磁珠法提取核酸的3种样本处理方法

磁珠法提取核酸的3种样本处理方法

转自：洛阳吉恩特生物科技有限公司磁珠法核酸提取实验室以生物磁珠为载体提取核酸，所有反应是在液体体系中进行的，但生物样本多种多样，有液体也有固体，或者固液混合体，大多数生物样本在进行核酸提取纯化之前需要进行一定的前处理，液化、富集、除杂等都是常见的前处理方式。

一、液化

将固体样本转化为液体样本是最重要的样本前处理方法，固体样本是很难直接在试剂盒的作用下用于提取核酸的。固体样本跟杂质一样，会严重阻碍磁珠吸附核酸，并且耗损大量的磁珠位点，很难取得良好的提取效果。

常见的固体样本如植物组织、动物组织、泥土、浓痰等。

植物组织和动物组织，可剪取适量的样本，在研钵内快速研磨。研磨时如果需要保护RNA，可以采用液氮研磨的方式。如果不需要提取RNA，也可以加入裂解液或者生理盐水帮助研磨成匀浆状态。

泥土的处理方式主要是通过浸泡。因为从泥土中提取核酸，并非提取泥土本身，而是提取泥土中存在的微生物的核酸。使用生理盐水或者其他适当缓冲液体浸泡泥土，如果是较为干硬致密的泥土，浸泡前可以先碾碎成小颗粒，浸泡过程中可用小棒搅动帮助泥土分散。浸泡一段时间后，将泥浆用三层滤纸过滤，过滤所得的液体，即可用于磁珠法提取。

如浓痰、脓液等固液混合又较为黏腻的生物样本，可以先使用氢氧化钠液体进行碱解液化，再酸中和后，作为液体样本进行磁珠法提取。

以上方法处理固体样本，所得的液体，可能并不完全清澈透明，杂质还是相对较多的，如果必要，使用离心的方式，可以除去更多的杂质，但相对应该控制离心速度在10000r/min以下，否则核酸也会一起随杂质被离心下去。

二、富集

很多时候，用磁珠法提取的核酸都是微量或者痕量的样本，直接使用样本进行操作，所能得到的核酸很少，这就要求下游的检测试剂灵敏度很高，如果检测试剂灵敏度不足，在样本痕量的情况下，很可能检测不出，出现假阴性。所以对于微量样本和痕量样本，可以进行富集前处理。

有些时候，样本属于常量样本，但下游实验需求核酸量大，也需要对样本进

行富集，以便每个提取都能获得更多的核酸。

或者样本量巨大，无法直接使用试剂盒进行提取，也需要进行富集操作。

常见的富集方法包括蒸发和离心。

以土壤浸润水样本为例，浸泡大量的土壤样本，获得了500ml浸润水，显然无法将500ml浸润水作为样本直接提取。可以先将样本分装在两个30ml离心管内进行，12000r/min离心十分钟，弃去上清液后，用适量生理盐水重悬沉淀后，移入小离心管内，在80℃温度下蒸发液体至液体量少于300ul，即可用于磁珠法进行核酸提取。

三、除杂

很多生物样本中都含有大量的杂质，这些杂质有的可以在试剂盒核酸提取的过程中被洗涤液除去，但有些，很难通过后续的试剂盒洗涤直接除去，这就要求我们在样本前处理的时候，就直接先做初步的除杂。

以大量血液样本为例，常规定量血液样本（200ul以下），通常是不需要提前除杂的。但如果血液样本的量很大，如4-5ml/提取，就很难直接进行了，不仅样本的量超过常规试剂盒的容纳范围，杂质也非常多。

通常的做法是，提前加入红细胞裂解液，离心，弃去上层液体，裂解液重悬样本。

各种各样的样本前处理方法是很灵活多样的，根据下游需求不同，样本特性不同，通常是多种前处理方式组合应用，以达到最佳效果。

四、结语

总之，在磁珠法核酸提取的过程中，样本的前处理工作对整个提取结果会有至关重要的影响。当然，选取合适的磁珠，更能使提取结果事半功倍，吉恩特生物的01系列磁珠，半沉降时间可达15min以上，磁吸时间仅为15s左右，可为操作者带来不一样的磁珠操作体验。详情可参考文章《4个参数教你鉴别DNA 提取磁珠》