于适量的蒸馏水中，并灭菌。
2. 培养细菌：将细菌菌株接种于培养基中，放入培养器中，在适宜的温度和湿度下培养一段时间，使细菌繁殖。
3. 收集细菌：将培养皿中的菌落取出，转移到试管中。
4. 细菌裂解：向试管中加入适量的细胞裂解缓冲液，用移液器轻轻混合，使细菌细胞破裂释放DNA。
5. 蛋白酶处理：加入适量的蛋白酶K，使其降解蛋白质，避免在DNA提取过程中的干扰。
6. DNA沉淀：向试管中加入等体积的异丙醇，轻轻摇动试管，使DNA沉淀形成。
7. DNA收集：用移液器将DNA沉淀转移到另一个试管中，去除异丙醇。
8. DNA溶解：加入适量的蒸馏水，轻轻摇动试管，使DNA溶解。
结果与讨论：经过上述步骤，我们成功地提取到了细菌的DNA。
下面将对实验结果进行讨论。
1. DNA的外观：提取得到的DNA呈现为无色透明的溶液状，可以通过肉眼观察到。
2. DNA的浓度：可以通过分光光度计等仪器测量DNA的浓度，以确定提取的DNA量是否足够。
3. DNA的纯度：通过比色法或凝胶电泳等方法，可以评估DNA的纯度，即DNA中是否含有杂质。
4. DNA的稳定性：提取得到的DNA可以在低温下长期保存，以便后续的实验研究。
细菌DNA的提取是研究细菌遗传特性和进化过程的基础。
通过提取DNA，可以进行PCR扩增、测序、基因克隆等实验，进一步了解细菌的基因组结构和功能。
DNA提取实验报告
DNA提取实验报告实验报告：DNA提取实验一、引言DNA提取是生物学实验中常见且重要的步骤，可以从细胞或组织中分离出DNA分子，并将其用于后续的分子生物学研究。
DNA提取可以用于基因组测序、PCR、限制性酶切、基因重组等实验。
本实验旨在通过一系列步骤，从土壤样品中提取纯度较高的DNA。
二、材料与方法材料：1.细菌培养基和试管2.无菌吸管和无菌离心管3.无菌培养皿和微量移液器4.DNA提取试剂盒（包括溶液、溶剂和酶等）5.离心机和冷冻干燥机方法：1.准备土壤样品，将其称取0.5克加入细菌培养基中。
2.震荡培养皿，使土壤样品均匀悬浮在细菌培养基中。
3.将培养皿放入震荡器中，在37°C恒温下震荡培养24小时。
4. 从培养液中取出2ml用无菌离心管离心2分钟，根据菌落情况可调整离心时间。
5. 倒出上清液后，加入0.5ml TE溶液进行洗涤。
6. 离心2分钟后，倒出上清液，加入0.5ml溶胀液进行洗涤。
7. 在离心后，倒出上清液，加入0.5ml各种试剂进行洗涤和裂解。
8.将洗涤和裂解好的液体转移到另一个无菌离心管中，用冷冻干燥机中15分钟。
9.用无菌离心管接着进行DNA纯化、酶切和PCR等实验。
三、结果与讨论本实验成功从土壤样品中提取到了较高纯度的DNA，提取的DNA量为300ng/ul。
通过电泳检测，可以看到DNA条带较为清晰，没有明显的降解。
这说明提取步骤中的洗涤和裂解等操作都较为有效，成功地去除了样品中的杂质和抑制物，使得提取的DNA纯度较高。
此外，实验中使用的试剂盒也起到了很好的作用，提供了高效的DNA提取试剂和相关酶。
DNA提取实验中有几个关键的步骤，包括洗涤、裂解和纯化。
洗涤过程中，TE溶液可以有效去除土壤样品中的盐类和细胞残渣，溶胀液可以去除蛋白质和脂类等杂质。
裂解过程中，酶的作用可以有效裂解细胞壁和细胞膜，释放DNA分子。
纯化过程中，通过离心和冷冻干燥等操作，可以将DNA分子重积到离心管底部，并去除杂质。
细菌基因组DNA提取方法
细菌基因组DNA提取方法1、取1.5mL菌液于2mL 离心管，12000rpm离心5min，弃上清；2、加入600ul 1xTE 重悬菌体沉淀，4℃ 12000rpm离心5min，弃上清；3、加入450ul 1xTE和50ul 10mg/mL 溶菌酶和10ul 100mg/mL 蜗牛酶，吹吸混匀，37℃孵育1h（或4℃过夜），每隔15min颠倒混匀一次；4、加入600ul TENS裂解液，和与沉淀等体积的玻璃珠，吹吸混匀，涡旋震荡10min 后，再加入30ul 20mg/mL 蛋白酶K，吹吸混匀，55℃孵育1h，每隔15min颠倒混匀一次；5、4℃ 12000rpm离心10min，转移上清至另一个干净的1.5mL 离心管；6、加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），充分混匀，-20℃静置2min，4℃ 12000rpm 离心5min；7、转移上清至另一个干净的 1.5mL 离心管，加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），充分混匀，-20℃静置2min，4℃ 12000rpm离心5min；8、转移上清至另一个干净的1.5mL 离心管，加入1/10 体积的3M 醋酸钠，2倍体积（加入醋酸钠后的终体积）预冷的无水乙醇，充分混匀，-20℃沉淀2h。
（或加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，-20℃沉淀2h），4℃ 12000rpm离心10min，弃上清；注：如需得到纯度更高的样品，可先用异丙醇沉淀，无菌水充分溶解后，离心取上清，再用醋酸钠+无水乙醇沉淀一次。
9、加入600ul 预冷的70%乙醇洗涤DNA沉淀，颠倒混匀，4℃ 12000rpm离心5min，弃上清；重复洗涤一次。
10、吸干离心管中的残留液体，待离心管风干后，加入30ul 无菌水和0.5ul 10mg/mL 的RNase A，吹吸混匀，取3ul电泳检测，剩余置于-20℃保存。
附：一、所需仪器恒温水浴锅、高压灭菌锅、高速冷冻离心机、超净工作台、通风橱、电子天平、称量纸、药匙、各种规格移液器及吸头、剪刀、1.5mL离心管、2mL离心管、15mL离心管、50mL离心管、涡旋震荡仪、掌上离心机、4℃及-20℃冰箱、微波炉、电泳仪、凝胶成像仪、Nanodrop微量分光光度计、烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、封口膜、橡皮筋。
细菌基因组DNA提取实验
细菌基因组DNA提取实验标签：细菌基因组DNA 提取细菌基因组DNA提取可以：（1）获得细菌基因组DNA；（2）作为PCR模板；（3）用于测序、遗传信息分析等。
实验方法细菌基因组DNA试剂盒提取法实验方法原理本试剂盒采用独特的细胞裂解和相分离技术，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到纯化基因组DNA 的目的。
适合于从1.0×109细菌中获得多至20 μg 的基因组DNA。
用于PCR、Southern 印迹分析、RAPD、RFLD 等分子生物学实验。
实验材料细菌培养物试剂、试剂盒细菌基因组DNA试剂盒仪器、耗材DNA 制备管小量滤器离心管实验步骤一、试剂盒组成、贮存、稳定性1. 说明书，耗材：DNA 制备管，小量滤器，2 ml 离心管，1.5 ml 离心管。
2. RNase A：50 mg/ml，室温保存。
3. 溶菌酶：50%甘油溶解溶菌酶，使溶菌酶浓度为50 mg/ml，-20℃密闭贮存。
4. Buffer S：细菌原生质制备液，加入RNase A 后，4℃密闭贮存。
5. 0.25M EDTA：室温密闭贮存。
6. Buffer G-A：裂解液，室温密闭贮存。
7. Buffer G-B：蛋白去除液，室温密闭贮存。
8. Buffer DV-A：Buffer DV 的制备液，请参照实验准备Buffer DV 的配制方法配制，室温密闭贮存。
9. Buffer DV：相分离液，室温密闭贮存。
10. Buffer BV：DNA 结合液，室温密闭贮存。
11. Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
12. Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇并混合均匀，室温密闭贮存。
可用100%乙醇或95%乙醇。
13. Eluent ：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。
二、实验准备1. 第一次使用时，在Buffer W2 中按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇并混合均匀。
细菌DNA提取方法
细菌DNA提取方案细菌DNA提取方案：革兰氏阴性菌，如E.coli，一般有三种可以选择的方法。
一、水煮模板法——主要用于PCR反应1、接种单菌落于LB或脑心平板，连续画线，37摄氏度培养18－24小时。
2、刮取1～2接种环菌苔加入150微升三蒸水中，混匀，100摄氏度煮沸10分钟。
3、12000转/分钟离心10分钟，取上清，－20摄氏度保存备用。
操作最简便，对试剂条件要求低。
缺点是纯度不够高，可能会含有RNA、蛋白等杂质。
但是作为一般检测目的的PCR反应模板已经足够了。
有人称扩增4kb以下片段都可用此种方法制取模版，编者用此类模板PCR可以扩增到3500bp的片段。
编者建议：此法得到的模版保存时间短，强烈建议每月重新制作一次。
二、CTAB/NaCl 法1、接种一单菌落于5mlLB中,30℃培养过夜,2、取1ml种子培养液接入100ml2%LB中,37℃、220r/min培养16小时;3、5000r/min离心10分钟,弃去上清。
4、加入10mlTE离心洗涤后,用10mlTE溶解菌体,混匀,-20℃保存备用。
5、取3.5ml菌悬液,加入184μl10%SDS,混匀,加入37μl10mg/ml蛋白酶K,混匀,37℃温育1小时6、加入740μl5mol/LNaCl,再加入512μlCTAB/NaCl,混匀,65℃温育10分钟。
7、加入等体积的氯仿/异戊醇,混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
8、上清中加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,10000r/min离心5分钟,保留上清。
9、加入0.6倍的异丙醇,混匀,10000r/min离心5分钟,收集DNA沉淀,用70%乙醇离心洗涤DNA沉淀。
10、用1mlTE溶解DNA,加入终浓度为20μg/mlRNaseA,4℃保存。
CTAB/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少，保存时间长，编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA 加在第5步温育的时候，这样最后没有RnaseA污染。
大肠杆菌基因组DNA的提取及荧光定量PCR试验设计
大肠杆菌基因组DNA的提取及荧光定量PCR试验设计大肠杆菌是一种常见的细菌，其基因组DNA的提取非常重要，可以用于进一步的分子生物学研究。
本文将介绍如何提取大肠杆菌基因组DNA以及如何设计荧光定量PCR试验。
一、大肠杆菌基因组DNA的提取基因组DNA的提取是分子生物学实验的基础步骤之一、下面是一种常规的大肠杆菌基因组DNA的提取方法：1. 培养大肠杆菌：从冻存的大肠杆菌液体培养物中取出1 mL，加入含有适量抗生素（如氨苄青霉素或巴龙霉素）的LB培养基中。
以250 rpm的速度在37℃下培养12-16小时，直到菌体适量生长。
2.收集菌体：离心培养物，将上清液去除，保留细胞沉淀。
3.溶菌：使用适当的溶解液（如0.2MNaOH/1%SDS溶液），彻底悬浮菌体，并在65℃下孵育5分钟。
4.中和反应：向菌液中加入3M的钾酸溶液，通过中和作用将菌体中的DNA中和沉淀出来。
6.洗涤：用70%乙醇洗涤DNA沉淀。
去除乙醇，使菌体中的盐等杂质完全去除。
7. 溶解：用 TE溶液（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）或纯水溶解DNA沉淀。
如果需要更高浓度的DNA，可使用低TE溶液（10 mM Tris-HCl, pH 8.0）。
荧光定量PCR（qPCR）是一种通过实时监测PCR反应的荧光强度来定量分析PCR产物的技术。
下面是一种针对大肠杆菌基因组DNA的定量PCR试验设计：试验目的：测定大肠杆菌基因组DNA中一些特定基因的拷贝数。
试验步骤：1.制备PCR反应体系：根据需要测定的基因和引物的特异性设计引物。
将PCR反应体系组分按照以下配方进行调配：- 模板DNA：5 ng-引物（正向和反向）：0.2μM-qPCR反应缓冲液：根据厂家推荐的浓度加入适量-dNTP混合液：0.2mM-热启动酶：根据厂家推荐的浓度加入适量- ddH2O：适量2.设计合适的PCR程序：-预热：95℃，5分钟-循环：95℃，30秒；55℃，30秒；72℃，30秒（重复30-40个循环）-最终延伸步骤：72℃，10分钟-保存在4℃下待用3.实施定量PCR试验：-根据样本中DNA浓度的不同，选择适当的试管和引物。
细菌dna的提取方法
细菌dna的提取方法
一、水煮模板法——主要用于PCR反应
操作Z简便，对试剂条件要求低。
缺点是纯度不够高，可能会含有RNA、蛋白等杂质。
但是作为一般检测目的的PCR反应模板已经足够了。
二、CTAB/NaCl 法
CTAB/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少，保存时间长，编者更喜欢把终浓度为20μg/ml RnaseA加在第5步温育的时候，这样Z后没有RnaseA污染。
每一步操作细致一些，得到的DNA 可用于Southern blot。
注意：长时间保存DNA可放于-20℃，但要尽量减少反复冻融，否则影响DNA质量。
三、盐析法
介于方法一和方法二之间，CTAB虽然取出糖分效果较好，但CTAB本身也是有毒的，所以此方法放弃了CTAB。
实验注意：提基因组Z好要将枪头尖剪掉（剪掉以后在酒精灯上迅速过一下，使其断口圆滑）。
以免枪头损伤基因组，抽干时Z 好是风干。
(完整版)实验一CTABNaCl法细菌基因组DNA提取
实验一CTAB/NaCl 法细菌基因组DNA提取一、培养基A. LB培养基（1L）胰蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g pH调至7.0二、菌种大肠杆菌野生型三、缓冲液A. 1M Tris-HCl ( pH 8.0, 1L)1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中，加入约800 ml的ddH2O，充分搅拌溶解，加浓HCl约42ml，将溶液定容至1 L。
C. TE缓冲液（pH 8.0）10 mmol/L Tris-Cl (pH8.0)，1mmol/L EDTA (pH8.0)D. 10% SDS溶液10 gSDS，定容至100mlE. CTAB/NaCl缓冲液CTAB 4gNaCl 16.364 g1M Tris-HCl 20ml ( PH8.0)0.5M EDTA 8ml先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌，冷却后0.2-1% β-巯基乙醇（400ul）。
F. 5mol/L NaCl溶液292.5 gNaCl了，定容至1LG. 氯仿：异戊醇（24：1）480ml氯仿+20ml异戊醇，混匀存放至棕色瓶备用。
H. 酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）250mlTris饱和酚+240ml氯仿+10ml异戊醇，混匀存放至棕色瓶备用。
I. 上样缓冲液（6×）0.25%溴酚蓝，20%蔗糖J. 电泳缓冲液（1×, 1L）Tris碱10.8g，硼酸5. 5g，0.5mol/L EDTA （pH8.0）4ml, 用ddH2O定容至1L。
K. 0.7%琼脂糖凝胶（100 ml）0.7 g琼脂糖凝胶, 加入1×电泳缓冲液，微波炉加热至凝胶完全融化即可三、实验具体步骤1、接种一单菌落于5mlLB中, 30℃培养过夜,2、取1ml种子培养液接入100ml LB中, 37℃、220r/min培养16小时;3、5000r/min离心10分钟,弃去上清。
4、加入10mlTE离心洗涤后,用10mlTE溶解菌体,混匀。
基因组dna的提取实验报告
基因组dna的提取实验报告一、实验目的本实验旨在学习基因组DNA的提取方法，掌握DNA提取实验的基本步骤和技巧。
二、实验原理DNA提取是生物学中最基础的实验之一，其目的是从细胞或组织中分离出DNA。
DNA提取的原理是利用化学试剂破坏细胞膜和核膜，使细胞内部的DNA裸露出来，并通过特定方法纯化出来。
三、实验材料1. 细菌培养液2. TE缓冲液（10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0）3. 蛋白酶K溶液（20 mg/mL）4. 洗涤缓冲液（10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0）5. 氢氧化钠（NaOH）溶液（0.2 M）6. 氯化钾（KCl）溶液（1 M）7. 高盐缓冲液（5 M NaCl, 1 M Tris-HCl, pH 8.0）8. 等体积异丙醇9. 离心管10. 微量离心管四、实验步骤1. 取细菌培养液0.5 mL，离心10分钟，将上清液倒掉。
2. 加入0.5 mL TE缓冲液和20 μL蛋白酶K溶液，室温下孵育10分钟。
3. 加入0.6 mL洗涤缓冲液，混匀后离心1分钟。
4. 倒掉上清液，加入0.2 mL氢氧化钠溶液，轻轻颠倒混匀，室温下孵育5分钟。
5. 加入0.3 mL氯化钾溶液，轻轻颠倒混匀后离心1分钟。
6. 将上清液转移到新的离心管中，加入等体积异丙醇，轻轻颠倒混匀后放置于-20℃冷冻箱中保存至少30分钟。
7. 离心10分钟后将上清液倒掉，并用70%乙醇洗涤沉淀一次。
8. 将沉淀用TE缓冲液重悬即可。
五、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作。
2. 操作过程中要避免DNA的降解和污染。
3. 实验前应做好必要的准备工作，并按照步骤进行操作。
六、实验结果通过本实验，成功提取出了细菌的基因组DNA，并经过浓度检测和质量检测，证明提取的DNA质量较好，可以用于后续实验。
七、实验总结本次实验通过对基因组DNA的提取方法进行学习和实践，掌握了基本的操作技巧和注意事项。
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四、注意事项——材料准备
最好使用新鲜材料，低温保 存的样品材料不要反复冻融
四、注意事项——细胞裂解
材料应适量，过多会影响裂解，导致DNA量 少，纯度低 针对不同材料，选择适当的裂解预处理方式： • 植物材料－－液氮研磨 • 动物组织－－匀浆或液氮研磨 • 组培细胞－－蛋白酶K • 细菌－－溶菌酶破壁 • 酵母－－破壁酶或玻璃珠 高温温浴时，定时轻柔振荡
核酸样品的保存
温度： 4℃（5℃）最佳和最简单 -70℃是长期保存的良好温度，为一次性保存 -20℃保存 保存介质： TE缓冲溶液(最常用) 10mmol/L Tris-Cl pH8.0 1mmol/L EDTA pH8.0
二、材料、设备及试剂
菌种 ：大肠杆菌DH5α 设备 ：eppendorf管、微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 台式高速离心机， 涡旋振荡器，水浴锅（ 37℃ 、60 ℃ ） 试剂：LB液体培养基 、无水乙醇、细菌基因组DNA提取试剂 盒。
细胞破碎 机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法； 化学试剂法：用SDS处理细胞； 酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。 DNA提取 SDS（十二烷基硫酸钠 ）法 ：SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与 蛋白质之间 常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏这种价键。 CTAB（十六烷基三甲基溴化铵 ）法 ：CTAB是一种阳离子去垢剂，它可 以溶解膜与脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使蛋白质 变性，使DNA与蛋白质分离。 DNA纯化（去杂质） 蛋白质： 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或氯仿：异戊醇（24：1） 抽提。 RNA ：常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子的RNA。 酚类物质： 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的材料。 多糖： 提取液中加1％PVP。
三、操作步骤
1、细菌 37℃ 过夜培养，取1ml培养物 12000rpm 室温离心 1min。
2、沉淀物加入180ul TE缓冲液，充分重悬细菌；再加入20ul 50mg/ml溶菌酶，混匀后于 30℃温育10min。 3、12000rpm 离心 5min, 弃上清后加入200 ul Buffer BTL，漩涡震荡悬浮细胞。 4、加入25ul 蛋白酶K溶液，振荡器混匀，于55℃温育30min，每隔10min 漩涡震荡一次。 5、加入220ul Buffer BDL，颠倒混匀，于65℃温育10min。 6、加入220ul 无水乙醇，以最大速度漩涡震荡20s。 7、转移样品至DNA 纯化柱中，纯化柱下端安装2ml收集管,12000rpm离心1min使DNA结 合在纯化柱上，弃去收集管。 8、将DNA纯化柱安装到新的2ml收集管中，加入500ul Buffer HB，12000rpm离心1min， 弃去滤液。
2、核酸制备的一般原则
分离纯化核酸总的原则： ①应保证核酸一级结构的完整性； ②排除其它分子的污染。 核酸纯化应达到的要求： ①核酸样品中不应存在有机溶剂和过高浓度的金属离子； ②其它生物大分子的污染应降低到最低程度； ③排除其它核酸分子的污染。
核酸制备的步骤：
破碎细胞
提取
纯化
核酸提取的一般过程
细菌ห้องสมุดไป่ตู้因组DNA的提取
一、实验原理
1、核酸的分类
DNA 主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量DNA， 如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA （cpDNA），质粒DNA。 RNA 存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。 除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和 噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。
9、DNA纯化柱中加入700ul DNA Wash Buffer，12000rpm离心1min，弃去滤液。
10、重复步骤9一次。12000rpm离心2min，干燥DNA纯化柱。 11、将DNA纯化柱转移至1.5ml EP管中，加入50ul 预热（65℃）的Elution Buffer, 室温放 置3min，12000rpm离心1min。