核酸扩增检测用试剂(盒)
HER2基因扩增检测试剂盒说明书
HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书【产品名称】通用名称：HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）英文名称：Zyto Light SPEC HER2/CEN17 Dual Color Probe Kit【包装规格】货号Z-2020-5：5测试/盒货号Z-2020-20：20测试/盒【预期用途】本试剂盒用于检测经10%中性缓冲福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺癌组织切片中HER2基因的扩增状态。
本试剂盒尤其适用于免疫组织化学HER2（ERBB2）蛋白检测结果为不确定的标本的检测。
HER2基因扩增是确定靶向治疗适应症的重要指标，基于本试剂盒未与具体药物联合进行临床评价，临床医生应在本检测结果基础上结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他检测结果对患者的个体化治疗进行综合判断。
【检验原理】荧光原位杂交技术（Fluorescent In Situ Hybridization, FISH）是一种以荧光标记的核酸探针与组织中的特异核酸分子进行杂交的技术，其基本原理是利用荧光标记的核酸探针在变性后根据碱基互补配对原则准确识别待检样本中的靶核酸序列，经退火复性后形成靶DNA与核酸探针杂交体，通过荧光检测系统（荧光显微镜）直接观察和分析染色体或基因的数量或结构的状态。
本试剂盒内HER2/CEN17双色探针液（以下简称为探针）设计序列来源图见图1和图2。
将样本经福尔马林固定、石蜡包埋后制成4±1μm厚度的切片，固定于粘性玻片上。
切片经预处理后，将HER2/CEN 17双色探针液与待测样本DNA变性、杂交。
杂交完成后，通过一系列洗涤缓冲液洗去未结合探针，并用DAPI（4，6-二咪基-2-联苯基吲哚）对样本中的细胞核复染成蓝色。
DAPI是一种蓝色荧光素，为DNA特异性染色剂。
探针杂交信号可通过配置相应滤光片的荧光显微镜进行观察。
在显微镜下观察细胞核内的荧光信号，对HER2基因（绿色荧光染料ZyGreen：激发波503nm，发射波528nm，同FITC）和CEN17着丝粒（橙红色荧光染料ZyOrange：激发波546nm，发射波572nm，同罗丹明）信号进行计数，计算比值（HER2/CEN17），从而判断HER2基因状态。
核酸扩增检测用试剂
YY/T 1182-2010核酸扩增检测用试剂（盒）1范围本标准规定了核酸扩增检测试剂（盒）【以下简称“试剂（盒）”】的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和说明书、包装、运输和贮存等。
本标准适用于核酸扩增检测试剂（盒）的质量控制。
核酸扩增检测试剂（盒）应包括核酸提取、核酸扩增及产物分析试剂组份，如核酸扩增检测试剂（盒）内不含有核酸提取组份，应由生产企业说明或指定提取试剂（盒）。
本标准不适用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突变检测用试剂（盒）及血源筛查的试剂（盒）。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 21415-2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性3术语和定义以下术语和定义适用于本文件。
3.1 聚合酶链反应polymerase chain reaction,PCR聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。
3.2 PCR杂交（膜上、板上）PCR hybridization具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）可以通过氢键的方式，按碱基互补配对原则相结合，探针结合于特定核酸序列或PCR产物的杂交过程可以在液相中进行，也可以将其中一个固定在固相载体上进行。
3.3 PCR 电泳 PCR electrophoresis根据PCR产物分子质量和所带电荷的不同在电场中进行分离的技术。
3.4实时荧光PCR real-time polymerase chain reaction,PCR在PCR过程中利用荧光染料释放的荧光定量的变化直接反映出PCR扩增产物量的变化，荧光信号变量与扩增产物变量成正比，并通过对荧光的采集和分析以达到对原始模板量进行分析的PCR。
MDM2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书
MDM2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书【产品名称】通用名称：MDM2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）英文名称：FISH detection Kit for the amplification of MDM2 gene【包装规格】10人份/盒、20人份/盒【预期用途】本产品用于检测福尔马林固定、石蜡包埋人脂肪肉瘤组织样本中的MDM2基因扩增情况[1,2]。
【检验原理】荧光原位杂交法（Fluorescent In Situ Hybridization，FISH）能够使细胞中特定的核苷酸片段通过荧光而清楚的呈现，FISH试验过程中包含了双链DNA的解链，荧光标记的DNA探针能够与目标序列结合[2-3]。
杂交完成之后，多余的探针被清洗掉，同时，细胞核被复染剂4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色会发出蓝色的荧光。
本试剂盒包含一组探针：MDM2(红色)位点和CEP12（绿色）位点及DAPI复染剂。
正常细胞信号方式：每个细胞显示两个绿色信号及两个红色信号。
异常细胞信号方式：细胞中若出现三个及以上红色信号且绿色信号不小于两个。
【主要组成成分】MDM2 /CEP12探针及DAPI于-20℃避光、密封储存；不应与有毒、有污染和有不良气味的物品混存；开封后，探针及DAPI 24小时内可在2-8℃避光、密封储存；24小时内不能使用完的，请放置于-20℃±5℃避光、密封储存；自生产之日起有效期为一年。
【适用仪器】本试剂盒探针杂交需在杂交仪上进行杂交，如ThermoBrite。
本试剂盒探针需在荧光显微镜下观察并分析结果。
所需荧光显微镜的配置包括：物镜：在FISH分析上，使用100×消色差浸油类型物镜可取得满意效果。
镜油：在浸油式物镜上使用的镜油应为低水平自发荧光配方，并专门在荧光显微镜上使用。
滤光片：建议客户处客使用探针前向滤片组供应商了解所使用的滤片组的详细情况，以便选择与标记荧光染料相适应的滤片组。
(整理)肺炎克雷伯氏菌PCR快速检测试剂盒
【产品名称】通用名称：肺炎克雷伯氏菌PCR检测试剂盒英文名称：PCR diagnostic kit for Klebsiella pneumoniae【检验原理】目前，国内食品卫生微生物检验的方法主要采用国家标准（GB/T）和行业标准（SN/T），该类标准是由传统的分离培养、镜检观察、生化鉴定等实验组成，一般的检测周期在6～8 天，要求检测步骤较多而且精度低，存在着检验周期偏长、工作量大等缺点。
临床上对致病菌检测也需要快速得到检测结果，以免延误病情。
针对目前微生物检测的现状，天津生物芯片结合目前微生物研究领域的先进技术，投入大量人力、物力，成功开发了基于PCR技术的肺炎克雷伯氏菌PCR检测试剂盒。
肺炎克雷伯氏菌PCR检测试剂盒使用肺炎克雷伯氏菌的特异引物，可与样本中的肺炎克雷伯氏菌基因组的相应靶位点特异性结合，利用PCR反应达到对肺炎克雷伯氏菌快速检测的目的。
试剂盒具有特异性强的特点，可以将肺炎克雷伯氏菌从其它细菌中特异地区分出来。
【预期用途】用于食品、水样、临床样品以及环境样品中的肺炎克雷伯氏菌的检测。
肺炎克雷伯氏菌PCR检测试剂盒检测乳粉中的肺炎克雷伯氏菌,无需增菌.通过滤膜法成功地从人工污染肺炎克雷伯氏菌的乳粉中提取了肺炎克雷伯氏菌的DNA.以肺炎克雷伯氏菌的间区序列(ITS)为靶基因,经过PCR扩增得到158 bp的产物,经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物.该方法灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为10CFU/mL,可在6 h内完成对乳品中肺炎克雷伯氏菌的检测,比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12-24 h.【主要组成部分】肺炎克雷伯氏菌核酸扩增（PCR）检测试剂盒组份规格数量贮存温度核酸提取液1ml/支2支-20℃肺炎克雷伯氏菌PCR反应液500μl /支1支Taq酶12μl /支1支肺炎克雷伯氏菌阳性对照品100μl /支1支阴性对照品100μl /支1支【储藏条件及有效期】-20℃保存，避免反复冻融，有效期一年。
MP核酸检测试剂盒说明书
肺炎支原体（MP）核酸检测试剂盒（PCR荧光法）说明书【产品名称】通用名称：肺炎支原体（MP）核酸检测试剂盒（PCR荧光法）英文名称：PCR-Fluorescence Detection Kit for Mycoplasma Pneumonia【包装规格】32人份/盒【预期用途】本产品用于定性检测痰液或咽拭子中的肺炎支原体核酸。
肺炎支原体（）是人类支原体肺炎的病原体，主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性，单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断。
若要明确诊断，需要进行病原体的检测。
而病原体核酸检测是目前最为直接的检测手段。
适应症：由肺炎支原体感染引起的肺炎等疾病。
【检验原理】本试剂盒选用肺炎支原体（MP）保守基因片段设计特异引物及特异Taqman 探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对肺炎支原体核酸的自动化检测。
【主要组成成份】注: 不同批号试剂盒中各组份不可以互换。
【储存条件及有效期】试剂-20℃可保存12个月。
【适用仪器】ABI7300、ABI7500荧光PCR扩增仪。
【样本要求】1. 标本：痰液及咽拭子。
2. 采集器：应当选用国家批准生产的一次性使用的咽拭子，拭子应当包括洁净海绵头、PP杆、PP杆与海绵头应连接牢固，经无尘清洗包装。
3. 采集：样本采集具体方法请参考《微生物标本采集手册》一书。
a. 自然咳痰法以晨痰为佳，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，标本量应大于等于1ml。
b. 咽拭子取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，转动拭子取出粘液。
4.存放：2-8℃保存，不超过24小时；-20℃下保存，不超过3个月；-70℃下长期保存，但应避免反复冻融。
HER-2基因扩增检测试剂盒(荧光原位杂交法)标准化操作流程.doc
HER-2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）标准化操作流程1、预期用途用于检测乳腺癌组织细胞中的HER-2基因扩增情况°1.1临床适用人群：临床上确诊为乳腺癌的患者。
1.2不适用的情况：未患有乳腺癌的患者。
1.3临床应用定位：用于检测患者乳腺癌组织细胞中的HER-2基因扩增情况，为乳腺癌的临床治疗和预后评估提供参考2、仪器配置要求荧光显微镜的配置包括：10x目镜，10x. 40x物镜和100x油镜。
建议顾客使用探针前向滤片组供应商了解所使用的滤片组的详细情况，以便选择与标记荧光染料相适应的滤片组。
绿色荧光：激发波长为490nm,发散波长为516nm,与FITC类似橘红色荧光：激发波长为551nm,发散波长为572nm,与rhodamine类似。
移液器，振荡器，微型离心机，分析天平，高压灭菌锅，3、耗材要求玻片，染缸，保子，无菌带滤芯吸头、离心管，无粉一次性乳胶手套。
4、责任人基因扩增实验室室长负责技术指导和质量监督。
5、执行人操作人员应经过专业培训，具有合格的操作技能的检验专业技术人员6、检测原理乳腺癌组织样本，经处理后可用于荧光原位杂交分析。
杂交操作流程包括：细胞核中核酸DNA与探针位点特异性荧光原位杂交探针在高温下变性成单链脱氧核糖核酸，在37C环境中，这些己变性成单链的样本及探针核酸根据碱基互补的原则进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸，洗涤非特异性杂交后，探针上标记的荧光信号既可在荧光显微镜下被检测。
本试剂盒包含一组探针：HER2（绿色）位点和CEN17 （红色）位点及FTSH操作配套试剂。
正常细胞信号方式：每个细胞显示两个绿色信号及两个红色信号。
异常细胞信号方式：细胞中若出现三个及以上绿色信号且红色信号不小于两个，则提示HER2基因扩增。
7、试剂来源北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司8、样本要求福尔马林固定、石蜡包理的乳腺癌组织和细胞。
9、标准操作程序9.1乙醇溶液（70%乙醇、90%乙醇）将700ml、900ml无水乙醇用去离子水分别稀释至1L,使用期间2-8°C储存。
丙型肝炎病毒核酸扩增检测标准操作规程
丙型肝炎病毒(HCV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测标准操作程序一、目的：明确丙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行丙肝病毒核酸定量的检测,保证检测结果及时可靠。
二、范围：适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。
三、职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。
四、检测原理：本试剂盒从血清或血浆中提取HCV RNA，在逆转录酶作用下将RNA逆转录为HCV cDNA，在引物的指导下，以四种脱氧核苷酸为底物，通过耐热DNA聚合酶的酶促作用，对cDNA进行体外扩增，用Taqman探针法检测扩增产物。
通过标准曲线，即可计算出被检物的含量。
五、试剂：1. 来源：上海科华生物工程股份有限公司HCV核酸扩增荧光定量检测试剂盒〔国药准字S2*******〕。
2. 规格：32人份/盒。
3. 试剂盒组成：3.1 病毒RNA提取试剂：用于从血清或血浆中提取HCV RNA。
裂解液 4ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液助沉剂1瓶含有助沉剂的冻干粉末去抑制剂1瓶含有去抑制剂的冻干粉末洗涤液A 14ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液洗涤液B 4ml×1瓶含有Tris的溶液洗脱液 1.8ml×2支含0.04% NaN3的灭菌双蒸水（无RNase）核酸提取柱32支×1包含连接套管3.2 核酸扩增（PCR）―荧光检测试剂：RT―PCR试剂PCR主反应液 250ul×1支含有一对引物和dNTP的溶液酶混合物 180ul×1支含有Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的溶液荧光探针20ul×1支含有荧光探针的溶液对照品阴性对照 250ul×1支含有0.05% NaN3的HCV RNA阴性的混和人血清强阳性对照 250ul×1支含有约2×106IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA弱阳性对照 250ul×1支含有约2×104 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品①250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA 工作标准品②250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA 工作标准品③250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA 工作标准品④250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA 工作标准品①～④的参数和强、弱阳性对照的定值允许范围根据批号不同而不同。
结核分枝杆菌GeneXpert核酸扩增检测操作步骤
结核分枝杆菌GeneXpert核酸扩增检测操作步骤-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)」INGBIAN结核分枝杆菌GeneXpert核酸扩增检测操作步骤一.准备工作：1. 开机①依次开启：UBS电源、仪器电源、打印机电源、笔记本电脑电源；⑥ 等待笔记本电脑进入系统，出现四个用户图案时，选择用户Cepheid,输入密码：cphd,等待约一分钟后系统弹出登录窗口，依次输入用户名和密码；③等待Gene-Xpert操作软件的启动与自检过程，自检过程中软件出现“数据库管理”提示窗，点选“否”;再在“存档”提示窗点选“否”，待模块进展显示“可用” o④仪器预热15分钟后再进行检测。
2. 耗材准备①标本处理液.©Cartridge反应盒、③前处理管（带有盖子的试管）、④塑料滴管（每个标本准备2支）、⑥待检标本。
3 •样品预处理①询处理管标号或粘贴条形码，再吸取2ml标本处理液在前处理管中，加入lml标本；②旋紧盖子，旋涡仪振荡10秒或剧烈摇动10-20次，室温静置10分钟，再旋涡仪振荡10秒或剧烈摇动10-20次，室温静置5分钟，观察无可见块状痰标本存在。
4.试剂盒①拆开Cartridge反应盒包装，小心取出，不要接触到正面的二维码、上面胶盖和后面有尖端区域，避免污染，可在侧面编号或粘贴条码。
②小心上拔开启Cartridge反应盒蓝色上盖的前部，取处理后的样品2ml,沿样品加入口的内壁缓缓加入反应盒内（避免吸到未液化的粘液部分，吸液量可以略超过两毫升，把尖端残液保留不注入，以免产生气泡）。
二、测定操作：1 .在GeneXpert Dx系统窗口的工具栏点击『创建测试』；2•在“扫描患者ID条形码”弹窗，选“手动输入患者条形码”,再输入患者的姓名：3. 在“扫描样品ID条形码”弹窗选“手动输入”,再在弹窗内输入痰检的实验室编号：4•在“扫描检测盒条形码”弹窗内，用扫码方法（或手动）输入测试盒上的条码，成功后软件自动指定待运行板块（（注意：为了保障每个模块有均等的运行机会，软件会选择运行次数最少的模块；但手工可以选择不同的模块）。
杭州优思达生物技术 CT 恒温扩增核酸试纸条检测试剂盒说明书
性病衣原体恒温扩增核酸试纸条检测试剂盒说明书【产品名称】性病衣原体恒温扩增核酸试纸条检测试剂盒【英文名称】Chlamydia Trachomatis（CT）Isothermal Amplification Diagnostic Kit【包装规格】单管单人份，20人份/盒。
【预期用途】用于性病衣原体的快速筛查和检测。
仅供科研使用。
【检验原理】本试剂盒将病原体DNA 扩增、核酸杂交和核酸试纸条检测三种技术有机地融为一体，在恒温扩增反应液中加入两对性病衣原体（CT）特异性引物和一对特异性探针，一次性完成HP DNA 扩增及杂交过程，然后用一次性核酸检测装置（3号）对性病衣原体进行定性检测。
由于待测样本的扩增（PCR 管盖和石蜡油双重保护）和检测过程均在物理封闭条件下完成，所以本试剂盒具有防止实验室扩增物交叉污染，防止假阳性的效果。
【试剂盒组成】1 试剂盒A*装有恒温扩增反应液的反应管中包括除样本外的所有试剂。
上覆矿物油，以防止扩增中产生气溶胶，防止假阳性。
2 试剂盒B【储运条件及有效期】1.运输条件：试剂盒A 需要-20℃冷冻运输，运输过程中，试剂盒A 在-20℃-0℃内保存时间不超过五天；试剂盒B 可以常温运输。
2.储存条件：试剂盒A 在-20℃保存；试剂盒B 在2℃-30℃干燥保存。
3.有效期：有效期12个月【仪器及物品要求】1.恒温装置如：水浴锅、金属浴、各种型号PCR 仪等。
2.实验需要但未提供的材料：生理盐水【样本采集】CT 样本采集通常使用无菌棉拭子，且遵循一般病原体采集程序。
采集后的样本可立即用于测试，也可保存于-20℃或-80℃待测。
保存最好不超过6个月。
样本长途运送时应采用0℃冰壶。
【操作步骤】1. 样本处理及DNA 提取1.1取1ml 生理盐水加入样本试管中，充分振荡混匀，将液体转移至1.5ml 离心管中（若分泌物较多，则只取0.5ml），12,000rpm 离心5分钟，弃上清。
1.2向上述沉淀中加入40ul DNA 提取液，振荡混匀，（提取液内含不溶于水的物质，取样时需用加样器充分混匀后吸取。
人线粒体 DNA(mtDNA)核酸扩增检测试剂盒 说明书
人线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒说明书【名称】通用名：人线粒体DNA(mtDNA)核酸扩增检测试剂盒英文名：Human Mitochontriol DNA Fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction(PCR)Diagnostic kit汉语拼音：ren xian li ti DNA he suan kuo zeng jian ce shi ji he【目的】本试剂盒适用于检测人外周血、精液或组织等样本中线粒体DNA，用于生殖、胃肠功能紊乱以及遗传性相关疾病如男性不孕等疾病的辅助诊断以及药物疗效观察。
其检测结果仅供临床参考。
【原理】本试剂盒选取一对线粒体DNA(mtDNA)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法提取DNA，后者在耐热DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-荧光探针法提取扩增法对线进行扩增，从而达到快速实时定量检测线粒体DNA(mtDNA)之目的。
【组成】名称数量规格核酸提取液B4管500μl/管Taq酶系1管80μl/管mtDNA–PCR MIX1管960μl/管mtDNA阳性质控品1管50μl/管(1×107Copies/ml)阴性质控品1管500μl/管备注：红细胞裂解液(10×RCLB)等另行配备。
【标本采集、保存和运输】1.全血：用无菌注射器抽取受检者静脉血1毫升，注入无菌2ml EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
2.精液：无菌条件下取精液1-3ml，转至5ml洁净的离心管中，密闭送检。
3．组织：无菌条件下取待检组织0.1-0.5g，转至1.5ml洁净的离心管中，密闭送检。
3.保存和运输：标本可立即用于测试，2-8℃保存下不应超过24小时；-70℃以下长期保存。
避免反复冻融。
五种致泻性大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒...
五种致泻性大肠埃希氏菌多重PCR检测试剂盒研发背景大部分的大肠杆菌是人或动物倡导的共生菌，但其中也有部分菌株可引起腹泻等疾病。
致泻大肠杆菌不但可引起传染性疾病而且可引起食源性疾病的暴发。
根据发病机制、临床特征、流行病学特征、O抗原血清及细菌的毒力测定，可将致泻大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌（EPEC）、产毒性大肠杆菌（ETEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、粘附性大肠杆菌（EAEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）。
目前针对致泻大肠杆菌的常规实验室检测方法仍然较为薄弱，需要研究快速、简便、准确的分子生物学方法。
【检验原理】五种致泻性大肠杆菌（EPEC、EHEC、EAEC、EIEC、ETEC）共含有11种毒力基因，针对这11种毒力基因，天津生物芯片试剂盒使用11对特异引物，与样本中基因组的相应靶位点特异性结合，PCR反应后，不同类型的样本产生不同的扩增片段，从而达到对五种致泻性大肠杆菌快速分型检测的目的。
【使用方法】1.试剂配制（试剂准备区）从试剂盒中取出PCR反应液在室温融化，将PCR反应液充分震荡混匀，所有试剂在使用前2000rpm离心10s。
设所需要的管数n（n=样本数+1管阴性对照品），每个测试反应体系试剂配置如下表。
计算所需要的n管反应的各试剂的使用量，加入至适当体积的无菌离心管中，充分混合均匀，分装至无菌PCR反应管中，每管24μl。
2.PCR扩增（扩增和产物分析区）将样本、阴性对照品使用前恢复至室温，2000rpm离心10s。
向每个PCR反应管中分别加入样本、阴性对照品各1μl，震荡混匀，于2000rpm离心10s。
将PCR管放入PCR仪中，使用以下程序进行扩增反应，整个扩增反应约需2小时：Step 1 94℃ 5minStep 2 94℃ 30sStep 3 63℃ 30s 30 个循环Step 4 72℃ 90sStep 5 72℃ 5min3.结果判断（扩增和产物分析区）从PCR管中取出2μl PCR产物与9μl阳性对照品一起进行浓度为2%的琼脂糖凝胶电泳检测，在紫外灯下阳性对照品从上至下应有11条带，分别为1487bp、1111bp、910bp、766bp、655bp、544bp、400bp、324bp、244bp、171bp和102bp。
结核杆菌TBPCR荧光扩增检测说明书
【正文】结核分枝杆菌（TB）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒说明书Operation Introduction for Mycobacteriumtuberculosis(TB) PCR Fluorescence Diagnostic Kit前言本试剂盒采用一对PCR引物和一个荧光双标记的探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，从而将PCR技术和荧光检测技术结合起来，实现了对TB核酸的自动化检测。
检测灵敏度为10个TB菌/毫升。
试剂盒在PCR循环结束后无需开盖。
试剂盒中采用了dUTP-UNG酶防污染系统。
本品可用于可疑结核病患者经处理的痰液标本结核分枝杆菌核酸的定性检测，可用于结核病的辅助诊断。
试剂盒组成※贮存条件及有效期本试剂盒贮存于-20℃的条件下有效期为一年（请于有效期内使用）。
自备试剂4％NaOH、灭菌生理盐水样本采集、存放及运输1．采集：以清晨第一口痰为宜。
先用清水漱口，嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管，密封，即可送检。
2．存放：待测样本在2-8℃保存不应超过24小时；-20℃保存不超过三个月；-70℃以下长期保存。
应避免反复冻融。
3．运输：采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。
适用仪器1．BIO-RAD iCycler荧光PCR检测仪、PE Gene Amp 7700荧光PCR检测仪2．Roche LightCycler 荧光PCR检测仪3．其它荧光PCR检测仪，如PE-5700、PE-7000、基因公司Rotor-Gene、MJ公司Opticon Monitor、大和Line-Gene荧光定量PCR检测仪等使用方法1．样本处理（样本处理区）1.1. 首先对痰液样本进行目测，若样本中唾液占绝大部分，则需重新采集样本。
1.2. 目测合格后，在样本中加入2～3倍体积4%的NaOH溶液，置于摇床上，在150rpm、37℃条件下处理30min或常温下1Hr，使其充分液化（无明显固状物并且吸出时无拖丝现象即为液化完全；若液化不完全，可适当再加入少量4%的NaOH溶液直至液化完全）。
新冠核酸检测试剂包说明书
第四包
新冠核酸扩增试剂
1、产品获得CFDA注册证或美国FDA认证，适用于AGS8830使用；
2、试剂盒配有内标，监控样本的核酸提取，PCR扩增等过程，避免假阴性结果出现。
3、有效期：不少于9个月，到货后质保期不少于7个月。
4、规格要求：48-50人份/盒。
★5、核酸扩增时间≤70分钟，提供一盒试剂及其说明书，在我中心AGS8830型荧光定量PCR仪器上现场验证扩增时间。
6、品牌伯杰、达安、圣湘。
7、暂不发货，联系实验室，根据实验室需求，由中标单位在24小时之内配送到位，据实结算。
COVID-19新冠病毒核酸检测质控品
1、需提产品合格证明。
0.5ml/管，20支/盒。
2、根据实验室需求，可调换其他品牌和浓度质控品。
新冠核酸提取试剂
★1、所有试剂预封装，无须自行分液，只需加入样品即可上机，方便省时，按1:1.3配备磁棒套。
★2、整板及单条可拆试剂盒可供选择，单条可拆试剂盒为每板8条，每条6孔，每个试剂盒配2块底板。
★3、适合磁珠法自动核酸提取仪上使用。
4、生产核酸试剂厂家须取得经营许可证和GMP认证。
★5、试剂盒完全符合台湾圆点SLA-32、SLA-E13200及台湾圆点M9600自动核酸提取仪使用要求。
6、有效期：不少于12个月，到货后质保期不少于9个月。
7、配套赠送微孔板迷你离心机一台，可离心2片96孔PCR板。
8、根据需求，可调换为同品牌其他规格提取试剂。
暂不发货，联系实验室，根据实验室需求，由中标单位在24小时之内配送到位，据实结算。
按1:1.3配备磁棒套。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
YY/T 1182-2010核酸扩增检测用试剂（盒）1范围本标准规定了核酸扩增检测试剂（盒）【以下简称“试剂（盒）”】的术语和定义、命名和分类、技术要求、试验方法、标识、标签和说明书、包装、运输和贮存等。
本标准适用于核酸扩增检测试剂（盒）的质量控制。
核酸扩增检测试剂（盒）应包括核酸提取、核酸扩增及产物分析试剂组份，如核酸扩增检测试剂（盒）内不含有核酸提取组份，应由生产企业说明或指定提取试剂（盒）。
本标准不适用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突变检测用试剂（盒）及血源筛查的试剂（盒）。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 21415-2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性3术语和定义以下术语和定义适用于本文件。
3.1 聚合酶链反应polymerase chain reaction,PCR聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。
3.2 PCR杂交（膜上、板上）PCR hybridization具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）可以通过氢键的方式，按碱基互补配对原则相结合，探针结合于特定核酸序列或PCR产物的杂交过程可以在液相中进行，也可以将其中一个固定在固相载体上进行。
3.3 PCR 电泳 PCR electrophoresis根据PCR产物分子质量和所带电荷的不同在电场中进行分离的技术。
3.4实时荧光PCR real-time polymerase chain reaction,PCR在PCR过程中利用荧光染料释放的荧光定量的变化直接反映出PCR扩增产物量的变化，荧光信号变量与扩增产物变量成正比，并通过对荧光的采集和分析以达到对原始模板量进行分析的PCR。
注：在每个循环中检测扩增产物是否可被检测。
3.5测量系统的线性 linearity of a measuring system给出的测量结果与样品中被测量的值直接成比例的能力。
注1：对与体外诊断医疗器械，线性相关于测量结果在一给定测量范围经校正或线性化以后的测量示值。
注2：线性通过测量包含被测量已知配方或其间相对关系（不必绝对知道）的样本来评估。
当测量结果相对被测量绝对或相对数值作图时，所画曲线对直线的符合程度及线性度的量度。
3.6样本线性 linearity of series diluted samples对高浓度样本进行系列稀释，得到的检测浓度对数值与稀释比例之间相关。
3.7分析特异性 analytical specificity测量程序只测量被测量的能力。
3.8测量精密度 precision of measurement在规定条件下，相互独立的测量结果间的一致程度。
注1：测量精密度不能用于被测量有关的数字值表示，在指定目的下只能以“足够”或“不足”进行描述。
注2：精密度的程度通常与精密度相反的测量不精密度统计量表示，如标准差和变异系数。
注3：给定测量程序的“精密度”可以根据特定的精密度条件进行分类。
“重复性”与基本不变的条件有关，常称为“序列内精密度”或“批内精密度”。
“重现性”与条件改变有关，如：时间、不同实验室、操作者和测量系统（包括不同校准和试剂批号）。
3.9计量学溯源性 metrological traceability通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。
注1：通过校准传递方案确定的（参考）测量程序实现每一步比较。
注2：溯源性有几种类型。
本标准使用术语“计量学溯源性”。
3.10检测限 detection limit,limit of detection样品中以一定概率可被申明与零有差异的被测量的最低值。
注1:也被描述为“最低检测限”（minimum detectable concentration）(或剂量或值)。
注2：有时被不正确地指作分析灵敏度。
注3：本标准中的最低检测限为区别于零的不低于95%可信区间的最低浓度。
3.11定量限 limit of quantitation给定分析程序能定量检测分析物的最小浓度或量。
3.12阈值循环数Ct（Cp）cycle threshold,crossing point实时监测扩增过程中，反应管内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。
主要的计算方式是以扩增过程前3到15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为阈值循环数（Ct）。
3.13基因型 genotype一个有机体的遗传组成，即明确界定具体等位基因位点的基因组。
3.14内标internal control在同一反应管中与靶序列共同扩增的一段非靶序列分子，其目的是鉴别仪器故障、试剂因素、聚合酶活性因素或样本中存在抑制物等造成的结果不理想的原因。
4命名和分类4.1命名***核酸（DNA或RNA）扩增检测试剂（盒）(方法学)。
4.2分类可按如下方式分类：a)根据核酸扩增检测分析采用的方法学原理分为：实时荧光PCR试剂（盒）、RT-PCR试剂（盒）、PCR杂交检测试剂（盒）、PCR-电泳法检测试剂（盒）等。
b)根据对试验结果的判定可分为：定量和定性。
5技术要求5.1外观外观应满足以下条件：a)试剂（盒）应符合生产企业规定的外观要求；b)试剂（盒）应组份完全，包装外观清洁、无泄漏、无破损；标志、标签字迹清楚。
5.2溯源性生产企业应根据GB/T 21415-2008及有关规定提供所用核酸标准品的来源、溯源的赋值过程和相应要求，以及测量不确定度等内容。
5.3 测量系统的线性线性相关系数︱r︱≧0.980。
试剂（盒）标准品应不少于4个浓度，宜包含线性范围上限和下限，线性相关系数︱r︱≧0.980。
5.4准确度对阳性参考品进行测定，检测结果应为阳性。
准确度应符合如下要求之一：a)检测国家标准品（或参考品）/国际标准品（或参考品），绝对偏差不超过±0.5个对数数量级；b)回收试验：回收率在85%~115%范围内。
5.5分析特异性分析特异性应满足以下要求：a)检测一定数量的不含被测物的样本，结果应为阴性；b)检测可能引起非特异反应的样本，如与被测物种属相近、感染部位相同或感染症状相似的其他样本，结果应为阴性。
5.6亚型检测能力检测生产企业规定试剂检测范围内国内常见亚型，应能检出。
注：只有当分析物具有不同亚型时应满足此项要求。
5.7 精密度5.7.1 定性试剂批内精密度应符合Ct值的变异系数（CV,%）≦5%批内精密度应符合检测浓度对数值的变异系数（CV,%）≦5%。
5.8 检测限/定量限检测限应符合生产企业声称的值。
定量限应符合生产企业声称的值。
适用时，检测限应符合生产企业声称的值。
5.9 干扰物质对血液样本，检测含有生产企业规定浓度的干扰物质如血红素及其代谢产物、脂血等样本，及含过量EDTA抗凝剂的样本，应符合生产企业规定的要求。
5.10稳定性可选用以下方法进行验证：a)效期稳定性：生产企业应规定产品的有效期。
取到效期后的样品检测测量线性、准确度、分析特异性、亚型检测能力、精密度、检测限/定量限、干扰物质，应分别符合5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9的要求。
b)热稳定性试验：测量线性、准确度、分析特异性、亚型检测能力、精密度、检测限/定量限、干扰物质，应分别符合5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9的要求。
注1：热稳定性不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式。
注2：根据产品特性可选择a),b)方法的任意组合，但所选用方法宜能验证产品的稳定性，以保证有效期内产品性能符合标准要求。
6试验方法6.1外观在自然光下目视检查外观，结果应符合5.1的要求。
6.2溯源性生产企业提供的溯源性资料应符合5.2的要求。
6.3测量系统的线性在生产企业规定的线性范围内，取接近线性范围上限的高值样本按一定比例（例：5倍或10倍）稀释为至少5种浓度，其中低值浓度样本需接近线性范围的下限。
按试剂（盒）说明书进行操作，将每一浓度样本重复检测3孔，计算每一浓度的对数值和Ct均值，以浓度的对数值为Y，Ct均值为X,进行线性拟合，计算其线性相关系数r,结果应符合按试剂（盒）说明书进行操作，试剂（盒）中每一标准品重复检测3孔，计算每一标准品的标示浓度的对数值与Ct值的均值，以浓度的对数值为Y, Ct均值为X,进行线性拟合，计算其线性相关系数r，结果应符合6.4准确度对阳性参考品进行测定，检测结果应符合建议按如下优先顺序，采用下列方法之一测试定量试剂（盒）的准确度，应符合a)绝对偏差用试剂盒对参考物质或有证参考物质（CRM）和相应的参考测量程序按照符合GB/T 21415-2008规定的溯源顺序进行测试，重复测定3次，取测试结果均值（M）,按公式（1）计算绝对偏差（B）,结果应符合或用有参考方法定值的高、中、低3个浓度的样本（可参照EP6-A的要求适当添加被测物，以获得高浓度的样品）对试剂（盒）进行测试，每个浓度样品重复测定3次，分别取测试结果均值，按公式（1）计算绝对偏差，结果应符合B=M-T (1)式中：B-绝对偏差；M-测试结果均值；T-参考物质标示值，或各浓度人血清定值。
b)回收试验在样品中加入一定体积标准溶液（标准溶液体积与样本体积比应不大于1:20，或其体积比不会产生基质的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂（盒）测定线性范围内），重复测定3次，取平均值，按公式（2）计算回收率，结果应符合R=c×(V0+V)-c0×V0×100% (2)V×c s式中：R-回收率；V-加入标准溶液的体积；V0-样品的体积c-样品加入标准溶液后的测定浓度c0-样品的测定浓度c s-标准溶液的浓度6.5分析特异性检测可能引起非特异反应的样本，如与被测物种属相近、感染部位相同或感染症状相似的其他样本，结果应符合5.5的要求。
6.6亚型检测能力检测生产企业规定实际检测范围内国内常见亚型样本，样本个数应至少一个亚型有一个样本，检测结果应符合5.6的要求。
6.7精密度用至少高、低2个浓度水平的样本各重复检测10次，计算C t值变异系数（CV,%）,结果应符合用至少高、低2个浓度水平的样本各重复检测10次，其浓度对数值变异系数（CV,%）应符合6.8检测限/定量限检测生产企业生产浓度值的样本20次，至少17次检测结果符合检测生产企业声称浓度值的样本25次，至少22次检测结果符合6.9干扰物质按照生产企业规定的方法进行检测，结果应符合5.9的要求。