乌头碱限量检查研究

xxx膏乌头碱限量检查研究的试验资料

1、乌头碱限量检查标准

【检查】乌头碱取本品约350cm2(5片)，除去盖衬，剪成条状，置具塞锥形瓶中，加1mol/L盐酸溶液60ml，浸泡过夜，超声处理20分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，加浓氨试液调节pH值至9～10，用乙醚振摇提取3次(30ml，20ml，20ml)，合并乙醚液，加无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，移至2ml容量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取乌头碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml 含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10µl，分别点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙醚－甲醇（60:1）为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸汽显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点，应小于对照品斑点或不出现斑点。

【用法用量】外用，贴患处，每次1-2贴，每日最大限量为10贴。

2、乌头碱（C34H47NO11）限量检查标准起草说明

根据样品特性和预试验，采用薄层色谱法进行乌头碱限量检查[1]，效果较好。在样品提取分离时，分别采用乙醇溶液加热回流法（1h和6h）[2] [3]和酸水浸泡-超声提取法[1]提取乌头碱，三种方法测定结果基本相同。但由于加热回流提取法加热时间较长、操作步骤较为复杂，故采用酸水浸泡-超声提取法较好。用氯仿作为溶剂，乌头碱易溶于氯仿，点样量大，易于挥散。以碘蒸汽显色，样品分离效果好，灵敏度高，阴性对照实验无干扰。

对照品溶液的制备取乌头碱对照品（中国药品生物制品检验所，批号110720-200410）适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的对照品溶液。

供试品溶液的制备[1]取本品约350cm2(5片)，除去盖衬，剪成条状，置具塞锥形瓶中，加1mol/L盐酸溶液60ml，浸泡过夜，超声处理20分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，加浓氨试液调节pH值至9～10，用乙醚振摇提取3次(30ml，20ml，20ml)，合并乙醚液，加无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，移至2ml容量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

阴性对照品溶液的制备照制法制备缺川乌、草乌的样品，并照供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

样品测定分别取供试品溶液、对照品溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录VI B）试验，精密吸取供试品溶液、阴性对照品溶液和对照品溶液各10µl，分别点于同一用2％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙醚－甲醇（60:1）为展开剂，展开，取出，晾干，碘蒸气显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点，小于对照品斑点或不出现斑点。在阴性对照试验图谱中，阴性对照样品在与对照品色谱相应的位置上无斑点。表明阴性无干扰。见表1、图1。

表1 三批样品测定结果

批号050401 050402 050403 结论

乌头碱

未出现斑点未出现斑点未出现斑点符合规定结果表明，本法操作稳定，重现性好，且阴性无干扰，可用于质量标准控制，列入正文。

3、每日最大剂量的确定

据有关文献报道[4]，草乌含乌头碱可高达0.055％，而且含量差异很大。因此，不能从川乌、草乌药材这方面来控制成品的限量。而制川乌含生物碱按乌头碱（C34H47NO11）计，不得少于0.20％，常规用量为1.5～3g（按乌头碱计为3～6mg），但其用法为先煎、久煎。使其所含的乌头碱会分解，煎煮时间不同，其乌头碱含量也不相同，且差异较大 [5]。因此中国药典2005年版中生川乌、草乌未确定其每日最大限量。

资料显示[6]，乌头碱内服的中毒剂量（成人）为2mg，致死量为3～5mg。由于个体的差异，对乌头碱的敏感性也不相同。为确保安全，按每日内服乌头碱最大限量为1mg，折合本品约为10片(贴)的含量。由于本品为外用制剂，其乌头碱透皮吸收的量低于口服吸收的量，而且粘贴时其透皮吸收是缓缓进行，安全保障程度很高。因此确定成人每日最大外用限量为10贴(相当于700cm2) 时，也只为口服中毒剂量的二分之一，能确保用药的安全。

参考文献

[1] 国家药典委员会·《中华人民共和国药典》（一部），2005，631。

[2] 郝丽晓，窦爱兰，钟化人·用薄层色谱法限量检测肩痹膏中的乌头碱，药物分析杂志，1997，17（4）：258～260。

[3]王富英熊慧林·双波长薄层扫描测定伤湿去痛膏中乌头碱含量，1997，22（3）。

[4]邬林祥，温爱平，党晓菊等·高效液相色谱法测定草乌药材中有效成分的含量，中国民族医药杂志，2003，9（2）：36～37。

[5] 曹晖乌头炮制品煎煮前后生物碱含量的初步研究，江西中医学院报，1994，6（2）：35～37。

[6]丁长江,孟勤,李宏斌等·中药制剂中乌头碱含量的测定及其临床应用，中国医院药学杂志，2003，23（1）：16～17。

1、2、3 样品

4 标准品

5 阴性对照品

图1 xxx膏乌头碱限量检查薄层色谱图