荧光原位杂交技术在临床病埋中的应用ppt课件
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滤泡性淋巴瘤
• 探针: BCL2/IGH （双色双融合探针）
BCL2基因位于18q21， IGH基因位于14q32. BCL2/IGH 融合基因导致BCL2蛋白的过度表达，从而抑制B细胞凋亡， 使B细胞持续增殖引发肿瘤。
• BCL2/IGH融合基因检测意义:
辅助诊断FL ：BCL2/IGH重排发生在约80%-85%的FL患 者中。
MYC
MYC
14 正常
18
14
18
异常
.
双色单融合探针(DC, SF Trans)
BCR
ABL
9
正常
22
ABL
BCR
9
异常
22
.
额外信号探针(ES)
ABL
BCR
ABL
BCR
9
正常
22
9
异常
22
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双色双融合探针( DC,DF Trans)
IGH
BCL2
IGH
BCL2
14 正常
18
14
异常
18
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三、FISH检测 在常见肿瘤中的应用与意义
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MALT淋巴瘤
• 探针： MALT1（双色分离探针） API2/MALT1（双色双融合探针）
452
Blue单通道
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二、常用探针种类
• 单色探针(single color probe, SC) • 双色探针(dual color probe, DC) • 三色探针(triple color probe, TC) • 双色分离探针(dual color, break apart probe. DC,BCR) • 双色单融合探针(dual color, single fusion. DC, SF
CCND1基因位于11q13，IGH基因位于14q32。 CCND1/IGH融合基因导致CCND1蛋白过度表达，可促进细胞 增生。
• CCND1/IGH融合基因检测意义
CCND1基因重排和(或)高表达是MCL的特征，FISH探 针检测CCND1/IGH的阳性率可以达到96%。
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CCND1/IGH正常
30%~40%非小细胞肺癌存在EGFR基因异常. 筛选酪氨酸激酶抑制剂适用者：EGFR基因 增多的患者，应用Iressa/Tarceva治疗的有效率为 35%，疾病控制率高达70%。
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EGFR (-) 2G + 2R Ratio: <2.0, EGFR FISH (-)
EGFR (+) Ratio: >2.0, EGFR FISH (+)
TOP2A基因两种异常：扩增和缺失。
• TOP2A基因检测的意义：
存在TOP2A基因异常的患者预后差，尤其是基因缺失 的患者预后更差。
TOP2A基因异常患者对于含蒽环类药物的治疗方案更 敏感。
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非小细胞肺癌
• 探针：EGFR/CSP7（双色探针）
EGFR基因异常：扩增和拷贝数增加。
• EGFR基因检测的意义：
BCL2/IGH持续阴性的FL患者3年生存率为100%，而阳 性者3年生存率只有54%；阴性者3年疾病无进展的患者 87.5%，而阳性者只有13%。
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BCL2/IGH 正常
BCL2/IGH断裂、平衡易位
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弥漫性大B细胞淋巴瘤
• 探针：BCL6（双色分离探针）
BCL6基因位于3q27，主要有t(3;14)，t(3;22)和 t(2;3)3种易位，分别是BCL6与免疫球蛋白Ig的重链(IGH)、 λ轻链(IGL)、κ轻链(IGK)区域易位。
筛选分子靶向药物的适用者：HER2基因扩增患者适合 使用曲妥珠单抗药物。
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Her2 (-) 2G + 2R Ratio: 1/1 <2.2/1, Her2 FISH (-)
Her2 (+++) Ratio: >2.2/1, Her2 FISH (+)
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• 探针：TOP2A/CSP17（双色探针）
• BCL6 基因断裂检测意义
目前研究确定至少40%的DLBCL涉及3q27染色体易位或 者BCL6基因重排。
BCL6阳性患者诊断治疗36个月后，疾病停止发展的比 率为82%，携带有BCL6重排的病例预后较好。
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BCL6正常
BCL6断裂
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套细胞淋巴瘤
• 探针：CCND1/IGH（双色双分离探针）
约80%的伯基特淋巴瘤病例发生t(8；14)（q24;q32）； 约15%的伯基特淋巴瘤病例发生t(2；8)(p11;q24)； 约5%发生t(8；22)（q24;q11）。 C-MYC基因断裂重组可能是伯基特淋巴瘤的一个标志， 可以应用于临床上伯基特淋巴瘤的辅助诊断。
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C-MYC正常
C-MYC断裂
CCND1/IGH断裂易位
.
伯基特淋巴瘤
• 探针:C-MYC（双色分离探针）
8号染色体上C-MYC基因最常见的是t(8；14)，导致8 号染色体上C-MYC基因和l4号染色体上IGH增强子元件并列, 也可发生t(2；8)(p12；q24)，或t(8；22)(q24；ql1)
• C-MYC基因断裂检测意义
Trans)
• 额外信号探针(extra signal. ES) • 双色双融合探针
(dual color,dual fusion probe. DC,DF Trans)
.
单色探针(SC)
CEP8
正常
.
异常
双色探针(DC)
HER2
CEP17
正常
.
异常
三色探针(TC)
正常
异常
X
Y
CEP18
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双色分离探针(DC,BCR)
荧光原位杂交技术(FISH)在 临床病理中的应用与质控
广西至科大学一附院病理科 王华
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• 荧光原位杂交技术(FISH):
用带有荧光素标记的核酸探针与组织细 胞中待测的核酸(DNA、RNA)按碱基配对 的原则进行特异性结合，在荧光显微镜下 显示细胞基因状态的方法。
FISH在临床病理中的应用
辅助病理诊断、判断预后、指导临床治疗
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乳腺癌
• 探针: HER2/CSP17（双色探针）
• HER2基因检测意义：
HER2基目扩增的患者预后差:无病生存和总生存期缩 短，淋巴结转移几率高，复发凤险高。
指导内分泌冶疗：HER2基因扩增患者对内分泌治疗产 生耐药。
指导合理选择辅助化疗方案：HER2基因扩增患者宜采 用紫杉醇化疗和高强度的蒽环类药物方案。
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一、常用荧光素及滤光片类型
荧光素颜色 激发波长 发射波长 常用滤光片
Red(红色)
592
Orange(橙色) 559
Green(绿色)
497
Aqua(青蓝色) 433
DAPI(蓝色)
367
612
Red单通道
588
Orange单通道
Gຫໍສະໝຸດ BaiduO双通道
524
Green单通道
G/O双通道
480
Aqua单通道
滤泡性淋巴瘤
• 探针: BCL2/IGH （双色双融合探针）
BCL2基因位于18q21， IGH基因位于14q32. BCL2/IGH 融合基因导致BCL2蛋白的过度表达，从而抑制B细胞凋亡， 使B细胞持续增殖引发肿瘤。
• BCL2/IGH融合基因检测意义:
辅助诊断FL ：BCL2/IGH重排发生在约80%-85%的FL患 者中。
MYC
MYC
14 正常
18
14
18
异常
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双色单融合探针(DC, SF Trans)
BCR
ABL
9
正常
22
ABL
BCR
9
异常
22
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额外信号探针(ES)
ABL
BCR
ABL
BCR
9
正常
22
9
异常
22
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双色双融合探针( DC,DF Trans)
IGH
BCL2
IGH
BCL2
14 正常
18
14
异常
18
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三、FISH检测 在常见肿瘤中的应用与意义
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MALT淋巴瘤
• 探针： MALT1（双色分离探针） API2/MALT1（双色双融合探针）
452
Blue单通道
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二、常用探针种类
• 单色探针(single color probe, SC) • 双色探针(dual color probe, DC) • 三色探针(triple color probe, TC) • 双色分离探针(dual color, break apart probe. DC,BCR) • 双色单融合探针(dual color, single fusion. DC, SF
CCND1基因位于11q13，IGH基因位于14q32。 CCND1/IGH融合基因导致CCND1蛋白过度表达，可促进细胞 增生。
• CCND1/IGH融合基因检测意义
CCND1基因重排和(或)高表达是MCL的特征，FISH探 针检测CCND1/IGH的阳性率可以达到96%。
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CCND1/IGH正常
30%~40%非小细胞肺癌存在EGFR基因异常. 筛选酪氨酸激酶抑制剂适用者：EGFR基因 增多的患者，应用Iressa/Tarceva治疗的有效率为 35%，疾病控制率高达70%。
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EGFR (-) 2G + 2R Ratio: <2.0, EGFR FISH (-)
EGFR (+) Ratio: >2.0, EGFR FISH (+)
TOP2A基因两种异常：扩增和缺失。
• TOP2A基因检测的意义：
存在TOP2A基因异常的患者预后差，尤其是基因缺失 的患者预后更差。
TOP2A基因异常患者对于含蒽环类药物的治疗方案更 敏感。
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非小细胞肺癌
• 探针：EGFR/CSP7（双色探针）
EGFR基因异常：扩增和拷贝数增加。
• EGFR基因检测的意义：
BCL2/IGH持续阴性的FL患者3年生存率为100%，而阳 性者3年生存率只有54%；阴性者3年疾病无进展的患者 87.5%，而阳性者只有13%。
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BCL2/IGH 正常
BCL2/IGH断裂、平衡易位
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弥漫性大B细胞淋巴瘤
• 探针：BCL6（双色分离探针）
BCL6基因位于3q27，主要有t(3;14)，t(3;22)和 t(2;3)3种易位，分别是BCL6与免疫球蛋白Ig的重链(IGH)、 λ轻链(IGL)、κ轻链(IGK)区域易位。
筛选分子靶向药物的适用者：HER2基因扩增患者适合 使用曲妥珠单抗药物。
.
Her2 (-) 2G + 2R Ratio: 1/1 <2.2/1, Her2 FISH (-)
Her2 (+++) Ratio: >2.2/1, Her2 FISH (+)
.
• 探针：TOP2A/CSP17（双色探针）
• BCL6 基因断裂检测意义
目前研究确定至少40%的DLBCL涉及3q27染色体易位或 者BCL6基因重排。
BCL6阳性患者诊断治疗36个月后，疾病停止发展的比 率为82%，携带有BCL6重排的病例预后较好。
.
BCL6正常
BCL6断裂
.
套细胞淋巴瘤
• 探针：CCND1/IGH（双色双分离探针）
约80%的伯基特淋巴瘤病例发生t(8；14)（q24;q32）； 约15%的伯基特淋巴瘤病例发生t(2；8)(p11;q24)； 约5%发生t(8；22)（q24;q11）。 C-MYC基因断裂重组可能是伯基特淋巴瘤的一个标志， 可以应用于临床上伯基特淋巴瘤的辅助诊断。
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C-MYC正常
C-MYC断裂
CCND1/IGH断裂易位
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伯基特淋巴瘤
• 探针:C-MYC（双色分离探针）
8号染色体上C-MYC基因最常见的是t(8；14)，导致8 号染色体上C-MYC基因和l4号染色体上IGH增强子元件并列, 也可发生t(2；8)(p12；q24)，或t(8；22)(q24；ql1)
• C-MYC基因断裂检测意义
Trans)
• 额外信号探针(extra signal. ES) • 双色双融合探针
(dual color,dual fusion probe. DC,DF Trans)
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单色探针(SC)
CEP8
正常
.
异常
双色探针(DC)
HER2
CEP17
正常
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异常
三色探针(TC)
正常
异常
X
Y
CEP18
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双色分离探针(DC,BCR)
荧光原位杂交技术(FISH)在 临床病理中的应用与质控
广西至科大学一附院病理科 王华
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• 荧光原位杂交技术(FISH):
用带有荧光素标记的核酸探针与组织细 胞中待测的核酸(DNA、RNA)按碱基配对 的原则进行特异性结合，在荧光显微镜下 显示细胞基因状态的方法。
FISH在临床病理中的应用
辅助病理诊断、判断预后、指导临床治疗
.
乳腺癌
• 探针: HER2/CSP17（双色探针）
• HER2基因检测意义：
HER2基目扩增的患者预后差:无病生存和总生存期缩 短，淋巴结转移几率高，复发凤险高。
指导内分泌冶疗：HER2基因扩增患者对内分泌治疗产 生耐药。
指导合理选择辅助化疗方案：HER2基因扩增患者宜采 用紫杉醇化疗和高强度的蒽环类药物方案。
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一、常用荧光素及滤光片类型
荧光素颜色 激发波长 发射波长 常用滤光片
Red(红色)
592
Orange(橙色) 559
Green(绿色)
497
Aqua(青蓝色) 433
DAPI(蓝色)
367
612
Red单通道
588
Orange单通道
Gຫໍສະໝຸດ BaiduO双通道
524
Green单通道
G/O双通道
480
Aqua单通道