β-地中海贫血基因检测(PCR-反向点杂交法)
pcr反向点杂交检测地中海分型报告
pcr反向点杂交检测地中海分型报告PCR反向点杂交检测地中海分型报告一、引言地中海贫血是一种常见的遗传性血液病，主要分为地中海贫血（β-地中海贫血）和地中海贫血症（α-地中海贫血）。
PCR反向点杂交（PCR-RFLP）是一种常用的分子生物学方法，可用于检测地中海分型。
本报告旨在详细介绍PCR-RFLP技术在地中海分型检测中的应用。
二、PCR反向点杂交原理1. PCR原理PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的缩写，是一种通过体外扩增DNA片段的方法。
它利用DNA聚合酶酶活性，在特定条件下，使DNA模板得到高效扩增。
2. 反向点杂交原理反向点杂交是一种基于DNA序列特异性识别的方法。
它通过将目标DNA序列与特异性引物结合，并经过适当处理后，通过电泳或其他方法进行检测。
三、PCR-RFLP技术在地中海分型检测中的应用1. 样本采集和DNA提取需要从受检者身上采集样本，如静脉血或口腔黏膜细胞。
通过常规方法提取DNA，如酚/氯仿法或商用DNA提取试剂盒。
2. PCR扩增使用特异性引物对目标基因进行PCR扩增。
对于β-地中海贫血，通常选择扩增β-地中海贫血突变的片段；对于α-地中海贫血，通常选择扩增α-地中海贫血突变的片段。
3. 酶切反应将PCR产物与适当的限制性内切酶一起进行酶切反应。
限制性内切酶是一种能够识别特定DNA序列并在该序列上切割的酶。
4. 胶电泳分析将酶切产物经过胶电泳分离，并使用合适的染料染色。
在紫外光下观察和记录胶图。
根据不同基因型的特点，可以确定受检者的地中海分型。
四、结果解读根据PCR-RFLP结果，可以得出以下结论：1. 如果在PCR-RFLP分析中观察到明显的限制性内切酶位点差异，即PCR产物经过酶切后出现不同长度的片段，可以判断受检者为地中海贫血（β-地中海贫血）或地中海贫血症（α-地中海贫血）。
2. 通过比对PCR-RFLP结果与已知标准样本的电泳图，可以进一步确定受检者的具体地中海分型。
血红蛋白电泳及PCR-反向斑点杂交法诊断β-地中海贫血的效用分析
血红蛋白电泳及PCR-反向斑点杂交法诊断β-地中海贫血的效用分析发布时间：2022-06-08T06:08:33.153Z 来源：《医师在线》2022年2月4期作者：覃学占[导读]覃学占（贵港市人民医院；广西贵港537100）[摘要]目的：对比分析血红蛋白电泳及PCR-反向斑点杂交法诊断β-地中海贫血的效用。
方法：研究选取我院2020年1月-2022年2月收治的产前地中海贫血患者86例，随机将其分为观察组与对照组，每组各43例，观察组行血红蛋白电泳联合PCR-反向斑点杂交法检测；对照组仅行血红蛋白电泳检测，对比分析检测两组效果。
结果：经过对比后发现，观察组疾病的确诊率为100.00%，对照组疾病的确诊率97.67%，观察组对疾病的确诊率明显高于对照组。
观察组能准确的显示基因突变的类型。
P<0.05，差异具有统计学意义。
结论：地中海贫血患者应用血红蛋白电泳联合PCR-反向斑点杂交法检测，能提高对疾病确诊率的同时可以明确基因突变的类型，为进一步的诊疗提供了有力的数据支持。
关键词：血红蛋白；电泳；PCR-反向斑点杂交；β-地中海贫血贫血是人体红细胞低于正常范围的下限，引起一系列症状，甚至导致器官病变的疾病。
据相关数据统计，全球贫血的患病率高达24.8%，而孕妇贫血的概率达41.8%，相对来说女性患贫血的概率更高一点。
地中海贫血与传统贫血有一定的差异，地中海贫血是遗传缺陷疾病，珠蛋白基因链的缺失或突变而导致的慢性溶血性贫血[1]。
研究选取我院收治的产前地中海贫血患者，旨在对比分析血红蛋白电泳及PCR-反向斑点杂交法诊断β-地中海贫血的效用。
1资料与方法1.1临床资料研究选取我院收治的产前地中海贫血患者86例，随机将其分为观察组与对照组，每组各43例。
观察组年龄范围（24-36）岁，平均年龄（30.12±2.13）岁，平均BMI（24.17±1.01）KG/cm2，平均血红蛋白（90.29±10.46）g/l，首次妊娠22例，2次及以上妊娠11例；对照组年龄范围（24-35）岁，平均年龄（30.75±2.24）岁，平均BMI（24.09±113）KG/cm2，平均血红蛋白（90.32±10.18）g/l，首次妊娠20例，2次及以上妊娠13例。
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法课件
35cycles
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法
3.杂交 ：
15ml管 探针膜条（做好记号） A液 5-6ml DNA溶液（PCR产物）25ul
沸水浴10min
42℃杂交1.5小时以上
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法
4.洗膜 ： 50ml塑料管
B液 40ml
42预热
取出膜条，置于 50ml塑料管中
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法
⑵PCR的反应动力学： PCR的三个反应步骤反复进 行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA 扩 增量可用Y＝(1＋X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的 拷贝数，X表示平(Y)均每次的扩增效率，n代表循 环次数。平均扩增效率的理论值为100%，但在实际 反应中平均效率达不到理论值。 反应初期，靶序 列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐 积累，被扩增的DNA 片段不再呈指数增加，而进入 线性增长期或静止期， 即出现“停滞效应” ，这种 效应称平台期数、PCR 扩增效率及DNA聚合酶PCR的 种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。大多数 情况下，平台期的到来是不可避免的。
β地中海贫血基因检测PCR-反向点杂交法
PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧 核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然 复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高 温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链 或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物 结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火(复性)： 模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板 DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引 物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列 为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就 可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环 的模板。每完成一个循环需2～4分钟， 2～3小时就能将待扩目 的基因扩增放大几百万倍。
β地中海贫血基因检测反向点杂交法ppt课件
反向斑点杂交技术
反向斑点杂交(reverse dot blot，RDB)是Saiki等提 出的一种斑点杂交技术，该技术采用固化了多种特异 性探针的膜条与扩增靶序列杂交，使一次杂交即可同 时筛查被检DNA中的多种突变。这种以膜上固定探针取 代固定靶DNA的方式，改变了传统杂交法一次只能检测 一种突变的模式，具有快速、简便、高敏感度和特异 性强的特点，尤其在基因突变检测、基因分型、病原 体的检测等领域有其独特的优势。
反向斑点杂交技术原理
反向斑点杂交采用生物素标记的引物进行靶核酸的扩 增，将扩增产物同固定在尼龙膜上的探针进行杂交， 一次杂交反应可以检测多种靶序列。该方法具有快速、 简便，高灵敏度和特异性的特点，广泛应用于病原体 检测、基因突变检测、基因分型以及遗传多态性检测 等多个方面，具有潜在的临床应用价值。
31N
27/28M
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
βEM
31M
IVS-I-1M
43M
-32M -29M -30M 14-15M CAP
IntM
IVS-I-5M
杂交膜条
41-42N 654N -28N
71-72N 17N
βEN
31N
27/28M
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
15min 10min 1min 30sec 30sec 7min
35cycles
反应条件按照试剂盒要求
影响PCR的因素见理论课内容
3.杂交 ：
15ml管 探针膜条（做好记号） A液 5-6ml DNA溶液（PCR产物）25ul
沸水浴10min
42℃杂交1.5小时以上
4.洗膜 ：
50ml塑料管
β-地中海贫血基因检测(PCR-反向点杂交法)
pcr扩增
DNA提取
利用特定的试剂从血细胞中提取出DNA。
pcr扩增
使用聚合酶链式反应（PCR）技术对DNA进行扩增，使其数量增加，便于后续 的检测。反向点Fra bibliotek交制备探针
将目标基因序列设计成特定的探针，并固定在尼龙膜上。
杂交反应
将扩增后的DNA与固定在膜上的探针进行杂交，通过碱基互 补配对原则，将目标基因序列特异性地结合在膜上。
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术提高检测的灵敏度和特异性，降 低检测误差。
要点二
基因组编辑技术
利用CRISPR-Cas9等基因组编辑技术，对β-地中海贫血基因 进行精确编辑和修复，从根本上治疗地中海贫血。
临床应用的拓展
早期筛查
将β-地中海贫血基因检测纳入新生儿筛查 计划，实现早期发现和干预，降低疾病对 患儿的影响。
β-地中海贫血基因检测(pcr反向点杂交法)
• β-地中海贫血基因检测介绍 • pcr-反向点杂交法介绍 • β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点
杂交法)流程 • β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点
杂交法)的临床意义
• β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点 杂交法)的未来发展
01
β-地中海贫血基因检测介绍
03
耗时长：需要进行PCR扩增和杂交反应， 整个过程需要一定时间。
04
对实验条件要求高：需要严格控制实验条 件，避免交叉污染和假阳性结果。
03
β-地中海贫血基因检测(pcr-反 向点杂交法)流程
样本采集和处理
血液样本采集
从患者静脉抽取适量血液，用于 后续的基因检测。
样本处理
将采集的血液进行离心，分离出 血浆和血细胞，保留血细胞用于 后续的DNA提取。
地中海贫血基因检测研究进展
地中海贫血基因检测研究进展施建刚广西壮族自治区贵港市人民医院检验科，广西贵港 537100[摘要] 地中海贫血在临床上也称为“海洋性贫血”，是一组遗传性溶血性贫血疾病。
根据流行病学的相关调查数据显示，地中海贫血的高发区域为东南亚，在我国多分布于两广、四川等地。
目前，地中海贫血基因检测是预防地中海贫血胎儿活产的主要检测方法，也是诊断出地中海贫血疾病的重要手段。
而随着各类检测技术的快速发展，地中海贫血基因检测技术质量也在不断提高，逐渐应用于临床诊断中。
[关键词] 地中海贫血；基因；检测；进展[中图分类号] R556 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2020）23-50-04Research progress of thalassemia gene detectionSHI Jian'gangDepartment of Clinical Laboratory, Guigang City People's Hospital, Guangxi, Guigang 537100, China[Abstract] Thalassemia, also known as 'marine anemia', is a group of hereditary hemolytic anemia diseases. According to epidemiological survey data, the high incidence area of thalassemia is Southeast Asia, and it is mostly distributed in Guangdong, Guangxi and Sichuan, etc. of China. At present, thalassemia gene detection is the main detection method to prevent live birth of thalassemia fetus, and it is also an important method to diagnose thalassemia disease. With the rapid development of various detection technologies, the quality of thalassemia gene detection technology is also constantly improving and gradually applied to clinical diagnosis.[Key words] Thalassemia; Gene; Detection; Progress[基金项目] 广西壮族自治区卫生健康委员会科研课题（Z20190320）。
反向点杂交法检测β地中海贫血在产检中的应用
反向点杂交法检测β地中海贫血在产检中的应用
杨柳光;巢薇;李卓园
【期刊名称】《齐齐哈尔医学院学报》
【年(卷),期】2006(027)016
【摘要】目的探讨反向点杂交(RDB)法检测在产检中筛查β地中海贫血的应用价值.方法采用RDB法,检测54例临床似诊为β地中海贫血患者.结果在54例样本中,检出β地贫基因携带者17人.结论 ROD法在检测β地贫中,具有高通量、特异性强、操作简便无需接触放射性等优点.
【总页数】2页(P1981-1982)
【作者】杨柳光;巢薇;李卓园
【作者单位】广西柳州市工人医院检验科,545005;广西柳州市工人医院检验科,545005;广西柳州市工人医院检验科,545005
【正文语种】中文
【中图分类】R4
【相关文献】
1.反向点杂交法在β-地中海贫血基因诊断中的应用 [J], 荣卡彬;李运雄;陈冬;陈和平
2.应用PCR-反向点杂交法检测β-地中海贫血基因点突变 [J], 吕燕波;潘兴华;徐庆玲;刘林;邓永丽;王金祥;石琳琳
3.应用反向点杂交法诊断β地中海贫血基因型 [J], 饶兆英;周红平
4.应用反向点杂交法检测α-地中海贫血点突变 [J], 郭广洲;陈延娥;廖生赟;周敏
5.应用反向点杂交法产前诊断β-地中海贫血375例 [J], 李坚;李冬至;廖灿;冯琼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同基因型地中海贫血的血液指标分析
临床探索不同基因型地中海贫血的血液指标分析杨鑫城 （重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010）摘要：目的：比较不同类型地中海贫血患者在血液学指标方面的差异。
方法：地中海贫血基因检测采用PCR体外扩增结合其他分子诊断技术。
血液指标参数采用BC-6800全自动血细胞分析仪进行检测。
结果：检出静止型α-地中海贫血10例，分别为αQSα/αα 2例、–α4.2/αα 1例、–α3.7/αα7例；标准型α-地中海贫血检出基因型全部为—SEA/αα。
β0地中海贫血主要基因型为CD17/N；β+地中海贫血基因型全部为IVS-Ⅱ-654/N。
与对照组相比，研究组的HGB、MCV、MCH、MCHC均降低，RDW-CV均升高，差异有统计意义（P＜0.05）。
结论：重庆医科大学附属第二医院片区α-地中海贫血中以标准型α-地中海贫血为主，基因型—SEA/αα检出率最高。
β-地中海贫血以β0地中海贫血居多，主要检出基因型为CD41-42/N和CD17/N 。
RBC、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV等血液学指标可以作为地中海贫血的初筛指标。
关键词：地中海贫血；基因突变类型；血液学指标地中海贫血，简称地贫，又称海洋性贫血，最早发现于地中海区域，是由于人体遗传的珠蛋白基因突变或缺失，导致其指导合成的珠蛋白链合成缺如或者不足的慢性溶血性贫血[1~3]。
目前，基因诊断是地中海贫血确诊的金标准，但是基因诊断方法耗时长且昂贵，很多基层医院无法开展，因此很有必要建立一个针对地中海贫血患者血液学指标的筛查策略。
本研究以重庆医科大学附属第二医院（下称附二院）地中海贫血基因检测阳性的患者为对象，具体分析地中海贫血的基因型、构成比和血液指标，探讨血常规参数在地中海贫血初筛中的意义。
1资料与方法1.1 研究对象收集2019年8月~2020年3月就诊于本院的地中海贫血患者71例，对照组为地中海贫血基因检测结果为正常健康体检者30例。
1.2 血常规检测采用迈瑞B C-6800血细胞分析仪对红细胞数R B C（×1012 /L）、血红蛋白量HGB （g/L）、平均红细胞血红蛋白量MCH（pg）、平均红细胞体积MCV（f l）、平均红细胞血红蛋白浓度MCHC（g/L）、红细胞分布宽度变异系数RDW-CV（%）这五项血常规参数进行检测。
地中海贫血的实验室分子诊断技术研究进展
地中海贫血的实验室分子诊断技术研究进展李继慧;覃运荣;梁毅【摘要】地中海贫血是最常见的血红蛋白病之一,具有遗传性,其主要类型为α-及β-型.目前实验室针对α-、β-型地中海贫血的分子学诊断方法主要是基于PCR法的多种检测技术,此外还有多重连接探针扩增技术、基因芯片技术、高通量测序技术等,各种技术均有其优缺点,合理选择检测方法有助于提高地贫的检出率,还能够引导患者及时进行产前诊断,为降低人口出生缺陷和提高人口素质提供有效的临床依据.本文就目前应用于地中海贫血的多种实验室分子诊断技术作一综述.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2018(010)003【总页数】4页(P202-205)【关键词】地中海贫血;分子诊断技术;α-地中海贫血;β-地中海贫血【作者】李继慧;覃运荣;梁毅【作者单位】广西玉林市妇幼保健院检验科,广西,玉林537000;广西玉林市妇幼保健院检验科,广西,玉林537000;广西玉林市妇幼保健院检验科,广西,玉林537000【正文语种】中文地中海贫血（简称地贫）是世界上最常见的血红蛋白病之一，主要是由于遗传性珠蛋白基因缺失或点突变导致血红蛋白中一种或一种以上珠蛋白链合成缺失和/或不足而引起的贫血，也称为珠蛋白生成障碍性贫血［1］。
按照存在缺陷的珠蛋白基因的种类，地中海贫血一般可以分为α⁃、β⁃、δβ⁃和εγδβ⁃等类型，其中α⁃和β⁃地贫是最为常见的2种地贫类型［1］。
地中海贫血好发于地中海、中东、南亚次大陆和东南亚等地区，在我国四川、云南、广西、贵州、广东等南部地区也较为常见［2］。
地贫患者具有广泛的临床表现，可从几乎无症状到需要终身输血并伴随多器官系统并发症的重度贫血，并会遗传给下一代，给家庭和社会带来沉重的负担［3］。
目前对于地贫的治疗一般是根据其类型采用相应的治疗方案，而α⁃重型地贫（通常是指Hb⁃Bart's胎儿水肿综合征）及β⁃重型地贫尚无有效、经济的治疗方法［4⁃5］。
广东潮汕地区地中海贫血基因突变谱分析
广东潮汕地区地中海贫血基因突变谱分析林芬;杨立业;邢少宜;张琳【摘要】目的了解潮汕地区地中海贫血的基因突变类型及构成比,为更准确地进行地贫诊断提供理论依据. 方法应用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-polymerase chain reaction,Gap-PCR)、反向斑点杂交(reverse dot blot,RDB)技术和PCR+导流杂交法,分析潮汕4个地理区域(汕头、潮州、揭阳、汕尾)的地贫基因突变类型. 结果 2 057例地贫样本中,检出14种α-地贫突变基因和19种β-地贫突变基因,同时检出α和β复合型地贫13种.α-地贫中最常见的基因型为东南亚缺失型(--SEA),β-地贫以IVS-Ⅱ-654M位点突变最为常见,其次是41/42M.结论潮汕地区地中海贫血的基因突变类型呈多样化,本研究的数据可为本地区开展地贫诊断和研究提供参考资料.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2017(009)004【总页数】5页(P252-256)【关键词】地中海贫血;基因类型;潮汕地区【作者】林芬;杨立业;邢少宜;张琳【作者单位】南方医科大学附属潮州中心医院中心实验室,广东,潮州521021;南方医科大学附属潮州中心医院中心实验室,广东,潮州521021;南方医科大学附属潮州中心医院中心实验室,广东,潮州521021;南方医科大学附属潮州中心医院中心实验室,广东,潮州521021【正文语种】中文地中海贫血（地贫）是由于珠蛋白基因发生缺陷，致使珠蛋白链合成减少或缺如而导致的一组遗传性溶血性疾病，轻者可无临床表现，重者以进行性溶血性贫血为主要特征。
地贫遍布世界各地，高发于地中海沿岸的意大利、希腊、马耳他、塞浦路斯、中非洲、亚洲、南太平洋地区到东南亚各国的广大地区［1-2］，它给流行区人们造成巨大的公共卫生问题和社会负担。
我国长江以南的广大地域为地中海贫血高发区，尤以广西、广东和海南三省为甚。
据流行病学数据统计分析估算，广东每年约有11万新生儿为地中海贫血基因携带者，每年出生重症地中海贫血超过1 000人［3］。
重庆地中海贫血基因携带率及基因型特点分析
重庆地中海贫血基因携带率及基因型特点分析摘要】目的：调查统计重庆及周边地区人群主要α、β地贫基因携带率及基因缺失、突变类型。
方法：收集2016年10月－2017年9月重庆各区域医疗中心进行地中海贫血基因检测的15081份临床样本检测结果进行统计分析。
α地贫血采用琼脂糖凝胶电泳法，β地贫血采用PCR反向点杂交法。
结果：15081份样本中，α基因缺失799例。
αα/-α3.7、αα/--SEA基因型携带率较高，分别为2.49%和2.31%。
β基因突变595例，主要型别为β0：CD17、CD41/42，β+：IVS-II-654基因杂合突变，携带率分别为1.15%、1.13%、1.12%。
结论：重庆地区人群地贫基因携带率为8.16%，携带率较高，应该引起高度重视。
为防止重型地贫儿出生，对孕妇或备孕妇女进行产前地贫基因筛查至关重要。
【关键词】地中海贫血α-地贫β-地贫地贫基因携带率【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）14-0233-02地中海贫血 (又称海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血)，简称地贫。
是由于珠蛋白基因缺失或缺陷，引起一种或几种血红蛋白珠蛋白肽链合成不平衡所导致的慢性溶血性疾病，属于常染色体单基因隐性遗传病，具有地区、种族和家族遗传史。
α肽链合成不足称为α地贫，分为轻型（静止型、标准型）和重型（HbH、HbBarts）。
β肽链合成不足称为β地贫，可分为轻型、中间型、重型。
重型致死、中型致残。
地贫是我国南方地区常见、危害大的遗传病之一。
广西、云南、海南和广东的地贫基因携带率均在10%以上，其中广西更是达到了20%以上。
迄今，对地贫尚无理想的治疗方法，开展产前筛查和产前基因诊断，防止新的受累胎儿出生，仍是目前控制地贫发生最为有效的措施。
1.资料与方法及试剂对象 2016年10月-2017年9月重庆各区域医疗中心进行地中海贫血基因检测的15081份临床样本，其中21～30岁之间的人群10279份。
β-地中海贫血基因检测(PCR-反向点杂交法)
βEM
31M
IVS-I-1M
43M
-32M -29M -30M 14-15M CAP
IntM
IVS-I-5M
杂交膜条
41-42N 654N -28N
71-72N 17N
βEN
31N
27/28M
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
βEM
31M
IVS-I-1M
43M
-32M -29M -30M 14-15M CAP
35cycles
反应条件按照试剂盒要求
影响PCR的因素见理论课内容
3.杂交 ：
15ml管 探针膜条（做好记号） A液 5-6ml DNA溶液（PCR产物）25ul
沸水浴10min
42℃杂交1.5小时以上
4.洗膜 ：
50ml塑料管 B液 40ml
4ห้องสมุดไป่ตู้ ℃预热
取出膜条，置于 50ml塑料管中
42 ℃洗涤15min
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶 （如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列 为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的 与模板DNA链互补的链。
重复循环变性--退火--延伸三过程,每一次循环使反 应体系中的DNA分子数增加约一倍,而且这种新DNA分 子又可成为下次循环的模板。理论上循环n次，就增 加2n倍，即DNA分子数呈指数式增加。当经30次循环后， DNA产量达230拷贝，约为109拷贝。每完成一个循环需 2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几 百万倍。
71-72N 17N
βEN
31N
27/28M
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
血红蛋白电泳及PCR-反向斑点杂交法诊断β-地中海贫血
北 京六 一 仪 器厂 Ｄ Ｙ一 Ｃ型 电泳 仪 、 海精 密 Ｙ ８ 上 科学 仪器 有 限公 司 ７ ２分 光光 度计 。 ２
１２２方 法 ．＿
本 文采用 醋酸 纤维 薄膜 电泳 法 。参照 临床 检验
操 作 规 程第 二 版回 用 生理 盐 水 洗 涤 红细 胞 ４次， ， 四 氯 化碳 萃 取后 制 备 Ｈ ｂ液 。 经适 当稀 释 后调 整 Ｈ ｂ含 量 ８ １ｇＬ 进行 点样 电泳 、 色 、 ～ ２ ／。 染 洗脱 和 比色 检测 出 Ｈ Ｆ和 Ｈ Ａ ，若 Ｍ Ｖ＜ ０ ， ｂ ２３２ ｂ ｂ２ Ｃ ８ ％ Ｈ Ａ＞ ． ％，或 Ｈｂ ＞ Ｆ ３１ ， 判为 Ｂ 地 中海贫 血表 型 阳性 【 ． 则 ％ 一 ３ Ｊ 。 １３ 一 中海 贫血 基 因检 测 ． Ｂ 地
６ ４ Ｃ Ｔ ｗ ｓ ｎｔｅｔ ｓ Ｃ ｎ ｌｓ ｎＴ ｅＰ Ｒ ｔ ｈ ｉｕ ｎ ｅｔ ｈ ｉｕ ｆ ｅ ｅｓ ｏ ｂｏ （ Ｄ ） ｒ ｔｅ ５ （ — ） ａ ｐｌ ｔ ｏ ｃ ｉ ：ｈ Ｃ ｃ ｎｑ ｅａ ｄｔ ｃ ｎｑ ｅｏ ｖｒｅｄ ｔ ｌｔＲ Ｂ ａｅ ｈ ｏ ｈ ｏ ｉ． ｕ ｏ ｅ ｈ ｅ ｒ
年 ５月 门诊及 住 院患者 的血 红 蛋 白电泳及 反 向斑 点 杂交 结果 进行 分析 报道 如下 。 １ 对 象与方 法
１１ 对 象 ．
病 例 来 自我 院 ２ １ ０ ０年 ｌ １月 至 ２ １ 年 ５月 住 ０１ 院与 门诊 患 者 ，均经 血 常规 检查 Ｈ ＜ ｌ ｇＬＭＣ ｂ １ Ｏ／ ， Ｖ＜
关 键词 ８ 地 中 海贫 血 ； 红 蛋 白 电泳 ； ｃ 反 向斑 点杂 交 一 血 Ｐ Ｒ一 中 图分 类号 Ｒ ９ ．３ Ｒ ５ ３ ４３ ； ５ ６ 文 献 标 识码 Ａ 文章 编 号 １ ０ — ６ ９ ２ １ ） － ２ １ ０ ０ ０ ２６ （０ ２ ３ ０ ９ － ３
轻型β-地中海贫血不同基因型携带者平均红细胞体积(MCV)水平观察论文
轻型β-地中海贫血不同基因型携带者平均红细胞体积(MCV)水平观察【摘要】目的通过观察常见轻型β-地中海贫血平均红细胞体积(mcv)的变化，探讨β-珠蛋白基因点突变对红细胞生成和破坏所造成的影响。
方法采用回顾性分析，选择观察经聚合酶链反应(pcr)结合反向点杂交(rdb)技术分析确诊的正常组和7种基因突变组(其中β0 4种，β+ 2种和hbe)的mcv水平表达，各组间mcv的比较采用方差分析中多重比较的newman-keuls (snk)检验。
结果 7种基因突变组的mcv水平均明显低于正常组，尤以β0组的减低最多，β+ 组次之，hbe组减低最少。
β0组内各基因型的mcv水平无显著差别，而β+ 组内各基因型的mcv水平有显著性差别。
结论 mcv的水平变化可间接反映轻型β-地中海贫血中β-珠蛋白链数量的平衡程度及由此而影响到的红细胞充盈程度，反之也可用于验证基因分析结果的可能性。
【关键词】轻型β-地中海贫血；基因型；mcv【中图分类号】r556【文献标识码】a【文章编号】1004-5511（2012）06-0100-01β-地中海贫血主要是由于珠蛋白基因点突变造成珠蛋白生成障碍性贫血，为常染色体隐形遗传疾病，主要是纯合子发病；而杂合子中正常珠蛋白基因可以掩盖突变珠蛋白基因带来的缺陷而成为无贫血症状或轻度贫血的地贫基因携带者，亦即轻型β-地中海贫血，其基因表型通常为β0/βn、β+/βn，在广西轻型β-地中海贫血基因突变类型包括β0/βn的cd17、cd41-42、cd71-72、ivs-1-1和β+/βn 的-28、ivs-2-654 及cd26(βe)等7种［1］。
本文通过观察轻型β-地中海贫血常见基因携带者平均红细胞体积(mcv)水平的变化，探讨珠蛋白基因点突变对血红蛋白生成所造成的影响，为循证医学提供实验依据。
1 资料与方法1.1 对象采用回顾性分析，选择2010年10月～2011年9月到我院门诊进行婚前健康检查者共189人，其中男87例，女102例，年龄22～41岁，平均年龄27岁，经地贫基因分析确诊正常组38例，cd41-42-tcct(41-42m) 49例，cd17 a变t (17m) 42例，ivs-2-654 c变t(654m)15例，cd26 g变a (βem)11例，cd-28 a 变g(28m)11例，ivs-1-1 g变t(ivs-1-1m)11例，cd71-72加a (71-72m)12例，所有病例均排除其他血液系统疾病且近期未接受过生物医学治疗。
αβ复合型地中海贫血的血液学和基因型特征
αβ复合型地中海贫血的血液学和基因型特征石青峰;杨峻;廖丽芬【摘要】目的分析αβ复合型地中海贫血(地贫)患者的基因类型及血液学特征.方法采用标准的血液学分析技术测量红细胞参数和血红蛋白组分,采用PCR-反向斑点杂交法及多重PCR法确定地贫基因型.结果 89例αβ复合型地贫患者中共检出17种复合地贫基因类型,其血液学指标与β地中海贫血携带者相似.结论在孕前检查或产前检查中,如一方诊断为有地贫基因携带,应对夫妇双方同时进行α地贫和β地贫的基因检测,防止误诊、漏诊发生.【期刊名称】《广西医学》【年(卷),期】2012(034)012【总页数】2页(P1670-1671)【关键词】地中海贫血;基因型;血液学【作者】石青峰;杨峻;廖丽芬【作者单位】桂林医学院附属医院检验科,桂林市,541001;桂林医学院附属医院检验科,桂林市,541001;桂林医学院附属医院检验科,桂林市,541001【正文语种】中文【中图分类】R556.61地中海贫血(地贫)是广西最常见的遗传性溶血性血液病，有资料显示，广西地贫基因携带率达23.0%［1-5］。
根据珠蛋白肽链合成障碍的不同，临床常见的有α-地贫和β-地贫，也有同时携带两种基因的αβ复合型地贫。
由于αβ复合型地贫孕妇其后代患中、重型地贫的风险比单独α-地贫和β-地贫要高［6-7］，因此检测αβ复合型地贫对指导临床开展产前诊断和优生优育意义重大。
笔者对临床工作中发现的89例αβ复合型地中海贫血患者的血液学表型及基因型进行了综合分析和研究，现报告如下。
1 资料与方法1.1 临床资料 2010年1月至2012年6月来我院产科门诊进行孕前检查或产前检查的89例αβ复合型地贫病例(诊断标准:患者体内同时携带有α地贫基因和β地贫基因)，年龄19～38岁。
另选择无地贫基因携带的50例正常人作为对照组，年龄18～35岁。
1.2 方法1.2.1 血常规检查:每例患者取2 ml EDTA抗凝静脉血，采用XE2100全自动血细胞仪检测红细胞参数，包括血红蛋白浓度(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞体积分布宽度(RDW)等。
60例同型地中海贫血基因携带者产前诊断结果分析
60例同型地中海贫血基因携带者产前诊断结果分析发布时间：2022-11-14T02:17:20.346Z 来源：《医师在线》2022年6月12期作者：黄向阳[导读]黄向阳（玉林市妇幼保健院检验科；广西玉林537000）摘要：目的分析夫妇双方均为同型地中海贫血基因携带者胎儿基因诊断情况，以防止中/重地中海贫血患儿出生。
方法分析2021年1月-2021年4月在我院就诊的有地贫产前诊断指征的孕妇60例，应用Gap-PCR和PCR结合反向斑点杂交技术对羊水标本进行α、β-地中海贫血基因检测。
分析同型地中海贫血基因携带者胎儿基因型分布及构成情况。
结果 60例夫妇双方均为同型地中海贫血基因携带者中，检出重型α-地中海贫血胎儿5例，中间型α-地中海贫血胎儿8例，中/重型β-地中海贫血胎儿4例，中/重型地贫检出率为28.33%，终止妊娠10例。
其中胎儿α-地贫主要基因突变类型为--SEA/αα19例（42.22%）比例最高，其次为--SEA/--SEA（11.11%），--SEA/-α3.7（11.11%），-α3.7/αα（8.89%）；β-地贫主要基因突变类型为βCD41-42/βN7例（50.00%）比例最高，其次为βCD41-42/βCD41-42（14.29%），结论地中海贫血产前基因诊断可有效地避免重症地中海贫血患儿的出生，减少出生缺陷，提高人口素质。
关键词：地中海贫血；基因诊断；产前诊断；中图分类号：R556.71 文献标识码：A地中海贫血（thalassaemia，简称地贫）是指由珠蛋白基因的缺失或点突变使珠蛋白基因的表达受到抑制，引起相应蛋白链合成减少甚至完全不能合成导致的遗传性溶血性贫血，是临床上最常见的单基因遗传病之一[1]。
根据合成珠蛋白的异常的情况，根据不同类型的珠蛋白合成的障碍进行分型可以有α-地贫和β-地贫，在中国主要分布于两广地区。
根据贫血严重程度分轻、中、重之分，静止型和轻型地贫可没有贫血或仅有轻度贫血，表现的是小细胞、低色素的贫血。
β-地中海贫血基因检测(PCR-反向点杂交法) ppt课件
（PCR-反向点杂交法）
β-地中海贫血（简称β-地贫）是一种由于β珠蛋白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基 因遗传血液病，多由β-珠蛋白基因点突变所致， 是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病之一。 在中国人群中常见的突变位点有CD41-42(-TCTT)、 CDL7(A→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)和TATAbox28(A→G)等位点。因本病多为点突变所致，故常 用PCR加反向点杂交(RDB)确定突变类型。
反向斑点杂交技术
反向斑点杂交(reverse dot blot，RDB)是Saiki等提 出的一种斑点杂交技术，该技术采用固化了多种特异 性探针的膜条与扩增靶序列杂交，使一次杂交即可同 时筛查被检DNA中的多种突变。这种以膜上固定探针取 代固定靶DNA的方式，改变了传统杂交法一次只能检测 一种突变的模式，具有快速、简便、高敏感度和特异 性强的特点，尤其在基因突变检测、基因分型、病原 体的检测等领域有其独特的优势。
5.显色
A液：POD=2000:1,轻摇保温30min,后用A液 洗膜2次，各5分钟。C液室温洗膜2min,之后置 显色液避光显色20min
杂交反应条件按照试剂盒要求
结果判断 杂交膜条 β-28/βN标本
β-28/ β-28标本 βIVS-II-654/ βN标本
β CD41-42/ βN标本 βCD17/ βN标本
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后， 使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为 单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单 链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列 配对结合；
应用PCR结合反向斑点杂交技术检测β-地中海贫血
术（ Ｃ ／ Ｄ ） Ｐ Ｒ Ｒ Ｂ 简便、 高效、 准确可靠 ， 适于 Ｂ地 中海贫血的基 因诊 断和 实验研 究， 一 可作为常规 方法推 广 用 于临床 标本 的检 测 和产 前诊 断 。
【 关键词 】 反向斑点杂交； Ｂ地 中海贫血 ； 基因诊 断 ห้องสมุดไป่ตู้ 一
Ｄ ｔｃｉｎ ｏ ｅｅ ｔ ｆ￣ｔａａｓｍｉ ｙＰ Ｒ ｎ ｅｔｄｗ ｔ ｅ ｅｓ ｏ ｌｔ ｏ ｈ ｌｓｅ ａｂ Ｃ ｃ ｎ ｃｅ ｉ ｒｖ ｒｅｄ ｔ ｏ ｏ ｈ ｂ Ｈ ｎ ａ ．Ｋ ｎ ｉｇＣ ｉ ｒｎ ＳＨ ｓｉ ｌ ｕ ｎ ｎ６ ０ ３ ， ｈｎ ｏ￣ｉ ｎ ｕ ｍ ｎ ｈｌ ｅ ’ ｏｐｔ ，Ｙ ｎ ａ ５ ０ ４ Ｃ ｉａ ｄ ａ Ｃ ｉａ ， ａ ｅＹ ｅ ｕ ｎ ， ａ ｕｌ ｎ Ｙ ｎ ｕｈ ａ ｅ Ｄ ｉ ｉ
ｄ ｔｃ ｏ ｆ — ａ ｓｅ ｉ ｅｅｄａｎ ｓ ｄｌ ｏａｏｙｓ ｄ ， ｄｉ ｕｅ ｌ ｎｒｕｉｅｌ ｏａ ｒ ｒ ｅ ｅｅｔ ｎｏ ｔ ｌ ｓｍ ａｉ ｇｎ ｉ ｏｉ ａ ｒｔ ｔ ｙ ａ ｓｆ ｏｔ ｒ ｏｙｆ — ｉ Ｂ ｈａ ｎ ｇ ｓ ｎ ａ ｂ ｒ ｕ ｎ ｓ ｕｉ ｎ ａ ｔ ｏ ｄ ｂ
美 国黑人 、 东南亚 、 印度次大陆及 中国南方发病率较
高， 是我 国南 方最 常见 、 害最 为严 重 的遗传 性 血液 危 病之 一 。Ｂ地 贫 分 子遗 传 流行 病学 资 料 显 示 ， 基 其 因突变类 型 和 频 率 具 有 明显 的 种 族 性 和 地 域 性 差 异 … 。我 们采 用 多突 变位 点 Ｐ Ｒ Ｒ Ｂ基 因诊 断技 Ｃ／ Ｄ 术 ， 时检测 １ 同 ６种 包 含 中 国人 常 见 和部 分 罕 见 的
【 ｂｔ ｃ】Ｏ ｊ ｔ ｅ Ｔ ｘｌ ｅ ｎｅｉ ｔ ｈ ｈｐｒｒ ａｃ ｃｎｌ ｙｏ ｇｎ ｉ ｎｓ ｒ Ａ ｓ ａｔ ｂｅ ｉ ｏ ｐ ｒ ａｃ ｖｎ ｎ， ｉ —ｅ ｏ ｎｅ ｅｈ ｏ ｇ ｆ ｅｅｄ ｇｏｉ ｆ ｒ ｃ ｖ ｅ ｏ ｏ ｅ ｇ ｆｍ ｔ ｏ ａ ｓｏ
地中海贫血基因检测试剂盒安全性、有效性、可靠性质量规范和审查标准
地中海贫血基因检测试剂盒安全性、有效性、可靠性质量规范和认证标准本文件旨在指导和规范地中海贫血基因检测试剂注册质量管理体系核查资料的准备及撰写，同时也为注册质量管理体系核查现场检查提供参考。
根据《医疗器械监督管理条例》（中华人民共和国国务院令第680号）、《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《医疗器械生产质量管理规范》（国家食品药品监督管理总局2014年第64号）、《国家食品药品监督管理总局关于发布医疗器械生产质量管理规范附录体外诊断试剂的公告》（国家食品药品监督管理总局2015年第103号）、《食品药品监管总局关于印发医疗器械生产质量管理规范现场检查指导原则等4个指导原则的通知》（食药监械监〔2015〕218号）等管理办法，结合广东省地中海贫血基因检测类产品注册证超过全国注册证60%，因此，制定广东省地中海贫血基因检测试剂质量规范和认证标准，旨在提高广东省行业水平，规范行业发展，把控产品的安全性、有效性、可靠性。
本文件是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，其相关内容也将适时进行调整。
1本文件不作为法规强制执行，不包括行政审批要求。
申请人应根据国家相关法律法规、标准及技术指导原则的要求合理评价产品的安全性和有效性。
一、适用范围本文件旨在指导申请人对地中海贫血基因检测试剂注册质量管理体系核查提交资料的准备及撰写，同时也为注册质量管理体系核查现场检查提供参考。
根据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），地中海贫血基因检测试剂属于三类体外诊断试剂。
二、产品概述地中海贫血（Thalassemia），又称海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血，简称地贫，是一组遗传性小细胞低色素溶血性贫血，其共同特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改变，从而导致发病。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
35cycles
反应条件按照试剂盒要求
影响PCR的因素见理论课内容
3.杂交 ：
15ml管 探针膜条（做好记号） A液 5-6ml DNA溶液（PCR产物）25ul
沸水浴10min
42℃杂交1.5小时以上
4.洗膜 ：
50ml塑料管 B液 40ml
42 ℃预热
取出膜条，置于 50ml塑料管中
42 ℃洗涤15min
【原理】
PCR技术原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。 双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链， 在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复 制成同样的两分子挎贝。
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其 特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
【原理】
PCR技术原理
βEM
31M
IVS-I-1M
43M
-32M -29M -30M 14-15M CAP
IntM
IVS-I-5M
杂交膜条
41-42N 654N -28N
71-72N 17N
βEN
31N
27/28M
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
βEM
31M
IVS-I-1M
43M
-32M -29M -30M 14-15M CAP
41-42N 654N -28N
71-72N 17N
βEN
31N
27/28M
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
βEM
31M
IVS-I-1M
43M
-32M -29M -30M 14-15M CAP
IntM
IVS-I-5M
βIVS-II-654/ βN标本
41-42N 654N -28N
β-地中海贫血基因检测
（PCR-反向点杂交法）
β-地中海贫血（简称β-地贫）是一种由于β珠蛋白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基 因遗传血液病，多由β-珠蛋白基因点突变所致， 是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病之一。 在中国人群中常见的突变位点有CD41-42(-TCTT)、 CDL7(A→T)、IVS-Ⅱ-654(C→T)和TATAbox28(A→G)等位点。因本病多为点突变所致，故常 用PCR加反向点杂交(RDB)确定突变类型。
5.显色
A液：POD=2000:1,轻摇保温30min,后用A液 洗膜2次，各5分钟。C液室温洗膜2min,之后置 显色液避光显色20min
杂交反应条件按照试剂盒要求
结果判断
41-42N 654N -28N
71-72N 17N
βEN
31N
27/28M
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶 （如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列 为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的 与模板DNA链互补的链。
重复循环变性--退火--延伸三过程,每一次循环使反 应体系中的DNA分子数增加约一倍,而且这种新DNA分 子又可成为下次循环的模板。理论上循环n次，就增 加2n倍，即DNA分子数呈指数式增加。当经30次循环后， DNA产量达230拷贝，约为109拷贝。每完成一个循环需 2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几 百万倍。
【操作步骤】
1.DNA获取（已准备好了）
2.PCR扩增（采用试剂盒） ： 反应液管（做好记号）
5000rpm，2秒
总体积25微升
加入 2ul DNA溶液
反应体系各组分的用量见理论课内容
PCR扩增条件
50℃， 95℃， 94℃， 55℃， 72℃， 72℃，
15min 10min 1min 30sec 30se/βN标本
41-42N 654N
41-42M 654M
43M
-32M
-28N -28M -29M
71-72N 17N
βEN
71-72M 17M
βEM
-30M 14-15M CAP
31N 31M IntM
27/28M IVS-I-1M IVS-I-5M
β-28/ β-28标本
广泛应用于基因突变检测（如地中海贫血、 G6PD缺乏症、耳聋等遗传病的检测）、基因分 型、遗传多态性检测以及病原体检测等多个方 面，具有广泛的临床应用价值。
71-72N 17N
βEN
71-72M 17M
βEM
-30M 14-15M CAP
31N 31M IntM
27/28M IVS-I-1M IVS-I-5M
βCD17/ βN标本
41-42N 654N -28N
71-72N 17N
βEN
31N
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
βEM
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后， 使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为 单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单 链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列 配对结合；
反向斑点杂交技术
反向斑点杂交(reverse dot blot，RDB)是Saiki等提 出的一种斑点杂交技术，该技术采用固化了多种特异 性探针的膜条与扩增靶序列杂交，使一次杂交即可同 时筛查被检DNA中的多种突变。这种以膜上固定探针取 代固定靶DNA的方式，改变了传统杂交法一次只能检测 一种突变的模式，具有快速、简便、高敏感度和特异 性强的特点，尤其在基因突变检测、基因分型、病原 体的检测等领域有其独特的优势。
71-72N 17N
βEN
31N
27/28M
41-42M 654M -28M 71-72M 17M
βEM
31M
IVS-I-1M
43M
-32M -29M -30M 14-15M CAP
IntM
IVS-I-5M
β CD41-42/ βN标本
41-42N 654N
41-42M 654M
43M
-32M
-28N -28M -29M
反向斑点杂交技术原理
反向斑点杂交采用生物素标记的引物进行靶核酸的扩 增，将扩增产物同固定在尼龙膜上的探针进行杂交， 一次杂交反应可以检测多种靶序列。该方法具有快速、 简便，高灵敏度和特异性的特点，广泛应用于病原体 检测、基因突变检测、基因分型以及遗传多态性检测 等多个方面，具有潜在的临床应用价值。
31M
43M
-32M -29M -30M 14-15M CAP
IntM
βCD17/ βIVS-II-654标本
蓝色斑点为阳性杂交信号，因此
N (+) M (-)
该位点无突变
N (+) M (+)
该位点杂合突变
N (-) M (+)
该位点纯合突变
27/28M IVS-I-1M IVS-I-5M
PCR-反向点杂交应用
【目的】
1.掌握PCR技术原理及方法，熟悉其注意事项 2.掌握反向点杂交技术原理及方法，熟悉其应用
PCR技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建 立的。这项技术可在试管内的经数小时反应就 将特定的DNA片段扩增数百万倍，这种迅速获取 大量单一核酸片段的技术在分子生物学研究中 具有举足轻重的意义，极大地推动了生命科学 的研究进展。它不仅是DNA分析最常用的技术， 而且在DNA重组与表达、基 因结构分析和功能 检测中具有重要的应用价值。