大鼠脑出血模型 - 360文档中心

大鼠脑出血后血肿周围组织中p75NTR表达及其与凋亡的时相性研究

鲍刚，李奇，徐高峰，王宁，黄晓斌，郭世文，何百祥
【摘要】目的
系。方法
通过大鼠脑出血模型，探讨脑出血后不同时期ｐ７５ＮＴＲ的变化规律及与细胞凋亡的关
血测血肿周围凋亡细胞的比例，ｐ７５ＮＴＲ的蛋白表达水平。结果
围６ｈ即可见细胞凋亡，７２ｈ达高峰，１０ｄ仍可见较高比例的凋亡细胞，与对照组比较有显著统计学差异（Ｐ＜
０．Ｏ１）。实验组及对照组均可检测出ｐ７５ＮＴＲ蛋白和ＲＮＡ表达，但各实验组与对照组比较有显著统计学差异
（Ｐ＜０．０５），尤以７２ｈ为著（Ｐ：０．０００）。发现除６ｈ组外，其余各组的ｐ７５ＮＴＲ的ＲＮＡ表达水平与凋亡比例
呈正相关（Ｐ＜０．００１）。结论大鼠脑出血模型中血肿周围组织ｐ７５ＮＴＲ蛋白和ＲＮＡ表达水平增加，且与凋亡规律一致，２４ｈ后ＲＮＡ表达与细胞凋亡正相关。
ｍｅａｓｕｒｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＣｅｌｌｕｌａｒａｐｏｐｔｏｓｉｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ６ｈｏｕｒｓａｆｔｅｒＩＣＨａｎｄｒｅａｃｈｅｄｐｅａｋａｔ７２－ｈｏｕｒ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｗａｓｓｈｏｗｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｒｏｇｕｐｓ（Ｐ＜０．０５），ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙａｔ７２－ｈｏｕｒ（Ｐ＜０．００１）．

改良枕大池二次注血法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型

改良枕大池二次注血法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型目的：建立大鼠蛛网膜下腔出血模型，通过研究其出血后认知、行为学改变，基底动脉变化探讨枕大池穿刺二次注入自体动脉血溶血物法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型的实际可行性。

方法：将72只清洁级雄性SD大鼠（体重300～350 g）随机分成对照组（n=12只）、实验组（n=60只）。

实验组又分别划分为出血后12 h、24 h、48 h、3 d、5 d 5个时相组，每个时相组各12只大鼠。

造模后，通过水迷宫试验观察各时相点大鼠蛛网膜下腔出血后的认知、行为学改变，评价大鼠的学习记忆功能障碍。

结果：水迷宫结果显示实验组大鼠与正常对照组比较，逃避潜伏期明显延长，跨越平台次数减少，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

大体标本观察，对照组脑蛛网膜下腔未见出血，实验组大鼠蛛网膜下腔出血明显，可见有大量血液或血凝块弥漫分布于蛛网膜下腔。

结论：枕大池穿刺二次注入自体动脉血溶血物法建立模型操作简便易行，可重复性强，大鼠学习记忆功能障碍改变明显。

大鼠基底动脉痉挛明显，模型复制成功。

蛛網膜下腔出血（Subarachnoid hemorrhage，SAH）是临床常见的脑血管疾病，死亡率及致残率高，目前对于该病早期的高死亡率知之甚少，因此动物实验成为研究的重要方法。

建立一种操作简单、发病机制相似的动物模型来研究SAH 后的病理生理变化，对临床治疗具有重要的指导意义。

本研究采用枕大池穿刺二次注入自体动脉血溶血物法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型，通过研究其出血后认知、行为学改变，探讨模型的可靠性，以期提供简单、可靠的SAH动物模型制作方法。

Otsuji等[6]1994年对Endo的模型进行改良，第二次注血时改用氧合血红蛋白代替全血，发现动物出现的神经功能障碍更加严重，使SAH的模型更加完善。

刘承基等[7-8]亦发现，SAH后急性脑血管痉挛与动脉破裂后血液成分进入蛛网膜下腔有关，血液对血管的长时间浸泡导致血管调节功能紊乱，血管收缩功能增强，同时舒张功能出现障碍，诱发血管痉挛。

蛛网膜下腔出血大鼠模型脑干组织谷氨酸受体表达的动态变化

蛛网膜下腔出血大鼠模型脑干组织谷氨酸受体表达的动态变化【摘要】目的探讨亲代谢型谷氨酸受体 (mGluR) 在蛛网膜下腔出血（SAH）大鼠脑干表达的动态变化。

方法采用枕大池二次注血法建立Wistar大鼠SAH模型。

应用颅多普勒超声检测和RT��PCR方法分别观察蛛网膜下腔出血大鼠基底动脉血流速度和谷氨酸受体在脑干的变化。

结果①超声检测显示与对照组相比，枕大池注血大鼠第1天基底动脉血流加快，第7天达到高峰，第14天血流速度下降，第21天未见明显变化，表明大鼠出现了脑血管痉挛(CVS)。

②RT��PCR 结果显示SAH模型组术后第1、7天脑干组织中 mGluR��4 和 mGluR6 mRNA的表达率均比对照组下降，第14、21天差别不显著。

结论大鼠SAH的急性期出现了CVS，mGluR��4 和 mGluR6 可能参与了大鼠SAH急性期CVS的形成。

【关键词】蛛网膜下腔出血；亲代谢型谷氨酸受体；脑血管痉挛蛛网膜下腔出血(SAH) 后，由于脑血管痉挛(Cerebral vasospasm， CVS)、微循环障碍和颅内压增高等因素，造成较高的患者神经功能伤残率和病死率〔1〕。

造成神经细胞坏死或凋亡的主要原因是谷氨酸在细胞外间隙的聚积。

亲代谢型谷氨酸受体(Metabotropic glutamate receptor， mGluR)作为突触前谷氨酸自身受体，能减少谷氨酸的释放。

这种作用通过抑制电压依赖性的Ca2+通道，也可以非Ca2+ 依赖性方式如激活突触前K+通道来实现〔2〕。

目前尚未见CVS与mGluR的有关报道。

本研究采用枕大池二次注血法复制SAH模型，观察SAH后发生CVS时脑干组织mGluR mRNA表达的动态变化，探讨谷氨酸受体的表达与CVS发生机制的关系。

1 材料与方法1.1 实验动物分组与模型的制备采用枕大池二次注血法〔3〕制备大鼠SAH模型: Wistar大鼠48只，体重（250±20）g，雌雄各半，由吉林农业大学实验动物中心提供，随机分为：正常对照组(8只)；假手术组(8只) ；SAH后第1、7、14、21天处死组（每组8只）。

阿托伐他汀对实验性脑出血大鼠脑组织中基质金属蛋白酶9表达和脑水肿影响

阿托伐他汀对实验性脑出血大鼠脑组织中基质金属蛋白酶9表达和脑水肿影响刘秋庭;涂鄂文;李军凤;吴军【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2013(28)3【摘要】目的观察不同剂量的阿托伐他汀对大鼠脑出血模型脑组织中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达变化的影响,探讨阿托伐他汀对脑出血后脑神经保护作用的机制和脑出血急性期治疗新途径.方法 135只大鼠分成假手术组15只,120只经过手术制成脑出血模型;脑出血模型中40只不做任何处理为脑出血组,40只在造模后6小时灌胃给予阿托伐他汀5 mg/kg治疗为阿托伐他汀A组,40只给予阿托伐他汀10 mg/kg治疗为阿托伐他汀B组.每组各30只分别检测手术后12小时、24小时、48小时、72小时、5天和7天(每时点5只)MMP-9积分光密度值变化和神经功能缺损评分.各组剩余的10只分别在术后3天和7天测定脑含水量.结果各组MMP-9积分光密度值均呈先升高,后降低的趋势,3组升高的峰值均在手术后48小时,各时间点之间差异有统计学意义(P<0.05或<0.01);术后24小时、72小时、5天和7天,阿托伐他汀B组MMP-9积分光密度值均低于脑出血组;脑出血组、阿托伐他汀A组和阿托伐他汀B组MMP-9积分光密度分别为手术后24小时(1.43±0.14) au×104、(1.27±0.11) au×104、(1.11±0.10) au×104;手术后72小时(1.48±0.14) au×104、(1.38±0.11)au×104、(1.23±0.12) au×104;术后5天(1.11±0.12) au×104、(0.94±0.08) au×104、(0.88±0.11) au×104;手术后7天(0.97±0.13) au×104、(0.82±0.11) au×104、(0.67±0.07) au×104(P<0.05或<0.01).术后7天,各组脑含水量均明显减少,阿托伐他汀B组与脑出血组比较,脑含水量均明显减少(P<0.01);各组神经功能缺损评分均为先升高后降低的趋势,但脑出血组神经功能缺损评分的高峰是在手术后72小时,阿托伐他汀A组神经功能缺损评分高峰在手术后48小时.阿托伐他汀B 组神经功能缺损评分高峰在手术后24小时.结论阿托伐他汀能降低MMP-9水平,减轻脑出血后血脑屏障的破坏,降低脑含水量,促进神经功能恢复,发挥神经保护作用.10 mg/kg阿托伐他汀比5 mg/kg更有效.%Objective To observe the neuroprotective effect of atrovastain and its influence to matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) in intracerebral hemorrhage(ICH) rat, and to explore the possible mechanism of its neuroprotective effect and try to find a new treatment of acute cerebral hemorrhage. Methods 135 rats were divided into shammed-operation group (n = 15), cerebral hemorrhage model ( n =120); from cerebral hemorrhage model group,40 rats were without any treatment for cerebral hemorrhage group, 40 rats in the models after 6 hours given intragastrically atorvastatin 5 mg/kg treatment for atorvastatin group A,40 rats only to atorvastatin therapy for 10 mg/ kg atorvastatin group B. 30 rats from each group( 5 rats in a time point) were observed in MMP-9 integral optical density changes and neural function defect score during 12 h, 24 h, 48 h, 72 h, 5 days, 7 days after operation, the remained 10 rats from each group were used only after operation 3 days and 7 days in determination of cerebral water content. Results MMP-9 integral optical densities in different groups showed first increase, then decrease trend, the increase peaks of three groups occurred in 48 hours after operation, the differences between different time points among three groups were significant ( P <0. 05 or <0.01) ; after operation for 24 hours, 72 hours, 5 days and 7 days, MMP-9 integral optical density in atorvastatin group B was significantly lower than that of cerebral hemorrhage group; in cerebral hemorrhagegroup,atorvastatin group A and atorvastatin group B, MMP-9 integral optical density was in 24 hours after operation (1. 43 ± 0. 14) au × 104 , ( 1.27 ± 0. 11) au × 104 , ( 1. 11 ± 0. 10) au × 104 ; in 72 hours after operation ( 1. 48 ± 0. 14) au × 104 , (1. 38 ± 0. 11) au × 104 , (1. 23 ± 0. 12) au × 10± ; in 5 days after operation (1. 11 + 0. 12) au×l04 ,(0. 94 ± 0.08) au×l04 ,(0. 88 ± 0. 11) au×l04 ;(0. 97 ± 0. 13) au×l04 ;in 7 days after operat ion ( 0. 97 + 0.13) au× 104 ,(0. 82 ± 0. 11) au × 104 , (0. 67 ±0. 07) au × 104( P <0. 05 or <0. 01). In 7 days after operation, the brain water contents of all groups were significantly reduced,atorvastatin group B compared with cerebral hemorrhage group showed significant less decrease in cerebral water contents( P <0. 01) ; neural function defect scores from all groups showed increase at first and then decrease, but in cerebral hemorrhage group, neural function defect score reached its peak in 72 hours after operation,but in atorvastatin group A,neural function defect score peaked at 48 hours after operation,and in atorvastatin group B,neural function defect score peaked at 24 hours after operation. Conclusion The study suggested atrovastatins can reduce MMP-9 level, atrovastatins may reduce the damage of blood-brain barrier,suppress brain water content,improve the neurologic deficits. The treatment with atrovasatin can protect neural function. Atorvastatin 10 mg/kg is more effective than the dose 5 mg/kg.【总页数】4页(P298-301)【作者】刘秋庭;涂鄂文;李军凤;吴军【作者单位】湖南省脑科医院,神经内科,湖南,长沙,410007;湖南省脑科医院,神经内科,湖南,长沙,410007;中南大学湘雅二医院,神经内科,湖南,长沙,410007;中南大学湘雅二医院,神经内科,湖南,长沙,410007【正文语种】中文【中图分类】R743.34【相关文献】1.芬戈莫德对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织中基质金属蛋白酶表达的影响[J], 邹维;李卓2.脑出血大鼠脑组织膜型基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9表达及益气活血中药的干预效应 [J], 王玲;唐涛;罗杰坤;邢之华;杨期东;黄菊芳;齐勇;刘小娟3.小檗碱对脑出血大鼠脑水肿和血肿周围脑组织中HIF-1α、VEGF表达水平的影响 [J], 郭银玲4.p38丝裂原活化蛋白激酶途径对大鼠脑缺血再灌注后脑组织基质金属蛋白酶－9表达及脑水肿形成的影响 [J], 李国辉;王耀辉5.实验性脑出血血肿周围脑组织基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的表达及其与脑水肿的关系 [J], 赵辉;李传玲;王庆广;崔桂云;张艺潆;陆军;沈霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

田黄冲剂对急性脑出血模型大鼠相关炎性细胞因子的干预作用

Ｃｈｉｎａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｉｔｖｅ：ＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｏｆＴｉａｎｈｕａｎｇＧｒａｎｕｌｅｏｎａｃｕｔｅｃｅｒｅｂｒａｌｈｅｍｏｒｒｈａｇｅｉｎｊｕｒｙｂａｓｅｄｏｎ
血模型大鼠脑损伤的干预作用。方法选用健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，随机分为模型组、中药组、西药组、中西药
组和盐水组。制作脑缺血大鼠模型，对造模成功大鼠除模型组只常规进食水外，其余各组按人与动物等效剂
量，分别给予中药（田黄冲剂）、西药（环磷酰胺）、中西药和生理盐水灌胃；并于大鼠清醒后０ｈ（即刻）、６ｈ、２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ５个时间段进行行为学观察和神经功能评分；后断头取脑测定炎性细胞因子ＩＬ一１，ＩＬ一６和
【关键词】田黄冲剂脑出血
模型大鼠
炎性细胞因子
ＩｎｔｅｒｖｅｎｉｔｏｎＥｆｆｅｃｔｏｆＴｉａｎｈｕａｎｇＧｒａｎｕｌｅｏｎＩｎｌｆａｍｍａｔｏｒｙＣｙｔｏｋｉｎｅｓｉｎＲａｔｓｗｉｔｈＣｅｒｅｂｒａｌＨｅｍｏｒｒｈａｇｅ

HtrA2 mRNA在大鼠脑出血模型中表达的实验性研究

Ｎｃｒｕ，ｕａｔｔｅｒｒｅｏｈｇａｈｇｕｅａｄｓｅｗｓｉｉｃｎｙｎｒｓｄ（＜．５，ｓｅｉ－ＡｉｅｈｇｏｐｂｔｆｒｎａｅｅａｈｍｒａｅｉｅｃｏｐｏｒｔｉａｇｆａｔｃｅｅＰ０ｏ）ｅｐｃｌｎａｅｉｒｂｌｒｎｒｐｅｄｓｎｉｌｉａａ
分；ＴＰＲ法检测Ｈｒ２ＩＮＲ．ＣｔＲＡ表达水平。结果Ａｎ
各组均有Ｈｒ２ｍＮｔＲＡ表达，脑出血后各组手术侧表达明显增加Ａ但
大鼠脑出血后Ｈｒ２ｔＡ
（＜．５，其是３Ｐ００）尤ｄ组，脑含水量呈正相关；与而脑含水量与神经功能缺失评分呈负相关。结论水肿的过程，导或加重了神经元的凋亡及脑水肿。诱
ｌｇ，ａｈｕＳｃｕｎ６６ＯＣｉｅｅｌｚｏ，ｉａ４ＯＯ，ｈｎ＿ｈａ
Ｉｂｔｃ］ＯｊｔｅｏｎｅｉｔｔｅｈｎｍｏＨｒ２ｉｒｒｎｅｏｈｅＭｅｏｓＥｅｌｄｉｄｍｌｓａｔＡｒｂｃｖｅｉＴｖｓａｅｃａｉｔｔａｍｒａ．ｔｄｖｙｉｄａｉｔｅｈｍｇｓｆＡｎａｂｉｈｒｇｈｎｖｅｅ
・
１２・２０
四川医学２１９月第３００年ｌ卷（９期）Ｓｈａ第ｉｕｎＭｅｉｌｏｒａ，００Ｖ１３，ｏ９ｃｄｃｕｎ２１，ｏ．１Ｎ．ａＪｌ
● 基础与实验研究 ●

针刺对脑出血模型大鼠脑组织自噬相关蛋白p62、Beclin-1表达的影响

针刺对脑出血模型大鼠脑组织自噬相关蛋白p62、Beclin-1表达的影响刘昊; 杜嘉; 冯培培; 阮晨; 张伟波; 朱仲华; 周驰; 李新伟【期刊名称】《《浙江中西医结合杂志》》【年(卷),期】2019(029)010【总页数】5页(P789-792,后插2)【关键词】大鼠; 脑出血; 针刺; 行为学评分; 自噬; p62; Beclin-1【作者】刘昊; 杜嘉; 冯培培; 阮晨; 张伟波; 朱仲华; 周驰; 李新伟【作者单位】浙江省中医药研究院杭州310000; 浙江省立同德医院针灸科杭州310012【正文语种】中文脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是一种常见且具有较高的死亡率和发病率的卒中亚型，每年占全球脑卒中的10%～15%[1]。

幸存患者多因血肿引起神经元死亡，导致严重的神经功能缺损[2]。

随着对ICH 脑损伤机制研究的日益深入，防治脑损伤、提高神经细胞存活率、保护神经细胞功能已成为ICH 机理研究和探索治疗方法的重要突破点。

ICH后细胞死亡主要有三种类型，包括细胞坏死、凋亡和自噬性细胞死亡[3]。

研究表明，血肿周边组织细胞中存在大量自噬小体结构，证实脑出血可以诱导自噬的激活[4]。

自噬的激活很可能是细胞为了清除胞质中受损的细胞器和有害物质而发生的自我保护机制[5]。

本研究通过建立自体血ICH 大鼠模型，运用免疫印迹、Western Blot 技术，以自噬相关蛋白p62、Beclin-1 为切入点，探究针刺对ICH 大鼠脑组织自噬表达的影响。

1 实验材料1.1 动物本研究所有研究流程遵循科技部颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》相关规定，符合浙江省立同德医院实验动物福利和伦理委员会标准（编号：XMSB20180007）。

80只SPF级雄性Sprague-Dawley 大鼠（250～300g）购置于浙江省实验动物中心，许可证号SCXK（浙）2014-0001。

一种大鼠蛛网膜下腔出血动物模型的建立-最新文档

一种大鼠蛛网膜下腔出血动物模型的建立蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage SAH）是一种常见综合征，不仅可引起血管痉挛[1]，而且还可以引起蛛网膜下腔纤维化，甚至导致慢性脑积水的发生[2]，但机制尚不十分清楚，目前相关研究较少。

柔脑膜是蛛网膜和软脑膜的合称，两者之间隔以蛛网膜下腔并以小梁相联系[3]。

本研究成功地建立了一种成年大鼠SAH模型，为进一步研究SAH提供了较好的动物模型，现报道如下。

1 材料与方法1.1 实验动物：18只SD雄性成年大鼠，体重（200±10）g （由中南大学湘雅医学院动物部提供）。

1.2 主要试剂与仪器：Masson三色盒（珠海贝索生物技术XX公司），异戊烷（国药集团化学试剂XX公司提供），液氮、甲基纤维素（中南大学湘雅三医院病理科提供），手术显微镜及显微手术器械（上海医用光学仪器厂），脑立体定位仪（Narishge，Japan）1.3 方法1.3.1 动物模型的制作：术前禁食24 h，自来水饲养。

用10%水合氯醛300mg/kg经右侧腹腔注射麻醉后，头颈部备皮及左侧腹股沟区备皮。

仰卧位常规消毒铺巾，切开左侧腹股沟区皮肤，找到左侧股静脉并置管备用；取俯卧位使用立体定位仪固定大鼠，颈部稍屈。

常规消毒铺巾，参照Konczalla方法[4]，在显微镜下沿头颈部交界处作一长约3~4 mm的纵切口，暴露环枕筋膜，先用0.45号注射针头（针尖需较钝）固定在立体定位仪纵臂上，垂直穿刺枕大池，抽出清亮脑脊液0.1 ml后，从原股静脉置管处抽0.2 ml新鲜血缓慢注入枕大池，注射完后留针5 min，拔针后用医用耳脑胶封闭针眼，缝合切口。

青霉素腹腔注射抗炎，头低位放置30 min。

术后24 h再次以同样的方法注射0.2 ml股静脉血。

生理盐水组操作与实验组完全相同，但两次注射均以生理盐水代替自体血。

1.3.2 取材：腹腔麻醉下灌注固定，室温下保存30 min后断头仔细咬除颅骨取出硬膜及脑组织。

安脑平冲汤对大鼠脑出血后脑水肿及水通道蛋白表达的影响

ｗａｉｄｄｉｏｍｏｅｏｄｔｅｔｄｇｏｃｏｄｎｇｔｒｏｕｎｃｏｃｒ．ｅｓｍｐｒｔｎｓｄｖｅｎｔｉｄｌｇｕｐａｒａｅｕｐａｃｒｉｏｎｅｖｕｓｆｒｎｒｉｔｎｓｏｅＴｈｈａｏｅａｏｉ
摘要：目的
观察安脑平冲汤对脑组织含水量和水通道蛋白一（Ｑ一）４ＡＰ４表达的影响。方法
将ｓＤ雄性大鼠随机
分为正常组、假手术组和造模组。以Ｉ型胶原酶注射法建立大鼠脑出血模型，Ｖ造模成功后分为模型组和治疗组，治疗组予安脑平冲汤灌胃，其他组予蒸馏水灌胃，日２次，５。假手术组、模型组和治疗组按１、２、４、７、１０ｈ每共ｄ２４８２２５时间点分为５个个亚组，每个亚组各６用来测定脑含水量，只另选９只大鼠采用同样的分组方法检测ＡＰ４６Ｑ一的表达。结果与模型组比较，治疗组各时间点脑组织含水量下降（尸＜００）Ｑ一表达在２～１ｈ时间点减低（．５；ＡＰ４４２０Ｐ＜００）．５，
ａｕｐｒｎ４（ＱＰ４ｉｅｐｒｅｔｍａａｔｒｎｒｃｒｂｒｅｒｈｇＩｑａｏｉ一Ａ一）ｎｔｅｈｍａｏｆｔａｅｅａａｈｍｏｒａｅ（ｈｅｉｌＣＨ）ｎｒｔ．ＭｅｈｄｎｙｓｉａｓｔｏｓＮｉｔ・ｉｘ
ｇｏｒｕｐ，ｍｏｅｏｎｄｅｔｄｇｏａｖｄｅｏ１ｄｌｇｕｐａｒｒｔａｅｕｐｗｓｄｉｒｉｄｔ２，２４，４８，７２，１０ｈｓ２ｕｂ— ｏｅｐｃｖｌ．Ｔｒｇｕｐｒｓｅｔｅｙｈｅｉ

蛭龙活血通瘀胶囊对模型大鼠脑出血后脑组织水肿及ZO-1、Occludin的影响

·研究报告·脑出血是威胁人类健康的严重疾病之一［1］，脑水肿是脑出血后重要的继发性病变，同时也影响着该病的发展和预后，成为急性期临床治疗的关键，如果能在脑水肿形成的初期有效控制水肿的发生，将有助于脑出血神经系统功能障碍的恢复，提高患者生活质量［2］。

通过前期的临床研究，我们发现，具有活血化瘀通络的蛭龙活血通瘀胶囊能有效治疗脑出血，改善患者的神经功能［3］。

本实验通过观察蛭龙活血通瘀胶囊对大鼠脑出血后脑含水量、脑系数以及血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA的表达，探寻该药防治脑出血的作用机制。

1材料与方法1.1实验动物雄性健康的SPF级SD大鼠，共96只，蛭龙活血通瘀胶囊对模型大鼠脑出血后脑组织水肿及ZO-1、Occludin的影响∗王蔚钟霞杜渊王洪连谭睿陟沈宏萍王丽杨思进△（西南医科大学附属中医医院，四川泸州646000）中图分类号：R285.5文献标志码：A文章编号：1004-745X（2020）12-2084-04doi：10.3969/j.issn.1004-745X.2020.12.005【摘要】目的观察蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠脑含水量、脑系数以及ZO-1、Occludin mRNA水平的影响。

方法将96只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀组（中药组），盐酸法舒地尔组（西药组），各组又分为12h、48h、3d、7d4个亚组，各亚组6只大鼠，取大鼠自体尾部血注入基底节区以制备脑出血模型，分别干预后在规定时点检测各组脑含水量及脑系数，采用实时荧光定量PCR法（PCR）检测大鼠脑组织ZO-1、Occludin mRNA水平。

结果与模型组比较，中药组、西药组大鼠的脑含水量和脑系数在各时点均明显降低（P<0.01）；qRT-PCR结果显示，与模型组比较，中药组、西药组各时点脑组织ZO-1、Occludin mRNA水平均显著上升（P<0.05）。

镇肝熄风汤对急性脑出血大鼠模型抗脑水肿作用研究

参考文献：［］１莫剑忠，耀宗，邹多武．化系功能性和动力障碍性袁消
型：体应激、理应激和综合应激（躯心或混合应激）。
躯体应激的方法包括番泻叶灌胃法、醋酸刺激法、冰
水灌胃法等。ＬＨ等研究发现，醋酸刺激７ｄａＪ
中医研究２１００年１第２０月３卷第１Ｏ期
ＴＭＲｓＯｔｂｒ００Ｖ１２ｏ１Ｃｅ．ｃｅ２１ｏ．３Ｎ．０ｏ
经过方差分析可知，婴分离、酸刺激、婴母醋母分离和醋酸刺激的交互作用对大鼠直肠敏感性的影
分离是加重腹泻型ＩＳ排便增加的原因。直肠敏感Ｂ
目前ＩＳ动物模型的刺激因素主要有３种类Ｂ
性实验结果表明，婴分离、酸刺激以及两种应激母醋手段的结合均能明显提高大鼠直肠敏感性（＜Ｐ００或００）而应激效果能持续较长时间。．５．１，

［］兴振，晓丽，文霞，．激动物模型研究进４谢迟周等应展［］中国新药杂志，０８１（６：３５—１３０Ｊ．２０，７１）１７８．
［］ａＪ５ＬＨ，ＫｍＴ，ｕｇＴ，ｔ１ｉｅａｈｐｒｎｉＶｔｉＷＳｎＳｅａ．Ｖｓｒｌｙｅｓｓｉｙｃｅｔｉ
后肠黏膜组织和髓过氧化物酶活性恢复正常，大但鼠对直肠扩张刺激的敏感性持续增高，这些表现与ＩＳ的特征吻合。心理应激的方法包括束缚应激Ｂ

大鼠脑出血模型血肿周围继发损害及超微结构变化研究

・基础研究・大鼠脑出血模型血肿周围继发损害及超微结构变化研究赵性泉　周剑　王拥军[摘要]目的探讨脑出血所引发的血肿周围组织继发性损害的病理生理过程和可能机制。

方法制备SD雄性大鼠脑出血模型,实验组分成1h、3h、12h、24h、48h、72h及7d7个小组;对照组分成3h、24h及72h3个小组,每组5只大鼠。

每实验小组取2只大鼠,2%氯四氮唑(TTC)染色,进行大体组织病理演变观察。

另取3只大鼠,在血肿周边区及同侧皮层区分别取脑组织在透射电子显微镜及光学显微镜下观察。

结果TTC染色显示,血肿呈黑褐色,血肿周围未见白色梗死区。

光镜下观察,血肿区与正常脑组织间有一周围区,其中可见组织疏松,细胞不同程度水肿,星形细胞肿胀,神经细胞变性、坏死,出血灶周边毛细血管增生伴炎细胞浸润。

电镜观察可见,血肿周围组织早期星形细胞胞体和周边足突肿胀,神经细胞改变不明显。

注血后24h,星形细胞肿胀明显,部分变性、坏死;神经细胞轻度变性,血脑屏障破坏。

注血后72h,星形细胞高度肿胀,神经细胞变性。

结论脑出血血肿周围脑组织发生病理、超微结构的改变,血肿周围脑组织产生继发性损害。

[关键词]脑出血;脑水肿;电子显微镜;病理;大鼠Second ary injury to perihem atom a in intracerebral haemorrhage rats ZHA O Xing2quan,ZHOU Jian,W A N G Yong2jun.Depart ment of Neurology,Beijing Tiantan Hospital,Beijing100050,China[Abstract]Objective To study possible mechanism through investigating the pathological and ultrastructural characters of secondary injury to perihematoma in intracerebral haemorrhage(ICH)rats.Methods Sprague2Dawley male rats were subjected to ICH models.They were randomly divided into test group and control group.The rats in the test group were divided into7subgroups at1h,3h,12h,24h, 48h,72h and7d after ICH;while those in control group were divided into3subgroups at3h,24h,72h after saline injection.Each subgroup contained5rats.2rats from each group were stained by2%triphenyltetrazolium chloride(TTC)to observe the pathological change.3rats were picked up from each group to do optical microscope and electric microscope investigation on perihematoma tissue and ip2 silateral cortex.R esults Hematoma tissue was demonstrated as black2brown by TTC staining,no white infarcted area was detected around hematoma.In addition,there was a transitional zone between hematoma and normal tissue under microscopy;the involved tissue looked loose with varied edematous cells.Astrocytes appeared swollen and neural cells looked degenerated and necrosis.Meanwhile,capillary hy2 perplasia around hematoma with foot2plate swollen were detected,no remarkable neural cells change was observed.24h after blood injec2 tion,astrocytes started to swell,part of them became degenerated and necrosis.Neural cells appeared mild degenerated and blood2brain bar2 rier were destroyed.72h after ICH,astrocytes showed highly swollen with neural cells degenerated.Conclusion Secondary injury to perihe2 matoma has been identified and the pathological and ultrastructural changes have been observed.[K ey w ords]intracerebral haemorrhage;cerebral edema;electric microscope;pathology;rat中图分类号:R743.34文献标识码:A文章编号:100629771(2004)0820469203[本文著录格式]　赵性泉,周剑,王拥军.大鼠脑出血模型血肿周围继发损害及超微结构变化研究[J].中国康复理论与实践, 2004,10(8):469—471.脑出血是一种发病率很高的急性脑血管病,至今仍无特别有效的治疗方法[1]。

神经系统疾病相关动物模型

2. 旋转大鼠模型 [造模机制] 利用神经毒剂6-羟基多巴胺（6-OHDA)破坏黑质的多巴胺能神经元。 [造模方法] 利用立体定向仪以微量注射器向黑质内注入6-羟多巴，两周以后皮下注射Apomorphine 0.25mg/kg诱发大鼠旋转。模型成功的标准：连续两周测试平均转速〉7次/min，持续旋转〉40min。 [模型特点] 操作简单成功率高、观察方便。但与灵长类动物相比不能完整准确的反应PD的特征。
（二）全脑缺血动物模型（Animal model of whole
cerebral ischemia）
1. 沙鼠全脑缺血模型： [造模机制] 结扎双侧颈总动脉可造成全脑缺血模型，开放双侧颈总动脉可方便地恢复血流，已广泛地应用于脑缺血及再灌注损伤研究。 2. 大鼠四条血管关闭全脑缺血模型： [模型简述] Pulsimelli法适用于脑缺血的急性和慢性实验研究。关键之处在于对双侧椎动脉的处理。模型成功的标志为大鼠应出现意识障碍。
•
犬常用于灵活型和迟钝型的神经实验；对红绿色盲，因而以红色刺激进行的条件反射实验不能选择犬。
•
绵羊的蓝舌病和人的脑积水相似，适宜于脑积水研究。
• 青蛙和蟾蜍的腓肠肌和坐骨神经很容易获得，且制作方便，适于观察药物对外周神经、横纹肌或神经肌肉接头的作用。蛙的大脑很不发达，可用来作简单的神经反射弧实验。 • 树枸是地球上幸存下来的灵长类原型之一，在进化上处于一种特殊的地位，是神经生物学良好的实验材料。 • 猴的高级神经活动发达，常用于行为学的研究；小儿麻痹症优选动物。 • 黑猩猩的智力发育和人类幼儿及智能低下的成年人相近，对黑猩猩学习行为所取得的数据，可应用于人类婴幼儿教育，对智能低下的成年人的教育也有参考价值。
二、转基因动物技术方法（transgenic animal techniques）是常规分子生物学技术的延伸和拓展，使动物和人体基因工程研究由以往的单基因离体水平的操作，发展到了离体和在体相配合的崭新阶段。 1. 显微注射技术：通过显微注射直接将外源基因导入受精卵，再移植到受体，使其发育成转基因动物的一种方法。

生地注射液对脑出血大鼠神经功能修复及抗凋亡作用的研究

生地注射液对脑出血大鼠神经功能修复及抗凋亡作用的研究张宗奇;俞晓飞【摘要】目的:探讨生地注射液对实验性脑出血大鼠神经功能修复及抗凋亡作用.方法:采用Ⅶ型胶原酶加肝素,脑内尾状核注射法,建立SD大鼠脑出血模型.将70只大鼠按体质量分为空白对照组、假手术组、模型对照组、生地注射液组和清开灵注射液组.从神经功能缺损评分、脑组织病理形态学、细胞凋亡等方面进行用药前后及组间比较研究.结果:生地注射液组大鼠脑组织病理形态学观察结果与清开灵注射液组相似,较模型组明显改善;神经功能评分明显改善,细胞凋亡数目明显减少,与模型组比较差异有统计学意义,与清开灵注射液组之间比较差异无统计学意义.提示生地注射液对实验性脑出血大鼠有一定疗效,可促进神经功能修复,减少神经细胞凋亡数目.结论:生地注射液对脑出血大鼠具有神经修复及抗神经细胞凋亡作用.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2015(021)008【总页数】4页(P939-942)【关键词】生地注射液;脑出血;神经功能;凋亡【作者】张宗奇;俞晓飞【作者单位】上海中医药大学附属曙光医院神经内科,上海 200021;上海中医药大学附属曙光医院神经内科,上海 200021【正文语种】中文【中图分类】R285.5急性脑出血严重威胁人类生命健康，出血性中风证属本虚标实，其发生、发展、演变过程反映了患者真阴亏虚的演变过程。

在长期的临床实践基础上，上海市名中医王左教授提出以养阴法为指导思想，运用生地注射液治疗急性出血性中风。

生地注射液由单味中药生地制成，生地味甘、苦，微寒，具有养阴生津、清热凉血止血之功效。

前期随机对照临床试验［1］结果显示，生地注射液(40ml/d，每日1次，静滴14d)治疗出血性中风具有确切疗效。

本研究通过脑出血大鼠模型，进一步探讨生地注射液治疗急性脑出血在神经功能修复及抗凋亡方面的作用。

1.1 实验材料1.1.1 动物 SD雄性清洁级大鼠70只，体质量(250±25)g，由上海中医药大学动物中心提供(动物合格证号SCXK(沪)2003-0002)。

局部亚低温对大鼠脑出血模型脑组织中紧密连接相关蛋白-5表达的影响

局部亚低温对大鼠脑出血模型脑组织中紧密连接相关蛋白-5表达的影响刘佳;王建平【摘要】目的：探讨局部亚低温对大鼠脑出血（intracerebral hemorrhage ，ICH）模型紧密连接相关蛋白‐5（Claudin‐5）表达的影响以及局部亚低温减轻IC H后水肿的可能机制。

方法：选取雄性SD大鼠216只，采用自体血注入法制备IC H模型，并随机分为IC H组和 IC H加局部亚低温（IC H＋ H ）组。

每组又分为假手术组以及IC H后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d组共6个亚组。

ICH＋ H组于注血后给予局部亚低温治疗。

采用免疫组织化学法检测Claudin‐5的表达，采用伊文思蓝法进行血脑屏障通透性的检测，采用干湿质量法进行脑组织含水量的检测。

结果：ICH组大鼠血肿周围脑组织中Claudin‐5表达在ICH后6 h开始减少，IC H后24 h下降最显著，IC H后7 d时仍低于假手术组（ P＜0．05）；IC H组大鼠在IC H后6 h开始出现血脑屏障通透性及脑组织含水量增加（P＜0．05），在ICH后3 d达到高峰，然后逐渐消退。

ICH＋ H组大鼠ICH后各时间点Claudin‐5表达均高于ICH组（P＜0．05），而血脑屏障通透性、脑组织含水量则低于ICH组（P＜0．05）。

结论：局部亚低温可能通过提高Claudin‐5的表达来抑制IC H后脑水肿的形成。

%Objective:To explore the effect of local mild hypothermia on the expression of Claudin‐5 in rat model of intracere‐bral hemorrhage(ICH) and the possible mechanism of local mild hypothermiain alleviating brain edema after ICH .Methods:A total of 216 male SDrats ,in which ICH model were established by injecting autologous blood into caudate nucleus ,were ran‐domly divided into the ICH group andICH+ local mild hypothermia(ICH+ H) group .Each group was furtherdivided into 6 subgroups :sham operation subgroup ,6 h ,12 h ,24 h ,3 d ,7 d after ICH subgroup .In ICH+ H group ,the local mild hypother‐mia was given after the injection of blood .The expression of Clau din‐5 in 6 subgroups was detected by immunohistochemical staining repectively .The permeability of blood‐brain barrier(BBB) was measured by Evans‐Blue extravasation and the brain wa‐ter content(BWC) was determined by dry‐wet weight method .Results:In ICH g roup ,the expression level of Claudin‐5 around hematoma decreased gradually from 6 h after ICH .It declined most significantly at 24 h after ICH .It was still lower than that in sham operation group at 7 d after ICH ( P< 0 .05 ) .The permeability of BBB and BWC increased from 6 h after ICH (P<0 .05) ,peaked at 3 d after ICH ,and then gradually declined .Compared with that in ICH group ,the expression level of Claudin‐5 in ICH+ H group were higher ,at each time point after ICH ,while permeability of BBB and BWC werelower(P<0 .05) .Conclusions:Local mild hypothermia might inhibit the formation of brain edema after ICH by increasing the expression of Claudin‐5 .【期刊名称】《中国临床医学》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】3页(P280-282)【关键词】局部亚低温;脑出血;紧密连接相关蛋白-5【作者】刘佳;王建平【作者单位】河南医学高等专科学校诊断学教研室，河南郑州 451191;郑州大学第五附属医院神经内科，河南郑州 450052【正文语种】中文【中图分类】R743.34脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)占卒中的20%～30%，主要发生于中老年人，致残率、病死率高，严重影响患者的生存和生活质量。

大鼠脑损伤模型制作的具体方法及步骤

大鼠脑损伤模型制作的具体方法及步骤(1)复制方法健康雄性大鼠，体重为230～260g。

采用改进的Feeney自由落体硬膜外撞击方法。

损伤装置由底板、固定支架、垂直导杆、下落击锤和聚乙烯撞击圆锥组成。

撞击圆锥头端直径为4mm、高为2.5mm。

经腹腔注射水合氯醛(按350～400mg/kg 体重的剂量)或戊丨巴丨比丨妥丨钠(按50～60mg/kg体重的剂量)麻醉。

将其头部固定于立体定向仪上，剪去顶部毛发，手术区域皮肤消毒。

沿中线左侧切开头皮，分离骨膜，用牙科钻于中线旁2mm、紧挨冠状缝后开一直径5mm的圆形窗，硬膜保持完整。

用20g砝码于10cm和30cm高处通过一金属导杆坠落，撞击置于硬膜上的圆锥上致轻、中型损伤，另用40g砝码于25cm高处坠落致重型损伤。

轻、中、重三型损伤的致伤冲击力分别为200g·cm、600g·cm和1000g·cm，用锌汀粉封闭骨窗，缝合头皮，置鼠笼喂养。

(2)检测指标1)脑含水量测定动物断头处死后，30s内取出大脑，用滤纸吸尽脑表面血丨渍后，锐性分离左侧顶叶皮质约100mg，用电子分析天平称湿重后，置于110℃恒温干燥箱内烤干(24h)，称干重。

用Elliot公式计算各部位脑含水量百分率：脑含水量(％)＝[(湿重－干重)/湿重]×比率2)血脑屏障定量测定动物于损伤前1h注射2％伊文斯蓝(3ml/kg体重)。

在取脑组织前，为清除血液中染料，可用生理盐水经左心室灌注至右心室流出清亮液体为止。

取损伤侧皮质分别称重，加入二倍体积的二甲基甲酰胺，50℃水浴中孵育72h，1500g离心，离心10min，取上清液。

应用分光光度计在伊文斯蓝大吸收光谱635mm处检测吸光度，从标准曲线上查得伊文斯蓝含量，结果以μg/g脑组织表示。

3)病理学观察损伤后24h再次麻醉，经升主动脉快速灌注生理盐水150ml，继之快速灌注冰冷的4％多聚甲醛200ml，随后再用其300ml在2h内慢速灌注，取脑组织浸入4％多聚甲醛内4℃后固定48h，常规乙醇脱水，石蜡包埋，行5μm冠状切片，作HE 染色及尼氏小体染色，光镜下观察。

(大学资料)脑出血2(1)

docin/sundae_meng
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脑出血血肿周围继发损害vs脑水肿
CT/ MRI等影像学资料表明 ,脑出血 (ICH) 后1 h可发生脑水肿 ,2 4h开始明显 ,3～ 5d 脑水肿达高峰 ,此时脑水肿可是血肿大小的 2～ 4倍？
脑出血后水肿是间质性脑水肿、血管原性脑水肿和细胞毒性脑水肿的共同结果 ,脑出血后脑水肿的形成在不同的阶段有不同的机制。
肿扩大独立相关(P＝
0.025).
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ICH后血肿扩大的影响因素
凝血功能障碍 :
过量饮酒、肝病以及由此引起的凝血系统功能障碍在高血压性脑出血的发生及血肿扩大中起一定作用。
但也有人认为 ,脑出血后血肿周围区域血流改变的程度和持续时间不足以引起组织的缺血性损伤。
docin/sundae_meng
缺血因素如何在临床中证实？
SPECT PET fMR（PW，DW） Xe-CT PCT
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PW-CBV
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脑出血血肿周围继发损害vs脑水肿
红细胞溶解及释放的血红蛋白在迟发性脑水肿的作用----红细胞大量溶解与补体系统的激活有关 ,补体系统激活后形成膜攻击复合体从而导致细胞溶解和炎症反应 ,引起脑水肿
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脑出血血肿周围继发损害vs脑水肿
脑出血后脑水肿的形成可能涉及以下几个阶段 :
❖ 第一阶段 (开始几小时 )血肿内血浆蛋白的渗出以及血凝块的回缩作用；
❖ 第二阶段 (第 1天 )凝血过程产生的凝血酶的作用；

大鼠丘脑出血后丘脑网状核中GAD67和MOR受体含量的变化

大鼠丘脑出血后丘脑网状核中GAD67和MOR受体含量的变化冯乘铭;寇珍珍;周红英;李云庆;蔡志平【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2022(38)11【摘要】目的:探讨大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型中,丘脑网状核(thalamic reticular nucleus,TRN)中谷氨酸脱氢酶67(glutamate decarboxylase 67,GAD67)和m型阿片受体(m-opioid receptor,MOR)含量的变化。

方法:在立体定位仪下进行右侧丘脑腹后外侧核(ventral posteriorlateral thalamic nucleus,VPL)注射Ⅳ型胶原酶,建立大鼠丘脑出血模型,同一位置注射同等体积的生理盐水为对照组,尼氏染色观察VPL周围神经元形态,免疫荧光染色观察TRN中GAD67和MOR含量的变化。

结果:丘脑腹后外侧核出血大鼠模型的运动功能未见明显异常表现;模型组VPL内神经元尼氏体坏死,萎缩,空泡变性;对照组TRN内MOR数量为77.77±9.45,ICH后7天减少到30.00±4.90(P<0.05),ICH后14天为23.30±2.05(P<0.05),ICH后28天10.50±2.87(P<0.05);GAD67阳性细胞数量对照组为78.67±7.77,而ICH后7天为27.00±5.35(P<0.05),ICH后14天为41.67±5.44(P<0.05),ICH后28天为26.00±6.13(P<0.05)。

结论:大鼠VPL注射Ⅳ型胶原酶能成功制备丘脑出血模型,模型组大鼠的运动功能无明显变化,模型组大鼠TRN中GAD67蛋白减少,MOR数量减少。

【总页数】5页(P34-38)【作者】冯乘铭;寇珍珍;周红英;李云庆;蔡志平【作者单位】内蒙古科技大学包头医学院;空军军医大学人体解剖与组织胚胎学教研室暨梁銶琚脑研究中心;西安医学院继续教育学院【正文语种】中文【中图分类】R74【相关文献】1.头部X线照射后大鼠血清中糖皮质激素含量及脾细胞中糖皮质激素受体变化机制的研究2.大鼠单侧耳蜗损伤后蜗核中GluR2/3受体表达的变化3.结肠炎诱导大鼠行为学变化及骶髓后连合核和丘脑板内核群中GFAP表达的意义4.去卵巢后大鼠骨组织中核因子κB受体活化因子配体和骨保护素表达的变化5.头部X线照射后大鼠血清中皮质酮含量和脾细胞中糖皮质激素受体变化及其相互因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。