动物细胞培养
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
细胞贴满瓶壁 胰蛋白酶处理
细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养
……
结束
用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出 生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这 样的组织细胞 （ D ）
A. 容易产生各种变异 B．具有更强的全能性 C. 取材十分方便 D．分裂增殖的能力强
结束
在动物细胞培养过程中遗传物质肯定发生改 变的细胞是 ----------------（ D ）
的细胞很快就贴附在
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
单个细胞 处理 加培养液稀释
细胞悬液
当瓶贴壁壁上细，胞称分为裂细生胞长贴到 原
原代表培壁养面。：相人互们接通触常时将动,细物胞组就 代 转入培养瓶培养
织消会化后停的止初分次裂培增养殖称为，原这代种 培
适宜条件下培养
培养现。象称为细胞的接触抑 养 细胞贴满瓶壁
思考题？？？
材料：（1）血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。氨
基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨 基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由 培养液提供。 （2）血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子 （如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长 因子等）， 血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促 贴附因子及其他活性物质。
满瓶壁
瓶培养
分瓶培养
……
二、动物细胞培养的过程：
动物组织块 剪碎、用胰蛋白酶处理
单个细胞
加培养液稀释 细胞悬液
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
细胞贴满瓶壁 胰蛋白酶处理
细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养
……
三、动物细胞培养过程分析：
1、取材：选用动物幼嫩的组织
好还是衰老的组织好，为什么？
幼嫩的组织。因为其细胞生 命力旺盛，分裂能力强。
问题2：根据资料分析，动物细胞进行培养时通常 要添加血清？
（1）提供必须的及未知的营养物质；
（2）提供能促进细胞的生长、增殖和贴附的物质
因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和 增殖，一般需添加10%～20%的血清。
总结：
动物组织块 剪碎、用胰蛋白酶处理
单个细胞
加培养液稀释 细胞悬液
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
三、动物细胞培养过程分析：
3、动物细胞培养的条件
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
单个细胞 处理
加培养液稀释
其它方面：
细胞悬液
（4）无菌无毒的环境
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
细胞贴满瓶壁
胰蛋白酶处理
细胞悬液 加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
4、细胞增殖过程
特 贴壁生长 点 在接培触养抑瓶制悬液中分散
细胞悬液
（2）用胰蛋白酶处理会不会对所 培养的细胞造成损伤？
细胞膜的成分是什么？ 蛋白酶的作用是什么？
在用胰蛋白酶处理组织时 应注意什么？？？
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
细胞贴满瓶壁
胰蛋白酶处理
细胞悬液
控制好时间！长时间处理会 损伤细胞。
加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
3、动物细胞培养的条件
3、动物细胞培养的条件
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
成分方面：
单个细胞 处理
加培养液稀释
（2）气体：
细胞悬液
氧气是细胞代谢必需的；
CO2维持培养液的PH。 “95％空气+5％CO2”的混 合气体培养箱。
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
细胞贴满瓶壁
胰蛋白酶处理
细胞悬液 加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
成分方面：
单个细胞 处理
加培养液稀释
（1）营养：
细胞悬液
（（---糖-水--、、液氨无体基机合酸盐成）、培、微养促量基生元长素因）子等、--转细入胞培贴养满适瓶瓶宜培壁条养件下培养
通常还需加入血浆、血清等 天然成分。
胰蛋白酶处理 细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
细胞悬液 加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
小资料：动物组织细胞间隙中含有一定量 动物组织块 剪碎、用
的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成
具有一定弹性和韧性的组织和器官。
胰蛋白酶可以将动物组织细胞
单个细胞
胰蛋白酶 处理
间的蛋白质成分酶解，使细胞
加培养液稀释
分散开，获得单个细胞。
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
单个细胞 处理 加培养液稀释
常选动物胚胎或幼龄个体的器官、 细胞悬液
组织为材料
2、材料处理：培养前将组织细转入培养瓶培养
胞分散成单个细胞是为了扩大细胞
适宜条件下培养
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
与培养液的接触面积，利于细胞吸 细胞贴满瓶壁
收营养。
胰蛋白酶处理
（1）将组织分散成单个细胞时为什 么要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 处理？
材料：
相关动物组织
培养前处理：分散成单个细胞
培养结果： 大量相同细胞
原理：
细胞增殖（有丝分裂）
二、动物细胞培养的过程：
动物 剪碎
单个 加__培__养__液__稀__释_
组织 块 用_胰__蛋__白_酶__处理
细胞
__细__胞__悬_液____
细胞 悬液
_胰__蛋_白__酶__处理细胞贴 适__宜_条__件__下__培__养转入培养
制。
传
胰蛋白酶处理
传代培养：分瓶继续培养的过程。代培 养
细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养 ……
思考题？？？
问题1：依据动物细胞培养条件分析，将动物细胞 分散成单个细胞为什么用胰蛋白酶处理而不用胃 蛋白酶？
动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适 宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为 7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。
3、动物细胞培养的条件
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
理化性质方面：
单个细胞 处理
加培养液稀释
（3）温度和pH：
细胞悬液
转入培养瓶培养
适宜的温度：人和哺乳动物细胞
适宜条件下培养
最适温度为36.5±0.5℃。 细胞贴满瓶壁
适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4
胰蛋白酶处理 细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养 ……
动物细胞培养
一、动物细胞培养的概念：
1、概念：动物细
胞培养就是从动物 有机体中取出相关 的组织,将它分散 成单个细胞,然后, 放在适宜的培养基 中,让这些细胞生 长和增殖.
2、概念分析
动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将 它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些 细胞生长和增殖.
A．原代细胞 B．10代以内的传代细胞 C．10-50代地细胞株 D．50代后具有无限传代能力的细胞
细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养
……
结束
用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出 生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这 样的组织细胞 （ D ）
A. 容易产生各种变异 B．具有更强的全能性 C. 取材十分方便 D．分裂增殖的能力强
结束
在动物细胞培养过程中遗传物质肯定发生改 变的细胞是 ----------------（ D ）
的细胞很快就贴附在
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
单个细胞 处理 加培养液稀释
细胞悬液
当瓶贴壁壁上细，胞称分为裂细生胞长贴到 原
原代表培壁养面。：相人互们接通触常时将动,细物胞组就 代 转入培养瓶培养
织消会化后停的止初分次裂培增养殖称为，原这代种 培
适宜条件下培养
培养现。象称为细胞的接触抑 养 细胞贴满瓶壁
思考题？？？
材料：（1）血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。氨
基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨 基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由 培养液提供。 （2）血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子 （如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长 因子等）， 血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促 贴附因子及其他活性物质。
满瓶壁
瓶培养
分瓶培养
……
二、动物细胞培养的过程：
动物组织块 剪碎、用胰蛋白酶处理
单个细胞
加培养液稀释 细胞悬液
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
细胞贴满瓶壁 胰蛋白酶处理
细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养
……
三、动物细胞培养过程分析：
1、取材：选用动物幼嫩的组织
好还是衰老的组织好，为什么？
幼嫩的组织。因为其细胞生 命力旺盛，分裂能力强。
问题2：根据资料分析，动物细胞进行培养时通常 要添加血清？
（1）提供必须的及未知的营养物质；
（2）提供能促进细胞的生长、增殖和贴附的物质
因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和 增殖，一般需添加10%～20%的血清。
总结：
动物组织块 剪碎、用胰蛋白酶处理
单个细胞
加培养液稀释 细胞悬液
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
三、动物细胞培养过程分析：
3、动物细胞培养的条件
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
单个细胞 处理
加培养液稀释
其它方面：
细胞悬液
（4）无菌无毒的环境
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
细胞贴满瓶壁
胰蛋白酶处理
细胞悬液 加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
4、细胞增殖过程
特 贴壁生长 点 在接培触养抑瓶制悬液中分散
细胞悬液
（2）用胰蛋白酶处理会不会对所 培养的细胞造成损伤？
细胞膜的成分是什么？ 蛋白酶的作用是什么？
在用胰蛋白酶处理组织时 应注意什么？？？
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
细胞贴满瓶壁
胰蛋白酶处理
细胞悬液
控制好时间！长时间处理会 损伤细胞。
加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
3、动物细胞培养的条件
3、动物细胞培养的条件
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
成分方面：
单个细胞 处理
加培养液稀释
（2）气体：
细胞悬液
氧气是细胞代谢必需的；
CO2维持培养液的PH。 “95％空气+5％CO2”的混 合气体培养箱。
转入培养瓶培养 适宜条件下培养
细胞贴满瓶壁
胰蛋白酶处理
细胞悬液 加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
成分方面：
单个细胞 处理
加培养液稀释
（1）营养：
细胞悬液
（（---糖-水--、、液氨无体基机合酸盐成）、培、微养促量基生元长素因）子等、--转细入胞培贴养满适瓶瓶宜培壁条养件下培养
通常还需加入血浆、血清等 天然成分。
胰蛋白酶处理 细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
细胞悬液 加培养液稀释
分瓶培养 ……
三、动物细胞培养过程分析：
小资料：动物组织细胞间隙中含有一定量 动物组织块 剪碎、用
的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成
具有一定弹性和韧性的组织和器官。
胰蛋白酶可以将动物组织细胞
单个细胞
胰蛋白酶 处理
间的蛋白质成分酶解，使细胞
加培养液稀释
分散开，获得单个细胞。
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
单个细胞 处理 加培养液稀释
常选动物胚胎或幼龄个体的器官、 细胞悬液
组织为材料
2、材料处理：培养前将组织细转入培养瓶培养
胞分散成单个细胞是为了扩大细胞
适宜条件下培养
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
与培养液的接触面积，利于细胞吸 细胞贴满瓶壁
收营养。
胰蛋白酶处理
（1）将组织分散成单个细胞时为什 么要用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 处理？
材料：
相关动物组织
培养前处理：分散成单个细胞
培养结果： 大量相同细胞
原理：
细胞增殖（有丝分裂）
二、动物细胞培养的过程：
动物 剪碎
单个 加__培__养__液__稀__释_
组织 块 用_胰__蛋__白_酶__处理
细胞
__细__胞__悬_液____
细胞 悬液
_胰__蛋_白__酶__处理细胞贴 适__宜_条__件__下__培__养转入培养
制。
传
胰蛋白酶处理
传代培养：分瓶继续培养的过程。代培 养
细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养 ……
思考题？？？
问题1：依据动物细胞培养条件分析，将动物细胞 分散成单个细胞为什么用胰蛋白酶处理而不用胃 蛋白酶？
动物细胞培养的最适PH值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适 宜PH为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为 7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。
3、动物细胞培养的条件
动物组织块 剪碎、用 胰蛋白酶
理化性质方面：
单个细胞 处理
加培养液稀释
（3）温度和pH：
细胞悬液
转入培养瓶培养
适宜的温度：人和哺乳动物细胞
适宜条件下培养
最适温度为36.5±0.5℃。 细胞贴满瓶壁
适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4
胰蛋白酶处理 细胞悬液
加培养液稀释
分瓶培养 ……
动物细胞培养
一、动物细胞培养的概念：
1、概念：动物细
胞培养就是从动物 有机体中取出相关 的组织,将它分散 成单个细胞,然后, 放在适宜的培养基 中,让这些细胞生 长和增殖.
2、概念分析
动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将 它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些 细胞生长和增殖.
A．原代细胞 B．10代以内的传代细胞 C．10-50代地细胞株 D．50代后具有无限传代能力的细胞