淋病的实验室诊断-PPT课件
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淋病的实验室诊断
概况
• 淋病（gonorrhea）是指由淋病奈瑟氏菌引起的泌尿
生殖器化脓性感染,是法定的乙类传染病 • 主要引起的疾病有：尿道炎、宫颈炎。 • 泌尿生殖器其它部位：附睾炎、前列腺炎、输卵管炎
和盆腔炎等 • 全身其它部位（播散性淋病）：淋球菌性关节炎、腱
鞘炎、心内膜炎和脑膜炎等合并症。 • ※淋菌性咽炎、淋菌性直肠炎和淋球性眼炎、淋菌性
• 用5支70mm×10mm小试管，在1管 ~ 4管中分别加入20%经过滤灭菌的 葡 萄 糖 、 麦 芽 糖 、 蔗 糖 和 乳 糖 溶 液 各 0.05ml 。 第 5 管 不 加 糖 （ 对 照 管）。
• 每管加0.1ml BSS。 • 每管加0.05ml菌悬液，充分混匀。在37℃水浴箱中卵育4小时，观察
纸片扩散法注意事项
• 每类药品选一种为代表 • ※——菌悬液制备：一定18~24小时菌苔 • ——贴纸片的时间：菌液涂布后放置3~5分
钟，30分钟内一定要贴完 • ※——药物纸片的贮存
淋球菌抑菌圈直径判断标准(NCCLS)
药物 含量
青霉素 10IU 头孢曲松 30ug 壮观霉素 100ug 四环素 30ug 环丙沙星 50ug 氟哌酸 5ug
纸片扩散法
• —原理 • ——方法 • ——结果 • ——临床意义 • ——注意事项
纸片扩散法原理
• 将含药纸片贴到涂有淋球菌的培养基上， 药物即扩散到琼脂中。如果淋球菌对此药 敏感，则生长被抑制，在纸片周围形成一 个透明的抑菌圈。琼脂中药物浓度与纸片 距离成反比，距纸片越远药物浓度越小。 因而，可根据抑菌圈的大小判定细菌对该 药的敏感、中介、耐药
过氧化氢酶试验
• ——原理：淋球菌产生过氧化氢酶。该 酶能使过氧化氢迅速分解成水和氧气， 出现气泡。
• ——方法：将30%过氧化氢（V/V）溶液 滴于可疑菌落表面，或从培养基上挑取 一接种环菌落置于干净载玻片上，然后 加一滴30%过氧化氢溶液。
• ——结果:1秒钟内产生大量气泡为阳性。 • ——意义：阴性排除淋球菌，98%脑膜
• ——温度：35~36OC • ——湿度：一定的水份 • ——CO2：5%CO2 • ※——对外环境影响：标本离体时间要短、
保湿，必要时用运送培养基，平皿接种前 要预温
淋球菌分离培养结果
• ※观察时间：24~48小时，阴性结果最好 72小时以后发报告。
• 菌落外观：圆形、凸起、湿润、光滑、 半透明或灰白色。
淋球菌分离培养（取材）
• 男性：尿道口2~4cm上，标本略带粘液； • ※必要时取前列腺液，提高阳性率； • 女性:宫颈口1.5cm转动并停留10~30秒。 • 不使用润滑油湿润扩阴器。 • 幼女：阴道分泌物。 • 肛门：肛门2.5cm以上，碰到粪便应重取。 • 咽：扁桃体及扁桃体窝。 • 眼：眼分泌物。 • ※取材时，注意无菌操作，取材前应该
纸片扩散法方法
• ※—菌种和纯化 • ——菌悬液的制备M-H肉汤1*109cfu/ml浓
度 • ——菌液涂布 • ——贴纸片 • ——孵育条件：35OC，5%CO2，16~18小
时
琼脂纸片扩散法
琼脂纸片扩散法
纸片扩散法临床意义
• —最常用的方法 • ——操作简便 • ——影响因素多，结果不够稳定 • ——指导治疗 • ——不适合菌株系统的耐药监测
出率高，亦没诊断价值。
非培养诊断技术-核酸检测
核酸检测的特点
不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运 送条件；
仅适合尿道或宫颈标本，以及尿液； 不能进行抗生素敏感性试验 用于判愈试验需在治疗后至少3 周以上进
行.
淋球菌耐药检测方法
• ——纸片扩散法 • ——琼脂稀释法 • ——E-test法 • 分子生物学方法(耐药基因检测)
— 特异性极高（100%）； —※ 可发现无症状淋球菌感染患者； — 可用于进一步作药敏试验； — 可用于治疗后的判愈试验。
初步鉴定
• —菌落特征 • ——氧化酶试验 • ——过氧化氢酶试验 • ——革兰染色
氧化酶试验
• ——原理：淋球菌在生长过程中产生氧化酶。
往培养基上生长了24小时~48小时的菌落上加 氧化酶试剂，淋球菌菌落颜色可变成紫红乃至 黑色。 • ——方法：试剂溶液和纸片。 • ——结果：变紫红。 • ——试剂配制：0.5~1%盐酸四甲基对苯二胺 或盐酸二甲基对苯二胺。 • ——注意事项：试剂要置棕色瓶避光保存一周。 纸片可保存一年。 • ——意义。
停药一周。
淋球菌分离培养基
• ——血琼脂或巧克力琼脂：8~10%脱纤维 羊血、马血、兔血、人血
• ——T-M培养基
T-M培养基
• —GC基础琼脂：3.6%. • ——血红蛋白粉1% • ——抗生素 • ——增菌剂 • ——PH：7.4 • ※——抗生素的作用 • ——林可霉素代替万古霉素
淋球菌分离培养条件
临床特征
• —患者以中青年为主。 • ——性接触为主要的传播途径。 • ——男女易感。 • ——生殖器感染多见。 • ——儿童可通过污染了淋球菌的物品间接
感染,新生儿可通过母亲产道分泌物间接感 染
传染特性
• —成人以直接性接触为主，儿童和新生儿 间接传染；
• —— 男 性 患 有 淋 病 ， 传 给 女 性 的 机 率 为 70%；
• ——细胞特性：淋球菌主要侵犯柱状上皮 和移行上皮细胞。
• ——采集时间和深度：嘱病人早晨起床不 小便检查或者排尿后2~3小时取材。男性尿 道口2~4cm，女性宫颈口1.5cm。
• ——淋球菌培养时，应采无菌采取标本。
直接显微镜检查 男性标本的采取
• ※淋球菌感染的男性病人，会出现尿痛 和尿道流脓等症状，采样前用灭菌等渗 盐水拭子揩洗尿道口，然后用手指由后 向前挤出脓液，蘸取脓液后轻轻涂布于 载玻片上（涂片厚薄要合适）。
方法
• 抗生素贮存液
•
A 青霉素：精确秤取3.2mg青霉素，溶于1ml灭菌
蒸馏水--3200μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。
•
B 四环素：精确秤取3.2mg四环素，溶于1ml灭菌
蒸馏水--3200μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。
•
C 壮观霉素：精确秤取25.6mg壮观霉素，溶于1ml
皮炎 • ※5%-20%的男性和60%女性病人没有临床症状。。
理化特性
• ※淋球菌对外界理化因子抵抗力比较弱,不耐干 燥,不耐冷和热，对普通化学消毒剂较敏感
• 普通家用洗衣粉对淋球菌具有较强抑杀作用, 此主要是洗衣粉中含有表面活性剂、磷酸盐及 其他去垢剂均对细菌有杀灭或抑制作用
• 杀灭和清除该菌的污染,切断传播途径并不困 难。普通洗衣粉浸泡洗涤,太阳下晾晒,热水煮 均具有良好的消毒效果,可以用这些方法预防 淋球菌感染,切断间接传播途径
淋球菌菌落形态 革兰阴性双球菌 阳性 阳性 G+ L- M- S-
淋病实验室检查的其它方法
• 白细胞脂酶快速法 • ELISA方法（抗原检测）：有症状的男性效果较好：阳
性率93.3%，很少有假阳性。女性标本不理想：阳性率 87%。 • 可以尿液为标本。：不作为常规筛选的方法。 • ELISA法（抗体检测）抗体检出率低，50%左右，不能 区分既往感染还是现症病人，交叉反应，女性抗体检
• —— 女 性 患 有 淋 病 ， 传 给 男 性 的 机 率 为 30%；
• ——没有终生免疫力。
实验室检查方法
• 直接显微镜检查革兰阴性双球菌； • 分离培养淋球菌； • 非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原或
DNA（EIA, PCR/LCR）
临床检验标本取材部位 （１）
男性 ✓ ※异性恋者:采集尿道标本，有口淫史者加取咽部
• ——※注意事项：糖要纯（特别是麦芽 糖 中 含 葡 萄 糖 量 要 小 于 0.25% ） 。 菌 要 新鲜（18~24小时的淋球菌菌落）。
快速非生长糖发酵微量法
• 用无选择性的巧克力或哥伦比亚琼脂平皿（含5%马血或羊血）转种受 检菌株，以获得纯菌。挑取培养18小时 ~ 24小时的纯菌2满环（直径 3mm）混悬于0.3ml ~ 0.4ml缓冲平衡盐指示溶液（BSS）中，制成浓 浊菌悬液。每升BSS中含磷酸氢二钾0.4g，磷酸二氢钾0.1g，氯化钾 8g，酚红0.6g，pH值为7.1 ~ 7.2。过滤灭菌后储存于4℃冰箱备用。
结果。淋球菌只发酵葡萄糖，不发酵其余的糖，葡萄糖管由红变黄。
糖发酵试验-奈瑟球菌属的糖发酵特征
细菌 淋球菌 脑膜炎球菌
葡萄糖 麦芽糖 乳糖
+
-
-
+
+
-
乳酰胺奈瑟菌 +
+
+
灰色奈瑟球菌 -
-
-
布兰汉卡他球 -
-
-
菌
蔗糖 -
淋球菌的鉴定特征
菌落形态 革兰染色 氧化酶试验 过氧化物酶试验 快速糖发酵试验
标本； ✓ 同性恋者: 采集尿道、直肠及咽部标本.
※女性 采集宫颈标本，必要时从尿道、直肠、咽部、
前庭大腺和尿道旁腺取材.
临床检验标本取材部位 （２）
• 幼女 幼女和/或处女膜未破的感染者标本：
采集阴道分泌物 • 新生儿眼炎患者
采集眼结膜分泌物
标本采集注意事项
• —结果影响因素：取材方法不妥当，直接 影响检测结果。
直接显微镜检查 女性标本采取
• —避免重复采样 • ——停止阴道内塞药，减少干扰因素。 • ——不要用润滑油。 • ——※宫颈外口的清洁。 • ——标本采集成功的标志：镜下可见鳞状
上皮和柱自然干燥； • ——火焰迅速通过2~3次； • ※——固定要及时； • ——原因:防止菌体结构模糊，细胞变形扭
曲
革兰氏染色方法
• ——初染：结晶紫染0.5~1分钟，水洗。 • ——媒染：碘液媒染1分钟，水洗。 • ——脱色：乙醇脱色0.5~1分钟，水洗。 • ——复染：复红染0.5分钟，水洗，晾干后
镜检。
革兰氏染色结果
• 革兰氏染色：革兰氏染色阴性（红色）。 • 菌体形：卵圆形，接触面扁平或稍凹。 • 大小：长0.7um，宽0.5um。 • 排列状况：一般成对排列，有时亦呈单
灭菌蒸馏水--25600μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。
•
D 头孢三嗪：精确秤取2mg头孢三嗪，溶于1ml灭
菌蒸馏水--2000μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。
个、四联、八叠状排列。 • ※排列位置：一般位于细胞浆内，病程
长，可见于胞浆外。 • 镜下还可见大量红色多形核白细胞。
革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌
美蓝染色
• —美蓝 0.3g • 95%乙醇 30ml • H2O 至100ml • 1%KOH 0.1ml • ——固定：染1~2分钟，水洗，镜检。 • 美蓝染色结果：背景细胞和菌体呈兰色。 • ——美蓝染色的优点：清晰、省时。
耐药
<=26 --
<=14 <=30 <=27 <=24
抑菌圈直径(mm)
中间值
中度敏感
-
27-46
-
-
15-17
-
-
31-37
-
28-40
-
25-30
敏感
>=47 >=35 >=18 >=38 >=41 >=31
琼脂稀释法 ( 原理)
• 将待检菌株种于含有不同抗菌药物的琼脂 平皿上，药物浓度小时细菌生长，药物浓 度高时细菌生长被抑制，据此可测出药物 对该菌的最小抑菌浓度，依标准判定菌是 否为耐药菌株
• 菌落大小：0.5~1mm。 • 粘性：有粘性。 • 涂片观察：25%为典型的双球菌，75%
为半球菌，四联或八叠。 • ※自溶：菌龄长，易自溶。
淋球菌分离培养意义
• 培养法为诊断淋病的金标准. • 对女性淋病的确诊应做淋球菌培养 • 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 • 培养的敏感性81-100%。 • 培养的优点有：
美兰染色
意义
• ——男性细胞内G-肾形双球，初步诊断淋 病。
• ——敏感性和特导性：均达95~99%。 • ——※女性：宫颈分泌物杂菌多，敏感性低，
不推荐用直接涂片法检查病人。
报告方式
• ※细胞内外革兰阴性双球菌
淋球菌分离培养
• 取材 • ——培养基 • ——培养条件 • ——结果 • ——临床意义。
炎球菌为阴性。
确证鉴定
• 糖发酵试验 • 免疫学试验
-荧光抗体染色 -协同凝集试验 • 酶底物试验 • DNA探针试验
糖发酵试验
• ——原理:分解葡萄糖、产酸，pH值降低， 酚红由红变黄,溴甲酚紫由紫变黄。
• ——方法：传统的的试验仅作参照方法 使用，实际工作中使用1~4小时读结果的 改良法。
• ——结果:葡萄糖发酵，麦、乳、蔗糖不 发酵。
概况
• 淋病（gonorrhea）是指由淋病奈瑟氏菌引起的泌尿
生殖器化脓性感染,是法定的乙类传染病 • 主要引起的疾病有：尿道炎、宫颈炎。 • 泌尿生殖器其它部位：附睾炎、前列腺炎、输卵管炎
和盆腔炎等 • 全身其它部位（播散性淋病）：淋球菌性关节炎、腱
鞘炎、心内膜炎和脑膜炎等合并症。 • ※淋菌性咽炎、淋菌性直肠炎和淋球性眼炎、淋菌性
• 用5支70mm×10mm小试管，在1管 ~ 4管中分别加入20%经过滤灭菌的 葡 萄 糖 、 麦 芽 糖 、 蔗 糖 和 乳 糖 溶 液 各 0.05ml 。 第 5 管 不 加 糖 （ 对 照 管）。
• 每管加0.1ml BSS。 • 每管加0.05ml菌悬液，充分混匀。在37℃水浴箱中卵育4小时，观察
纸片扩散法注意事项
• 每类药品选一种为代表 • ※——菌悬液制备：一定18~24小时菌苔 • ——贴纸片的时间：菌液涂布后放置3~5分
钟，30分钟内一定要贴完 • ※——药物纸片的贮存
淋球菌抑菌圈直径判断标准(NCCLS)
药物 含量
青霉素 10IU 头孢曲松 30ug 壮观霉素 100ug 四环素 30ug 环丙沙星 50ug 氟哌酸 5ug
纸片扩散法
• —原理 • ——方法 • ——结果 • ——临床意义 • ——注意事项
纸片扩散法原理
• 将含药纸片贴到涂有淋球菌的培养基上， 药物即扩散到琼脂中。如果淋球菌对此药 敏感，则生长被抑制，在纸片周围形成一 个透明的抑菌圈。琼脂中药物浓度与纸片 距离成反比，距纸片越远药物浓度越小。 因而，可根据抑菌圈的大小判定细菌对该 药的敏感、中介、耐药
过氧化氢酶试验
• ——原理：淋球菌产生过氧化氢酶。该 酶能使过氧化氢迅速分解成水和氧气， 出现气泡。
• ——方法：将30%过氧化氢（V/V）溶液 滴于可疑菌落表面，或从培养基上挑取 一接种环菌落置于干净载玻片上，然后 加一滴30%过氧化氢溶液。
• ——结果:1秒钟内产生大量气泡为阳性。 • ——意义：阴性排除淋球菌，98%脑膜
• ——温度：35~36OC • ——湿度：一定的水份 • ——CO2：5%CO2 • ※——对外环境影响：标本离体时间要短、
保湿，必要时用运送培养基，平皿接种前 要预温
淋球菌分离培养结果
• ※观察时间：24~48小时，阴性结果最好 72小时以后发报告。
• 菌落外观：圆形、凸起、湿润、光滑、 半透明或灰白色。
淋球菌分离培养（取材）
• 男性：尿道口2~4cm上，标本略带粘液； • ※必要时取前列腺液，提高阳性率； • 女性:宫颈口1.5cm转动并停留10~30秒。 • 不使用润滑油湿润扩阴器。 • 幼女：阴道分泌物。 • 肛门：肛门2.5cm以上，碰到粪便应重取。 • 咽：扁桃体及扁桃体窝。 • 眼：眼分泌物。 • ※取材时，注意无菌操作，取材前应该
纸片扩散法方法
• ※—菌种和纯化 • ——菌悬液的制备M-H肉汤1*109cfu/ml浓
度 • ——菌液涂布 • ——贴纸片 • ——孵育条件：35OC，5%CO2，16~18小
时
琼脂纸片扩散法
琼脂纸片扩散法
纸片扩散法临床意义
• —最常用的方法 • ——操作简便 • ——影响因素多，结果不够稳定 • ——指导治疗 • ——不适合菌株系统的耐药监测
出率高，亦没诊断价值。
非培养诊断技术-核酸检测
核酸检测的特点
不依赖于活的病原体的存在，无需特殊运 送条件；
仅适合尿道或宫颈标本，以及尿液； 不能进行抗生素敏感性试验 用于判愈试验需在治疗后至少3 周以上进
行.
淋球菌耐药检测方法
• ——纸片扩散法 • ——琼脂稀释法 • ——E-test法 • 分子生物学方法(耐药基因检测)
— 特异性极高（100%）； —※ 可发现无症状淋球菌感染患者； — 可用于进一步作药敏试验； — 可用于治疗后的判愈试验。
初步鉴定
• —菌落特征 • ——氧化酶试验 • ——过氧化氢酶试验 • ——革兰染色
氧化酶试验
• ——原理：淋球菌在生长过程中产生氧化酶。
往培养基上生长了24小时~48小时的菌落上加 氧化酶试剂，淋球菌菌落颜色可变成紫红乃至 黑色。 • ——方法：试剂溶液和纸片。 • ——结果：变紫红。 • ——试剂配制：0.5~1%盐酸四甲基对苯二胺 或盐酸二甲基对苯二胺。 • ——注意事项：试剂要置棕色瓶避光保存一周。 纸片可保存一年。 • ——意义。
停药一周。
淋球菌分离培养基
• ——血琼脂或巧克力琼脂：8~10%脱纤维 羊血、马血、兔血、人血
• ——T-M培养基
T-M培养基
• —GC基础琼脂：3.6%. • ——血红蛋白粉1% • ——抗生素 • ——增菌剂 • ——PH：7.4 • ※——抗生素的作用 • ——林可霉素代替万古霉素
淋球菌分离培养条件
临床特征
• —患者以中青年为主。 • ——性接触为主要的传播途径。 • ——男女易感。 • ——生殖器感染多见。 • ——儿童可通过污染了淋球菌的物品间接
感染,新生儿可通过母亲产道分泌物间接感 染
传染特性
• —成人以直接性接触为主，儿童和新生儿 间接传染；
• —— 男 性 患 有 淋 病 ， 传 给 女 性 的 机 率 为 70%；
• ——细胞特性：淋球菌主要侵犯柱状上皮 和移行上皮细胞。
• ——采集时间和深度：嘱病人早晨起床不 小便检查或者排尿后2~3小时取材。男性尿 道口2~4cm，女性宫颈口1.5cm。
• ——淋球菌培养时，应采无菌采取标本。
直接显微镜检查 男性标本的采取
• ※淋球菌感染的男性病人，会出现尿痛 和尿道流脓等症状，采样前用灭菌等渗 盐水拭子揩洗尿道口，然后用手指由后 向前挤出脓液，蘸取脓液后轻轻涂布于 载玻片上（涂片厚薄要合适）。
方法
• 抗生素贮存液
•
A 青霉素：精确秤取3.2mg青霉素，溶于1ml灭菌
蒸馏水--3200μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。
•
B 四环素：精确秤取3.2mg四环素，溶于1ml灭菌
蒸馏水--3200μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。
•
C 壮观霉素：精确秤取25.6mg壮观霉素，溶于1ml
皮炎 • ※5%-20%的男性和60%女性病人没有临床症状。。
理化特性
• ※淋球菌对外界理化因子抵抗力比较弱,不耐干 燥,不耐冷和热，对普通化学消毒剂较敏感
• 普通家用洗衣粉对淋球菌具有较强抑杀作用, 此主要是洗衣粉中含有表面活性剂、磷酸盐及 其他去垢剂均对细菌有杀灭或抑制作用
• 杀灭和清除该菌的污染,切断传播途径并不困 难。普通洗衣粉浸泡洗涤,太阳下晾晒,热水煮 均具有良好的消毒效果,可以用这些方法预防 淋球菌感染,切断间接传播途径
淋球菌菌落形态 革兰阴性双球菌 阳性 阳性 G+ L- M- S-
淋病实验室检查的其它方法
• 白细胞脂酶快速法 • ELISA方法（抗原检测）：有症状的男性效果较好：阳
性率93.3%，很少有假阳性。女性标本不理想：阳性率 87%。 • 可以尿液为标本。：不作为常规筛选的方法。 • ELISA法（抗体检测）抗体检出率低，50%左右，不能 区分既往感染还是现症病人，交叉反应，女性抗体检
• —— 女 性 患 有 淋 病 ， 传 给 男 性 的 机 率 为 30%；
• ——没有终生免疫力。
实验室检查方法
• 直接显微镜检查革兰阴性双球菌； • 分离培养淋球菌； • 非培养技术检测淋球菌细胞成份如抗原或
DNA（EIA, PCR/LCR）
临床检验标本取材部位 （１）
男性 ✓ ※异性恋者:采集尿道标本，有口淫史者加取咽部
• ——※注意事项：糖要纯（特别是麦芽 糖 中 含 葡 萄 糖 量 要 小 于 0.25% ） 。 菌 要 新鲜（18~24小时的淋球菌菌落）。
快速非生长糖发酵微量法
• 用无选择性的巧克力或哥伦比亚琼脂平皿（含5%马血或羊血）转种受 检菌株，以获得纯菌。挑取培养18小时 ~ 24小时的纯菌2满环（直径 3mm）混悬于0.3ml ~ 0.4ml缓冲平衡盐指示溶液（BSS）中，制成浓 浊菌悬液。每升BSS中含磷酸氢二钾0.4g，磷酸二氢钾0.1g，氯化钾 8g，酚红0.6g，pH值为7.1 ~ 7.2。过滤灭菌后储存于4℃冰箱备用。
结果。淋球菌只发酵葡萄糖，不发酵其余的糖，葡萄糖管由红变黄。
糖发酵试验-奈瑟球菌属的糖发酵特征
细菌 淋球菌 脑膜炎球菌
葡萄糖 麦芽糖 乳糖
+
-
-
+
+
-
乳酰胺奈瑟菌 +
+
+
灰色奈瑟球菌 -
-
-
布兰汉卡他球 -
-
-
菌
蔗糖 -
淋球菌的鉴定特征
菌落形态 革兰染色 氧化酶试验 过氧化物酶试验 快速糖发酵试验
标本； ✓ 同性恋者: 采集尿道、直肠及咽部标本.
※女性 采集宫颈标本，必要时从尿道、直肠、咽部、
前庭大腺和尿道旁腺取材.
临床检验标本取材部位 （２）
• 幼女 幼女和/或处女膜未破的感染者标本：
采集阴道分泌物 • 新生儿眼炎患者
采集眼结膜分泌物
标本采集注意事项
• —结果影响因素：取材方法不妥当，直接 影响检测结果。
直接显微镜检查 女性标本采取
• —避免重复采样 • ——停止阴道内塞药，减少干扰因素。 • ——不要用润滑油。 • ——※宫颈外口的清洁。 • ——标本采集成功的标志：镜下可见鳞状
上皮和柱自然干燥； • ——火焰迅速通过2~3次； • ※——固定要及时； • ——原因:防止菌体结构模糊，细胞变形扭
曲
革兰氏染色方法
• ——初染：结晶紫染0.5~1分钟，水洗。 • ——媒染：碘液媒染1分钟，水洗。 • ——脱色：乙醇脱色0.5~1分钟，水洗。 • ——复染：复红染0.5分钟，水洗，晾干后
镜检。
革兰氏染色结果
• 革兰氏染色：革兰氏染色阴性（红色）。 • 菌体形：卵圆形，接触面扁平或稍凹。 • 大小：长0.7um，宽0.5um。 • 排列状况：一般成对排列，有时亦呈单
灭菌蒸馏水--25600μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。
•
D 头孢三嗪：精确秤取2mg头孢三嗪，溶于1ml灭
菌蒸馏水--2000μg/ml，-70℃或-30℃冰箱贮存。
个、四联、八叠状排列。 • ※排列位置：一般位于细胞浆内，病程
长，可见于胞浆外。 • 镜下还可见大量红色多形核白细胞。
革兰染色：细胞内革兰阴性双球菌
美蓝染色
• —美蓝 0.3g • 95%乙醇 30ml • H2O 至100ml • 1%KOH 0.1ml • ——固定：染1~2分钟，水洗，镜检。 • 美蓝染色结果：背景细胞和菌体呈兰色。 • ——美蓝染色的优点：清晰、省时。
耐药
<=26 --
<=14 <=30 <=27 <=24
抑菌圈直径(mm)
中间值
中度敏感
-
27-46
-
-
15-17
-
-
31-37
-
28-40
-
25-30
敏感
>=47 >=35 >=18 >=38 >=41 >=31
琼脂稀释法 ( 原理)
• 将待检菌株种于含有不同抗菌药物的琼脂 平皿上，药物浓度小时细菌生长，药物浓 度高时细菌生长被抑制，据此可测出药物 对该菌的最小抑菌浓度，依标准判定菌是 否为耐药菌株
• 菌落大小：0.5~1mm。 • 粘性：有粘性。 • 涂片观察：25%为典型的双球菌，75%
为半球菌，四联或八叠。 • ※自溶：菌龄长，易自溶。
淋球菌分离培养意义
• 培养法为诊断淋病的金标准. • 对女性淋病的确诊应做淋球菌培养 • 从选择性培养基上分离出淋球菌即可诊断淋病。 • 培养的敏感性81-100%。 • 培养的优点有：
美兰染色
意义
• ——男性细胞内G-肾形双球，初步诊断淋 病。
• ——敏感性和特导性：均达95~99%。 • ——※女性：宫颈分泌物杂菌多，敏感性低，
不推荐用直接涂片法检查病人。
报告方式
• ※细胞内外革兰阴性双球菌
淋球菌分离培养
• 取材 • ——培养基 • ——培养条件 • ——结果 • ——临床意义。
炎球菌为阴性。
确证鉴定
• 糖发酵试验 • 免疫学试验
-荧光抗体染色 -协同凝集试验 • 酶底物试验 • DNA探针试验
糖发酵试验
• ——原理:分解葡萄糖、产酸，pH值降低， 酚红由红变黄,溴甲酚紫由紫变黄。
• ——方法：传统的的试验仅作参照方法 使用，实际工作中使用1~4小时读结果的 改良法。
• ——结果:葡萄糖发酵，麦、乳、蔗糖不 发酵。