关于香豆素的提取方法分析

关于香豆素的提取方法分析

[摘要]水曲柳是一种落叶乔木,研究其香豆素类成分对水曲柳皮的开发利用以及防治病虫害具有积极意义。

[关键词]水曲柳;总香豆素;提取

1 选用仪器与材料

(1)仪器722 型光栅分光光度计(山东高密彩虹分析仪器有限公司),梅特勒AB135 -S 十万分之一天平(德国),HH -42 快速恒温数显水箱(常州国华电器有限公司)。

(2)试药水曲柳采自长白山,经吉林大学药学院张静敏教授鉴定为水曲柳Fraxinus Mandschurica Rupr.;标准品白蜡树精(自制),经过1 H -.MR,13 C -.MR 鉴定,HPLC 峰面积归一化法测定其含量达98%以上;其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

(1)标准曲线的绘制精密称取白蜡树精对照品,置于50ml容量瓶中,加入适量甲醇溶解并定容至刻度,配制成含白蜡树精0.1mg/ml的原对照品溶液。精密吸取对照品溶液适量,加甲醇定容至50ml,配制成含白蜡树精分别为8μg/ml、16μg/ml、24μg/ml、32μg/ml、40μg/ml的对照品系列溶液。于334nm处测定吸收度,并以吸光度与对照品浓度进行回归,得标准曲线方程Y=0.036X-0.0219,r=0.9997。实验表明白蜡树精在8～40μg/ml浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。

(2)稳定性实验将精密度实验项下的对照品溶液于0h、1h、2h、4h、6h、8h 在334nm处测定吸光度,实验结果表明RSD=0.93%,对照品溶液在8h内稳定性良好。

(3)精密度实验精密吸取上述原对照品溶液适量2ml,加甲醇稀释至10ml,于334nm处测定吸光度,连续6次,结果表明6次测定的RSD为0.54%,故仪器精密度良好。

(4)加样回收率实验取已知重现性实验项下的6份样品中的任意一份,精密吸

取1ml,稀释20倍后,准确加入一定量的对照品溶液,混匀,在334nm处测定吸光度,计算白蜡树精的平均加样回收率为98.2%,RSD=2.07%。

(5)重现性实验取水曲柳皮粗粉6份各2g,精密称定后置于50ml容量瓶中,加甲醇至刻度线,超声30min,过滤,取滤液稀释20倍后分别于334nm处测定吸光度,并计算其含量,实验结果6个样品含量RSD=1.57%,表明本法重现性良好。

(6)正交实验设计优化以水曲柳中总香豆素为考察指标,选择超声提取工艺中4个主要影响因素:浸渍时间(A)、乙醇浓度(B)、水浴温度(C)、提取时间(D)进行优化提取水曲柳中香豆素的条件。研究方法采用正交设计,每个因素选择3个水平,以L9(34)正交表安排实验。

每一实验号取水曲柳皮粗粉2.0g,精密称定后置于50ml容量瓶中,加甲醇至刻度线,按要求浸渍一定时间后在设定的水浴温度下进行超声提取,取出冷却至室温,过滤,取滤液稀释20倍后进行测定,各实验号平行操作重复3次。

极差R比较可知,影响水曲柳总香豆素提取的因素主次顺序为B>D>A>C,即乙醇浓度最重要,超声时间次之。

3 讨论

由于水曲柳中的秦皮乙素与秦皮甲素的含量相对较低,但白蜡树精的化学性质稳定,所以本实验选择白蜡树精为对照品考察检测条件的可行性。游离香豆素能溶于沸水,难溶于冷水,易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚等溶剂;香豆素苷类能溶于水、甲醇、乙醇,难溶于乙醚、苯等极性小的溶剂。考虑对总香豆素的溶解与溶剂的毒性,本实验选择乙醇作为提取水曲柳中总香豆素的溶剂。

通过正交实验设计及方差分析,表明乙醇浓度和超声提取时间均对总香豆素的提取具有非常显著性差异,而水浴温度与浸渍时间没有显著性差异,结合实际条件,优选出水曲柳皮总香豆素的最佳提取工艺为水曲柳粗粉加25倍量95%乙醇,室温超声提取45min。实验过程中发现水曲柳皮中含有较多的糖,所以选择95%的乙醇既能提高总香豆素的提取率,又能降低糖的溶解度,有利于香豆素成分的进一步纯化和分离。该提取工艺简单,成本低,节能省时,对研究水曲柳的提取分离具有一定的参考价值。