液_质联用串联质谱检测干血滤纸氨基酸水平的影响因素

氨基酸含量的影响
结果表明, 中心打孔组测得的
19 种氨基酸水平与周边打孔组之间比较无显著差 异。详见表 1 。
m o l/L ) 的影响
0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. t值 002 279 220 025 193 376 029 173 261 047 112 161 264 288 014 100 147 256 133 P值 0. 998 0. 781 0. 826 0. 980 0. 848 0. 708 0. 977 0. 863 0. 795 0. 963 0. 911 0. 873 0. 792 0. 774 0. 989 0. 921 0. 883 0. 799 0. 895 周边打孔组 93 . 65 ∃ 9 . 99 5 . 12 ∃ 1 . 11 30 . 24 ∃ 7 . 99 15 . 94 ∃ 1 . 63 0 . 85 ∃ 0 . 13 45 . 47 ∃ 4 . 44 105 . 07 ∃ 17. 40 120 . 91 ∃ 12. 80 60 . 57 ∃ 4 . 66 104 . 44 ∃ 12. 49 68 . 08 ∃ 13. 00 16 . 80 ∃ 2 . 94 29 . 13 ∃ 3 . 83 38 . 57 ∃ 3 . 94 160 . 10 ∃ 21. 47 131 . 87 ∃ 16. 95 39 . 64 ∃ 8 . 17 23 . 24 ∃ 4 . 57 133 . 84 ∃ 17. 10
中图分类号 : R 446 . 1
质量管理
液 质联用串联质谱检测干血滤纸氨基酸水平的影响 因素
李启亮 , 宋文琪, 徐樨巍, 周敏, 金芳 ( 北京儿童医院 检验中心, 北京 100045)
摘要 : 目的 影响因素组 : 分析液 质串联质谱检测干血滤纸片氨基酸水平 的影响 因素 , 寻找消 除这些 影响因 素的方 法 。 方法 设立 3 个 不同打孔位置组 ; ! 4 ∀ 条件下 , 不同滤纸片保存 时间组 ; # 室 温条件 下 , 不 同放置 时间组 。 比 较在上 述条件 不同的打孔位置对于 19 种氨基酸的测定没有明显的影响 。 不同的纸片保存时 间对
表 2 纸片保存时间对串联质谱检测氨 基酸水平 ( x ∃ s ,
氨基酸 A la A rg A sp C it Cys G ln G lu G ly H is Leu- Ile Lys M et O rn Phe Pro S er Thr Tyr V al 例数 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 新鲜纸片 158 . 9 ∃ 40. 98 9 . 77 ∃ 2. 89 40 . 45 ∃ 12. 33 18 . 34 ∃ 3. 09 0 . 65 ∃ 0. 11 33 . 23 ∃ 6. 37 238 . 43 ∃ 27. 40 190 . 33 ∃ 30. 21 40 . . 45 ∃ 11 . 56 107 . 59 ∃ 16. 78 74 . 56 ∃ 17. 36 14 . 35 ∃ 2. 78 36 . 57 ∃ 6. 34 41 . 23 ∃ 5. 48 176 . 90 ∃ 22. 90 141 . 34 ∃ 18. 67 45 . 67 ∃ 9. 70 55 . 78 ∃ 9. 99 146 . 38 ∃ 48. 90 保存 1个月 140. 79 ∃ 47 . 58 8. 02 ∃ 5 . 82 41. 57 ∃ 13 . 06 17. 66 ∃ 3 . 51 0. 72 ∃ 0 . 16 32. 90 ∃ 5 . 53 244. 79 ∃ 36 . 90 181. 99 ∃ 34 . 07 37. 63 ∃ 17 . 72 109. 65 ∃ 20 . 07 69. 20 ∃ 18 . 66 14. 86 ∃ 2 . 89 36. 03 ∃ 7 . 44 44. 45 ∃ 12 . 08 181. 74 ∃ 69 . 65 134. 17 ∃ 25 . 31 45. 17 ∃ 25 . 31 56. 16 ∃ 11 . 36 142. 36 ∃ 58 . 20 保存 3个月 138 . 15 ∃ 40. 07 11 . 91 ∃ 2. 23 35 . 50 ∃ 16. 43 17 . 80 ∃ 4. 61 0 . 62 ∃ 0. 16 37 . 14 ∃ 9. 51 168 . 37 ∃ 21. 50* 171 . 07 ∃ 25. 65* 45 . 91 ∃ 10. 68 116 . 68 ∃ 15. 32 71 . 77 ∃ 18. 93 16 . 83 ∃ 2. 79 34 . 77 ∃ 8. 63 46 . 61 ∃ 11. 74 178 . 61 ∃ 42. 21 141 . 70 ∃ 18. 66 46 . 50 ∃ 10. 66 60 . 55 ∃ 14. 86 128 . 67 ∃ 17. 00
表 1 打孔位置对串联质谱检测氨基 酸水平 ( x ∃ s ,
2 . 2 不同滤纸片保存时间对串联质谱检测干血滤 纸片上氨基酸含量的影响 由表 2 可以看出 , 大多 数氨基酸水平没有发生变化 , 但是 G lu 、 G ly 、 P ro、 Ser 等 4 种氨基酸的水平随纸片保存时间的不同而发生
1 . 4 样品 处理
按参考 文献
[ 1 - 2]
方 法, 取 直径 3 l全血 ), 置 96
mm 的质控干滤纸血片 (相当于 3 . 2
孔过滤板中 , 每 孔加 入含 氨基酸 内标 的甲 醇 100 l 室温放置 20 m in , , 萃取血片中的游离氨基酸, 离 心 ( 2 400 r /m in, 2 m in), 吸上清至另一个 96 孔聚 丙烯板中 , 50 ∀ 加热吹干 , 加入 70 l盐酸正丁醇 ( 3 mo l /L) , T eflon 膜覆盖, 置 65 ∀ 恒温箱内 15 m in 进行衍 生 化, 随 后再 50 ∀ 加热 吹干 , 最 后加 入 80 % 乙腈 100 l , 铝膜覆盖后混匀 , 上样检测。 1 . 5 定量分析 根据质谱峰的 m / z进行定性。由 于质谱峰强度与它代表的化合物的水平成正比, 通 过测定离子峰的强度, 可进行定量分析。定量分析 是由计算机软件 ( ChemV iew 1 . 2 , 美国生物 应用系 统公司 ), 根据各种丁酯化的氨基 酸及其同位素内 标的离子峰强度, 由已知水平的内标, 自动计算出所 测样品中氨基酸水平。 1 . 6 实验分组 本实验共有 3 个影响因素组 : 不 同打孔位置组, 其中包括 滤纸中心打孔组 ( 距滤纸 片边缘 2 mm 处打孔 ) 和滤纸周边打孔组。 ! 4 ∀ 条件下不同滤纸片保存时间组, 其中包括新鲜滤纸 片组、 保存 1个月组、 保存 3个月组、 保存 5个月组、 保存 7 个月组。 # 室温条件下 , 不同测定时间组, 包 括即时测定组、 放置 2 h 后组、 放置 4 h 组。 1 . 7 统计学处理 定量资料以 x ∃ s 表示。各影响 因素组之间数据的比较采用独立样本 t检验和方差
了明显的变化。 G lu 、 G ly 、 P ro 的水平随纸片保存时 间的延长而降低; Ser的水平随纸片保存时间的延长 而升高。
m o l/L ) 的影响
保存 5 个月 133 . 41 ∃ 40 . 38 7 . 36 ∃ 2. 39 30 . 15 ∃ 10 . 55 16 . 91 ∃ 3. 98 0 . 59 ∃ 0. 13 28 . 75 ∃ 14 . 26 * 165 . 12 ∃ 24 . 37 * 160 . 05 ∃ 29 . 96 37 . 82 ∃ 7. 59 109 . 18 ∃ 14 . 06 68 . 42 ∃ 17 . 68 14 . 85 ∃ 4. 11 32 . 57 ∃ 4. 14 39 . 91 ∃ 6. 90 * 134 . 38 ∃ 17 . 53 128 . 13 ∃ 19 . 45 46 . 47 ∃ 9. 93 54 . 34 ∃ 12 . 97 127 . 97 ∃ 27 . 49 保存 7个月 126. 64 ∃ 26 . 66 6. 13 ∃ 1 . 78 39. 07 ∃ 8 . 95 15. 97 ∃ 2 . 40 0. 56 ∃ 0 . 12 31. 76 ∃ 12 . 31 149. 70 ∃ 20 . 42* 166. 71 ∃ 28 . 53* 43. 00 ∃ 7 . 87 100. 28 ∃ 20 . 22 76. 07 ∃ 18 . 76 14. 24 ∃ 3 . 00 35. 69 ∃ 4 . 56 42. 35 ∃ 4 . 91 132. 90 ∃ 30 . 56* 154. 38 ∃ 16 . 46* 43. 70 ∃ 7 . 92 49. 17 ∃ 8 . 74 125. 55 ∃ 33 . 81
氨基酸是构建生物机体的生物 活性大分子之 一 , 是构建细胞、 修复组织的基础材料。氨基酸的缺 乏会引起人体的生长迟缓、 生理机能减退和对疾病 抵抗力的降低; 相反 , 如果体内的某些氨基酸 ( 如苯 丙氨 酸 ) 的浓度 太高, 又会导致 一些疾病 的发生。 因此, 及时准确地向临床医师提供患儿的氨基酸水 平情况 , 对于临床诊治患儿是十分重要的。 1 材料与方法 1 . 1 标本 60 份标本均来自我院门诊健康体检儿 童 , 男女各 30 例, 年龄 0 . 1 ~ 15 岁, 平均年龄 4 . 36 岁。其血细胞分析均正常 , 无血栓性疾病及出凝血 功能障碍, 无心肝肾等重要脏器疾病 , 也无任何内分 泌疾病。采血部位为肘前静脉 ( 空腹 ) , 直接将注射 器中的全血滴加在 903 滤纸上。 1 . 2 仪器 Shm azu DGU 20A3 型高效液相分析仪 ( 日本岛 津公 司 ), AP I 2000 型 质谱 分 析仪 ( 美国 AB I公司 ) , 96 孔板氮吹仪 ( 北京众益中和公司 ) , 零 级空气发生器 (天津市达因仪器厂 )。 1 . 3 试剂 相应的 8 种氨基酸同位素内标 ( 15N; 2 13C G ly, 2H 4 A la 、2 H 8 V a, l 2H 3 Leu, 2H 3 M e, t 13C6 Phe, 13C6 T yr , 2H 3 Asp , 2H 3 G lu , 2 H 2 O rn) 购于英国剑桥同位素实验 室; 甲醇、 盐酸正丁醇 ( 3 m o l/L ) 、 乙腈均购于 美国 Sigm a 公司 ; 高纯氮气和 903滤纸 ( 德国 W hatm an 公司 ) ; 质控用干血滤纸片 由美国 CDC 质控部门提供。
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临床检验杂志 2009 年第 27 卷第 4 期
Ch inese Journa l of C lin ica l L aboratory Sc ience , 2009 , V o l 27 , No 4 文献标识码 : A
文章编号 : 1001 764X ( 2009) 04 0302 03
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Байду номын сангаас
分析。使用 SPSS 13 . 0统计软件进行统计。 2 结果 2 . 1 不同打孔位置对串联质谱检测干血滤纸片上
氨基酸 A la A rg A sp C it Cys G ln G lu G ly H is Leu- Ile Lys M et O rn Ph e Pro Ser Th r Tyr V al 例数 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 中心打孔组 93. 66 ∃ 10 . 16 5. 05 ∃ 1 . 09 30. 63 ∃ 8 . 00 15. 95 ∃ 1 . 68 0. 86 ∃ 0 . 13 45. 83 ∃ 4 . 24 104. 95 ∃ 17 . 85 120. 41 ∃ 12 . 94 60. 30 ∃ 4 . 62 104. 31 ∃ 12 . 80 68. 41 ∃ 13 . 25 16. 70 ∃ 2 . 98 28. 90 ∃ 3 . 79 38. 32 ∃ 3 . 88 160. 03 ∃ 22 . 02 131. 49 ∃ 17 . 30 39. 37 ∃ 8 . 29 22. 98 ∃ 4 . 54 133. 35 ∃ 17 . 39
作者简介 : 李启亮 , 1979年生 , 女 , 检验学硕士 , 从事临床检验工作。 E ma i:l liqil iang2005 @ 126 . com。
临床检验杂志 2009 年第 27 卷第 4 期
Chinese Journal of C lin ica l L aboratory Science , 2009, V o l 27, N o 4
下检测干血滤纸片的 氨基酸水平 。 结果
多数氨基酸的测定没 有明显的影响 , 但是 G lu 、 G ly 、 P ro 、Se r 4 种氨基酸的水平随着纸片保存时间的 不同而发 生了明显的 变化 ; 不同的放置时间对多 数氨基酸的测定没有明显影响 , 但是 A rg 、 G ln、 G lu 、 L ys 、 T yr 5 种氨 基酸的 水平随 着放置时 间的不 同而发 生了明显的变化 。 结论 在使用串联质 谱法检测干血滤纸片上的氨基酸水平时 应使用新 鲜纸片 , 及时进行 预处理 , 从而保证 结果的稳定性和准确 性 。 关键词 : 氨基酸 ; 干血滤纸片 ; 串联质谱法