高效液相色谱法工作原理
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目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又 称机械泵，它又分机械注射泵和机械往复 泵两种，应用最多的是机械往复泵。
（2）进样系统 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多
（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外 效应）较突出。
柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起 的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道 及检测器中存在死体积。
硬胶主要用于离子交换和尺 寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与 二乙烯苯基交联而成。可承受压 力上限为3.5×108Pa。固定相按 孔隙深度分类，可分为表面多孔 型和全多孔型固定相两类。
1.表面多孔型固定相
它的基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面 覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化铝、 离子交换剂、分子筛、聚酸胺等。
高效液相色谱仪1
高效液相色谱仪2
高效液相色谱仪3
高效液相色谱仪4
一、高效液相色谱法的特点
二、流程及主要部件
1.流程
2. 主要部件：
（1）高压输液泵： ♥主要部件之一，压力：150～350×105 Pa ♥应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调
、 耐腐蚀等特性。
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极 细，因此对流动相阻力很大，为使流动相 较快流动，必须配备有高压输液系统。它 是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由 储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动 阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部 件。
（－）固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能 力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大 类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承 受7.O×108～1.O×109Pa的高压，可制成 直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果 在二氧化硅表面键合各种官能团，就是 键合固定相，可扩大应用范围，它是目 前最广泛使用的一种固定相。
第十六章 高效液相色谱法
一、高效液相色谱法的特点 二、流程及主要部件 三、影响分离的因素 四、高效液相色谱法的主要分离类型
概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60 年代末70年代初发展起来的一种新型分离 分析技术，随着不断改进与发展，目前已 成为应用极为广泛的化学分离分析的重要 手段。
一、液相色谱分离原理及分类
表面活性材料为氧化铝的固定相，这类 固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积 小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透 性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达平 衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度 薄，最大允许量受限制。
2．全多孔型固定相
它由直径为10nm的硅胶微粒凝 聚而成。也可由氧化铝微粒凝聚成 全多孔型固定相， 这类固定相由于 颗粒很细（5～10μm），孔仍然较 浅，传质速率快，易实现高效、高 速。特别适合复杂混合物分离及痕 量分析。
一般在分离前备有一个前置柱，前 置柱内填充物和分离柱完全一样，这样 可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的 固定相饱和，使它在流过分离柱时不再 洗脱其中固定相，保证分离技的性能不 受影响。
柱子装填得好坏对柱效影响很大。 对于细粒度的填料（＜20μm）一般采 用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀 浆，然后在高压泵作用下，快速将其压 入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后， 即可备用。
另一类是总体检测器，它对试 样和洗脱液总的物理或化学性质有 响应，属于这类检测器的有示差折 光，电导检测器等。
现将常用的检测器介绍如下:
目前最常用的检测器主要
有：
紫外-可见检测器
荧光检测器
电化学检测器
蒸发光散射检测器
质谱检测器
1.紫外-可见检测器
检测室
光源
光栅
二极管阵 列检测器
紫外光度检测器（UV）：最小检测 量10-9g·mL-1，对流量和温度的波动不敏
②液相色谱固定相类型多，如离子交换色 谱和排阻色谱。等，作为分析时选择余 地大；而气相色谱并不可能的。 ③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的 温度，一般有利于色谱分离条件的选 择。
（3）由于液体的扩散性比气体的小 105倍，因此，溶质在液相中的传质速率 慢，柱外效应就显得特别重要；而在气 相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不 计。
感，可用于梯度洗脱。
2.荧光检测器
许多有机化合物，特别是芳香族化合 物、被一定强度和波长的紫外光照射后， 发射出较激发光波长要长的荧光。
特点： 有非常高的灵敏度和良好的选择 性，灵敏度要比紫外检测法高2∼3个数量 级，特别适合于药物和生物化学样品的分 析。
荧光检测器结构示意图
检测 器
光源 滤光片
梯度洗脱装置分为两类： 一类是外梯度装置（又称低压梯
度），流动相在常温常压下混合，用 高压泵压至柱系统，仅需一台泵即 可。
另一类是内梯度装置（又称高压 梯度），将两种溶剂分别用泵增压 后，按电器部件设置的程序，注入梯 度混合室混合，再输至柱系统。
梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动 相的强度，来调整混合样品中各组分的k 值，使所有谱带都以最佳平均k值通过色 谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当 于气相色谱中的程序升温。所不同的 是，在梯度洗脱中溶质k值的变化是通过 溶质的极性、pH值和离子强度来实现 的，而不是借改变温度（温度程序）来 达到。
流动相及流动相的极性
（1）可显著改变组分分离状况的流动相 选择在液相色谱中显得特别重要。 液相色 谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。
（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相 ，即流动相的极性小于固定相的极性，称 为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。
（4）液相色谱中制备样品简单，回收 样品也比较容易，而且回收是定量的， 适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通 用的检测器，仪器比较复杂，价格昂 贵。在实际应用中，这两种色谱技术是 互相补充的。
目前高效液相色谱法已被广泛 应用于分析对生物学和医药上有重 大意义的大分子物质，例如蛋白 质、核酸、氨基酸、多糖类、植物 色素、高聚物、染料及药物等物质 的分离和分析。
对于一个好的高压输液泵应符合密 封性好，输出流量恒定，压力平稳，可 调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀 等要求。
常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两 种。
恒流泵特点是在一定操作条件下，输 出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化 无关；
恒压泵是指能保持输出压力恒定，但 其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留 时间的重视性差，它们各有优缺点。
Hale Waihona Puke Baidu
(5)附属系统
它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自 动进样、馏分收集以及数据处理等装 置。其中梯度淋洗装置是高压液相色谱 仪中尤为重要的附属装置。
梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使
两种或两种以上不同极性的溶剂按 一定程序连续改变它们之间的比 例，从而使流动相的强度、极性、 pH值或离子强度相应地变化，达到 提高分离效果，缩短分析时间的目 的。
高效液相色谱法与气相色谱法
（l）气相色谱法分析对象只限于分 析气体和沸点较低的化合物，它们仅占 有机物总数的20％。对于占有机物总数 近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩 尔质量大的物质，目前主要采用高效液 相色谱法进行分离和分析。
（2）液相色谱能完成难度较高的分离 工作，因为：
①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的， 不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和 作用，样品分子只与固定相相互作用。而 在液相色谱中，流动相液体也与固定相争 夺样品分子，为提高选择性增加了一个因 素。也可选用不同比例的两种或两种以上 的液体作流动相，增大分离的选择性。
H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不 同，如图所示：
影响分离的因素
流速：流速大于0.5 cm/s时, H～u曲线是一 段斜率不大的直线。降 低流速，柱效提高不是 很大。但在实际操作 中，流量仍是一个调整 分离度和出峰时间的重 要可选择参数。
高效液相色谱的固定相和流动相
固定相及分离柱：气相色谱中的固 定液原则上都可以用于液相色谱，其选 用原则与气相色谱一样。但在高效液相 色谱中，分离柱的制备是一项技术要求 非常高的工作，一般很少自行制备。
高效液相色谱法与经典液相色谱法
高效液相色谱法比起经典液相色谱 法的最大优点在于高速、高效、高灵敏 度、高自动化。高速是指在分析速度上 比经典液相色谱法快数百倍。由于经典 色谱是重力加料，流出速度极慢；而高 效液相色谱配备了高压输液设备，流速 最高可达 103cm·min-1。
例如分离苯的羟基化合物，7个组分 只需1min就可完成。
和气相色谱一样，液相色谱分离系统也 由两相——固定相和流动相组成。液相 色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合 固定相（或在惰性载体表面涂上一层液 膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流 动相是各种溶剂。
被分离混合物由流动相液体推动进 入色谱柱。根据各组分在固定相及流动 相中的吸附能力、分配系数、离子交换 作用或分子尺寸大小的差异进行分离。
对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约 170cm，柱径0.9cm，流动相速度为 30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出20
种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需 lh之内即可完成。
又如用25cm× 0.46 cm 的Lichrosorb －ODS(5μ)的柱，采用梯度洗脱，可在 不到0.5h内分离出尿中104个组分。
柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样 系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高 效液相色谱法中对进样技术要求较严。
进样装置
流路中为高压力工作状态，通常使用耐 高压的六通阀进样装置，
其结构如图所示：
（3）分离系统—色谱柱
色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包 括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻 璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑聚合材料 的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管 用得较多。一般色谱柱长5～30cm，内径为 4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备柱 内径较大，可达25mm 以上。
在线脱气装置
在线脱气装置用于脱去流动相中的溶解 气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱 柱。
除在线脱气装置外，目前也采用超声脱 气、真空脱气等方式。
脱气不好时有气泡，导致流动相流速 不稳定，造成基线飘移，噪音增加。
三、影响分离的因素
影响分离的主要因素有流动相的流量、 性质和极性。
在高效液相色谱中, 速率方程中的分子 扩散项B/U较小，可以忽略不计，而只有两 项，即：
高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，发展趋势是减小填 料粒度和柱径以提高柱效。
（4）检测系统
作用—— 用来连续监测经色谱柱分离后 的流出物的组成和含量变化的装置。
在液相色谱中，有两种基本类型的 检测器。一类是溶质性检测器，它仅对 被分离组分的物理或化学特性有响应， 属于这类检测器的有紫外、荧光、电化 学检测器等。
色谱分离的实质是样品分子（以下称 溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以 及固定相分子间的作用，作用力的大 小，决定色谱过程的保留行为。
根据分离机制不同，液相色谱可分 为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化 合键合色谱、离子交换色谱以及分子排 阻色谱等类型。
它是在经典液相色谱基础上，引入了气 相色谱的理论，在技术上采用了高压 泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因 而具备速度快、效率高、灵敏度高、操 作自动化的特点。为了更好地了解高效 液相色谱法优越性，现从两方面进行比 较：
高效液相色谱法的仪器设备费 用昂贵，操作严格，这是它的主要 缺点。
高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的结构示意见 图20-1，一般可分为4个主要部分： 高压输液系统，进样系统，分离系 统和检测系统。此外还配有辅助装 置：如梯度淋洗，自动进样及数据 处理等。
其工作过程如下：首先高压泵 将贮液器中流动相溶剂经过进样器 送入色谱柱，然后从控制器的出口 流出。当注入欲分离的样品时，流 经进样器贮液器的流动相将样品同 时带入色谱柱进行分离，然后依先 后顺序进入检测器，记录仪将检测 器送出的信号记录下来，由此得到 液相色谱图。
检测室
3.蒸发光散射检测器
蒸发光散射检测器适合于无紫外吸 收、无电活性和不发荧光的样品的检 测。
4.电化学检测器（以电导检测器为例）
电极
电极
电导仪
问题
电导检测器怎样消除流动相电 导的干扰？
例如，采用阳离子交换色谱分 离碱金属离子时，通常用HCl作为 流动相。
5.示差折光率检测器
几乎所有物质都有各自不同的折射 率，因此差示折光检测器是一种通用型检 测器。灵敏度可达10-7g·cm-3。主要缺点是 对温度变化敏感，并且不能用于梯度淋 洗。
（2）进样系统 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多
（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外 效应）较突出。
柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起 的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道 及检测器中存在死体积。
硬胶主要用于离子交换和尺 寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与 二乙烯苯基交联而成。可承受压 力上限为3.5×108Pa。固定相按 孔隙深度分类，可分为表面多孔 型和全多孔型固定相两类。
1.表面多孔型固定相
它的基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面 覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化铝、 离子交换剂、分子筛、聚酸胺等。
高效液相色谱仪1
高效液相色谱仪2
高效液相色谱仪3
高效液相色谱仪4
一、高效液相色谱法的特点
二、流程及主要部件
1.流程
2. 主要部件：
（1）高压输液泵： ♥主要部件之一，压力：150～350×105 Pa ♥应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调
、 耐腐蚀等特性。
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极 细，因此对流动相阻力很大，为使流动相 较快流动，必须配备有高压输液系统。它 是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由 储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动 阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部 件。
（－）固定相
高效液相色谱固定相以承受高压能 力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大 类。刚性固体以二氧化硅为基质，可承 受7.O×108～1.O×109Pa的高压，可制成 直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果 在二氧化硅表面键合各种官能团，就是 键合固定相，可扩大应用范围，它是目 前最广泛使用的一种固定相。
第十六章 高效液相色谱法
一、高效液相色谱法的特点 二、流程及主要部件 三、影响分离的因素 四、高效液相色谱法的主要分离类型
概述
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60 年代末70年代初发展起来的一种新型分离 分析技术，随着不断改进与发展，目前已 成为应用极为广泛的化学分离分析的重要 手段。
一、液相色谱分离原理及分类
表面活性材料为氧化铝的固定相，这类 固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积 小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透 性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达平 衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度 薄，最大允许量受限制。
2．全多孔型固定相
它由直径为10nm的硅胶微粒凝 聚而成。也可由氧化铝微粒凝聚成 全多孔型固定相， 这类固定相由于 颗粒很细（5～10μm），孔仍然较 浅，传质速率快，易实现高效、高 速。特别适合复杂混合物分离及痕 量分析。
一般在分离前备有一个前置柱，前 置柱内填充物和分离柱完全一样，这样 可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的 固定相饱和，使它在流过分离柱时不再 洗脱其中固定相，保证分离技的性能不 受影响。
柱子装填得好坏对柱效影响很大。 对于细粒度的填料（＜20μm）一般采 用匀浆填充法装柱，先将填料调成匀 浆，然后在高压泵作用下，快速将其压 入装有洗脱液的色谱柱内，经冲洗后， 即可备用。
另一类是总体检测器，它对试 样和洗脱液总的物理或化学性质有 响应，属于这类检测器的有示差折 光，电导检测器等。
现将常用的检测器介绍如下:
目前最常用的检测器主要
有：
紫外-可见检测器
荧光检测器
电化学检测器
蒸发光散射检测器
质谱检测器
1.紫外-可见检测器
检测室
光源
光栅
二极管阵 列检测器
紫外光度检测器（UV）：最小检测 量10-9g·mL-1，对流量和温度的波动不敏
②液相色谱固定相类型多，如离子交换色 谱和排阻色谱。等，作为分析时选择余 地大；而气相色谱并不可能的。 ③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的 温度，一般有利于色谱分离条件的选 择。
（3）由于液体的扩散性比气体的小 105倍，因此，溶质在液相中的传质速率 慢，柱外效应就显得特别重要；而在气 相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不 计。
感，可用于梯度洗脱。
2.荧光检测器
许多有机化合物，特别是芳香族化合 物、被一定强度和波长的紫外光照射后， 发射出较激发光波长要长的荧光。
特点： 有非常高的灵敏度和良好的选择 性，灵敏度要比紫外检测法高2∼3个数量 级，特别适合于药物和生物化学样品的分 析。
荧光检测器结构示意图
检测 器
光源 滤光片
梯度洗脱装置分为两类： 一类是外梯度装置（又称低压梯
度），流动相在常温常压下混合，用 高压泵压至柱系统，仅需一台泵即 可。
另一类是内梯度装置（又称高压 梯度），将两种溶剂分别用泵增压 后，按电器部件设置的程序，注入梯 度混合室混合，再输至柱系统。
梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动 相的强度，来调整混合样品中各组分的k 值，使所有谱带都以最佳平均k值通过色 谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当 于气相色谱中的程序升温。所不同的 是，在梯度洗脱中溶质k值的变化是通过 溶质的极性、pH值和离子强度来实现 的，而不是借改变温度（温度程序）来 达到。
流动相及流动相的极性
（1）可显著改变组分分离状况的流动相 选择在液相色谱中显得特别重要。 液相色 谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。
（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相 ，即流动相的极性小于固定相的极性，称 为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。
（4）液相色谱中制备样品简单，回收 样品也比较容易，而且回收是定量的， 适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通 用的检测器，仪器比较复杂，价格昂 贵。在实际应用中，这两种色谱技术是 互相补充的。
目前高效液相色谱法已被广泛 应用于分析对生物学和医药上有重 大意义的大分子物质，例如蛋白 质、核酸、氨基酸、多糖类、植物 色素、高聚物、染料及药物等物质 的分离和分析。
对于一个好的高压输液泵应符合密 封性好，输出流量恒定，压力平稳，可 调范围宽，便于迅速更换溶剂及耐腐蚀 等要求。
常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两 种。
恒流泵特点是在一定操作条件下，输 出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化 无关；
恒压泵是指能保持输出压力恒定，但 其流量则随色谱系统阻力而变化，故保留 时间的重视性差，它们各有优缺点。
Hale Waihona Puke Baidu
(5)附属系统
它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自 动进样、馏分收集以及数据处理等装 置。其中梯度淋洗装置是高压液相色谱 仪中尤为重要的附属装置。
梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使
两种或两种以上不同极性的溶剂按 一定程序连续改变它们之间的比 例，从而使流动相的强度、极性、 pH值或离子强度相应地变化，达到 提高分离效果，缩短分析时间的目 的。
高效液相色谱法与气相色谱法
（l）气相色谱法分析对象只限于分 析气体和沸点较低的化合物，它们仅占 有机物总数的20％。对于占有机物总数 近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩 尔质量大的物质，目前主要采用高效液 相色谱法进行分离和分析。
（2）液相色谱能完成难度较高的分离 工作，因为：
①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的， 不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和 作用，样品分子只与固定相相互作用。而 在液相色谱中，流动相液体也与固定相争 夺样品分子，为提高选择性增加了一个因 素。也可选用不同比例的两种或两种以上 的液体作流动相，增大分离的选择性。
H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不 同，如图所示：
影响分离的因素
流速：流速大于0.5 cm/s时, H～u曲线是一 段斜率不大的直线。降 低流速，柱效提高不是 很大。但在实际操作 中，流量仍是一个调整 分离度和出峰时间的重 要可选择参数。
高效液相色谱的固定相和流动相
固定相及分离柱：气相色谱中的固 定液原则上都可以用于液相色谱，其选 用原则与气相色谱一样。但在高效液相 色谱中，分离柱的制备是一项技术要求 非常高的工作，一般很少自行制备。
高效液相色谱法与经典液相色谱法
高效液相色谱法比起经典液相色谱 法的最大优点在于高速、高效、高灵敏 度、高自动化。高速是指在分析速度上 比经典液相色谱法快数百倍。由于经典 色谱是重力加料，流出速度极慢；而高 效液相色谱配备了高压输液设备，流速 最高可达 103cm·min-1。
例如分离苯的羟基化合物，7个组分 只需1min就可完成。
和气相色谱一样，液相色谱分离系统也 由两相——固定相和流动相组成。液相 色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合 固定相（或在惰性载体表面涂上一层液 膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流 动相是各种溶剂。
被分离混合物由流动相液体推动进 入色谱柱。根据各组分在固定相及流动 相中的吸附能力、分配系数、离子交换 作用或分子尺寸大小的差异进行分离。
对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约 170cm，柱径0.9cm，流动相速度为 30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出20
种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需 lh之内即可完成。
又如用25cm× 0.46 cm 的Lichrosorb －ODS(5μ)的柱，采用梯度洗脱，可在 不到0.5h内分离出尿中104个组分。
柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样 系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高 效液相色谱法中对进样技术要求较严。
进样装置
流路中为高压力工作状态，通常使用耐 高压的六通阀进样装置，
其结构如图所示：
（3）分离系统—色谱柱
色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包 括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻 璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑聚合材料 的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管 用得较多。一般色谱柱长5～30cm，内径为 4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备柱 内径较大，可达25mm 以上。
在线脱气装置
在线脱气装置用于脱去流动相中的溶解 气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱 柱。
除在线脱气装置外，目前也采用超声脱 气、真空脱气等方式。
脱气不好时有气泡，导致流动相流速 不稳定，造成基线飘移，噪音增加。
三、影响分离的因素
影响分离的主要因素有流动相的流量、 性质和极性。
在高效液相色谱中, 速率方程中的分子 扩散项B/U较小，可以忽略不计，而只有两 项，即：
高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，发展趋势是减小填 料粒度和柱径以提高柱效。
（4）检测系统
作用—— 用来连续监测经色谱柱分离后 的流出物的组成和含量变化的装置。
在液相色谱中，有两种基本类型的 检测器。一类是溶质性检测器，它仅对 被分离组分的物理或化学特性有响应， 属于这类检测器的有紫外、荧光、电化 学检测器等。
色谱分离的实质是样品分子（以下称 溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以 及固定相分子间的作用，作用力的大 小，决定色谱过程的保留行为。
根据分离机制不同，液相色谱可分 为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化 合键合色谱、离子交换色谱以及分子排 阻色谱等类型。
它是在经典液相色谱基础上，引入了气 相色谱的理论，在技术上采用了高压 泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因 而具备速度快、效率高、灵敏度高、操 作自动化的特点。为了更好地了解高效 液相色谱法优越性，现从两方面进行比 较：
高效液相色谱法的仪器设备费 用昂贵，操作严格，这是它的主要 缺点。
高效液相色谱仪
高效液相色谱仪的结构示意见 图20-1，一般可分为4个主要部分： 高压输液系统，进样系统，分离系 统和检测系统。此外还配有辅助装 置：如梯度淋洗，自动进样及数据 处理等。
其工作过程如下：首先高压泵 将贮液器中流动相溶剂经过进样器 送入色谱柱，然后从控制器的出口 流出。当注入欲分离的样品时，流 经进样器贮液器的流动相将样品同 时带入色谱柱进行分离，然后依先 后顺序进入检测器，记录仪将检测 器送出的信号记录下来，由此得到 液相色谱图。
检测室
3.蒸发光散射检测器
蒸发光散射检测器适合于无紫外吸 收、无电活性和不发荧光的样品的检 测。
4.电化学检测器（以电导检测器为例）
电极
电极
电导仪
问题
电导检测器怎样消除流动相电 导的干扰？
例如，采用阳离子交换色谱分 离碱金属离子时，通常用HCl作为 流动相。
5.示差折光率检测器
几乎所有物质都有各自不同的折射 率，因此差示折光检测器是一种通用型检 测器。灵敏度可达10-7g·cm-3。主要缺点是 对温度变化敏感，并且不能用于梯度淋 洗。