核酸的理化性质

纯的RNA：A260/ A280 =2.0
四.变性与复性
(一 ) 变 性
1. 变性的概念 核酸在某些物理或化学因素的作用下，其空 间结构发生改变，从而引起理化性质的改变及生
物活性的降低或丧失。
A260值升高
粘度下降 沉降系数加快 ……
(一 ) 变 性
2. 引起变性的因素源自文库
物理因素：
热（热变性）
紫外、辐射等
核酸的杂交广泛应用于分子遗传学中。
基因（gene)：DNA分子上具有遗传效应的特定核苷酸序列， 其编码产物是多肽链或RNA。 基因组(genome)：一种生物体的全部基因或染色体。 基因组学 (genomics) ：一门涵盖了对所有基因进行基因组 作图、核苷酸序列分析、基因定位和功能分析的科学。包 括 结 构 基 因 组 学 (structural genomics) 和 功 能 基 因 组 学 (fuctional genomics )。 生物信息学 (bioinformatics) ：将计算机科学和数学应用于 生物大分子信息的获取、加工、存储、分类、检索与分析， 以达到理解这些生物大分子信息的生物学意义的交叉学科。
变性百分率 A260
指DNA的变性达
到50%，即增色效 应达到一半时的 温度 DNA的Tm值一
100
50
般在70~85℃之间
0
Tm
温度
(一 ) 变 性
5. 解链温度(Tm值)
影响Tm值的因素：
DNA分子中GC碱基对的含量
DNA分子中GC含量高，则Tm值大
DNA的溶液环境
如离子强度、pH
(一 ) 变 性
利用核酸的两性解离可以通过调节核酸溶液
的pH来沉淀核酸，也可通过电泳分离纯化核酸。
三. 紫外吸收性质 嘌呤和嘧啶具有共轭双键，能强烈吸收 紫外光。在 260nm 处有最大吸收峰。对于纯 的DNA或RNA，可以通过测得A260来推测其 核酸含量。 A260/ A280值可以反映核酸的纯度。
纯的DNA：A260/ A280 =1.8
核酸的理化性质
一.一般的物理性质 1. 形 态
DNA —— 白色纤维状固体
RNA —— 白色粉末状固体
一.一般的物理性质 2. 溶解性
微溶于水 不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂 RNA核蛋白体(RNP)易溶于0.14mol/L的NaCl溶液
DNP可溶于高浓度(1~2mol/L)的NaCl溶液
RNA的变性
RNA含局部双螺旋，也可发生变性。
特点： 变性效应不如DNA明显 增色效应的跳跃较平缓 Tm值较低
四.变性与复性
（二） 复性
1. 复性的概念
变性DNA在适当条件下，又可使两条彼此分开的 链重新缔合成为双螺旋结构，此过程成为复性。 退火：热变性的DNA在缓慢冷却的条件下的复性过程。
四.变性与复性
使氢键断裂，破
化学因素：
过酸（酸变性）
坏碱基堆集力，从 而引起核酸二级结 构的破坏。
过碱（碱变性）
有机溶剂 尿素……
(一 ) 变 性
3. 增色效应
变性后的DNA对260nm的紫外光吸收值比变性 前明显升高，这种现象称为增色效应。 这是由于变性的DNA双螺旋解体，藏于螺旋内 部的碱基暴露出来。
增色效应常可用来衡量 DNA变性的程度。
一.一般的物理性质
3. 粘 度
DNA溶液粘度极高 (因其分子直径小而长度大) RNA溶液粘度要小得多
核酸变性或降解后，粘度降低
二. 两性解离
核酸既含有酸性的磷酸基团，又含有弱碱性
的碱基，故可发生两性解离。其解离状态随溶液
的pH值而改变。
由于磷酸基团的酸性很强，所以pI较低，整
个分子相当于多元酸。
（二） 复性
2. 减色效应
当变性的DNA经复性以重新形成双螺旋结构时， 其溶液的A260值则减小，这种现象称为减色效应。 减色效应常可用来衡量DNA复性的程度。
四.变性与复性
（二） 复性
3. 分子杂交
不同来源的 DNA 分子放在一起热变性，然后慢慢冷却， 让其复性。这些异源 DNA （ RNA) 之间有互补的序列或部分 互补的序列，则复性时会形成“杂交分子”。
(一 ) 变 性
4. 热变性曲线(熔解曲线)
在DNA发生热变性的过程中，A260随温度的变化曲线。
变性百分率 A260
不 同 DNA 的 熔 解
100
曲线不同，但很
类似。都是 —— S 形曲线
50
0
温度
(一 ) 变 性
5. 解链温度(Tm值) ( melting temperature) 又称 熔解温度、熔点