标准菌株质量控制作业指导书
(完整版)质量控制作业指导书
(完整版)质量控制作业指导书质量控制作业指导书目标本文档旨在为质量控制作业的执行提供指导，确保产品和服务的质量符合标准并满足客户需求。
步骤1. 确定质量标准：确定所涉及产品或服务的质量标准，以确保质量控制的目标清晰明确。
2. 收集数据：收集与产品或服务质量相关的数据，包括但不限于工艺参数、测量数据等。
3. 分析数据：通过合适的数据分析工具和方法，对收集的数据进行分析，以揭示潜在的问题和改进机会。
4. 制定改进方案：基于数据分析的结果，制定相应的质量改进方案，包括但不限于工艺调整、流程优化等。
5. 实施改进方案：依据制定的改进方案，实施相应的改进措施，并确保过程中的每个环节都得到妥善执行。
6. 监控和评估：建立监控机制，持续跟踪改进方案的执行情况，并进行评估，确保改进效果的稳定有效。
7. 反馈和调整：根据监控和评估的结果，及时提供反馈，针对不足之处进行调整和改进。
质量控制要点- 强调预防：重视预防性措施，通过不断优化产品和服务的设计及流程，最大程度地避免潜在问题的产生。
- 持续改进：持续改进是质量控制的核心目标，要保持不断进步的态势，不断提高产品和服务的质量水平。
- 团队合作：质量控制需要全员参与，研发、生产、品质等各个环节都应紧密合作，共同推动质量提升。
- 数据驱动：质量控制的决策应基于数据，通过数据分析和评估，为改进方案的制定提供科学依据。
注意事项- 确保操作规范性：执行质量控制作业时，严格按照操作规范进行操作，以保证数据准确性和结果可信度。
- 不定期复核：定期复核已实施的质量控制措施，评估其有效性，并根据需要进行调整和改进。
- 沟通和沟通：加强与相关部门和人员的沟通合作，及时共享信息和问题，加强整体效能。
结论质量控制是确保产品和服务质量的关键环节，本作业指导书为质量控制工作提供了具体指导和要点，希望能够帮助质量控制团队提高质量管理水平，并持续改进产品和服务的质量。
标准菌株制备作业指导书
标准储存菌株和工作菌株制备作业指导书一、目的保证菌种经过较长时间保藏后仍然保持较强的生命力，不被其他杂菌污染，减少菌株突变或发生典型的特性变化，从而保证微生物学检验结果的准确可靠。
二、方法依据《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB4789.28-2013》及《附录B标准储存菌株和工作菌株的制备》。
三、适用范围适用于本中心检验菌种（大肠埃希氏菌、产气肠杆菌）的传代、储存及工作菌株制备。
四、名词解释4.1标准菌株（F0）:直接从官方菌种保藏机构获得。
4.2标准储备菌株（F1):将标准菌株在实验室转接一代以后得到的一套完全相同的独立菌株。
4.3储备菌株（F2）：从标准储备菌株转接一代获得的培养物。
4.4工作菌株：由标准储备菌株、储备菌株或标准物质转接一代获得的菌株。
五、培养基和试剂5.1营养肉汤5.2营养琼脂5.3乳糖蛋白胨培养液5.4 75%乙醇5.5 无菌水六、仪器设备6.1生物安全柜6.2生化培养箱（37℃，44.5℃）6.3高压蒸汽灭菌器6.4冰箱（4℃，﹣20℃）6.5微型旋涡混合仪6.6水浴恒温振荡器6.7接种环6.8酒精灯七、标准储存菌株的制备7.1本中心所需标准菌株从认可的菌种中心购买，并要求生产商提供验证报告。
冷冻干燥菌种为0代。
本中心应做好符合性检查并做好符合性检查并填写记录，做好文件归档。
7.2菌种复活7.2.1将标准菌株及已灭菌的培养基等用物移入生物安全柜。
7.2.2点燃酒精灯，在酒精灯火焰周围5厘米无菌区内，用砂轮在距菌种管封口端1/3处划痕，75%酒精棉球消毒菌种管外壁，用无菌纱布包裹菌种管末端用力掰开。
7.2.3用无菌吸管吸取0.5ml适宜的液体培养基加到菌快上，混匀成菌悬液。
再将全部菌悬液移入含有5ml适宜的培养基的培养试管中，在37℃生化培养箱中培养12～18小时。
7.2.4取出培养试管，仔细观察液体培养基是否浑浊，浑浊说明菌种复活成长。
形成第一代菌种（F1），各菌种适宜培养基及培养条件见表1.7.3在适宜的固体培养基上进行平板分离选择适宜的鉴别平板，用灼烧灭菌的接种环完全浸入复活的培养基中，取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次去除多余的液体。
标准菌株的制备
标准储存菌株和工作菌株制备作业指导书一、目的保证菌种经过较长时间保藏后仍然保持较强的生命力，不被其他杂菌污染，减少菌株突变或发生典型的特性变化，从而保证微生物学检验结果的准确可靠。
二、方法依据《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB4789.28-2013》及《附录B标准储存菌株和工作菌株的制备》。
三、适用范围适用于本中心检验菌种（大肠埃希氏菌、产气肠杆菌）的传代、储存及工作菌株制备。
四、名词解释4.1标准菌株（F0）:直接从官方菌种保藏机构获得。
4.2标准储备菌株（F1):将标准菌株在实验室转接一代以后得到的一套完全相同的独立菌株。
4.3储备菌株（F2）：从标准储备菌株转接一代获得的培养物。
4.4工作菌株：由标准储备菌株、储备菌株或标准物质转接一代获得的菌株。
五、培养基和试剂5.1营养肉汤5.2营养琼脂5.3乳糖蛋白胨培养液5.4 75%乙醇5.5 无菌水六、仪器设备6.1生物安全柜6.2生化培养箱（37℃，44.5℃）6.3高压蒸汽灭菌器6.4冰箱（4℃，﹣20℃）6.5微型旋涡混合仪6.6水浴恒温振荡器6.7接种环6.8酒精灯七、标准储存菌株的制备7.1本中心所需标准菌株从认可的菌种中心购买，并要求生产商提供验证报告。
冷冻干燥菌种为0代。
本中心应做好符合性检查并做好符合性检查并填写记录，做好文件归档。
7.2菌种复活7.2.1将标准菌株及已灭菌的培养基等用物移入生物安全柜。
7.2.2点燃酒精灯，在酒精灯火焰周围5厘米无菌区内，用砂轮在距菌种管封口端1/3处划痕，75%酒精棉球消毒菌种管外壁，用无菌纱布包裹菌种管末端用力掰开。
7.2.3用无菌吸管吸取0.5ml适宜的液体培养基加大菌快上，混匀成菌悬液。
再将全部菌悬液移入含有5ml适宜的培养基的培养试管中，在37℃生化培养箱中培养12-18小时。
7.2.4取出培养试管，仔细观察液体培养基是否浑浊，浑浊说明菌种复活成长。
形成第一代菌种（），各菌种适宜培养基及培养条件见表1.7.3在适宜的固体培养基上进行平板分离选择适宜的鉴别平板，用灼烧灭菌的接种环完全浸入复活的培养基中，取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次去除多余的液体。
标准菌株质量控制作业指导书
标准菌株质量控制作业指导书1、目的：对微生物标准菌株的验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等进行规定，确保标准菌株符合要求，保证检测结果。
2、职责：2.1、检测中心主任负责标准菌株资源的配备。
2.2、微生物检测室工作人员负责标准菌株的有效储存和正确的使用。
3、要求：3.1供应商的选择：选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须有附件的供应商的合格证或检测报告，来证明所采购的标准菌株是合格的。
3.2标准菌株和验收菌株一到实验室，一定要记录好菌株号和标准菌株来源，确保溯源性清楚。
同时，还应尽可能多的菌株信息，如：标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等。
3.3冻干标准菌株的复活：3.3.1、开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株保藏管上。
3.3.2、复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明）进行复活。
冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。
捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。
垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。
通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭子浸于水合液体。
挤压并旋转拭子，接种于初级培养平板，接种圈的直径约为25mm，用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次，促使分离出单菌落。
同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种3%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤管。
将接种好的平板和管立即进行培养。
细菌培养温度通常为25℃或37℃。
多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。
复活后的菌株为F1代。
3.3.3将TSB生长的浓菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出，将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代。
将平板上生长的良好菌株接种于营养琼脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化钠营养琼脂）36℃培养24h当作工作菌株，为W3代，记录为F2代。
菌种管理作业指导书
6.1《采购控制程序》
6.2《微生物实验室安全操作指导书》
6.3《化妆品卫生规范》
6.4 GB/T 4789食品卫生微生物学验7 记录表格无
3.2 微生物检测人员负责提出菌种采购需求、菌种接收、传代、保存及废弃菌种培养物的销毁，负责填写菌种的使用和销毁记录等。
4 概念
原代：指自权威菌种保藏中心购买回的原始冻干菌种或标准菌株。从其中（未经培养）转接出来并经过培养而得的菌种为第一代；从第一代转接出来并经过培养而得的菌种为第二代；每经过一次转接和培养即为一代，依此类推。以上菌株也可通称为标准菌种。具体的各菌种培养温度与时间参照菌种说明书或证明文件。
5.2.2验收时应检查其外包装，数量及菌种外观。要求外观无破损，标识正确清楚，数量正确，并有标准菌种编号和溯源性证明资料。
5.2.3实验室收到菌种后检测人员应按有关说明书资料及菌种的生理生化特性调查菌种的分类、性状、适合生长的培养基和保存条件，以及有否危害的情况，为使用人员提供必要的使用知识及注意事项。同时应填写相关验收记录。
5.3.7控制传代次数。根据菌种特性和实际保存情况规定最多传代次数，传代次数一般不超过5次，时间不超两年。
5.3.8根据需要及时提供菌种，并且应是正常、无变异的。
5.3.9 菌种操作应在无菌条件进行，防止杂菌污染。在使用过程中如出现杂菌污染或菌种性能下降，应及时更换新的菌种。
5.4菌种的保存
5.4.1菌种保存时就作好标识，标明名称、编号、购买日期或传代日期、传代次数。
5.6菌种的销毁
使用完毕的原种、保存菌种、工作菌种及其废弃培养物等，均应及时监督人员监督销毁人员进行销毁。销毁方式为：121℃高压灭菌30分钟。并对销毁效果进行不定期抽查确认。确认方式为：取销毁完毕的液体或培养物适量，接种至无菌检测用培养基(如硫乙醇酸盐液体培养基)中培养，无浑浊发生，并填写相应记录。
06菌种保存、传代管理作业指导书.
06菌种保存、传代管理作业指导书.菌种保存、传代管理制度1.⽬的为保证实验室标准菌株保藏及传代规范有效，保证⼯作菌株储存制定本作业指导书。
2.适⽤范围适⽤本实验室保藏具有菌种标准号的标准菌株及本实验室在检测中分离的已证明菌株。
3．来源1.1微⽣物实验室使⽤的参照菌种来源有⼆：⼀是从标准菌株提供单位购买获得的标准菌株，⼆是从本实验室⽇常检测中分离到的阳性菌株。
1.2实验室如需购买某种标准菌株，则由微⽣物检测相关⼈员提出申请并填写《耗材采购申请单》，经技术负责⼈批后，从标准菌株提供单位购买具有标准号的有证标准菌株。
1.3实验室在⽇常检测中发现的阳性菌株如需留存，由⽣物安全员提出申请并填写《菌种、毒种（株）阳性标本保管⽬录登记表》，经技术负责⼈审批后，进⾏存。
4．验收、验证4.1购买的标准菌株到达实验室由试剂管理员与⽣物安全员共同进⾏验收，主要观察和核对其包装、名称、标识、编号、有⽆破损、污染以及瓶塞紧否等外观状态，并填写《物质验收⼊库登记表》与《菌种、毒种（株）阳性标本保管⽬录登记表》，验收合格的菌株存放于指定冰箱；验收不合格的菌株及时退货，并让发货单位重新发货。
4.2标准菌株验收后由⽣物安全员组织有关⼈员对购买的标准菌株进⾏复活传代后，验证确认鉴定，并填写《菌种、毒种（株）验证记录表》。
验证合格菌株存放于指定冰箱；验证不合格菌株及时退货，并重新申请购买。
4.3实验室⾃留菌株因在检测过程中已经过确认，⽆需重新验证。
5．保存与传代5.1经过确认的新菌种（包括购买的标准菌株、实验室⾃留的阳性菌株以及这⼆者传代后得到的⼦代菌株）保存在菌种室的专⽤冰箱，冰箱由⽣物安全员实⾏双⼈双锁管理。
5.2购买的标准品初次使⽤时，应⼤量增殖，菌种保存采⽤斜⾯传代、琼脂斜⾯加固体⽯腊封管、磁珠冷冻保存等⽅法，即接种后37℃培养18h左右，⽤上述⽅法处理、塞上橡⽪塞、并做好有关标识，⽤斜⾯传代、琼脂斜⾯加液体⽯腊管置0-5℃5.3专⽤冰箱保存，磁珠置-20℃以下保存。
011-菌种使用管理程序---检验科作业指导书
检验科作业指导书
菌种使用管理程序
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1 目的 制定菌种管理程序的目的是保证菌种合理、有效的使用和保存，保证实验室和社会的生物安全。 2 菌种的类型及用途 2.1 质控菌株的作用及其来源 质控菌株主要包括标准菌株(购买于国家菌种保存中心)和室间质评标本分离株（广东省临检中心 和卫生部临检中心）；标准菌株均为 ATCC 菌株，主要用于药物敏感试验和菌株鉴定试剂方面的室内质 控，如 MicroScan Walkaway40 微生物鉴定及药敏分析仪检测板、API 试剂条、Ｋ－Ｂ法药敏试验等的 质控。室内质量控制主要菌株的一览表见表 1-11-1。
1.API 20C 的质控
流感嗜血杆菌
ATCC10211
1.API NH 的质控 2.HTM 平板质控
2.2 临床分离株
日常工作中的临床分离株，可按需要进行留取菌种保存，主要应用于流行病学调查和实验科研等。
3 菌种的保存方法
3.1 平板 4℃保存法
此法只适合短期保存菌种，可用于每周转种的质控参考菌株的保存，方法是将要用的菌株转种于
表 1-11-1 室内质量控制主要菌株的一览表
菌种名称
菌种代码
菌种用途
肺炎链球菌 流感嗜血杆菌 淋病奈瑟菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌
ATCC49619 ATCC49247 ATCC49226 ATCC29213 ATCC25923
ATCC25922
1.血平板培养基质控 2.链球菌药敏质控(K-B 法) 3.OP 试验质 控 1.巧克力平板培养基质控 2.流感嗜血杆菌 K-B 法药敏试验质 控 3.X,X+V,V 因子试验质控 1.淋球菌平板培养基质控 2.淋球菌 K-B 法药敏试验质控. 3.GC 平板的质控 1.PC20 板质控(包括鉴定与微量肉汤稀释法药敏试验) 2.B 内 酰胺酶试验阳性质控 3. 触酶试验阳性质控 1.葡萄球菌 K-B 法药敏试验质控 2.革兰氏染液质控 3.葡萄球 菌乳胶凝集试剂阳性质控 4.血平板/伊红美兰/营养琼脂平板 培养基质控 5.API20Strap 的质控 1.NUC33/NC31 板质控(包括鉴定与微量肉汤稀释法药敏) 2.革 兰氏/抗酸染液质控 3. 伊红美兰/营养琼脂平板培养基质控 4.氧化酶试剂阴性质控 5.ESBL 试验阴性株质控 6.API20E 的 质控
ATCC菌种管理作业指导书
ATCC cultures have been cited in national and international standards for many years. Examples include the standards promulgated by the National Committee for Clinical Labora-tory Standards (NCCLS) for the healthcare community and the United States Pharmacopeia (USP) for the pharmaceutical and biopharmaceutical industries. Cultures are used in performance testing of products, as positive and negative controls, as indica-tor organisms, and as identification standards.Though the use of microbiological standards is widely accepted there is still some confusion as to specific labora-tory guidelines, especially when determining the number of subcultures allowed beyond the reference strain. As recently as January and June 2003 discussions about passages took place on the Pharmaceutical Microbiological Mail List (PMFLIST) (1-3). This article will attempt to clear up some of this confusion and provide some definitions and recommendations.Strain definitionsThe confusion starts with the different names that are ascribed to these cultures. In various NCCLS and USP publica-tions these cultures are called control strains, standard cultures, reference strains, test strains, and quality control strains. These terms can generally be used interchangeably, though the pref-erence seems to be reference strain or reference culture. Both the NCCLS and USP agree that reference strains should come from a reliable source; both organizations cite ATCC. There is agreement that the reference strains from ATCC are subcul-tured to make “stock cultures,” which are subcultured weeklyor monthly to make the “working cultures” used daily. Working cultures are often kept as slants, and it is these subcultures that raise the questions about passages from the original reference strain.A subculture is a passage. The USP26 Antimicrobial Effec-tiveness Testing, section 51 states:“For the purposes of the test, one passage is defined as the transfer of organisms from an established culture to fresh medium. All transfers are counted.” (4)This definition was recently updated in the Pharmacopeial Previews to read:“One passage is defined as the transfer of organisms froma viable culture to fresh medium with growth of the micro-organisms. Any form of subculturing is considered to be a transfer/passage.” (5)This updated definition is preferable. The earlier definition left questions about the meaning of “an established culture.” There were several questions raised on the PMFLIST as to whether the frozen or freeze-dried vial from ATCC was an established cul-ture. To some, the phrase “established culture” implied a grow-ing culture. It is clear, however, that these frozen or freeze-dried vials of reference strains from ATCC are indeed “viable” cultures.A passage involves growing the microorganism with fresh medium, either on solid agar or in broth. Resuscitating frozen or freeze-dried cultures by thawing or rehydrating is not by itself considered a passage. Thus subculturing the reference strain from ATCC’s frozen or freeze-dried vial to the stock culture is the first passage. Subculturing stock cultures to working cultures is the second passage from the original reference strain. Any sub-sequent subculture is another cumulative passage. Authenticity of culturesAnother term used by commercial sources other than ATCC is “ATCC derived.” A culture is derived from the ATCC reference strain by subculturing�in other words, one or more passages. In most cases it is not known how many passages are used by the com-mercial source to produce their cultures. Some commer-cial sources charge a premium for cultures certified to be “only” two passages from the ATCC. The NCCLS recognizes reliable commercial sources for reference strains. However, you must take into account that these cultures are at least one or two passages from the ATCC reference strains.Maintaining culturesThe USP recommends a seed lot system to maintain refer-ence strains in laboratories. In this system the ATCC reference strain is subcultured to several replicates at one time, all of which are within one passage. These replicates of the stock culture are the seed vials for the laboratory. The seed stock is subcultured, the second passage, to make replicates of working cultures. This is the same system that the ATCC uses to minimize passages in its culture collection (Figure 1).But how many passages are recommended or acceptable in the laboratory? There is agreement that the number of pas-sages should be minimized to reduce the possibility of phe-notypic variations, genetic drift, and contamination as muchas possible, but standards organizations differ as to how many passages are acceptable.Over the years the recommendations from the NCCLS have varied. The least specific recommendations call for subcultur-ing stock cultures weekly with new working cultures subcul-tured monthly, with no maximum number of passages noted. Another NCCLS standard recommends up to three subcultures of the stock cultures and up to three subcultures of the working cultures (6). This would add up to up to seven passages fromReference Strains: How Many Passages are Too Many?P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108 | TEL 800 638 6597 or 703 365 2700 | FAX 703 365 2750 | No. 6the original ATCC reference culture (one to make the first stock culture, plus three subcultures and three additional subcul-tures).USP standards have been more specific. USP clearly states that the working cultures used for testing should not be more than five passages from the ATCC reference culture. The USP26 states:“The viable microorganisms used in this test must not be more than five passages from the original ATCCculture.” (4)The USP26 also contains the following definition:“Microbial Strains – Where a microbial strain is cited andidentified by its ATCC catalog number, the specified strain shall be used directly or, if subcultured, shall be used notmore than five passages removed from theoriginal strain.” (7)The recommendation of five passages or less from the ATCC reference culture has been broadly accepted in the healthcare community and the pharmaceutical and biophar-maceutical industries. ATCC agrees with this recommendation.Utilizing cold storageStorage temperature of stock and working cultures can affect growth characteristics and viability. The NCCLS recom-mendations include storage at −50°C to −70°C for one yearor below −70°C indefinitely (5), or −20°C or below (preferably below −70°C) for “prolonged” storage (8). Storage of slantsis recommended at 2 to 8°C for either one week (8,9) or two weeks (10). The USP26 recommends storage in liquid nitrogen or a mechanical freezer below −50°C.For long-term storage of frozen cultures, ATCC recom-mends the vapor phase of liquid nitrogen or a mechanical freezer at −80°C. Immersion in liquid nitrogen is not recom-mended. Frozen cultures may be kept at −20°C for short-term storage (less than one month). Do not store frozen cultures in a freezer with a defrost cycle; this will expose the cultures to higher temperatures. Freeze-dried cultures should be stored at 2 to 8°C. Slants can be kept at 2 to 8°C for up to a week.In conclusion, the ATCC recommendations are:1. ATCC reference strains should be subcultured to repli-cate stock cultures in the laboratory. Stock cultures canbe subcultured for working cultures weekly, typicallykept as slants. A seed lot system is recommended.2. A passage is defined as a subculture involving growth ofthe viable microorganism with fresh medium. Thawingor rehydrating ATCC reference cultures is not a passage.3. Microorganisms for standard protocols should be usedwithin five passages of the ATCC reference culture.4. Frozen cultures should be stored in the vapor phase ofliquid nitrogen or in a mechanical freezer at −80°C orbelow. Freeze-dried cultures should be stored at 2 to8°C. Slants may be stored at 2 to 8°C for up to a week. References1. Friedel B. Culture passage guidelines. In: PMFLIST Archives [Inter-net]. [The Pharmaceutical Microbiology Mail List] 2003 Jan 2.Available from: /archives/pmflist.html 2. Kramer, K. Seed stock culture. In: PMFLIST Archives [Internet]. [ThePharmaceutical Microbiology Mail List] 2003 June 10. Availablefrom: /archives/pmflist.html3. Anger, Claude. Seed stock culture. In: PMFLIST Archives [Internet].[The Pharmaceutical Microbiology Mail List] 2003 June 11. Avail-able from: /archives/pmflist.html4. U.S. Pharmacopeia. Antimicrobial Effectiveness Testing. In: U.S.Pharmacopeia 26th rev. Rockville, MD: U.S. Pharmacopeia; 2003,2nd Supplement <51>.5. U.S. Pharmacopeia. Microbiological Good Laboratory Practices,<1117>. Pharmacopeial Forum 29(3): Pharmacopeial Previews,2003.6. NCCLS. Quality assurance for commercially prepared microbio-logical culture media. 2nd ed. Wayne, PA: NCCLS; M22-A2, 1996. 7. U.S. Pharmacopeia. General Notices. In: U.S. Pharmacopeia 26threv. Rockville, MD: U.S. Pharmacopeia; 2003, 2nd Supplement.8. NCCLS. Performance standards for antimicrobial disk susceptibil-ity tests. 8th ed. Wayne, PA: NCCLS; M2–A8, 2003.9. NCCLS. Performance standards for antimicrobial disk and dilutionsusceptibility tests for bacteria isolated from animals; approvedstandard. 2nd ed. Wayne, PA: NCCLS; 2002.10. NCCLS. Reference method for broth dilution antifungal suscep-tibility testing of yeasts; approved standard. Wayne, PA: NCCLS;M27-A, 1997.Reprinted from ATCC Connection 23(2): 6-7, 2003.© 2003 ATCC. All rights reserved. ATCC is a registered trademark of the American Type Culture Collection.Reference Strains: How Many Passages are Too Many? Figure 1. Seed lot system.ATCC Culture Passage 0Stock Cultures Passage 15 Replicates Working Cultures Passage 25 Replicates。
标准菌株使用标准操作规程
标准菌株使用标准操作规程1 检验目的对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。
2 范围微生物实验室保存的标准菌株。
3 职责微生物组工作人员正确执行本操作规程。
4 术语和定义4.1标准菌株其特征进行了分类和描述，有明确的来源。
ATCC（American Type Culture Collection）美国标准菌株收藏中心。
4.2标准储备菌株标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。
4.3 工作菌株标准储备菌株传代后得到的同种菌株。
4.4 标准培养物标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。
4.5质控菌株ATCC最佳，但当无法获得时可以使用ATCC演化的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。
特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。
室间质评的菌株即可。
5 保存程序5.1标准菌株5.1.1商业购买的ATCC标准菌株干粉，-80℃低温保存，可以2年以上。
安瓿真空包装的，-80℃可长期稳定保存。
将标准菌株进行编号和登记。
5.1.2复苏用1ml无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。
根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养18-24h。
酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。
5.2标准储备菌株5.2.1由复苏后的ATCC标准菌株制备。
复苏后的标准菌株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。
刮取培养物上的菌体，用足量的菌悬浮于防冻培养基中。
防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。
储存足够量的标准储备菌株，可用1-2年。
一年52周需要52支以上。
5.2.2甘油肉汤保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。
相当于20%的甘油。
挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。
苛养菌可以适当增加菌量。
-80℃保存。
除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用。
保存期限1-5年。
5.2.3全血保存法成分为脱纤维羊血。
挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。
苛养菌可以适当增加菌量。
标准菌株的管理与使用操作规程
标准菌株的管理与使用操作规程一、目的规范用于微生物实验质量控制和操作评估的标准菌株管理与使用程序，尽量减少交叉污染确保实验结果可靠与实验室安全。
二、范围本工作指引适用于微生物实验室所有标准菌株的管理与使用。
三、内容3.1 程序1.标准菌株的复壮a.将复壮所用的0.5-1ml液体培养基（如TS或BPW）置于室温；b.将标准菌株从冰箱取出置于室温；c.无菌操作去除菌株的包装物；d.无菌操作敬液体培养基导入菌株容器；或者无菌操作剪开菌株包装物，将菌株倒入液体培养基；e.将试管在37℃下放置一段时间后，使菌种完全溶解到培养基中；f.轻轻摇动试管形成悬浮液；g. 从菌种悬浮液中接种几环到培养基平板（如营养琼脂）划线培养；h. 将接种过的平板置于合适的温度和条件下培养复壮。
2. 从培养过的平板或斜面上挑取几个菌落，按照相应的LI接种到选择性培养基上。
3. 将挑选出的菌落按照相应的LI进行菌种确认。
进行革兰氏染色或者镜检，并纯化后按照相应的LI进行生化试验确认。
记录下所有的现象。
4. 在每年复壮或者买入是都要进行菌种确认实验。
5. 菌种确认达到要求后，使用Microbank Frozen Beads标准储备菌株。
a.取一定量的标准菌株培养物（18-24h），无菌操作接种到装有小珠的小瓶内并加入肉汤（BPW）。
关紧小瓶并颠倒4-5次乳化培养物。
不要剧烈摇晃，避免液体洒出；b.将多余的液体吸出。
关紧小瓶；c.在小瓶上贴上标签，标明菌种名称和准备日期；d.小瓶在冷冻条件下（大约-20℃）可储存一年；e.从Microbank中准备工作菌株：从小瓶中无菌操作取出一个小珠，接种到非选择性培养基平板或斜面，或者放入液体培养基中。
小珠从小瓶中取出后决不可以再放回。
立即将小瓶放回冷冻；f. 接种过的平板、斜面或者肉汤放在37℃培养24-48h。
一旦发现平板、斜面或者肉汤有微生物生长后立即从培养箱取出；g.在平板、斜面或者肉汤上粘贴标签，注明菌种名称、准备日期和有效期。
菌种传代与保藏指导书
菌种验收、传代与保藏作业指导书1.目的为确保菌种管理的正确操作性，制定本作业指导书。
2.适用范围适用于实验室各菌种。
3.职责检验员负责菌种的验收、传代与保藏。
4.内容4.1定义标准菌株是指由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。
传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每培养一次即称为一代。
所有传代用菌种和工作用菌种的传代次数应严格控制，原则上不得超过5代（从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度传代增加菌种变异和污染的风险。
4.2标准菌的来源标准菌株需有明确来源，应可溯源至国内或国际认可的菌种保藏中心的标准菌株。
4.3标准菌的验收新购买的标准菌株应检查是否随菌种附有菌种证书。
接收时还应检查菌种数量和名称及每一支包装的完整性。
在相应的菌种验收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和验收日期等。
新购入的标准菌株储存于－20℃冰箱。
4.4菌种的复苏与传代根据不同的菌种保存方法和保存形式，选择适宜的方法无菌开启菌种。
应减少开启过程对菌种活力的影响，且不要引入外部污染。
经冷冻干燥安瓿保存的菌种：先用适宜的消毒剂擦拭安瓿后，用砂轮在安瓿上部1/3处划痕，将安额管顶部烧热，将无菌水滴于加热处使顶部出现裂纹，用无菌器具轻叩裂纹处上部，开启安瓿管的顶端，用适宜的缓冲液或液体培养基溶解菌块，并转移至新鲜的培养基上培养。
甘油小瓷珠保存法保存的菌种：取出冻存管并用力摇晃，使管内瓷珠分散。
无菌条件下拧开冻存管，用无菌的接种环（接种针）或镊子取出1个小瓷珠，拧紧瓶盖。
尽可能快地将冻存管放回原来的保存环境，温度过多改变将减弱细菌的生产能力。
取出的小瓷珠可以直接放在平板培养基上作划线接种，或者直接置于适合的液体培养基中培养。
107-室内质量控制程序---检验科作业指导书
物培养基的质量检验规程》。
3.2 生化反应试验与鉴定试剂的质量控制标准 购于杭州天的 OF 管、半固体培养基、克氏双糖铁
培养基、胆汁七叶苷、高盐培养基的质控标准参照《全国临床检验操作规程》，鉴定纸片（OP 纸片、
杆菌肽纸片、X、V、X+V 因子纸片）、Slidex Stap Plus 乳胶凝集试剂、各种诊断血清试剂、染液、触酶和
4.2 CO2 恒温孵箱 每天工作开始前与下班前观察 CO2 的浓度和温度，并记录，其温度校准同 4.1.2 步骤，而 CO2 的浓度是每半年校准一次，由厂家进行校准并出具相应报告。
4.3 光电比浊仪与生物安全柜应按计量局规定进行定期校准，校准周期为一年一次。 4.4 Bact/Alert120 微生物培养仪的质控监测, 每天执行 QC,并每月检查 CELL STATUS,保证系统 的敏感性和可行性。 4.5 BACTEC 9240 全自动血培养仪的质控监测, 每天执行 QC,并每月检查 CELL STATUS,保证系统 的敏感性和可行性。 4.6 MicroscanW/A40 微生物鉴定药敏分析仪的质控监测 每日进行仪器自检 QC 及维护,使用 CLSI 相应 QC 建议的质控菌株进行检测板的鉴定、药敏的质控监测，质控频率为每月一次。 4.7 DL-96 细菌测定系统的质控监测 每日进行仪器维护,使用 CLSI 相应 QC 建议的质控菌株进行 检测板的鉴定、药敏的质控监测，质控频率为每月一次。 4.8 培养基 每批新购置的商品培养基附带有厂家的质控报告，实验室可无需进行质控检测，如 使用过程中发现需要进一步进行质控监测，则可按商品培养基的质量检验规程中的标准来执行并形成 记录，具体可见《常见培养基质控程序》。 4.8 试剂 正常情况下，在试剂投入市场之前，厂家已经完成了对试剂的完整调查评估，每一种试 剂都被厂家调试、核对并验证过，监测试剂的有效性是我实验室的室内质控方法，并不是重复厂家做 过的事情。所有新批号试剂在使用前均应进行一次质控监测，各种试剂使用相应的阳性、阴性质控菌 株进行质控监测并形成记录，质控频率视不同的试剂要求不同（见下表 11-11-3），质控操作详见相应 的质控程序。 4.9 药敏试验 我科现行的药敏试验方法有肉汤微量释稀法（Microscan 、DL-96 仪器），纸片扩 散法和 E-test 法，各种方法所使用的质控菌株、质控方法及频率（见下页表 11-11-3）具体见相应的 药敏试验质控程序，质控结果以表格的形式完整记录。 4.10 室内质量控制坚持做到有记录有失控情况处理措施分析，并有室内质控每月总结分析。按 《 检验科室内质评月总结分析记录表》填写。
医院检验微生物作业指导书
1.目的规范微生物实验室内部质量控制，确保临床报告的质量。
2.适用范围微生物实验室的所有检验项目。
3.职责实验室检验人员均需熟知并遵守本程序。
4.程序4.1分析前质量控制4.1.1检验申请单：临床医生应按照《微生物检验项目申请程序》申请临床微生物检测口头申请追加样本检验项目，必须在样本有效期内申请.并补正式的检验申请单。
4.1.2生成微生物检验标本标签：护士应在核对医嘱患者信息和检验申请信息后，按照《微生物检验标本条形码程序》生成申请单和微生物检验项目标签，并将微生物检验项目标签正确张贴于标本容器上。
4.1.3样本采集手册：实验室应制订样本采集手册，指导正确采集和处理样本。
4.1.4样本采集和运输：样本采集人员应按照《采样前患者识别程序》确认患者，按照《标本采集、运送、保存程序》采集样本，并在规定的时间和温度范围内，使用指定的运输培养基，安全运送到微生物室。
4.1.5样本的接收：样本接收人员应严格按照《标本接收、标识及信息录人程序》《标本拒收程序》对样本接收或拒收，并记录。
4.1.6微生物检验标本信息输人：微生物实验室接种岗位检验人员严格按照相关的微生物标本检验信息输，人程序录人，核对患者信息和标本信息等资料。
4.1.7样本储存：微生物实验室接种岗位检验人员按照相关的微生物标本检验前储存程序正确铺存未能及时处理的标本，已经检验的样本应在保证其性质稳定的条件下，将样本以适当的方式保留到规定时间内，以便能在出具结果报告后可以复查，成做补无检食。
4.2分析中质量控制4.2.1试剂的质量控制4.2.1.1所有试剂用于检测标本前，必须做质控以验证试剂性能并记录质控结果，只有质控合格才可使用（表2-1-1）。
质控应遵循以下原则。
4.2.1.1.1使用中的染色剂（革兰染色、特殊染色和荧光染色），至少每周（若检测频率小于每周1次,则实验当日）用已知阳性和阴性（适用时）的质控菌株检测。
4.2.1.2平行试验：新批号试剂使用前须用老试利或参考材料平行试验。
食用野生菌质量控制指导手册
食用野生菌质量控制指导手册为保证野生菌产品质量安全，实现过程追溯和质量管控，特制定本指导手册。
本公司野生菌产品生产加工过程可归纳为四部分：野生采集过程、初步加工和分选过程、查验入库保存、精细分选加工部分。
本指导手册分别对这三个过程部分的操作和控制要点作出说明和规定，相关人员需按规定严格执行相关操作。
第一部分：野生采集过程的控制要点和相关要求此过程重点包括：采集区的选择确定、野生菌采集要求说明、采集农户的培训。
一、采集区的选择确定：在主产地进行考查筛选，选择生态环境好、周边没有矿山、化工厂等污染源的区域作为指定采集区。
二、每个指定采集区指定负责人，监督指导农户按公司要求进行采收、清洗、切片和脱水干燥，并负责将各合格农户的产品集中收购，由专车运输到初步加工分选点进行下一步加工。
三、每年产季开始前各采集区负责人组织农户进行采集前的培训，要求农户按照野生菌采集要求说明的相关规定进行培训。
详细内容见：野生菌采集要求说明野生菌采集要求说明为保障本公司野生菌的质量安全，各采集区的采集农户要严格按照此规定进行采集操作，不允许在禁止采集的地方进行采集活动。
1、不在村庄、乡镇等人群集中的地方周边500米内进行采集。
2、不在田地、菜园周边500米内进行采集。
3、不在有机动车行驶的道路两边200米内采集。
4、不在工厂、工地等有污染源地方的1000米内进行采集。
5、每天采集回来的新鲜野生菌必须在六小时内进行清洗、切片和干燥，确保产品新鲜加工，保障产品的质量品质。
6、各农户在清洗、切片和干燥过程中，做好污染防范工作，各种工具要先用自来水等饮用水源清洗干净。
7、干燥后的产品要放在专用的袋子里保存好，送到指定的交收点。
8、各交收点集中将各农户产品由干净的车量专车送到指定加工点进行初步加工和分选。
第二部分：初步加工和分选过程质量控制要点和相关要求此过程的重点包括：加工场地的选择、人员的培训、有效区分各批次产品（溯源标识）一、选择的加工场地要有充足的加工和储存能力，要干燥干净整洁，能有效保障产品干度和防止受到不洁物品的污染。
检验科微生物实验室作业指导书和相关制度
细菌室工作守则1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。
2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。
3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。
尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。
4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。
5.做好标本的登记、编号及试验记录。
未发出报告前，请勿丢弃标本。
6.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。
7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。
8.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。
9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。
易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必须远离火源，妥善保存。
10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、用具等放回原处，清理台面，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物应送高压灭菌后处理。
11.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗净。
12.爱护仪器设备，经常清洁，注意防尘和防潮。
细菌室消毒隔离措施1.每天工作前用消毒液消毒工作台，上班前、下班后开紫外灯（最少半小时）进行空气消毒。
2.非必要品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。
3.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。
4.试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒，所有用于试验的反应板、吸头等用消毒液浸泡（至少24小时以上）后清洗或丢弃。
5.所有微生物培养物（细菌、支原体、真菌等培养物），不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。
标准菌株管理作业指导书
标准菌株管理作业指导书修改记录：1目的规范微生物学标准菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2适用范围本作业指导书适用于微生物学标准菌种的管理，包括菌种的申购、保存（藏）、传代、使用及销毁等。
3工作程序3.1 菌种的申购微生物主管根据菌种的使用情况（包括临时检验需要）按需要购买，填写《实验室设备、标准物质、消耗品采购登记表》提出购买申请，交由技术负责人批准后，由行政办公室向有购买菌种资质的供应商购买原始标准菌种，购买时，须确定菌种的标准号。
3.2 菌种的接收和领用菌种到达实验室后，由微生物主管与一名检验人员两人共同接收和领用菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《微生物标准菌种接收、领用、保藏、传代、使用和销毁记录表》上，内容包括：菌种名称、数量、菌种号、代数、来源、接收和领用日期、人员等，并将其暂贮存于菌种冰箱中，在一周内必须完成转种（即将原始标准菌种复苏传代成标准储存菌株）。
3.3 标准菌株的保存菌种保存（藏）必须由具备相应技能的专业技术人员操作，保存（藏）菌种的容器表面应贴有相应的标签，内容包括：菌种名称、菌种号、传代数、接种日期、人员等。
标准储存菌株是由原始标准菌种经过一代转接后获得的同种菌株；工作菌株是由标准储存菌株转接后获得的同种菌株。
3.4 菌株的保存方法3.4.1 试验条件按照微生物菌种保存的常规方法规定的条件。
3.4.2 操作方法（1）微生物菌种的冰箱4℃保藏法（斜面传代法）a)将需要保藏的菌种接种于该微生物最适宜的新鲜斜面培养基上，在合适的温度下培养，以得到健壮的菌体。
b)将长好的斜面取出，换上无菌的橡皮塞塞紧，于4℃冰箱中保存。
c)每隔一定时间（根据不同微生物而定，如细菌约一个月左右，放线菌三个月左右）将斜面重新移植培养，塞上橡皮塞4℃保存。
（2）微生物菌种的休眠保藏法（液体石蜡法）a)采用斜面保藏法相同的方法获得健壮的培养物。
培养基质量控制作业指导书
培养基质量控制作业指导书文件编号：WLCDC/ZD7651、目的：为加强我中心检验科实验室的工作管理，保证实验室的检测质量，特制定此作业指导书；2、范围：适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。
3、职责：3、1 检验人员：按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。
3、2 科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。
4、生产企业提供的材料培养基生产厂家随产品应提供下列文件：培养基、独立成分、添加成分名称；批号；使用前的pH；储藏信息和有效期；性能评价和所用测试菌株；技术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。
5、验收实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等，验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。
6、贮存及使用前质量确认6、1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。
6、2 验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单”，使用前对容器密闭性进行复查。
6、3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化。
若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用。
6、4制备好的成品培养基应建立“ 成品培养基目录清单”，每次使用前应检查：颜色是否发生变化?/是否蒸发/脱水?/是否有微生物生长 ?等。
如果发生上述异常情况，则不应再使用。
7、制备好的成品培养基的质量控制新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，符合要求后使用。
成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。
7、1物理指标控制1）测试20℃～25℃的pH值2）琼脂层厚度；色泽；透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质；凝胶稳定性、粘稠度和湿度。
7、2微生物学指标控制可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法（详见表1-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法详见作业指导书“培养基性能测试指南”。
食品微生物检测实验室标准菌株的管理和质量控制
质量控制食品微生物检测实验室标准菌株的管理和质量控制詹 清，郑孝贤，王海龙，林梦丹，方东升*（福建省微生物研究所，福建福州 350000）摘 要：标准菌株是微生物检测实验室不可或缺的物质之一，稳定和有效的标准菌株对微生物检测质量的有效性起到了至关重要的作用。
本文从标准菌株的选择、验收、传代及确认、保藏、期间核查、领用以及销毁等方面，分析了食品微生物检测实验室标准菌株的规范化管理程序和质量控制要素，为食品微生物检测实验室标准菌株的管理提供参考和借鉴。
关键词：食品微生物检测；标准菌株；管理；质量控制Management and Quality Control of Standard Strains in Food Microbiology Testing LaboratoryZHAN Qing, ZHENG Xiaoxian, WANG Hailong, LIN Mengdan, FANG Dongsheng*(Fujian Institute of Microbiology, Fuzhou 350000, China)Abstract: Standard strains are one of the indispensable elements of a microbiological testing laboratory. Stable and effective standard strains play a crucial role in the effectiveness of microbiological testing quality. In this paper, the standardized management procedures and quality control elements of standard strains in food microbiology testing laboratory are discussed from the aspects of selection, acceptance, passage and confirmation, preservation, period verification, acquisition and destruction of standard strains. The works provide reference for the management of standard strains in food microbiological testing laboratory.Keywords: food microbiological testing; standard strains; management; quality control随着人们对食品安全问题的日渐关注，食品微生物检验的市场需求扩大，同时也对检验机构的人员和专业技术手段提出了更严格的要求。
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标准菌株质量控制作业指导书
1、目的：
对微生物标准菌株的验收、复活、确认、转代、储存、使用、废弃等进行规定，确保标准菌株符合要求，保证检测结果。
2、职责：
2.1、检测中心主任负责标准菌株资源的配备。
2.2、微生物检测室工作人员负责标准菌株的有效储存和正确的使用。
3、要求：
3.1供应商的选择：选择有资质的标准菌株的合格供应商，每批标准菌株必须有附件的供应商的合格证或检测报告，来证明所采购的标准菌株是合格的。
3.2标准菌株和验收
菌株一到实验室，一定要记录好菌株号和标准菌株来源，确保溯源性清楚。
同时，还应尽可能多的菌株信息，如：标准菌株名称和数量、生产日期、接收日期和有无破损等。
3.3冻干标准菌株的复活：
3.3.1、开启产品包装：先用70%酒精棉擦拭外包装，从凹口处撕开产品外包装，撕掉标签上的拉片，将其贴于菌株保藏管上。
3.3.2、复活：选择合适的培养基和培养条件（根据生产商说明）进行复活。
冻干菌株的传代次数不得超过5代，从标准菌株保藏中心购买的冻干标准菌株为第F0代。
捏管帽处安瓿瓶（仅一次）使其释放水合液体。
垂直握住安瓿瓶并轻拍之，使液体流入含小球的管底。
通过挤捏压碎小球使其与液体混合，立即将拭子浸于水合液体。
挤压并旋转拭子，接种于初级培养平板，接种圈的直径约为25mm，用一无菌接种环在先前接种区域划线10-20次，促使分离出单菌落。
同时吸出部分菌液接种胰蛋白胨大豆肉汤管，副溶血性弧菌接种3%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤管。
将接种好的平板和管立即进行培养。
细菌培养温度通常为25℃或37℃。
多数冻干菌株会在几天后长出，但是少数菌会表现出延滞期延长的现象，需要将正常培养时间加倍。
复活后的菌株为F1代。
3.3.3将TSB生长的浓菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混匀后将液体吸出，将保藏管-18℃保存1-3年为标准储备菌株F2代。
将平板上生长的良好菌株接种
于营养琼脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化钠营养琼脂）36℃培养24h当作工作菌株，为W3代，记录为F2代。
3.3.4、工作菌株确认方法及依据：
大肠杆菌的确认依照“SN 0169-1992 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法”执行。
金黄色葡萄球菌的确认依照“SN/T 0172-2010进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法”执行。
沙门氏菌的确认依照“SN 0170-1992 出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法”执行。
副溶血性弧菌的确认依照“SN/T 0173-2010 进出口食品中副溶血性弧菌检验方法”执行。
3.4、工作菌株的储存：
3.4.1、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、储存在2-8℃的冰箱内。
3.4.2、副溶血性弧菌在常温条件下保存。
3.4.3、储存期限：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌为3个月。
3.5、标准菌株的转接：
3.5.1标准菌株的复苏：①菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。
②每次使用和复苏时只需将小珠在平板上滚动或置肉汤中培养。
3.5.2标准储备菌株每转接一次须进行确认。
3.5.3工作菌株转接的方法：
①、配制营养琼脂培养基（副溶血性弧菌加3%氯化钠）并分装在试管内，
121℃高压灭菌15分钟后摆斜面，冷却后备用。
②、在无菌条件下，用接种环挑取菌苔至新鲜斜面上作“之”字形划线接
种，放置在36℃的培养箱内培养24小时。
3.6 工作菌株的使用：
3.6.1内部质量控制：一个月一次阳性对照、培养基每批验收；
3.6.2外部质量控制：能力验证、实验室比对；
3.7、工作菌株的期间核查：
3.7.1期间核查的频率：每半年对使用标准菌株进行一次期间核查。
3.7.2工作菌株期间核查的方法及依据：同工作菌株的确认。
3.7.3建立标准菌株期间核查记录。
3.8标准菌株的废弃：
3.8.1标准菌株如已老化、退化、或变异、污染等，经确认试验不符合的或该菌种已无使用需要的应及时销毁。
3.8.2 废弃的标准菌株由部门负责人批准，使用人员放入高压锅内121℃45min高压灭菌后作为废弃物处理。