第11章 吸光光度法
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c——吸光物浓度
k——比列系数
分析化学
其中，浓度c的单位有两种表示方法： 1、以质量浓度（g· -1）为单位，相应k称 L
为吸收系数用“a”表示，则：A=abc
2、以物质的量浓度（mol· -1）为单位，相 L
应k称为摩尔吸收系数，用“κ”表示，则：
A=κbc
较常用，下面 的讨论均为此 种关系
分析化学
分析化学
不同的物质，对光的吸收性能不同，其κmax 也不同。显然，κmax越大的物质，在相同浓度下 的吸光度越大，其测定的灵敏度也越高。即： κmax∝灵敏度。 通常情况下，为获得较好的测量效果，一般 要求：κmax＞104 L· -1· -1 mol cm
吸光光度法的灵敏度除用摩尔吸收系数κmax表示外， 还常用桑德尔灵敏度表示。其定义见P280，常用符号S表示， S与κmax的关系为：
S=M/κ
M——被测物的摩尔质量
分析化学
二、吸光度A—浓度c的关系曲线：
按朗伯—比尔定律，当物 质一定，波长一定，吸收层 厚度一定时，A—c应呈线性 关系（如右图）： 但实践中，若处理不好， 关系曲线常有偏离——分正偏 差、负偏差两种情况： 正偏差（A测＞A理）； 负偏差（A测＜A理）。
分析化学
A A A
t0
t
t0
t
t1
t2
t
稳定型：产物一 旦产生，便非常 稳定（最理想的 类型，可在t0以 后测定）
不稳定型：产 物形成后逐渐 分解（不能用 于吸光分析）
半稳定型：产物较 稳定，经一段时间 放臵后才逐渐分解 （应抓紧时间在t1 至t2测定）
分析化学
④温度： 不同的显色反应需不同的温度，有的常温下即可 进行，有的需加热，有的在高温下要分解，故应根 据不同情况选择适宜温度。
n=5 C
分析化学
②溶液酸度： 若溶液中被测离子或显色剂能与酸碱作用， 则改变酸度即可改变产物浓度，使其吸光度和灵 敏度发生变化。
A
pHmax
pH
解决方法： 让显色反应在不同酸度下进行，找出其最大 吸收酸度，即得最适宜的酸度条件。
分析化学
③显色时间： 当被测物与显色剂通过显色反应生成有色产 物后，按产物的稳定情况可分几种不同的类型：
不平行光 平行光 不平行光
解决方法：
使入射光严格平 行通过吸收层 （垂直于比色皿 的被照表面）
分析化学
③介质不均匀：
若被测物为溶液，溶质是分子或接近分子的 离子状态，颗粒很小，其直径远小于可见光波长， 则入射光通过时将发生绕射而非散射，微粒对A无 直接影响（吸收除外）。 若被测物颗粒较大，入射光通过时将发生散 射，使T 减小，A 增加，产生正偏差。
分析化学
但是，因T 与A、c 均非线性而呈现对数 关系，故在不同T 所对应的读数误差△T 导致 的吸光度A的误差△A 是不同的，由此造成的 浓度△c 也不同。
何处的△A、△c最小？
分析化学
1 按关系: A lg 0.434lnT bc T
解出： 微分：
0.434lnT c b
分析化学
极端情况：
若所有光均被物质吸收
若所有光均不被物质吸收
该物质呈黑色；
该物质呈白色。
同时，物质的颜色的深浅与其吸收的强弱有
关——吸收越强，颜色越深，由此可进行化学分析。
分析化学
三、吸收曲线
1、吸光度
定义：物质对光的吸收程度，常用“A”表
示。
显然，吸收程度越大，其颜色就越深，吸 光度A值也越大。
造成偏差的原因有两类：
物理因素 和 化学因素
1、物理因素：
①光不纯：
朗伯—比尔定律要求入射光应为单色光（具 有确定波长的光），且一般要求测定时的波长为 最大吸收波长（λmax或κmax）。 若入射光不纯，含有其他不同波长的光，则 此类光由于不易被所测物质吸收，必然导致A减 小，产生负偏差。
分析化学
第十一章
吸光光度法
分析化学
§11-1 概论
一、光的本质：
光的本质是电磁波，具有特定的波长和频 率。若ν、λ不同，其物理属性也不同。
10-2 nm 10 nm
射 线 x 射 线
102 nm 104 nm
紫 外 光 红 外 光
0.1 cm 10cm
微 波
103 cm
无 线 电 波
105 cm
可
λmax =525nm
分析化学
最大吸收波长λmax的意义 不同的物质，λmax不同 性分析。 曲线高度(吸光度A)的意义 据此可进行定
同一种物质，λmax相同，但若浓度不同，吸 收曲线的高度也不同 据此即可进行定量 分析。
分析化学
§11-2 光吸收定律
一、朗伯—比尔定律：
波长相同 或相近
溶液
显然要求物质的 颗粒小(光通过时
MnO4-(紫红)
②络合：
如： Mo5+(无色)＋5SCN-→Mo(SCN)5(橙红)
分析化学
使用显色剂时需注意: ①选择性好：显色剂不与其它离子发生副反应； ②灵敏度要高：只需很少被测物即能显出明显颜色； ③对比度要大：显色剂与产物之间的颜色（波长） 相差较大（△λ在 60nm以上，即颜色不同）否则 显色剂将发生干扰；
分析化学
前一种误差可通过检修等方法提高质量，而 后一种则难以消除。 一般来说，读数器上最初读取的参数均为透 光度（再以此换算为A）。因测量条件所限，均 存在一定的读数误差。 通常情况下，读数误差△T处在0.002～0.01 之间，取平均值：
T 0.005
即每次显示的T值均 有0.005的误差，且 此值对0～1.0之间的 每个T值均相同。
⑤共存离子干扰：
a.共存离子与显色剂生成有色物。
消除方法：掩蔽或分离。
b.共存离子本身有颜色，且不易分离。
消除方法：适当调整参比溶液，如用不加显色剂的
溶液为参比，将其参比调零，即可消除。
分析化学 分析化学
二、仪器的测量误差
仪器的质量引起的误差 读数误差
如仪器不稳定， 显示不灵敏等
对仪器读数表上的刻 度读取不准造成（尽 管采用液晶显示，但 仍存在一定的显色误 差）
解决方法：
a.选择好的分光器以获得 较纯的单色光。 b.即使再好的分光器，也 难以获得绝对意义上的单色 光，但若混进的光的λ与选 测光的λ测相近，则对吸光 度A不影响；若相差较大， 需调整入射波长，减小灵敏 度，选择影响较小的λ分析 （见右图）。
A
max 测
分析化学
②入射光不平行：
测定时，是将被测 溶液臵于矩形的比色皿 内进行测试。若入射光 不平行，则难以保证光 线垂直通过被测溶液， 造成部分光线的光程增 大（相当于液层厚度b 增大），从而导致A增 加，产生正偏差（右 图） 。
④有色物要稳定，组成要恒定：保证重现性好，准
确度高；
⑤显色条件易于掌握。
分析化学
2、影响因素：
①显色剂的用量： 因显色反应可逆，故增大显色剂用量，可使 平衡右移，产物转换彻底，A增大，准确性和灵 敏度均可提高。 A
但个别物质，如Mo(SCN)n，显 色剂SCN-用量增大后，因生成配位 数为6的络合物［Mo(SCN)6-］，颜色 反而变浅，A减小。
解决方法：
控制操作条件，使溶液 澄清透明，避免生成胶 体或产生浑浊现象。
被测物质
分析化学
2、化学因素：
①溶液浓度过高：
使溶液中微粒之间的间隙减小，同时使溶质间 的相互作用增加，溶液的粘度增加，导致T 、A 发生变化（这种改变与浓度增大时，被测物分子 数增多，吸光度增大毫不相关）。
解决方法：
稀释，使被测液在 较低浓度下进行。
§11-4 吸光光度法分析条件的选择
一、显色反应及影响因素： 1、显色反应：
若被测物有色——可直接测其A；若无色， 则需加入某种试剂使之显色。此类试剂叫“显 色剂”，其反应称“显色反应”，可表示为： 无色被测物+显色剂 有色物
分析化学
其显色机理有两类： ①氧化还原：
如： Mn2++S2O82过二硫 酸盐
分析化学
2、透光度（透光率、透色比）
定义：透过光的强度与入射光的强度的比
值，常用“ T ”表示：
It T I0
I0 It
显然： ∵ 0≤It≤I0 故：T 的取值范围为： 0≤T≤1（或0≤T≤100%）
分析化学
3、二者的关系
若将一定强度（I0）的光照射某一溶液，透 过的光越多，T 越大，相应的吸光度A则越小，二 者呈现负相关的关系：
见
光
分析化学
波长在400～750nm的可见光：人的视网膜对 此类光尤为敏感，且在此范围内不同波长的光在视 网膜中的颜色不同。其规律为：
分析化学
特点： 两两互补
两种颜色的光以 一定的比例相混 合，即成白光。
常见的自然光为白
光，系由多种光混合互
补而构成。
分析化学
二、显色的机理：
按物理学的观点： 物质本身并不具有 颜色，之所以显色，系 物质吸收相应互补色之 故，如： 若显兰色： 系吸收了兰色的互补色——黄色； 若显红色： 系吸收了红色的互补色——青色。
κ=A/(bc)
显然，对于特定的物质而言，影响κ大小的唯一 因素只剩下测定时所用电磁波的波长：波长不同， κ值也就不同——因而应用κ时，需注明测定波长 （如选用λmax，也可不注明）。 3、κ的分析意义： 按吸收曲线的变化关系已知，波长不同，同一 物质的吸光度也不同——相应的κ也不一样。由关系 式κ =A/(bc)可知，若测定波长选择最大吸收波长 λmax，对应的吸光度A最大，相应的κ也最大——称 为最大摩尔吸收系数，写为κmax 。
分析化学
吸收池：
吸收池又叫比色皿，是由质料均匀的玻 璃构成，分0.5cm、1cm、2cm、3cm（均指 池的厚度，即液层厚度）几种规格。虽然无 色透明，但仍有一定的吸光度（A池）。 另外，虽然多数溶剂为水，表面无色透 明，但也有一定的吸光度，用A剂表示。
分析化学
若溶液中具有颜色的被测离子吸光度为A测，
A=κbc
κ=A/(bc)
对于κ，需注意以下两点：
1、κ的单位：吸光度A是无单位的量，故κ的 单位为：L· -1· -1 mol cm 2、κ的物理意义： 指当吸收层厚度为1cm，浓度为 1 mol· -1时对 L 应的吸光度。 可见，κ与浓度、厚度无关，只取决于测量波长、 物质种类。
分析化学
A=κbc
分析化学
由于吸光光度法是一种很灵敏的分析法（灵敏 度可高达10－4～10－5%，万分之一或十万分之一的 含量），故操作条件尤为关键，应注意以下几点 （针对吸收池）： ①.各吸收池的规格和性能应一致。 ②.使用时应注意保持清洁。 ③.不要在吸收池上留下划痕。 ④.吸收池在比色槽中的位臵要固定。
分析化学
1 A = lg — T
由此可见： 当T→0，A→∞ 当T→1(或100%)时，A→0
故A 的取值范 围为：0→∞
分析化学
4、吸收曲线
不同的物质，由于分子结构不同， 其核外电子运动时所需要的能量也不 同，因而吸收的电磁波也不一样 — — 所需能量越大，吸收光的波长也 越短，反之则越长。
分析化学
如：KMnO4溶液主要吸收波长 为525nm附近的绿光，而使溶液呈 紫色。 若以不同波长（λ）的单色光 照射溶液，测其吸光度A，以此作 图（λ为横坐标，A为纵坐标），可 得其溶液吸光度A随λ变化而变化的 曲线 吸收曲线 曲线的最高点（A值最大处） 位于525nm，记为：
分析化学
②化学反应：
通过解离、缔合等形成其他化合物，使 被测物的浓度c 减小，A 减小，产生负偏差。
解决方法：
控制浓度、酸度，除 去其它易反应物质， 从而减小偏差。
分析化学
§11-3
吸光光度法的仪器
分光光度计
由光源、单色器、吸收池、检测系统四部分 构成。
0.482
光源
单色器
吸收池
检测器
显示器
检测系统
不产生散射，而 是绕其而过)
当一束平行的单色光垂直地通过某一均匀的非
散射的吸光物质时，其吸光度A与相应物质的浓度c
和吸收层厚度（b）成正比。
有色 物质
分析化学
即：
Io 1 A = kbc = lg — = lg — It T
此即为朗伯—比尔 定律（光吸收定律） 式中：
A——吸光度
b——吸收层厚度(cm)
则当一束光照射至吸收池及其内部溶液时，所测
得的总吸光度为A总，则： A总= A测+ A池+A剂= A测+ AR AR
虽然按朗伯—比尔定律，A测= κbc，但 得到的却非A测而为A总，若由其算c，须知AR，这 样就略显复杂。
分析化学
解决方法：
先取同样厚度的吸收池盛同样的溶剂（注意： 不含被测离子），此类溶液称“参比溶液”。用同 样波长的光在相同条件下测定，其吸光度用“A参” 表示，显然： A参= A池+A剂=AR 若人为的将参比液的吸光度调节为0（亦即T参 =100%），即 A参=0，再对被测溶液进行测定： A总= A测+A参=A测= κbc 参比调零 由测出的A总即可直接计算c。
k——比列系数
分析化学
其中，浓度c的单位有两种表示方法： 1、以质量浓度（g· -1）为单位，相应k称 L
为吸收系数用“a”表示，则：A=abc
2、以物质的量浓度（mol· -1）为单位，相 L
应k称为摩尔吸收系数，用“κ”表示，则：
A=κbc
较常用，下面 的讨论均为此 种关系
分析化学
分析化学
不同的物质，对光的吸收性能不同，其κmax 也不同。显然，κmax越大的物质，在相同浓度下 的吸光度越大，其测定的灵敏度也越高。即： κmax∝灵敏度。 通常情况下，为获得较好的测量效果，一般 要求：κmax＞104 L· -1· -1 mol cm
吸光光度法的灵敏度除用摩尔吸收系数κmax表示外， 还常用桑德尔灵敏度表示。其定义见P280，常用符号S表示， S与κmax的关系为：
S=M/κ
M——被测物的摩尔质量
分析化学
二、吸光度A—浓度c的关系曲线：
按朗伯—比尔定律，当物 质一定，波长一定，吸收层 厚度一定时，A—c应呈线性 关系（如右图）： 但实践中，若处理不好， 关系曲线常有偏离——分正偏 差、负偏差两种情况： 正偏差（A测＞A理）； 负偏差（A测＜A理）。
分析化学
A A A
t0
t
t0
t
t1
t2
t
稳定型：产物一 旦产生，便非常 稳定（最理想的 类型，可在t0以 后测定）
不稳定型：产 物形成后逐渐 分解（不能用 于吸光分析）
半稳定型：产物较 稳定，经一段时间 放臵后才逐渐分解 （应抓紧时间在t1 至t2测定）
分析化学
④温度： 不同的显色反应需不同的温度，有的常温下即可 进行，有的需加热，有的在高温下要分解，故应根 据不同情况选择适宜温度。
n=5 C
分析化学
②溶液酸度： 若溶液中被测离子或显色剂能与酸碱作用， 则改变酸度即可改变产物浓度，使其吸光度和灵 敏度发生变化。
A
pHmax
pH
解决方法： 让显色反应在不同酸度下进行，找出其最大 吸收酸度，即得最适宜的酸度条件。
分析化学
③显色时间： 当被测物与显色剂通过显色反应生成有色产 物后，按产物的稳定情况可分几种不同的类型：
不平行光 平行光 不平行光
解决方法：
使入射光严格平 行通过吸收层 （垂直于比色皿 的被照表面）
分析化学
③介质不均匀：
若被测物为溶液，溶质是分子或接近分子的 离子状态，颗粒很小，其直径远小于可见光波长， 则入射光通过时将发生绕射而非散射，微粒对A无 直接影响（吸收除外）。 若被测物颗粒较大，入射光通过时将发生散 射，使T 减小，A 增加，产生正偏差。
分析化学
但是，因T 与A、c 均非线性而呈现对数 关系，故在不同T 所对应的读数误差△T 导致 的吸光度A的误差△A 是不同的，由此造成的 浓度△c 也不同。
何处的△A、△c最小？
分析化学
1 按关系: A lg 0.434lnT bc T
解出： 微分：
0.434lnT c b
分析化学
极端情况：
若所有光均被物质吸收
若所有光均不被物质吸收
该物质呈黑色；
该物质呈白色。
同时，物质的颜色的深浅与其吸收的强弱有
关——吸收越强，颜色越深，由此可进行化学分析。
分析化学
三、吸收曲线
1、吸光度
定义：物质对光的吸收程度，常用“A”表
示。
显然，吸收程度越大，其颜色就越深，吸 光度A值也越大。
造成偏差的原因有两类：
物理因素 和 化学因素
1、物理因素：
①光不纯：
朗伯—比尔定律要求入射光应为单色光（具 有确定波长的光），且一般要求测定时的波长为 最大吸收波长（λmax或κmax）。 若入射光不纯，含有其他不同波长的光，则 此类光由于不易被所测物质吸收，必然导致A减 小，产生负偏差。
分析化学
第十一章
吸光光度法
分析化学
§11-1 概论
一、光的本质：
光的本质是电磁波，具有特定的波长和频 率。若ν、λ不同，其物理属性也不同。
10-2 nm 10 nm
射 线 x 射 线
102 nm 104 nm
紫 外 光 红 外 光
0.1 cm 10cm
微 波
103 cm
无 线 电 波
105 cm
可
λmax =525nm
分析化学
最大吸收波长λmax的意义 不同的物质，λmax不同 性分析。 曲线高度(吸光度A)的意义 据此可进行定
同一种物质，λmax相同，但若浓度不同，吸 收曲线的高度也不同 据此即可进行定量 分析。
分析化学
§11-2 光吸收定律
一、朗伯—比尔定律：
波长相同 或相近
溶液
显然要求物质的 颗粒小(光通过时
MnO4-(紫红)
②络合：
如： Mo5+(无色)＋5SCN-→Mo(SCN)5(橙红)
分析化学
使用显色剂时需注意: ①选择性好：显色剂不与其它离子发生副反应； ②灵敏度要高：只需很少被测物即能显出明显颜色； ③对比度要大：显色剂与产物之间的颜色（波长） 相差较大（△λ在 60nm以上，即颜色不同）否则 显色剂将发生干扰；
分析化学
前一种误差可通过检修等方法提高质量，而 后一种则难以消除。 一般来说，读数器上最初读取的参数均为透 光度（再以此换算为A）。因测量条件所限，均 存在一定的读数误差。 通常情况下，读数误差△T处在0.002～0.01 之间，取平均值：
T 0.005
即每次显示的T值均 有0.005的误差，且 此值对0～1.0之间的 每个T值均相同。
⑤共存离子干扰：
a.共存离子与显色剂生成有色物。
消除方法：掩蔽或分离。
b.共存离子本身有颜色，且不易分离。
消除方法：适当调整参比溶液，如用不加显色剂的
溶液为参比，将其参比调零，即可消除。
分析化学 分析化学
二、仪器的测量误差
仪器的质量引起的误差 读数误差
如仪器不稳定， 显示不灵敏等
对仪器读数表上的刻 度读取不准造成（尽 管采用液晶显示，但 仍存在一定的显色误 差）
解决方法：
a.选择好的分光器以获得 较纯的单色光。 b.即使再好的分光器，也 难以获得绝对意义上的单色 光，但若混进的光的λ与选 测光的λ测相近，则对吸光 度A不影响；若相差较大， 需调整入射波长，减小灵敏 度，选择影响较小的λ分析 （见右图）。
A
max 测
分析化学
②入射光不平行：
测定时，是将被测 溶液臵于矩形的比色皿 内进行测试。若入射光 不平行，则难以保证光 线垂直通过被测溶液， 造成部分光线的光程增 大（相当于液层厚度b 增大），从而导致A增 加，产生正偏差（右 图） 。
④有色物要稳定，组成要恒定：保证重现性好，准
确度高；
⑤显色条件易于掌握。
分析化学
2、影响因素：
①显色剂的用量： 因显色反应可逆，故增大显色剂用量，可使 平衡右移，产物转换彻底，A增大，准确性和灵 敏度均可提高。 A
但个别物质，如Mo(SCN)n，显 色剂SCN-用量增大后，因生成配位 数为6的络合物［Mo(SCN)6-］，颜色 反而变浅，A减小。
解决方法：
控制操作条件，使溶液 澄清透明，避免生成胶 体或产生浑浊现象。
被测物质
分析化学
2、化学因素：
①溶液浓度过高：
使溶液中微粒之间的间隙减小，同时使溶质间 的相互作用增加，溶液的粘度增加，导致T 、A 发生变化（这种改变与浓度增大时，被测物分子 数增多，吸光度增大毫不相关）。
解决方法：
稀释，使被测液在 较低浓度下进行。
§11-4 吸光光度法分析条件的选择
一、显色反应及影响因素： 1、显色反应：
若被测物有色——可直接测其A；若无色， 则需加入某种试剂使之显色。此类试剂叫“显 色剂”，其反应称“显色反应”，可表示为： 无色被测物+显色剂 有色物
分析化学
其显色机理有两类： ①氧化还原：
如： Mn2++S2O82过二硫 酸盐
分析化学
2、透光度（透光率、透色比）
定义：透过光的强度与入射光的强度的比
值，常用“ T ”表示：
It T I0
I0 It
显然： ∵ 0≤It≤I0 故：T 的取值范围为： 0≤T≤1（或0≤T≤100%）
分析化学
3、二者的关系
若将一定强度（I0）的光照射某一溶液，透 过的光越多，T 越大，相应的吸光度A则越小，二 者呈现负相关的关系：
见
光
分析化学
波长在400～750nm的可见光：人的视网膜对 此类光尤为敏感，且在此范围内不同波长的光在视 网膜中的颜色不同。其规律为：
分析化学
特点： 两两互补
两种颜色的光以 一定的比例相混 合，即成白光。
常见的自然光为白
光，系由多种光混合互
补而构成。
分析化学
二、显色的机理：
按物理学的观点： 物质本身并不具有 颜色，之所以显色，系 物质吸收相应互补色之 故，如： 若显兰色： 系吸收了兰色的互补色——黄色； 若显红色： 系吸收了红色的互补色——青色。
κ=A/(bc)
显然，对于特定的物质而言，影响κ大小的唯一 因素只剩下测定时所用电磁波的波长：波长不同， κ值也就不同——因而应用κ时，需注明测定波长 （如选用λmax，也可不注明）。 3、κ的分析意义： 按吸收曲线的变化关系已知，波长不同，同一 物质的吸光度也不同——相应的κ也不一样。由关系 式κ =A/(bc)可知，若测定波长选择最大吸收波长 λmax，对应的吸光度A最大，相应的κ也最大——称 为最大摩尔吸收系数，写为κmax 。
分析化学
吸收池：
吸收池又叫比色皿，是由质料均匀的玻 璃构成，分0.5cm、1cm、2cm、3cm（均指 池的厚度，即液层厚度）几种规格。虽然无 色透明，但仍有一定的吸光度（A池）。 另外，虽然多数溶剂为水，表面无色透 明，但也有一定的吸光度，用A剂表示。
分析化学
若溶液中具有颜色的被测离子吸光度为A测，
A=κbc
κ=A/(bc)
对于κ，需注意以下两点：
1、κ的单位：吸光度A是无单位的量，故κ的 单位为：L· -1· -1 mol cm 2、κ的物理意义： 指当吸收层厚度为1cm，浓度为 1 mol· -1时对 L 应的吸光度。 可见，κ与浓度、厚度无关，只取决于测量波长、 物质种类。
分析化学
A=κbc
分析化学
由于吸光光度法是一种很灵敏的分析法（灵敏 度可高达10－4～10－5%，万分之一或十万分之一的 含量），故操作条件尤为关键，应注意以下几点 （针对吸收池）： ①.各吸收池的规格和性能应一致。 ②.使用时应注意保持清洁。 ③.不要在吸收池上留下划痕。 ④.吸收池在比色槽中的位臵要固定。
分析化学
1 A = lg — T
由此可见： 当T→0，A→∞ 当T→1(或100%)时，A→0
故A 的取值范 围为：0→∞
分析化学
4、吸收曲线
不同的物质，由于分子结构不同， 其核外电子运动时所需要的能量也不 同，因而吸收的电磁波也不一样 — — 所需能量越大，吸收光的波长也 越短，反之则越长。
分析化学
如：KMnO4溶液主要吸收波长 为525nm附近的绿光，而使溶液呈 紫色。 若以不同波长（λ）的单色光 照射溶液，测其吸光度A，以此作 图（λ为横坐标，A为纵坐标），可 得其溶液吸光度A随λ变化而变化的 曲线 吸收曲线 曲线的最高点（A值最大处） 位于525nm，记为：
分析化学
②化学反应：
通过解离、缔合等形成其他化合物，使 被测物的浓度c 减小，A 减小，产生负偏差。
解决方法：
控制浓度、酸度，除 去其它易反应物质， 从而减小偏差。
分析化学
§11-3
吸光光度法的仪器
分光光度计
由光源、单色器、吸收池、检测系统四部分 构成。
0.482
光源
单色器
吸收池
检测器
显示器
检测系统
不产生散射，而 是绕其而过)
当一束平行的单色光垂直地通过某一均匀的非
散射的吸光物质时，其吸光度A与相应物质的浓度c
和吸收层厚度（b）成正比。
有色 物质
分析化学
即：
Io 1 A = kbc = lg — = lg — It T
此即为朗伯—比尔 定律（光吸收定律） 式中：
A——吸光度
b——吸收层厚度(cm)
则当一束光照射至吸收池及其内部溶液时，所测
得的总吸光度为A总，则： A总= A测+ A池+A剂= A测+ AR AR
虽然按朗伯—比尔定律，A测= κbc，但 得到的却非A测而为A总，若由其算c，须知AR，这 样就略显复杂。
分析化学
解决方法：
先取同样厚度的吸收池盛同样的溶剂（注意： 不含被测离子），此类溶液称“参比溶液”。用同 样波长的光在相同条件下测定，其吸光度用“A参” 表示，显然： A参= A池+A剂=AR 若人为的将参比液的吸光度调节为0（亦即T参 =100%），即 A参=0，再对被测溶液进行测定： A总= A测+A参=A测= κbc 参比调零 由测出的A总即可直接计算c。