大肠杆菌的培养

大肠杆菌种子液的制备

牛肉膏蛋白胨培养基的配方：

液体培养基

牛肉膏 3.0g

蛋白胨10.0g

氯化钠 5.0g

水1000ml

pH 7.4-7.6

固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂

1 试管斜面与平板的制备

（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中。

（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。将称量好的

1.8％琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。

（3）调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用PH试纸测

基PH直到PH达到7.4-7.6。反之用1mol/L HCl进行调节。

（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。其试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过1/2加塞培养基分装完毕后，在试管口和三角烧瓶

口上塞上棉塞。

（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期。

（6）灭菌将上述培养基以0.1Mpa,121℃,25min高压蒸气灭菌。

（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基，冷却。

（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

2 接种大肠杆菌斜面种子

(1) 取实验室储备的大肠杆菌DH-5α种子，在洒精灯附近，用接种环在已制备

好的斜面上接种上大肠杆菌。

(2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h。

3 制备平板种子

(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下

来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为1倍，10倍，100倍和1000倍，用移液

枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液

100ul)，然后在37℃培养箱中过夜。

（12）次日，挑取生长状态好，特征明显的单个菌落，接种于新鲜灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基中37℃，170r/min恒温振荡培养18h作种子培养液。

其后的实验中，每次实验前从种子培养液中吸取2ml菌液接种于新鲜灭菌的液体培养基中，37℃，170r/min恒温振荡培养