腺苷对缺氧复氧心肌细胞的保护作用_图文(精)
腺苷对缺氧_复氧心肌细胞的保护作用
H/ R injury of cultured cardiomyocytes; ( 2) exogenous ADO inhibits t he production of T NF af ter H/ R injury ; ( 3) exogenous ADO prevents t he act ivation of NF B, w hich may be the molecular mechanism of dow n regulat ion of T NF expression. Key words: adenosine; hypox ia/ reoxygenat ion injury; cardiomyocyt es 腺苷( adenosine, ADO) 作为心肌细胞的能量代 谢产物, 在缺 血预处理 的心脏保 护中具有 重要作 用。近来研究发现, ADO 可下调人和大鼠缺血心肌 组织肿瘤坏死因子 ( t umor necrosis f act or , T NF ) 的表达 , 而 T NF 是中性粒细胞介导缺血/ 再灌 注损伤的主要细胞因子[ 1] 。目前对 ADO 下调 T NF 表达的分子机制尚不清楚。有作者报道 , 心肌组 织缺 血/ 再灌 注 时, 核因 子 B ( nuclear fact or B, NF B) 活 性 持 续 增 高[ 2~ 4] , 且 最 近 有 研 究 表 明 ADO 可抑 制离体 心脏 缺血 / 再灌 注时 的 NF B 活 性 。而后者参与了一系列炎症因子的表达调控 , 包括 T NF 。本文通过观察外源性 ADO 对缺氧/ 复 氧( hypox ia/ reoxygenat ion, H / R) 心肌细胞的形态结 构、损伤指标、T NF 表达及 NF B 活性的影响 , 进一步从细胞水平明确 ADO 的心脏保护作用及其 机制, 并初步探讨心肌细胞缺氧/ 复氧损伤时 T NF 与 NF B 活性的关系, 为其临床应用提供理论依 据。
腺苷与心脏保护的研究进展_赵京林
·综 述·文章编号 1672-5301(2004)08-0658-04腺苷与心脏保护的研究进展100037 北京市,中国医学科学院 中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院心内科 赵京林 杨跃进(审校)关键词 腺苷;心肌缺血;心肌保护中图分类号 R-33 文献标识码 A 恢复冠状动脉(冠脉)血流和心肌再灌注对于缺血缺氧的心肌复苏是十分必要的。
然而缺血心肌在再灌注时也可导致心肌损伤。
腺苷是组织缺血时所释放的一种内源性因子,自从1985年Ely等[1]研究发现它对心肌细胞亦有直接保护作用以来,对腺苷的心肌保护作用的研究不断深入,近年来取得了重要进展。
本文就腺苷的代谢、心肌保护作用及其临床应用进展作一综述。
1 腺苷的代谢腺苷(Adenosine)是一种嘌呤核苷,由糖苷键连接腺嘌呤和核糖而成。
它是腺苷酸的前体,又是其代谢产物,广泛分布于体内各种组织中。
在氧含量正常时,腺苷保持低水平持续释放。
通过S-腺苷同型半胱氨酸经S-腺苷同型半胱氨酸酶水解,和腺苷一磷酸经胞质中或细胞外的5′-核苷酸酶脱磷酸2种方式而生成腺苷。
细胞内腺苷有3种转移途径:在腺苷激酶的作用下使一磷酸腺苷(AM P)重新磷酸化、在腺苷脱氨酶的作用下使次黄嘌呤脱氨基、自细胞内向外释放[2]。
这些转移途径可以在有氧的条件下使游离的腺苷保持较低的水平。
心肌在缺血/缺氧时,由于氧供需失衡最终导致ATP分解,腺苷的释放量可增加50倍。
心肌细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞均可生成腺苷。
AMP可以在外源和内源性5′-核苷酸酶的作用下脱磷酸而生成腺苷。
腺苷经自由扩散透过心肌细胞,并在组织间液中蓄积。
经胞旁清除作用进入血管腔内(较慢,在生理条件下为10%);或经核苷酸载体摄入内皮细胞,在细胞内代谢为肌苷和次黄嘌呤,还可以进一步分解为黄嘌呤和尿酸[2](图1)。
因此,入血之后,腺苷可被内皮细胞快速摄取并降解。
血中腺苷的半衰期较短,不超过10s。
腺苷
精密吸取上述供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，以紫外检测器检测，检测波长为260nm，记录腺苷的 响应值，计算其含量。
临床应用
腺苷是内源性嘌呤核苷，能使房室结传导减慢，阻断房室结折返途径，阵发性室上性心动过速（PSVT）（伴 或不伴预激综合征）患者恢复正常窦性心律。腺苷能迅速为红细胞所摄取，因此作用时间很短，游离腺苷的血浆 半衰期小于10s。PSVT的最常见形式是通过折返途径，因此腺苷能有效地终止这类心律失常。对非房室结或窦房 结折返性心律失常（如房扑、房颤、房速、室速），腺苷不能使其终止，但可产生暂时性房室或室房阻滞，有助 于作出鉴别诊断。
腺苷的副作用（潮红、气急、胸痛）较常见，但多为一过性（1～2 min内消失）。室上这终止后常见短暂的 窦性心动过缓和室性早搏。因此对有窦缓或房室阻滞者慎用。由于腺苷的作用时间短，因此对血流动力学几无影 响，较少引起低血压。腺苷与某些药物具有相互作用。
生理功能
腺苷是一种遍布人体细胞的内源性核苷，可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还 参与扩张冠脉血管，增加血流量。可用于治疗室上性心动过速。腺苷对心血管系统和肌体的许多其它系统及组织 均有生理作用。腺苷是用于合成三磷酸腺苷（ATP）、腺嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷的重要中间体。
本方法采用高效液相色谱法测定灵芝子珍珠口服液中腺苷的含量。 本方法适用于灵芝子珍珠口服液。
取供试品加甲醇，超声处理，放置待沉淀完全，滤过，取许滤液蒸干，残渣加水溶解，以水饱和的正丁醇提 取，正丁醇提取液蒸干，残渣加50%甲醇溶解并定容，摇匀，作为供试品溶液。注入高效液相色谱仪，以紫外检 测器检测，检测波长为260nm，记录腺苷的响应值，计算其含量。
腺苷
有机化合物
目录
缺氧后处理对缺氧／复氧心肌细胞的保护作用及其机理研究
机制 。本实验在心肌 细胞缺 氧／ 氧（ ｙｏｉ ｒｏｙｅａｏ ， ／ 模型上 观察 Ｈ Ｒ及缺氧 后处理 （ ｙ 复 ｈｐｘａ ｅｘｇｎｆ ｎ Ｈ Ｒ） ／ ｉ ／ ｈ—
Ｔ ｏ ｅ ｔｖ ｆｅ ｔ ｏ ｐ ｘ ｃ Ｐ ｓ ｃ ｎ ｉｉｎ ｎ Ｈ Ｉｃ ｅ ￣ ／ｒ ｐ ｒ ｕ ｉｎ －ｎｄ ｃ ｄ Ｍ ｙ ｃ ｒ ｉｌ ｈｅＰｒ ｔｃ ｉ ｅ Ｅｆ ｃ ｆ Ｈｙ ｏ ｉ ｏ ｔ ｏ ｄ ｔ ｉ ｇ Ｏ ｓ ｈ ｎ ｉ ｅ ｅ ｆ ｓｏ Ｉ ｕ ｅ ｏ ａ ｏ ａ ｄａ
ｐｘｃ ｏｔ ｎ ｉｏｉｇＨ—ｏｔ ） Ｇ Ｐ ８ Ｃ Ｔ表 达以及 ｃｓａｅ１ ｏｉ ｐ ｓ ｏｄｔ ｎ ， ｐ ｓ 对 Ｒ ７ 、 Ｒ ｅ ｉ ｎ Ｃ ａｐｓ．２活化的影响 ， 探讨 内质 网应激 （ ｎｏ ｅｄ—
ｐ ｍ ｅｒ ｉ ｌｍ ｓ ｅｓＥ Ｓ 在 Ｈ－ｏｔ 护机制 中的意 义及 其细胞信号 转导机 制 。方法 ｌ ｉ ｅｃ ｕ ｔ ｓ，Ｒ ） ｓ ａ ｔｕ ｒ ｐｓ Ｃ保
抑 制作用 （ Ｃ Ｔ蛋 白 其 Ｒ 相对 水平较 Ｈ Ｒ＋ —ｏＣ组 高 ４．％ ） ／ Ｈ ｐｓ ｔ ７２ 。结论
Ｈ ｐｓ ． ｔ ｏ Ｃ可调控 Ｅ Ｓ反应 程 Ｒ
度． 抑制 Ｈ Ｒ诱导的过度 Ｅ Ｓ 减轻内质网凋 亡信号介 导的细胞凋 亡 的发生 。ｐ ８Ｍ Ｐ ／ Ｒ， ３ Ａ Ｋ及 Ｊ Ｋ信 号 Ｎ
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｔ ｅ Ｉ ｈｍｃｐｓｏｄｉ ｉ （－ｏ Ｃ ｉ ａ ｐｒｎ ｅｄｇ ｏｓｐ ｔ ｔｅ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅ ｖ ｓ ｅ ｉ ｏｅｎｉ ｎ ｇ Ｉ ｓ ） ｓ ｎｉ ｏａｔ ｎｏｅ ｕ ｒｅ ｉ ｃ ｉ ｃ ｔ ｔ ｎ ｐｔ ｏ ｍ ｔ ｎ ｏ ｃｖ
缺氧诱导因子-1在缺氧预处理心肌保护中的作用及其机制研究
缺氧诱导因子-1在缺氧预处理心肌保护中的作用及其机制研究刘秀华;武旭东;蔡莉蓉;刘凤英【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2004(020)003【摘要】目的:研究缺氧诱导因子-1(HIF-1)在缺氧预处理(HPC)心肌细胞保护中的作用及其机制.方法:在培养的SD乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型上,观察HPC 对于24 h后心肌细胞H/R损伤的影响,以MTT法测定心肌细胞存活率,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.制备心肌细胞蛋白提取物,以磷酸化的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)抗体测定HPC后不同时间ERK1/2活性,以聚丙烯酰胺电泳迁移实验观察HIF-1α磷酸化,并观察蛋白磷酸酶激动剂BDM和ERKs的上游激酶(MEK1/2)抑制剂PD98059对于HPC诱导的HIF-1α磷酸化以及心肌细胞保护作用的影响.结果:HPC可以提高心肌细胞H/R后存活率、减少LDH漏出,并激活ERK1/2,使HIF-1α发生磷酸化;蛋白磷酸酶激动剂BDM和ERKs的上游激酶MEK 抑制剂PD98059可以消除HPC诱导的HIF-1α磷酸化和心肌细胞保护作用.结论:HPC可以提高乳鼠心肌细胞对于H/R的耐受性,其机制涉及ERKs介导的HIF-1α磷酸化.【总页数】4页(P343-346)【作者】刘秀华;武旭东;蔡莉蓉;刘凤英【作者单位】解放军总医院,病理生理学研究室,北京,100853;解放军总医院,南八科,北京,100853;解放军总医院,病理生理学研究室,北京,100853;解放军总医院,病理生理学研究室,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R541.4【相关文献】1.缺氧预处理在心肌保护中的作用机制 [J], 黄杰;郑宏2.缺氧诱导因子-2α在小鼠DSS结肠炎中的作用及其机制研究 [J], 张顺;杜涛;蒋小华;宋纯3.大鼠离体心脏模型中雷帕霉素调节HIf1α干预缺氧预处理心肌保护作用的机制[J], 伊利亚尔·买买提力;俞瑾;郭海;郑宏4.缺氧诱导因子在胃癌中的作用及机制研究进展 [J], 赵乙锾;徐洪雨5.缺氧诱导因子-1α在缺氧预处理预防心肌细胞损伤中的作用 [J], 徐菲菲;刘秀华;蔡莉蓉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
缺氧复氧致心肌AC16细胞损伤途径的研究
缺氧复氧致心肌AC16细胞损伤途径的研究DAI Wen-zhi;YE Wen-feng;HE Yuan;CHEN Can;HUANG Shi-an;LEI Wei;GUO Jun【摘要】目的:探讨缺氧复氧条件下不同复氧时间致心肌细胞损伤的途径.方法:培养人心肌AC16细胞,先置入1％O2、无糖无血清条件下培养24 h,再更换含10％胎牛血清的低糖DMEM联合21％O2进行不同时间的复氧培养,采用CCK-8法检测细胞活力,并通过Western blot法检测不同细胞损伤途径标记分子的蛋白水平,如细胞自噬相关蛋白LC3-II/-I、细胞焦亡相关蛋白caspase-1和gasdermin D 及凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl2.结果:与空白对照组相比,各缺氧复氧组细胞活力降低,且随复氧时间延长,细胞活力相应持续降低(P<0.05),同时缺氧组LC3-II/-I上调(P<0.05),而复氧后LC3-II/-I较缺氧组下降,但仍高于对照组;此外,cleaved caspase-1和cleaved gasdermin D蛋白在复氧6 h组和复氧12 h 组表达水平上调(P<0.05);cleaved caspase-3水平和Bax/Bcl2在复氧12 h组上调(P<0.05).结论:缺氧致心肌AC16细胞的自噬上调,并随复氧时间增加自噬水平减弱,且在复氧过程中细胞焦亡的激活早于细胞凋亡.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2019(035)007【总页数】4页(P1232-1235)【关键词】缺氧复氧;心肌细胞;细胞自噬;细胞焦亡;细胞凋亡【作者】DAI Wen-zhi;YE Wen-feng;HE Yuan;CHEN Can;HUANG Shi-an;LEI Wei;GUO Jun【作者单位】;;;;;;【正文语种】中文【中图分类】R363.2;R541.4缺血性心脏病是心血管系统中致死率和致残率最高的疾病之一，临床使用经皮冠状动脉介入术疏通狭窄甚至闭塞的冠状动脉管腔，从而改善心肌血流灌注和阻止梗死面积扩大，是治疗缺血性心脏病的基本原则和有效方法[1]。
缺氧时腺苷的变化
缺氧时腺苷的变化
当人体缺氧时，腺苷水平会增加。
缺氧导致细胞能量供应不足，细胞开始通过一系列途径来产生额外的能量。
一种重要的途径是通过腺苷酸的代谢来产生能量。
腺苷酸在细胞内转化为腺苷，腺苷可以通过特定的受体进入细胞内，然后被转化为腺苷酸。
腺苷和腺苷酸之间的循环途径被称为腺苷循环。
在缺氧的条件下，腺苷循环的速度增加，导致腺苷水平增加。
腺苷的产生可以通过两个主要途径：核苷酸酶的磷酸化和核苷酸酶的去乙酰化。
这些途径可以产生腺苷来提供额外的细胞能量。
在缺氧时，腺苷的增加有助于维持细胞的能量供应和生存。
腺苷可以通过活化细胞内的能量生成途径来提供额外的能量。
此外，腺苷还具有调节细胞代谢和保护细胞的作用。
腺苷可以通过与特定的受体相结合来调节细胞内的信号转导，从而调节细胞的代谢和生理功能。
此外，腺苷还可以通过抗氧化和抗炎作用来保护细胞，减轻缺氧引起的损伤。
因此，腺苷的增加在缺氧条件下可能起到一定的保护作用。
腺苷药物预适应对缺血心肌的保护作用
腺苷药物预适应对缺血心肌的保护作用摘要】目的：分析腺苷药物预适应对缺血心肌的保护作用及Mn-SOD、ICAM-1﹑iNOS的含量变化。
方法：试验用Wistar 大鼠140只，随机分为：对照组﹑心肌梗塞组﹑IP组﹑腺苷PP1个循环组﹑腺苷PP 2个循环组﹑腺苷PP 3个循环组﹑腺苷PP 4个循环组。
通过TTC（Triphenyl tetrazolium chloride）染色方法来测定心肌梗塞的面积；通过氧化还原酶法测定血清中的Mn-SOD、ICAM-1﹑iNOS的含量变化。
结果：⑴心肌梗塞面积在心肌梗塞组中最大，IP后心肌梗塞面积有明显的下降，两者之间有明显的统计学差异。
在PP三个循环组，心肌梗塞面积达到最小，在PP四个循环组，心肌梗塞面积较PP三个循环组稍有升高，两者之间没有统计学差异（p>0.05）。
⑵心肌梗塞以后Mn-SOD含量与对照组相比明显升高(p<0.05)。
PP以后血清中的Mn-SOD含量亦有明显的升高，从第一个循环到第三个循环，随着循环次数的增加而增加，高峰在PP三个循环的时间，与心肌梗塞组相比较两者之间有明显的统计学差异（p<0.01）；第四个循环Mn-SOD的含量较三个循环组反而稍有下降，两者之间没有统计学差异(p>0.05)。
⑶心肌梗塞以后血清中的ICAM-1含量表达较对照组有明显的升高，两者之间有统计学差异（p<0.05）。
ICAM-1的含量随PP循环次数的增加而增加，其含量在PP四个循环的时间达到最高峰，其同心肌梗塞组之间有明显的统计学差异（p<0.01）。
⑷心肌梗塞以后血清中的iNOS含量表达较对照组有明显的升高，两者之间有统计学差异（p<0.05）。
iNOS的含量随PP循环次数的增加减少， PP四个循环最低，同心肌梗塞组之间有明显的统计学差异（p<0.01）。
结论：PP对梗塞心肌具有保护作用，Mn-SOD、ICAM-1﹑iNOS在PP过程中有明显的变化，可能参与了心肌PP 的过程。
缺氧兔心肌血流量的变化及一氧化氮和腺苷的调节作用
缺氧兔心肌血流量的变化及一氧化氮和腺苷的调节作用
黄庆愿
【期刊名称】《中国应用生理学杂志》
【年(卷),期】1996(000)002
【摘要】观察了急性缺氧和慢性间断性缺氧兔心肌血流量，心肌组织中腺苷和GMP含量的变化及Nω-NO3－L精氨酸（L－NA）阻断一氧化氮（NO）生成后的影响。
结果表明，急性缺氧兔心肌血流量增加，心肌组织中腺苷和cGMP含量
增高，静脉输入L－NA后，心肌血流量减少，同时心肌组织中cGMP含量降低，腺苷含量进一步增高，慢性缺氧兔心肌血流量无明显变化，红细胞压和（Hct)增高，抑制O合成后，右室心肌血流量减少，左室心肌血流量无明显变化，说明NO和
腺苷均参与急性缺氧时冠状血管扩张机制；NO参与慢性缺氧兔心肌血管基础张力调节。
【总页数】1页(P170)
【作者】黄庆愿
【作者单位】第三军医大学病理生理学教研室，重庆630038;第三军医大学病理
生理学教研室，重庆63003
【正文语种】中文
【中图分类】R594.302
【相关文献】
1.慢性缺氧时心肌血流量的变化及一氧化氮和内皮素-1的调节作用 [J], 周玉峰;万强;谢增柱;刘福玉;廖为公
2.缺氧时ET-1、NO、TXA2、PGI2的变化及对心肌血流量的调节作用 [J], 周玉峰;黄梅;邓聪颖;汤立新
3.环磷酸腺苷和一氧化氮在后适应保护缺氧/复氧损伤心肌细胞中的作用 [J], 王茜;刘革修;宾娟;徐江平
4.缺氧时TXA2和PGI2对心肌血流量变化的调节作用 [J], 周玉峰;黄梅;邓聪颖;汤立新
5.N~ω─硝基─L─精氨酸对兔慢性缺氧心肌区域血流量的影响 [J], 黄庆愿;刘福玉;谢增柱;张国斌
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腺苷的心肌保护作用机制及临床应用
血／ 再灌 注损伤 ， 缩小梗死 面积。Ｔ ｕｅｔａ ｏｆｋ ｉ ｓ ｎ等 研 究 示 ， 急性心肌梗死（ Ｍ ） Ａ Ｉ 后腺苷 Ａ 受体激动可 以抑制炎症 反应 和弱化心室收缩 功能 障碍 。
２ 腺 苷 心 肌保 护 作 用 的 可 能 机 制 ２ １ 抑 制 炎 症 反 应 ． 冠 心 病 是 炎 症性 疾病 ， 症在 冠 心 病 的 发 生 和 发 展 中 起 炎 重 要 作 用 ， 种 炎 症 细 胞 和 因 子参 与这 一 过 程 。肥 大 细胞 脱 多
缺血期后 ， 再灌注开始 以前 ， 对冠状动脉进行短暂、 重复地开
在 近 年 取得 了重 要 的进 展 。笔 者 就 腺 苷 的心 肌 保 护 作 用 及
长时间缺血 中延迟并减轻心肌损伤 ， 即缺血预处理 。腺苷能 直接诱 导 血管平滑肌舒 张 ， 可能是通过 激活细胞表面 Ａ 受
其临床应用进展作一综述 。
１ 腺 苷 及 受体
体来 实现 。心肌缺氧时内源性腺苷释放 ， 可直接作用于血管 平滑肌 Ａ 受体 ， 也可通过刺激内皮细胞 的 Ａ 受体 间接起作
陈韵岱
可以削弱非梗 死 区心 肌纤维化 ， 改善心室 功能。腺苷 并 受体 缺陷可以避免压力超负荷的左心室发展为心力衰竭 Ｊ 。
２ ３ 介 导缺 血 预 处 理 与 缺 血 后 处理 ． 心肌 在 经 受 了多 次 短 暂 的 缺 血／ 灌 注 后 ， 在 随 后 的 再 能
保护作用 以来 ， 针对腺 苷心肌保护作 用的研究 不断深人 ， 并
用。Ｈ ｃ ｈｕｅ 等 对 离 体 大 鼠心脏 进 行缺 血／ 灌 注之 ｏｈ ａｓｒ 再 前， 应用腺苷 Ａ 受 体激动剂灌注心脏 ， 以改善冠 状动脉血 可
腺苷的作用
腺苷的作用腺苷（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）是一种嘌呤核苷，具有广泛的心脏效应。
除了人们熟知的负性变时、变力、变传导以及快速显著的冠脉扩张作用外，大量研究表明，腺苷还具有触发或介导缺血预适应、减轻再灌注损伤等心脏保护效应。
一、腺苷受体和心脏效应腺苷受体是一种与Ｇ蛋白耦联的糖蛋白，目前发现的腺苷受体有４型：Ａ１、Ａ２ａ、Ａ２ｂ和Ａ３。
腺苷的负性变时、变力、变传导效应与Ａ１受体有关；扩张冠脉与Ａ２受体有关；缺血预适应与Ａ１和Ａ３受体有关，另外，Ａ２ａ受体激动还可抑制血小板聚集。
二、心律失常的诊断和治疗腺苷是美国ＦＤＡ批准的转复阵发性室上性心动过速ＰＳＶＴ的一线药物，美国心脏学会指定的治疗ＰＳＶＴ首选药物。
２０００年统计，美国８０％的ＰＳＶＴ使用腺苷治疗。
几乎可以终止所有以房室结作为部分折返通路的ＰＳＶＴ。
北京协和医院等的研究显示：腺苷成功转复ＰＳＶＴ所需的时间仅为维拉帕米的１／１０（３４．２±１９．５秒对４１４．４±１９１．２秒）不良事件少于维拉帕米，无严重不良事件。
腺苷也用于心律失常的鉴别诊断。
对于窄ＱＲＳ心动过速，腺苷能终止的大多需要以ＡＶＮ做部分折返环；不能终止房扑、房颤和各种房速。
宽ＱＲＳ心动过速，腺苷可以终止伴差异传导的ＰＳＶＴ；不能终止室性心动过速。
对隐性预激和间歇预激，腺苷可以使预激波变得明显。
腺苷的负性变时作用还用于无创诊断病窦综合征（ＳＳＳ）；静脉冲击腺苷，可测定腺苷校正窦房结恢复时间。
三、冠脉循环评价１、腺苷负荷试验腺苷负荷核素心肌显像在国外已被大量用于冠心病的诊断及对其预后的评价。
Ｖｅｒａｎｉ等报道，腺苷２０１ＴＩ心肌显像诊断冠心病的敏感性为８１％，特异性为９４％。
另有研究显示，腺苷２０１ＴＩ心肌显像显示的心肌灌注异常范围的大小是判断心脏事件最重要的预测因子。
协和医院的研究显示，腺苷负荷超声心动图诊断冠心病的敏感性为９２．３％，特异性为８２．３％。
腺苷负荷试验操作相对简便易行半衰期短（＜１０秒），副作用少并自行迅速消失，患者易于接受；适用于因各种原因不能运动或不能达到目标运动量的病人。
缺氧复氧细胞结果处理
缺氧复氧细胞结果处理缺氧复氧细胞结果处理缺氧和复氧是生物学中常见的概念，缺氧指的是细胞或组织缺乏足够的氧气供应，而复氧则是指在一段时间内缺氧后，再次提供足够的氧气给予细胞或组织。
在生物体内，缺氧和复氧会引起一系列生理和病理变化，其中包括细胞结果处理。
一、缺氧和复氧对细胞结果的影响1. 缺氧对细胞结果的影响当细胞或组织处于缺乏足够的氧供应时，它们可能会出现一系列生理和病理变化。
例如，在心肌梗死中，心肌因为血液供应不足而发生坏死。
此外，在癌症中，由于肿瘤组织过度增长导致其内部血管供应不足而发生缺血现象。
2. 复氧对细胞结果的影响当缺乏足够的氧供应时，如果能够及时提供充足的氧，则可以逆转许多与缺血有关的损伤。
这种现象被称为复氧。
复氧可以促进细胞的再生和修复，并促进细胞的生长和分化。
二、缺氧和复氧对基因表达的影响1. 缺氧对基因表达的影响缺氧可以引起一系列基因表达的变化，包括启动一些特定的信号通路，例如HIF-1信号通路。
HIF-1是一种转录因子，它可以在缺氧条件下激活，并启动细胞内一系列适应性反应，例如血管生成、糖代谢和酸碱平衡等。
2. 复氧对基因表达的影响与缺氧相比，复氧可以逆转许多与缺血有关的损伤，并恢复正常的基因表达模式。
此外，在某些情况下，复氧还可以诱导新基因表达，例如抗炎和抗凋亡基因。
三、缺氧和复氧对蛋白质合成的影响1. 缺氧对蛋白质合成的影响当细胞或组织处于缺乏足够的氧供应时，它们可能会出现蛋白质合成受阻的情况。
这是因为缺氧会导致细胞内ATP生成减少，从而影响蛋白质合成所需的能量供应。
2. 复氧对蛋白质合成的影响与缺氧相比，复氧可以逆转许多与缺血有关的损伤，并恢复正常的蛋白质合成模式。
此外，在某些情况下，复氧还可以促进新蛋白质合成，例如抗炎和抗凋亡蛋白。
四、缺氧和复氧对细胞死亡的影响1. 缺氧对细胞死亡的影响当细胞或组织处于缺乏足够的氧供应时，它们可能会出现一系列生理和病理变化，并最终导致细胞死亡。
腺苷在心血管疾病中的应用
腺苷在心血管疾病中的应用腺苷是存在于几乎每个细胞内的一种内源性核苷。
1998年获得了美国FDA 的批准后，腺苷在临床心血管疾病的诊断和治疗方面得到了广泛的应用。
本文就最近几年对腺苷在心血管疾病的诊断和治疗方面的进展做一综述。
1 腺苷的药理心肌细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞都能迅速地合成、转运腺苷，参与腺苷的代谢，并调节细胞间质及血浆中的腺苷浓度。
在正常的细胞代谢过程中，单磷酸腺苷脱磷酸和S腺苷半胱氨酸降解可以产生少量的腺苷。
腺苷形成后，被释放到细胞外液中与其他细胞发生作用。
细胞外的腺苷会被细胞膜上特异的跨膜核苷转运系统摄取，而很快地清除，这种转运系统可以被罂粟碱和潘生丁所阻断。
一旦进入细胞内，腺苷又将很快在腺苷磷酸激酶的作用下形成单磷酸腺苷，或者在腺苷脱氨酶的作用下脱氨基形成肌苷，这些细胞内的代谢产物是没有活性的。
肌苷可以完整地离开细胞或者再被降解成次黄嘌呤核苷酸和黄嘌呤，最后变成尿酸，而单磷酸腺苷则参与了细胞的高能磷酸池。
细胞外的腺苷可以通过细胞表面特异的腺苷受体而发挥作用。
2 腺苷的使用方法静脉应用腺苷后，血液循环中的腺苷主要是通过经细胞和血管内皮细胞的摄取，而被快速清除，半衰期＜10 s。
超生理量的腺苷可以被细胞外的腺苷脱氨酶通过脱氨作用降解。
腺苷的激活和灭活都不需要通过肝脏或者肾脏代谢。
在临床实践中，腺苷可以通过两种途径应用。
2.1 静脉应用成人推荐的腺苷持续静脉滴注的剂量为140 μg/（kg·min）。
在进行放射性同位素检查时，如201铊，应该在注射腺苷的中点注射同位素。
开始静脉推注2 min内冠脉就可以达到最大的扩张状态。
在弹丸式注射治疗室上性心律失常的情况下，可以从外周静脉弹丸式推注腺苷，首次6 mg，每1～2 min重复给12 mg，最大总剂量为30 mg。
2.2 冠脉内应用冠脉内诊断或者治疗性应用腺苷的推荐剂量为弹丸式注射18～30 μg。
需要时可以重复多次（可以达到10～15次）。
腺苷对缺氧复氧心肌细胞的保护作用_图文(精)
研究论文腺苷对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用王兴祥1,3,周利龙1,丁家望2,冯义柏1,程龙献11华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科,武汉430022;2宜昌市中心人民医院,宜昌443000摘要:本研究旨在探讨腺苷(adenosine,ADO对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R心肌细胞的保护作用及其分子机制。
将原代培养的新生大鼠心肌细胞分成H/R对照组和ADO(110μmol/L保护组。
用倒置相差显微镜观察心肌细胞的生长状态。
检测两组培养基质乳酸脱氢酶(LDH活性和心肌细胞Ca2+和丙二醛(MDA浓度。
用EL ISA法检测肿瘤坏死因子(TNF2α的表达,并用凝胶电泳迁移率改变法(EMSA测定核因子(NF2κB结合活性。
所得结果如下:(1心肌细胞H/R培养后皱缩、变圆,伪足减少,ADO组心肌细胞的形态变化小于对照组;(2 ADO减少缺氧和复氧期间心肌细胞LDH的漏出(bothP<0101;(3ADO降低缺氧和复氧期间心肌细胞内的Ca2+浓度(both P<0101;(4ADO降低缺氧和复氧期间心肌细胞MDA浓度(both P<0101;(5ADO抑制缺氧和复氧期间TNF2α的表达(both P<0101;(6ADO抑制缺氧和复氧期间心肌细胞NF2κB结合活性(both P<0101。
以上结果提示:(1外源性ADO可减轻心肌细胞的H/R损伤;(2外源性ADO抑制H/R期间心肌细胞TNF2α的表达;(3外源性ADO可能通过抑制心肌细胞NF2κB结合活性下调TNF2α的表达。
关键词:腺苷;缺氧/复氧损伤;心肌细胞中图分类号:Q463;R540Adenosine protects cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation injuryWAN G Xing2Xiang1,3,ZHOU Li2Long1,DIN G Jia2Wang2,FEN G Yi2Bai1,CHEN G Long2Xian1 1Depart ment of Cardiology,U nion Hospital A f f iliated to Tongji Medical College,Huaz hong U niver2 sity ofScience and Technology,W uhan430022;2Yichang People Hospital,Yichang443000Abstract:The aim of this study was to investigate the protective effect of adenosine(ADOon car2 diomyocytes following hypoxia/reoxygenation(H/Rand its molecular mechanism.Primary cultured cardiomyocytes of neonatal rats were dividedin to two groups,namely H/R(controland ADO(110μmol/Lgroups.The morphologic changes in cardiomyocytes were observed under an inverted phase2 contrast microscope.The following parameters of the two groups were determined:lactate dehydroge2 nase(LDHactivity,intracellular calcium concentration and malondialdehyde(MDAcontent.Tumor necrotic factor(TN F2αassay was performed using an EL ISA kit and N F2κB in the nucleus was analyzed by electrophoretic mobility shift assay(EMSA.The results are as follows:(1after H/R injury,car2 diomyocytes contracted,tending to get round in shape and its pseudopods decreased,while marked mor2 phological changes were not observed in ADO group;(2LDH leakage maintained at a lower level in ADO group than that in the control group during H/R(bothP<0101;(3ADO significantly reduced the concentration of calcium in cells and prevented calcium overload during H/R(both P<0101;(4 ADO markedly reduced the content of MDA during H/R(both P<0101;(5ADO inhibited the pro2 duction of TN F2αduringH/R(both P<0101;and(6ADO down2regulated N F2κB binding activity of cardiomyocytes during H/R(both P<0101。
miR-93-5p对缺氧
miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞凋亡的作用机制研究刘斌,刘娜,曹广林摘要目的:探讨miR-93-5p对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用机制㊂方法:取对数生长期的H9c2心肌细胞用于实验,将细胞分为control组㊁H/R组㊁miR-NC组㊁miR-93-5p mimic组㊂miR-NC组转染miR-93-5p阴性对照片段50μmol/L,miR-93-5p mimic 组转染miR-93-5p模拟物㊂24h后,除control组外,H/R组㊁miR-NC组㊁miR-93-5p mimic组建立H/R模型㊂2h后采用聚合酶链式反应(PCR)法检测心肌细胞中miR-93-5p表达水平,噻唑蓝(MTT)比色法检测心肌细胞存活率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,二硫双硝基苯甲酸定量法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)㊁白细胞介素-1β(IL-1β)㊁白细胞介素-6(IL-6)含量,蛋白免疫印迹法检测活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)㊁B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)㊁Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达㊂结果:与control组比较,H/R组miR-93-5p表达㊁心肌细胞存活率㊁SOD和GSH-Px活性㊁Bcl-2蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率㊁MDA㊁TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R组和miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组miR-93-5p表达㊁心肌细胞存活率㊁SOD和GSH-Px活性㊁Bcl-2蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率㊁MDA㊁TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6㊁Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂结论:miR-93-5p通过降低H/R心肌细胞的炎症和氧化应激水平,发挥抗细胞凋亡作用㊂关键词心肌细胞凋亡;miR-93-5p;缺氧/复氧;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.21.011随着生活方式的改变和生活节奏的加快,心血管疾病的发生率逐渐趋于年轻化㊂心肌缺血再灌注损伤造成的心肌细胞凋亡和线粒体功能障碍是心肌缺血再灌注病人发生心力衰竭的主要原因[1]㊂研究表明,降低炎症反应和氧化应激水平可明显减少心肌细胞凋亡,改善线粒体功能障碍[2]㊂miRNA是一种单链非编码RNA,研究发现,多种miRNA参与调节心肌缺血再灌注损伤[3-5],miRNA-93-5p对脓毒症造成的心肌损伤以及糖尿病肾病等具有保护作用[6-7]㊂本研究旨在探讨miR-93-5p在缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞中的作用㊂1材料与方法1.1细胞系大鼠H9c2心肌细胞购自中国科学院上海细胞生物学研究所㊂1.2试剂及仪器超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)㊁丙二醛(malondialdehyde,MDA)㊁谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)试剂盒购自南京建成生物工程研究所;白细胞介素(interleukin,IL)-6㊁基金项目河北省2020年度医学科学研究课题计划(No.20200283)作者单位沧州市人民医院(河北沧州061000),E-mail:luxtqg@163. com引用信息刘斌,刘娜,曹广林.miR-93-5p对缺氧/复氧H9c2心肌细胞凋亡的作用机制研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(21): 3931-3935.IL-1β㊁肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自武汉博士德生物有限公司;miR-93-5p阴性对照片段以及miR-93-5p mimic购自上海吉玛制药技术有限公司;miR-93-5p和U6的聚合酶链式反应(PCR)引物序列购自中国广州锐博公司;兔抗大鼠活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 (cysteinyl aspartate specificproteinase-3,Caspase-3)㊁B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)㊁Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)㊁甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)一抗购自英国Abcam公司;辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔二抗购自美国Sigma公司;DMEM培养基购自北京华美试剂公司;超净工作台购自沈阳市医疗器械二厂;培养箱购自美国NAPCO公司㊂1.3分组及给药将H9c2心肌细胞接种到含有10%胎牛血清的DMEM培养基中进行培养,置于37ħ5%CO2的恒温培养箱中孵育,当细胞融合度达到90%时,进行传代㊂取第4代对数生长期的细胞用于实验㊂将细胞分为对照组(control组)㊁H/R组㊁miR-93-5p阴性对照组(miR-NC组)㊁miR-93-5p模拟物组(miR-93-5p mimic 组)㊂miR-NC组转染miR-93-5p阴性对照片段50μmol/L,miR-93-5p mimic组转染miR-93-5p模拟物50μmol/L㊂24h后,除control组外,其余3组建立H/R 模型㊂首先,将不含血清和糖的DMEM培养基用混合气体(95%N2和5%CO2)平衡2h制备饱和缺氧液,将心肌细胞中原有的培养液弃掉,加入饱和过的缺氧液,并放置在37ħ含有95%N2和5%CO2的培养箱中培养10h,建立缺氧模型㊂10h后,弃掉缺氧液,加入含糖和10%胎牛血清的DMEM培养基,置于37ħ含有95%O2和5%CO2的培养箱中,培养2h,建立复氧模型㊂control组心肌细胞置于含糖和10%胎牛血清的DMEM培养基中培养,置于37ħ含有95%O2和5%CO2的培养箱中孵育㊂1.4实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定miR-93-5p 的表达水平复氧结束后,弃去细胞培养液,磷酸缓冲盐溶液(PBS)清洗2次,Trizol试剂完全裂解细胞,细胞裂解液用氯仿抽提,异丙醇沉淀后,收集总RNA㊂紫外分光光度计鉴定RNA浓度和纯度㊂取1μL样品进行反转录,荧光定量PCR仪进行扩增,反应条件为95ħ2min; 95ħ30s;58ħ40s;共40个循环㊂所有样品均进行5次重复操作㊂以U6作为内参,采用2-әәCt法计算miR-93-5p的相对表达水平㊂miR-93-5p的引物序列见表1㊂表1基因及引物序列基因引物序列miR-93-5p正向:5'-ATCTGCCGTTGATGCTGA-3'反向:5'-CTGGCTATCATCGCGTGC-3'U6正向:5'-CTGACCTAGCGTGAGCTA-3'反向:5'-CGATGGACCAGTAGCGCT-3'1.5噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率各组心肌细胞复氧结束后,MTT比色法检测心肌细胞存活率㊂将细胞制成细胞悬液,接种于96孔板中,每孔3000个细胞,每孔中再加入5mg/mL的MTT 溶液20μL,37ħ培养箱中孵育4h㊂弃去上层清液后,每孔再加入200μL的二甲基亚砜,振荡孵育10 min后,放置在酶标仪上,设定波长为490nm,测定A 值,参照试剂盒说明书指定标准曲线,根据标准曲线计算心肌细胞存活率㊂细胞存活率=(实验组A值/对照组A值)ˑ100%㊂1.6流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率各组心肌细胞复氧结束后,胰酶消化细胞,PBS 洗涤重悬,加入500μL缓冲液混匀,取100μL细胞悬液加入膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)孵育10min,然后加入碘化丙啶(PI)孵育15min㊂使用流式细胞仪和Flowjo软件分析心肌细胞凋亡率㊂1.7氧化应激损伤指标检测各组心肌细胞复氧结束后,弃掉细胞培养基,收集细胞,冰浴中用超声细胞粉碎仪处理30s,之后,4ħ下3500r/min离心10min,收集上清㊂根据各试剂盒说明书,用紫外-可见分光光度计平行测定各组细胞裂解液中SOD㊁GSH-Px活性和MDA含量㊂黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,二硫双硝基苯甲酸定量法检测GSH-Px活性㊂1.8ELISA检测炎性因子TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6表达各组心肌细胞复氧结束后,收集上清液检测炎性因子TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6表达㊂首先,用包被液稀释包被抗原,最适浓度为5~20μg/mL,450nm波长处测定A值,根据说明书建立标准曲线,由标准曲线计算含量㊂反应板每孔各加入0.3mL,37ħ水浴2h,弃掉包被液,加入洗涤缓冲液洗涤㊂每孔加入经稀释过的待测上清液0.2mL,37ħ水浴2h㊂洗涤后,每孔加入稀释过的酶结合物0.2μL,37ħ水浴2h㊂洗涤后,加入邻苯二胺溶液0.2μL,室温静置30min,每孔加入0.05μL终止液㊂酶标仪波长调至490nm处,测量A值㊂1.9蛋白免疫印迹法检测心肌细胞中蛋白表达各组心肌细胞复氧结束后,弃去上清液,预冷过的PBS洗涤各组细胞,各洗3次,加入50μL的RIPA裂解液,置于冰上30min,4ħ下12000r/min离心10 min,收集上清液,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白浓度㊂按照实验分组依次加入各蛋白样品20μL,120V恒压电泳,直至溴酚蓝达到凝胶底部,结束电泳㊂采用聚偏二氟乙烯(PVDF)膜,0.3A恒流湿转2h,室温封闭1h,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)㊁Bcl-2㊁Bax㊁GAPDH一抗4ħ孵育过夜,二抗(1ʒ5000)室温孵育2h,增强化学发光试剂(enhanced chemiluminescence, ECL)法显色,Image J软件分析蛋白条带灰度值,以目的蛋白条带灰度值与GAPDH蛋白条带灰度值的比值为目的蛋白的相对表达量㊂1.10统计学处理采用SPSS21.0软件进行统计学分析㊂符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1各组心肌细胞中miR-93-5p表达比较各组miR-93-5p表达比较,差异有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组miR-93-5p表达降低(P<0.05);与H/R组比较,miR-93-5p mimic 组miR-93-5p表达升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组miR-93-5p表达升高(P<0.05)㊂详见表2㊂表2各组心肌细胞中miR-93-5p表达比较(xʃs)组别样本量miR-93-5p control组516.63ʃ4.22H/R组58.74ʃ3.17①miR-NC组59.16ʃ4.32①miR-93-5p mimic组525.30ʃ3.74①②③注:F=20.056,P<0.001㊂与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.2各组心肌细胞存活率比较各组心肌细胞存活率比较,差异有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组心肌细胞存活率降低(P<0.05);与H/R组比较,miR-93-5p mimic 组心肌细胞存活率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组心肌细胞存活率升高(P<0.05)㊂详见表3㊂表3各组心肌细胞存活率比较(xʃs)单位:%组别样本量心肌细胞存活率control组5100.00H/R组547.62ʃ5.44①miR-NC组550.18ʃ6.25①miR-93-5p mimic组586.47ʃ6.51①②③注:F=98.128,P<0.001㊂与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.3各组心肌细胞凋亡率比较各组心肌细胞凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组心肌细胞凋亡率升高(P<0.05);与H/R组比较,miR-93-5p mimic 组心肌细胞凋亡率降低(P<0.05);与miR-NC组比较, miR-93-5p mimic组心肌细胞凋亡率降低(P<0.05)㊂详图1㊁表4㊂图1流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡情况表4各组心肌细胞凋亡率比较(xʃs)单位:%组别样本量心肌细胞凋亡率control组5 2.68ʃ0.33H/R组525.49ʃ0.54①miR-NC组524.83ʃ0.57①miR-93-5p mimic组510.50ʃ0.48①②③注:F=2620.066,P<0.001㊂与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.4各组氧化应激指标SOD㊁MDA㊁GSH-Px水平比较各组SOD㊁GSH-Px㊁MDA水平比较,差异均有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组SOD㊁GSH-Px水平降低,MDA水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R组㊁miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组SOD㊁GSH-Px水平升高,MDA水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂详见表5㊂表5各组氧化应激指标SOD㊁MDA㊁GSH-Px表达比较(xʃs)组别样本量SOD(U/L)MDA(nmol/L)GSH-Px(U/L) control组5173.48ʃ23.6646.77ʃ8.29163.42ʃ20.38 H/R组593.79ʃ22.43①112.58ʃ9.47①86.47ʃ18.29①miR-NC组594.68ʃ21.54①110.84ʃ10.02①85.62ʃ18.14①miR-93-5p mimic组5132.29ʃ25.37①②③83.17ʃ8.06①②③128.75ʃ21.34①②③F值13.17258.65518.276P<0.001<0.001<0.001注:与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.5各组炎性因子TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平比较各组TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平比较,差异均有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平升高(P<0.05);与H/R组㊁miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平降低(P< 0.05)㊂详见表6㊂表6各组炎性因子TNF-α㊁IL-1β㊁IL-6水平比较(xʃs)单位:ng/L 组别样本量TNF-αIL-1βIL-6 control组556.27ʃ8.2448.24ʃ6.7343.90ʃ6.47H/R组5147.62ʃ9.77①122.75ʃ8.66①135.64ʃ7.45①miR-NC组5142.58ʃ9.64①120.38ʃ7.47①132.18ʃ7.22①miR-93-5p mimic组593.80ʃ8.51①②③79.63ʃ6.82①②③88.36ʃ8.64①②③F值240.456114.305166.218P<0.001<0.001<0.001注:与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂2.6各组心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bcl-2㊁Bax 蛋白表达比较各组心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bcl-2㊁Bax 蛋白表达比较,差异均有统计学意义(P<0.001)㊂与control组比较,H/R组Cleaved Caspase-3㊁Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与H/R组㊁miR-NC组比较,miR-93-5p mimic组Cleaved Caspase-3㊁Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂详见表7㊁图2㊂表7各组心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bcl-2㊁Bax蛋白表达水平比较(xʃs)组别样本量Cleaved Caspase-3蛋白Bcl-2蛋白Bax蛋白control组50.25ʃ0.03 1.07ʃ0.050.55ʃ0.03 H/R组50.94ʃ0.05①0.54ʃ0.04① 1.23ʃ0.05①miR-NC组50.88ʃ0.04①0.58ʃ0.04① 1.18ʃ0.05①miR-93-5p mimic组50.49ʃ0.04①②③0.95ʃ0.05①②③0.85ʃ0.05①②③F值325.455171.138239.107P<0.001<0.001<0.001注:与control组比较,①P<0.05;与H/R组比较,②P<0.05;与miR-NC组比较,③P<0.05㊂图2各组心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bcl-2㊁Bax蛋白表达条带图(A为control组;B为H/R组;C为miR-NC组;D为miR-93-5p mimic组)3讨论缺血再灌注时心肌细胞由长时间的缺血缺氧状态到吸入大量的氧气和营养物质,导致线粒体功能损伤,活性氧过度产生,氧化应激水平升高,诱导心肌细胞凋亡㊂心肌细胞损伤触发炎症反应,大量炎性因子释放,进一步加重心肌细胞凋亡㊂过度的炎症反应和氧化应激水平引起细胞凋亡㊁纤维化和细胞自噬[8-11],抑制炎症和氧化应激水平可减少心肌缺血再灌注或H/R诱导的心肌细胞凋亡[12]㊂既往研究表明,miR-93-5p通过调节Toll样受体4(TLR4)/髓分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路抑制脂多糖造成的炎症反应,改善急性肺损伤[13]㊂本研究通过建立H/R心肌细胞模型,探讨miR-93-5p对H/R造成的心肌细胞损伤的影响㊂SOD和GSH-Px是广泛存在于细胞内的一类抗氧化酶,线粒体损伤时,过度产生活性氧,使氧化应激水平升高,而GSH-Px可有效清除活性氧,保护线粒体结构和功能完整㊂SOD具有清除超氧阴离子的作用,保护细胞免受损伤,其活性的高低间接反映机体清除氧自由基的能力[14],而MDA水平则间接反映氧自由基对细胞损伤的程度㊂心肌细胞损伤触发TNF-α的释放,进一步刺激炎性因子的分泌,如IL-1β㊁IL-6㊁黏附分子等,而促炎因子的大量分泌,会进一步加重心肌损伤㊂在本研究中,心肌缺血再灌注时,SOD和GSH-Px活性降低,MDA水平升高,炎性因子TNF-α㊁IL-1β和IL-6水平升高,由于活性氧和氧自由基清除受到阻碍,以及促炎因子大量释放,导致心肌细胞存活率降低㊁凋亡率升高㊂miR-93-5p参与调节多种生理过程,如高糖诱导的细胞增殖㊁迁移㊁纤维化及心肌细胞凋亡等[15-16]㊂为了探讨miR-93-5p对H/R造成的心肌细胞损伤是否具有保护作用,采用miR-93-5p mimic孵育心肌细胞后,建立H/R模型㊂实验结果显示,miR-93-5p 过表达增强SOD㊁GSH-Px活性,降低MDA以及炎性因子TNF-α㊁IL-1β和IL-6水平,心肌细胞存活率升高,凋亡率降低,表明,miR-93-5p通过降低氧化应激水平和炎症反应,改善H/R诱导的心肌细胞损伤㊂细胞凋亡受到促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的共同调控,两类凋亡蛋白失衡,导致细胞凋亡发生㊂Caspase 家族是一组半胱氨酸蛋白酶,在调节细胞凋亡的过程中发挥重要作用,其中Caspase-3位于凋亡级联反应的关键位置,是重要的凋亡蛋白酶㊂Bcl-2家族同样是调节细胞凋亡的重要家族,Bcl-2通过干扰细胞色素C 的释放,阻断Caspase蛋白酶的激活,抑制细胞凋亡㊂Bax作为Bcl-2家族重要的促凋亡蛋白,其表达水平与细胞凋亡密切相关㊂Bax是线粒体膜上离子通道的组成部分,可以使细胞色素C穿过线粒体膜,激活Caspase-3,促进细胞凋亡[17]㊂本实验通过蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白表达情况,H/R使心肌细胞中Cleaved Caspase-3㊁Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低,miR-93-5p过表达使Cleaved Caspase-3㊁Bax 蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高㊂本实验结果表明,miR-93-5p通过调节凋亡相关蛋白表达,抑制细胞凋亡㊂综上所述,miR-93-5p可有效抑制H/R诱导的细胞凋亡,可能是通过调节凋亡相关蛋白表达,抑制炎症反应和降低氧化应激水平发挥作用,为临床治疗心肌缺血再灌注提供理论支持㊂参考文献:[1]LIAO C L,LIU Y,HUANG M Z,et al.Retraction note:myocardialischemia reperfusion injury is alleviated by curcumin-peptidehydrogel via upregulating autophagy and protectingmitochondrial function[J].Stem Cell Research&Therapy,2022,13(1):51.[2]LIU X,BIAN H,DOU Q L,et al.Ginkgetin alleviates inflammation,oxidative stress,and apoptosis induced by hypoxia/reoxygenationin H9c2cells via Caspase-3dependent pathway[J].BioMedResearch International,2020,2020:1928410.[3]CHENG N,LI L B,WU Y B,et al.microRNA-30e 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[10]LI Z,FENG H H,HAN L,et al.Chicoric acid ameliorateinflammation and oxidative stress in Lipopolysaccharide and d-galactosamine induced acute liver injury[J].Journal of Cellularand Molecular Medicine,2020,24(5):3022-3033.[11]YU P,MA S C,DAI X C,et al.Elabela alleviates myocardialischemia reperfusion-induced apoptosis,fibrosis andmitochondrial dysfunction through PI3K/AKT signaling[J].American Journal of Translational Research,2020,12(8):4467-4477.[12]LIANG H Q,LI F J,LI H X,et al.Overexpression of lncRNA HULCattenuates myocardial ischemia/reperfusion injury in rat modelsand apoptosis of hypoxia/reoxygenation cardiomyocytes viatargeting miR-377-5p through NLRP3/caspase-1/IL-1βsignalingpathway inhibition[J].Immunological Investigations,2021,50(8):925-938.[13]GAO H,XIAO D Q,GAO L B,et al.microRNA-93contributes to thesuppression of lung inflammatory responses in LPS-inducedacute lung injury in mice via the TLR4/MyD88/NF-κB signalingpathway[J].International Journal of Molecular Medicine,2020,46(2):561-570.[14]TIWARI M K,JENA N R,MISHRA P C.Mechanisms of scavengingsuperoxide,hydroxyl,nitrogen dioxide and methoxy radicals byallicin:catalytic role of superoxide dismutase in scavengingsuperoxide radical[J].Journal of Chemical Sciences,2018,130(8):1-17.[15]LI J Z,ZHAO Q,JIN X H,et al.Silencing of LncRNA PVT1inhibitsthe proliferation,migration and fibrosis of high glucose-inducedmouse mesangial cells via targeting microRNA-93-5p[J].Bioscience Reports,2020,40(5):BSR20194427.[16]LV J,ZHU Y,YAO S.LncRNAMORT is upregulated in myocardialinfarction and promotes the apoptosis of cardiomyocyte bydownregulating miR-93[J].BMC Cardiovasc Disord,2020,20(1):247.[17]CAMPBELL K J,TAIT S W G.Targeting Bcl-2regulated apoptosisin cancer[J].Open Biology,2018,8(5):180002.(收稿日期:2022-01-25)(本文编辑郭怀印)。
腺苷A1受体激动剂对心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的保护作用
目前研 究发现 ， 不但心肌本身可以产生腺苷 ， 而且心脏存在 腺苷受体（ 包括 Ａ ， ２和 Ａ １Ａ ３三种受体亚型 ）其 中 Ａ１ ， 受体 占重 要地位＿ 。有研究报道 ， ｌ Ｊ 腺苷受体 Ａ１ Ａ 和 ３受体激 活对心肌细 胞缺血有保 护作用 ＿ ， ２ 但作 用机制 尚不完全 清楚 。本研 究通过 Ｊ 暂时停 止供应心肌细胞赖 以生存 的氧和糖 ， 定时间后恢 复供 一 糖供氧 ， 造成模拟心肌缺血模型 ， 从细胞水平观察培养液上清液
值 ／， 组 Ａ值 ×１０ ｘ照 ｔ ０ ％ １５ 统计学处理 ． 所 有 数 据 以均 数 ±标 准 差 （ ±Ｓ 表 示 ， ） 采 用 ｔ检 验 ， 间 数 据 根 据 处 理 方 差 齐 性 分 析 结 果 ， 用 非 配 对 ｔ 组 采 检验 ， Ｐ＜０ ０ 为 差别 有 统 计 学 意 义 。 ．５
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１８ ・ ０２
Ｃ Ｎ Ｓ Ｕ Ｎ ＬＯ Ｔ Ｇ Ａ Ｉ Ｅ ＭＥ Ｉ ＩＥ Ｏ Ａ Ｄ Ｏ一／ Ｅ Ｅ Ｒ Ｖ Ｓ Ｕ ￣ ＲＤ Ｓ Ａ Ｅ ＨＩＥ Ｅ Ｊ Ｒ Ａ Ｆ Ｉ Ｅ Ｒ Ｔ Ｖ Ｄ Ｃ Ｎ Ｎ Ｃ Ｒ Ｉ Ｏ Ｎ Ｃ Ｒ Ｂ Ｏ Ａ Ｃ ＩＭ ＩＥ Ｓ Ｎｏ ｅ ｅ ２ ０ Ｖ ｌ ５ Ｎ ． １ ｖ ｍｂ ｒ ０ ７ ｏ ｏ １
在 上述缺糖缺氧 ３ｈ ， 用正常含糖含氧的 Ｈａｋ 液培养 ， 后 换 ｎｓ 为 了研究 Ｒ—ＰＡ对心肌细胞 缺氧再 给氧损 伤 的影 响 ， Ｉ 在再给 氧 损伤之前 ， 分别加入 Ｒ—ＰＡ０ １／ ｌＬ及 １ｌ ｌＬ， Ｉ ． ｘ ／ ｍｏ ｍｏ／ 分别在 缺 氧 １ｈ 再给氧 ２ｈ ６ｈ １ ，４ｈ时取上清 液测 Ｌ Ｈ， Ａ含 ， ， ，２ｈ ２ Ｄ ＭＤ
中乳 酸脱氢 酶（ Ｄ 和丙二醛 （ Ａ） Ｌ Ｈ） ＭＤ 的含量 、 超氧化物歧 化酶 （ Ｏ 的活性及 细胞 ＭＴ Ｓ Ｄ） Ｔ代谢率 ， 以评价腺苷 Ａ 借 １受体激动 剂对培养的心肌 细胞损伤可能具有 的保护作用 。
腺苷受体激活对体外培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护效应
腺苷受体激活对体外培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护效应杨育红;王洪新【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2007(011)038【摘要】目的:观察腺苷A1受体激动剂和A2受体激动剂对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/再给氧损伤的影响.方法:实验于2005-09/2006-06在辽宁医学院药理实验室完成.生后2～4 d的SD大白鼠乳鼠260只,以培养的大鼠乳鼠心肌细胞为模型,在造成心肌细胞缺氧/再给氧损伤模型后,观察分别给正常含糖含氧的Hanks液组,缺氧+腺苷A1受体激动剂再给氧组,缺氧+腺苷A1受体激动剂+腺苷A1受体拮抗剂再给氧组,缺氧+腺苷A2受体激动剂再给氧组,缺氧+腺苷A2受体激动剂+腺苷A2受体拮抗剂再给氧组对心肌细胞活力及心肌细胞搏动频率的影响,以及对心肌细胞培养液上清中乳酸脱氢酶含量的影响.结果:腺苷A1受体激动剂可以明显增加心肌细胞的活力,显著提高心肌细胞的搏动频率,使心肌细胞的搏动频率在缺氧/再给氧后明显恢复,还可以使心肌细胞培养液上清中乳酸脱氢酶的含量明显降低.并且这种保护作用可以被腺苷A1受体拮抗剂所拮抗.腺苷A2受体激动剂和A2受体拮抗剂对培养的心肌细胞缺氧/再给氧损伤无明显影响.结论:腺苷受体激活对培养的心肌细胞缺氧/再给氧损伤有保护作用,其保护作用可能是通过激动腺苷A1受体途径来实现的.【总页数】4页(P7577-7580)【作者】杨育红;王洪新【作者单位】辽宁医学院药理教研室,辽宁省锦州市,121001;辽宁医学院药理教研室,辽宁省锦州市,121001【正文语种】中文【中图分类】R542.2【相关文献】1.麦冬总皂甙对培养心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用 [J], 何平;代赵明2.腺苷A1受体激动剂对心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的保护作用 [J], 杨育红;王洪新3.小牛血去蛋白提取物注射液对培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用 [J], 杨育红;娄凤霞;王洪新4.人urotensin Ⅱ对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及机制 [J], 王荣俊;丁波;文继月;陈志武5.儿茶素单体对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及机制研究 [J], 叶锦霞;王岚;梁日欣;杨滨因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
腺苷对心肌的保护作用
腺苷对心肌的保护作用
燕振中;周其文;崔宝国
【期刊名称】《滨州医学院学报》
【年(卷),期】2003(026)005
【摘要】@@ 腺苷是体内重要的内源性生理活性物质,对心脏功能有多方面的作用.近年来,通过对腺苷的生理效应及临床应用进行了广泛的探讨,发现腺苷在心肌保护方面具有极其重要的作用.
【总页数】3页(P361-363)
【作者】燕振中;周其文;崔宝国
【作者单位】胜利石油管理局中心医院,东营市,257034;首都医科大学附属北京安贞医院;胜利石油管理局卫生处
【正文语种】中文
【中图分类】R333.6
【相关文献】
1.急性心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗中腺苷对心肌保护作用 [J], 籍振国;韩建妙;周素华;刘刚;刘坤申
2.腺苷在急性心肌梗死再灌注损伤中的心肌保护作用 [J], 韩建妙;籍振国;刘坤申
3.环磷酸腺苷葡胺对心脏瓣膜置换术患者心肌缺血/再灌注损伤心肌保护作用的研究 [J], 马辉兰;耿智隆;刘东;殷裕雄;汪惠文
4.腺苷对急性心肌梗死经皮冠状动脉介入治疗患者的心肌保护作用 [J], 韩建妙;籍振国;周素华;刘坤申;郭恒信
5.环磷腺苷、维生素C联合抗病毒治疗对病毒性心肌炎患儿心肌损伤的保护作用[J], 龚一珍;李少春
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腺苷对复苏兔心肌及脑组织超微结构的影响
腺苷对复苏兔心肌及脑组织超微结构的影响陈威;沈洪【期刊名称】《中国全科医学》【年(卷),期】2007(10)5【摘要】目的观察腺苷对复苏兔心肌及脑组织超微结构的影响.方法采用窒息法制作兔复苏模型,随机分为对照组(A组)、肾上腺素组(B组)和肾上腺素合并腺苷组(C组).持续窒息4 min后,行心肺复苏,4 min后静脉给药.A组(n=6)不用复苏药物;B组(n=12)静脉注射肾上腺素0.09 mg/kg;C组(n=12)静脉注射肾上腺素0.09 mg/kg并持续静脉滴注腺苷150 μg·kg-1·min-1至复苏结束.取左心室心肌和脑海马组织,电镜下观察超微结构改变.结果 B组兔心肌细胞和脑海马神经元超微结构有明显损害,C组损害较轻,两组均明显好于A组.结论复苏时合并应用腺苷可以保护心肌细胞和脑海马神经元超微结构,可能会改善复苏成功后心脑功能.【总页数】4页(P379-382)【作者】陈威;沈洪【作者单位】100853,北京,中国人民解放军总医院急诊科;100853,北京,中国人民解放军总医院急诊科【正文语种】中文【中图分类】R605.974【相关文献】1.复苏饮对复苏犬脑组织超微结构的影响 [J], 靳利利;罗小星;赵锋利;陈镜合;黄培红2.腺苷对复苏兔心肌及脑组织变化的干预 [J], 陈威;刘刚;计达;沈洪3.参附注射液对新西兰兔心脏骤停心肺复苏后心肌组织超微结构的影响 [J], 刘绍辉;何明丰;张英俭;陈景利;毛荣军4.亚低温治疗对心肺复苏后兔脑组织中基质金属蛋白酶9和神经元特异性烯醇化酶水平及脑复苏的影响 [J], 祝雅;赵晖;董莲莲;金燕5.生脉注射液对心肺复苏兔心肌超微结构的影响 [J], 孙素红;蒙定水因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
缺氧的机理是什么？缺氧分为几类？
缺氧的机理是什么？缺氧分为几类？
佚名
【期刊名称】《护士进修杂志》
【年(卷),期】2006(21)1
【摘要】正常人在静止状态下，每分钟耗氧量约250ml，而体内储存的氧仅1．5L，缺氧时储备的氧只能供组织器官消耗4～5min。
缺氧是向器官和组织运送氧减沙，或组织利用氧发生障碍，细胞氧化过程障碍，能量生成不足，细胞功能紊乱甚至结构改变而死亡。
中枢神经对缺氧最敏感，当动脉血氧饱和度低于25％时即可出现紫绀。
【总页数】1页(P30-30)
【关键词】缺氧;细胞功能紊乱;动脉血氧饱和度;组织器官;机理;氧化过程;能量生成;结构改变;中枢神经
【正文语种】中文
【中图分类】R364.4;R977.15
【相关文献】
1.水气病分为几类？其证候特征是什么？ [J],
2.急性缺氧动物吸入纯氧后再缺氧损伤机理的研究 [J], 牟信兵;高钰琪;刘福玉;郑碧海;郑建保;陈有;周小波;何艳梅
3.腺苷负性变导作用机理的初步探讨—兼论心肌缺氧时房室传导阻滞发病机理的一种新假说 [J], 孙继文
4.缺氧后处理对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其机理研究 [J], 祝筱梅;刘秀华;
蔡莉蓉
5.高体温、低体温、脱水、失血、缺氧……生与死的分界线是什么? [J],
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研究论文腺苷对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用王兴祥1,3,周利龙1,丁家望2,冯义柏1,程龙献11华中科技大学同济医学院附属协和医院心内科,武汉430022;2宜昌市中心人民医院,宜昌443000摘要:本研究旨在探讨腺苷(adenosine,ADO对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R心肌细胞的保护作用及其分子机制。
将原代培养的新生大鼠心肌细胞分成H/R对照组和ADO(110μmol/L保护组。
用倒置相差显微镜观察心肌细胞的生长状态。
检测两组培养基质乳酸脱氢酶(LDH活性和心肌细胞Ca2+和丙二醛(MDA浓度。
用EL ISA法检测肿瘤坏死因子(TNF2α的表达,并用凝胶电泳迁移率改变法(EMSA测定核因子(NF2κB结合活性。
所得结果如下:(1心肌细胞H/R培养后皱缩、变圆,伪足减少,ADO组心肌细胞的形态变化小于对照组;(2 ADO减少缺氧和复氧期间心肌细胞LDH的漏出(bothP<0101;(3ADO降低缺氧和复氧期间心肌细胞内的Ca2+浓度(both P<0101;(4ADO降低缺氧和复氧期间心肌细胞MDA浓度(both P<0101;(5ADO抑制缺氧和复氧期间TNF2α的表达(both P<0101;(6ADO抑制缺氧和复氧期间心肌细胞NF2κB结合活性(both P<0101。
以上结果提示:(1外源性ADO可减轻心肌细胞的H/R损伤;(2外源性ADO抑制H/R期间心肌细胞TNF2α的表达;(3外源性ADO可能通过抑制心肌细胞NF2κB结合活性下调TNF2α的表达。
关键词:腺苷;缺氧/复氧损伤;心肌细胞中图分类号:Q463;R540Adenosine protects cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation injuryWAN G Xing2Xiang1,3,ZHOU Li2Long1,DIN G Jia2Wang2,FEN G Yi2Bai1,CHEN G Long2Xian1 1Depart ment of Cardiology,U nion Hospital A f f iliated to Tongji Medical College,Huaz hong U niver2 sity ofScience and Technology,W uhan430022;2Yichang People Hospital,Yichang443000Abstract:The aim of this study was to investigate the protective effect of adenosine(ADOon car2 diomyocytes following hypoxia/reoxygenation(H/Rand its molecular mechanism.Primary cultured cardiomyocytes of neonatal rats were dividedin to two groups,namely H/R(controland ADO(110μmol/Lgroups.The morphologic changes in cardiomyocytes were observed under an inverted phase2 contrast microscope.The following parameters of the two groups were determined:lactate dehydroge2 nase(LDHactivity,intracellular calcium concentration and malondialdehyde(MDAcontent.Tumor necrotic factor(TN F2αassay was performed using an EL ISA kit and N F2κB in the nucleus was analyzed by electrophoretic mobility shift assay(EMSA.The results are as follows:(1after H/R injury,car2 diomyocytes contracted,tending to get round in shape and its pseudopods decreased,while marked mor2 phological changes were not observed in ADO group;(2LDH leakage maintained at a lower level in ADO group than that in the control group during H/R(bothP<0101;(3ADO significantly reduced the concentration of calcium in cells and prevented calcium overload during H/R(both P<0101;(4 ADO markedly reduced the content of MDA during H/R(both P<0101;(5ADO inhibited the pro2 duction of TN F2αduringH/R(both P<0101;and(6ADO down2regulated N F2κB binding activity of cardiomyocytes during H/R(both P<0101。
The results suggest that(1exogenous ADO attenuatesReceived2002205207Accepted20022082263Corresponding author.Present address:Cardiovascular Disease Department,First Affiliated Hospital,Medical School of Zhejiang University,Hangzhou310003,China.Tel:+86257528061397;E2mail:wangxx19730312@yahoo1com1 cnH/R injury of cultured cardiomyocytes;(2exogenous ADO inhibits the production of TN F2αafter H/R injury;(3exogenous ADO prevents the activation of N F2κB,which may be the molecular mechanism of down2regulation of TN F2αexpression.K ey w ords:adenosine;hypoxia/reoxygenation injury;cardiomyocytes腺苷(adenosine,ADO作为心肌细胞的能量代谢产物,在缺血预处理的心脏保护中具有重要作用。
近来研究发现,ADO可下调人和大鼠缺血心肌组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor2α,TN F2α的表达,而TN F2α是中性粒细胞介导缺血/再灌注损伤的主要细胞因子[1]。
目前对ADO下调TN F2α表达的分子机制尚不清楚。
有作者报道,心肌组织缺血/再灌注时,核因子κB(nuclear factorκB, N F2κB活性持续增高[2~4],且最近有研究表明ADO可抑制离体心脏缺血/再灌注时的N F2κB活性[5]。
而后者参与了一系列炎症因子的表达调控,包括TN F2α。
本文通过观察外源性ADO对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R心肌细胞的形态结构、损伤指标、TN F2α表达及N F2κB活性的影响,进一步从细胞水平明确ADO的心脏保护作用及其机制,并初步探讨心肌细胞缺氧/复氧损伤时TN F2α与N F2κB活性的关系,为其临床应用提供理论依据。
1材料和方法111主要试剂和仪器胎牛血清和DM EM合成培养基购自G ibco公司。
胰蛋白酶(trypsin购自Difco公司。
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH试剂盒购自上海申能生物技术有限公司。
丙二醛(malondialdehyde,MDA和TN F2αEL ISA试剂盒购自北京邦定泰克生物技术有限公司。
N F2κB寡核苷酸序列、T4多核苷酸激酶、T4激酶缓冲液均购自Promega公司。
[γ232P]A TP购自北京福瑞公司。
ADO 购自Sigma公司。
其余试剂为国产分析纯级。
二氧化碳培养箱购自德国Heraeus公司;倒置相差显微镜购自日本Olympus公司。
112新生大鼠心肌细胞的原代培养取新生1~4 d SD大鼠(华中科技大学同济医学院实验动物学部提供的心室肌组织并剪碎,用011%胰蛋白酶分次消化,分离心肌细胞。
用含10%胎牛血清、100U/ ml青霉素、100μg/ml链霉素的DM EM培养基制备细胞悬液,以差速贴壁法纯化心肌细胞,使纯度达到90%以上。
以115×106/ml 接种于预先用50 mg/L多聚赖氨酸涂布过的培养瓶中,瓶中置盖玻片供细胞贴附生长,在37℃、95%O2+5%CO2的二氧化碳孵箱内进行培养。
每2d更换一次培养基,取培养4d的单层细胞进行实验。
113H/R损伤模型的建立将心肌细胞用缺氧缺糖培养基培养后,培养瓶内立即充入215%O2+ 9215%N2+5%CO2(1L/min持续90s,以驱除瓶内氧气,37℃密闭培养2h。
将缺氧的心肌细胞换用饱含95%O2+5%CO2的含糖培养基,在正常培养条件下培养1h,建立缺氧/复氧损伤模型。
114实验分组将培养的单层心肌细胞分为2组: (1对照组:按照上述方法,制备缺氧/复氧损伤模型;(2ADO处理组:在培养基中加入ADO(110μmol/L后,立即按对照组程序处理。
各组均缺氧培养2h后再给氧1h。
收集缺氧前、缺氧后2h、再给氧1h后的培养基和心肌细胞用于后续实验指标测定。
各组均在上述心肌细胞培养条件下培养3批细胞并做6份重复测试。
115心肌细胞的鉴定心肌细胞的鉴定采用免疫组织化学方法。
116心肌细胞生长状态的检测心肌细胞复氧1 h后,利用倒置相差显微镜观察心肌细胞的形态学改变,用台盼蓝排斥试验检测心肌细胞的存活率。