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异恶唑啉类新型广谱杀虫药--氟雷拉纳

动物医学进展,021,2(2)112117ProgressinVeterinary Medicine异恶唑啉类新型广谱杀虫药——氟雷拉纳黄茗鑫，谢跃，杨光友*（四川农业大学动物医学院，四川成都611130）摘要：氟雷拉纳（fluralaner ）是一种新型广谱兽药，属于异恶唑啉类杀虫剂，是神经元中配体门控氯离子通道的有效抑制剂，对哺乳动物神经元和节肢动物神经元具有显著的选择性。

与其他同类杀虫剂相比，该药在分子结构、作用位点、选择性以及交互抗性等方面均有显著的差异，具有对哺乳动物安全、杀虫活性较高等特性。

近年来，该药已被应用于犬、猫体外寄生虫病临床治疗。

论文主要对该药在国外的研究进展情况进行了综述，以期对该药的进一步应用及开发提供参考。

关键词：氟雷拉纳；体外寄生虫；杀虫剂中图分类号:S859. 795；S852. 7文献标识码:A文章编号：1007-5038(2021)02-0112-06氟雷拉纳（fluralaner ）是2004年由日本日产化学工业公司和美国杜邦公司的科学家开发的异恶唑啉类杀虫剂之一，分子式C 22 H 17 ClF 6N 3O 3,分子质量为556. 285 u,化学名称为4-［5-（ 3,5-二氯苯基） 4,5-二氢5-三氟甲基3-异恶唑基］2-甲基-氮-［2-氧代-2-［（ 2,2,2-三氟乙基）氨基］乙基•苯甲酰胺（图1A ）,分离可得S 与R 两种构型（图1B 和图1C ）,S 构型为主要活性组分，并于2005年获得国际专利。

该药为■—氨基丁酸（Gamma amino butyric acid , GABA ）门控氯离子通道的阻滞剂，同类杀虫剂一一环戊二烯类杀虫剂如林丹（lindane ）和狄氏剂（de-drin ）在世界范围内被禁用，而在我国，前者仍在特定范围内使用，后者并未投入生产和使用［1］。

氟雷拉纳研发早期主要用于有效防治农业害虫，近年来该药已受国内外兽药研究者的青睐，多用于犬、猫体外寄生虫防治，并于2014年被默克公司（Merk ）开发生产为兽药（BravectoT M ）进入临床使用。

茎瘤芥BjuGAPC基因序列特征及其参与茎

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２２ꎬ３８(６):１４７４￣１４８３ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ李晓燕ꎬ李成双ꎬ金业程ꎬ等.茎瘤芥ＢｊｕＧＡＰＣ基因序列特征及其参与茎发育的糖酸含量调控[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２２ꎬ３８(６):１４７４￣１４８３.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２２.０６.００４茎瘤芥ＢｊｕＧＡＰＣ基因序列特征及其参与茎发育的糖酸含量调控李晓燕ꎬ㊀李成双ꎬ㊀金业程ꎬ㊀魏小涵ꎬ㊀李梦瑶(四川农业大学园艺学院ꎬ四川成都６１１１３０)收稿日期:２０２２￣０４￣０７基金项目:国家自然科学基金项目(３２００２０２７)作者简介:李晓燕(１９９９－)ꎬ女ꎬ山西长治人ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事蔬菜栽培生理与遗传育种研究ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)Ｌｘｙ２３２４８０４３４２＠１６３.ｃｏｍ通讯作者:李梦瑶ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｌｉｍｙ＠ｓｉｃａｕ.ｅｄｕ.ｃｎ㊀㊀摘要:㊀为明确茎瘤芥瘤状茎形成过程中的糖酸含量变化ꎬ揭示茎瘤芥甘油醛￣３￣磷酸脱氢酶(ＧＡＰＤＨ)的主要生理功能ꎬ并进一步探究ＢｊｕＧＡＰＣ基因的表达模式对糖酸含量的调控机制ꎬ首先对ＢｊｕＧＡＰＣ基因进行克隆ꎬ同时ꎬ利用生物信息学方法对ＢｊｕＧＡＰＣ的理化性质㊁系统进化发育等多方面进行系统分析ꎬ并使用ｑＲＴ￣ＰＣＲ比较分析ＢｊｕＧＡＰＣ基因在茎瘤芥茎不同发育阶段的表达规律ꎮ结果显示:(１)ＢｊｕＧＡＰＣ基因开放阅读框全长１０３８ｂｐꎬ是一个稳定的亲水性蛋白质ꎬ同时具有多个蛋白质糖基化位点㊁磷酸化位点和特异性蛋白质激酶的结合位点ꎻＢｊｕＧＡＰＣ与其他物种的ＧＡＰＤＨ具有高度相似性ꎬ亲缘关系与同科的芜菁㊁油菜㊁萝卜较近ꎮ(２)ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析结果表明ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因在茎瘤芥茎膨大不同时期的相对表达量差异显著且随着器官膨大相对表达量下调ꎬ与转录组的表达丰度一致ꎮ(３)相关性分析结果显示ꎬ基因表达量与可溶性糖和可滴定酸含量均呈正相关关系ꎬ并与糖酸比呈显著正相关关系ꎮ说明ＢｊｕＧＡＰＣ基因参与甘油醛￣３￣磷酸脱氢酶中ＮＡＤ＋￣ＧＡＰＤＨ的合成ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因对糖酸含量有正调控作用ꎬ可能参与了糖酸的合成过程ꎮ关键词:㊀茎瘤芥ꎻ茎膨大ꎻ糖酸含量ꎻＢｊｕＧＡＰＣ基因ꎻ理化性质ꎻ表达分析中图分类号:㊀Ｓ６３７.３㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２２)０６￣１４７４￣１０ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｉｎＢｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ.ｔｕｍｉｄａａｎｄｉｔｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｓｕｇａｒａｎｄａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔｉｎｓｔｅｍｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＬＩＸｉａｏ￣ｙａｎꎬ㊀ＬＩＣｈｅｎｇ￣ｓｈｕａｎｇꎬ㊀ＪＩＮＹｅ￣ｃｈｅｎｇꎬ㊀ＷＥＩＸｉａｏ￣ｈａｎꎬ㊀ＬＩＭｅｎｇ￣ｙａｏ(ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＣｈｅｎｇｄｕ６１１１３０ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀Ｔｈｅａｉｍｏｆｔｈｅｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆｓｕｇａｒａｎｄａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔｓｄｕｒｉｎｇｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｕｂｅｒｃｕ￣ｌａｔｅｓｔｅｍｉｎＢｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ.ｔｕｍｉｄａａｎｄｒｅｖｅａｌｔｈｅｍａｉｎｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏ￣ｇｅｎａｓｅ(ＧＡＰＤＨ)ꎬａｎｄｔｏｆｕｒｔｈｅｒｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｍｏｄｅｏｎｓｕｇａｒａｎｄａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔ.ＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｆｉｒｓｔꎬａｎｄｉｔｓｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓꎬｓｙｓｔｅｍｅｖｏｌｕｔｉｏｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｏｔｈｅｒａｓ￣ｐｅｃｔｓｗｅｒｅｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙａｎａｌｙｚｅｄｂｙｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｍｅｔｈｏｄｓａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ.ｑＲＴ￣ＰＣＲｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｃｏｍｐａｒｅａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｏｆＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅｓｏｆＢ.ｊｕｎｃｅａｖａｒ.ｔｕｍｉｄａｓｔｅｍ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔꎬｆｉｒｓｔｌｙꎬｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｌｅｎｇｔｈｏｆｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｏｆＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅｗａｓ１０３８ｂｐꎬａｎｄｉｔｗａｓａｓｔａｂｌｅａｎｄｈｙ￣ｄｒｏｐｈｉｌｉｃｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈｍｕｌｔｉｐｌｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｓｉｔｅｓꎬｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｓｉｔｅｓａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｂｉｎｄｉｎｇｓｉｔｅｓ.ＢｊｕＧＡＰＣｈａｄａｈｉｇｈｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｗｉｔｈＧＡＰＤＨｏｆｏｔｈｅｒｓｐｅｃｉｅｓꎬａｎｄｉｔｓｇｅｎｅｔｉｃｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗａｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｃｒｏｐｓｏｆｔｈｅｓａｍｅｆａｍｉｌｙꎬｓｕｃｈａｓＢｒａｓｓｉｃａｒａｐａꎬＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓａｎｄＲａｐｈａｎｕｓｓａｔｉｖｕｓ.ＳｅｃｏｎｄｌｙꎬｒｅｓｕｌｔｓｏｆｑＲＴ￣４７４１ＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔꎬｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｇｅｓｏｆＢ.ｊｕｎｃｅａｖａｒ.ｔｕｍｉｄａｓｔｅｍｓｗｅｌｌｉｎｇｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｄｗａｓｄｏｗｎ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｏｒｇａｎｓｗｅｌｌｅｄꎬｗｈｉｃｈｗａｓｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ.Ｔｈｉｒｄｌｙꎬｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔꎬｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｓｏｌｕ￣ｂｌｅｓｕｇａｒｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｔｉｔｒａｔａｂｌｅａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔꎬａｎｄｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｓｕｇａｒ￣ａｃｉｄｒａｔｉｏ.Ｔｈｅｓｔｕｄｙｒｅ￣ｖｅａｌｅｄｔｈａｔꎬＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｄｉｎｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＮＡＤ＋￣ＧＡＰＤＨｉｎＧＡＰＤＨꎬａｎｄｓｈｏｗｅｄｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｏｌｅｉｎｓｕｇａｒａｎｄａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔｓꎬｗｈｉｃｈｍａｙｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐｒｏｃｅｓｓｏｆｓｕｇａｒａｎｄａｃｉｄｉｎＢｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀Ｂｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ.ｔｕｍｉｄａꎻｓｔｅｍｓｗｅｌｌｉｎｇꎻｓｕｇａｒａｎｄａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔꎻＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅꎻｐｈｙｓｉｃａｌａｎｄｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓꎻｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ㊀㊀茎瘤芥(Ｂｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ.ｔｕｍｉｄａＴｓｅｎｅｔＬｅｅ)属于十字花科ꎬ是芸薹属芥菜种的变种之一ꎬ也是榨菜生产的主要原料[１]ꎮ茎瘤芥的产品器官为膨大的瘤状茎ꎬ既可鲜食ꎬ又宜加工ꎬ具有极高的营养和经济价值ꎮ茎瘤芥的生长和发育过程受到外部条件㊁内源激素等共同调控[２￣３]ꎮ已有研究结果证明ꎬ许多关键基因可以调控果实发育过程中有机酸和糖代谢的合成[４]ꎬ但在茎瘤芥茎膨大过程中有关糖酸含量的调控基因以及关键基因的生物信息分析较少ꎮ因此ꎬ结合茎瘤芥茎膨大过程中糖酸含量的变化ꎬ克隆与之相关的基因并研究其表达模式与调控作用ꎬ能够给茎瘤芥的分子育种和改良茎瘤芥品种提供一定的理论依据ꎮ在植物体内ꎬ糖不仅是能量代谢的物质来源ꎬ同时可调控植物生长发育和环境应答[５]ꎮ果蔬及其制品中糖和有机酸的种类㊁数量以及糖酸比会影响其风味品质ꎮ可溶性糖是淀粉合成的底物ꎬ也直接关系到变态茎的营养状况ꎬ还原糖是蔗糖㊁淀粉等合成过程中光合作用的必需物质ꎮ甘油醛￣３￣磷酸脱氢酶(ＧＡＰＤＨ)是高等植物糖酵解和糖异生反应中的关键酶ꎬ大致可以归为２种类型ꎬ一类是ＮＡＤＰ＋￣ＧＡＰＤＨꎬ参与植物的卡尔文循环[６]ꎬ另一类是ＮＡＤ＋￣ＧＡＰＤＨꎬ参与糖酵解和糖异生过程[７]ꎮ过去认为ＧＡＰＤＨ基因在所有植物组织中几乎都是高水平表达且表达量相对稳定ꎬ所以常被用作研究其他功能性基因表达的内参基因[８]ꎮ然而ꎬ新的研究结果表明ꎬＧＡＰＤＨ是一种多功能酶[９]ꎬ除了参与植物基础的新陈代谢外ꎬ也参与逆境胁迫下的抵御反应[１０￣１１]ꎮＧＡＰＤＨ还广泛参与植株的生长发育进程ꎬ如拟南芥ＧＡＰＤＨ基因缺失突变体表现为根不能正常生长和花粉败育[１２￣１３]ꎬ生理型雄性不育小麦发育过程中种子在不同生长发育阶段ＧＡＰＤＨ基因表达量存在显著差异[１４]ꎬ拟南芥ｇａｐｃ１￣１㊁ｇａｐｃ２￣１基因双敲除突变体的种子含油量与敲除前相比下降３％[１５]ꎮ当前已有多种植物的ＧＡＰＤＨ基因被克隆ꎬ如拟南芥[１６]㊁番茄[１７]㊁水稻[１８]等ꎬ但是在芥菜中还未见相关报道ꎮ本研究基于芥菜的基因组和转录组数据库[１９]ꎬ克隆芥菜ＧＡＰＤＨ基因ꎬ利用生物信息学方法对其编码的蛋白质氨基酸组成㊁蛋白质结构及系统进化等方面进行全面预测和分析ꎬ并结合茎瘤芥不同膨大时期的糖酸含量变化ꎬ对Ｂｊｕ￣ＧＡＰＣ基因的表达进行相关性分析ꎬ为阐明该基因的表达在茎瘤芥茎膨大过程中的调控作用奠定基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料植物材料为涪杂２号茎瘤芥ꎬ采自四川农业大学(成都校区)第五教学实验楼楼顶大棚ꎮ从瘤茎发育始期(２０２１年１２月)开始取样ꎬ横径间隔２ｃｍ取样１次ꎬ每次取３个生物学重复ꎬ共取样４次ꎮ取样完立即放入冰盒带回实验室ꎬ所取样品用清水将杂质除净ꎬ晾干水分ꎬ用液氮速冻后放于－８０ħ冰箱中保存ꎮ１.２㊀试验方法１.２.１㊀茎瘤芥总ＲＮＡ的提取和反转录㊀利用十六烷基三甲基溴化铵(ＣＴＡＢ)试剂盒[生工生物工程(上海)股份有限公司]提取茎瘤芥总ＲＮＡꎬ利用ＴＳＩＮＧＫＥ公司研发的ＧｏｌｄｅｎｓｔａｒＴＭＲＴ６ｃＤＮＡＳｙｎ￣ｔｈｅｓｉｓＭｉｘ反转录试剂盒合成ｃＤＮＡ第一链ꎮ１.２.２㊀ＢｊｕＧＡＰＣ基因的克隆㊀利用Ｐｒｉｍｅｒ６.０软件设计用于克隆ＢｊｕＧＡＰＣ基因编码区全长和检测该基因表达量的引物(表１)ꎮ以芥菜的ｃＤＮＡ为模板进行克隆ꎬ扩增程序为:９５ħ预变性３ｍｉｎꎻ９５ħ３０ｓꎬ５３ħ３０ｓꎬ７２ħ１０ｓꎬ３５个循环ꎻ７２ħ延伸５ｍｉｎꎮ采用１％琼脂糖凝胶电泳检查条带大小ꎬ对大小正确的条带切胶后用ＤＮＡ凝胶回收试剂盒(ＯＭＥＧＡ公司)对ＰＣＲ产物进行纯化回收ꎬ连接转化ＤＨ５α大肠杆菌感受态细胞ꎬ挑选菌落ＰＣＲ检测ꎬ将筛选到的阳性菌落送至北京５７４１李晓燕等:茎瘤芥ＢｊｕＧＡＰＣ基因序列特征及其参与茎发育的糖酸含量调控擎科生物科技有限公司进行测序验证ꎮ表１㊀ＢｊｕＧＡＰＣ基因引物信息Ｔａｂｌｅ１㊀ＰｒｉｍｅｒｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅ引物名称㊀㊀引物序列(５ᶄң３ᶄ)㊀㊀㊀用途ＢｊｕＧＡＰＣ￣ＦＡＴＧＧＣＴＡＡＣＧＧＴＡＡＧＡＴＣＡＡＧＡＴＣＧ克隆ＢｊｕＧＡＰＣ￣ＲＴＡＡＧＣＣＡＡＣＡＡＡＣＣＡＴＡＣＧＡＴＡＴＧＡＢｊｕＧＡＰＣ￣ＲＴ￣ＦＧＣＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＧＣＴＡＣＴＣＡＧ荧光定量ＰＣＲＢｊｕＧＡＰＣ￣ＲＴ￣ＲＡＴＣＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＵＢ￣ＦＡＴＧＡＧＡＧＡＧＡＴＣＣＴＣＣＡＣＡＴＣ内参基因ＴＵＢ￣ＲＴＣＡＡＧＣＣＴＣＡＴＣＧＴＡＴＴＣＣＴＣ１.２.３㊀ＢｊｕＧＡＰＣ基因在瘤茎膨大不同时期的表达分析㊀以茎瘤芥不同发育阶段的ｃＤＮＡ为模板ꎬ以芥菜ＴＵＢ基因为内参基因[２０]ꎮ反应程序:９５ħ预变性３ｍｉｎꎻ９５ħ变性５ｓꎬ５３ħ退火３０ｓꎬ７０ħ延伸１０ｓꎬ３５个循环ꎻ７２ħ延伸５ｍｉｎꎮ用２－әәＣｔ方法计算ＢｊｕＧＡＰＣ基因的相对表达量ꎮ１.２.４㊀ＢｊｕＧＡＰＣ基因的生物信息学分析㊀首先使用美国国家生物技术信息中心(ＮＣＢＩ)在线工具ＯＲＦｆｉｎｄｅｒ查找ＢｊｕＧＡＰＣ基因的开放阅读框ꎮＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的氨基酸组成和理化性质分析用在线分析工具ＰｒｏｔＰａｒａｍ来完成ꎮ用在线分析软件Ｎｅｔ￣Ｐｈｏｓ３１Ｓｅｒｖｅｒ分析磷酸化位点和激酶特异性ꎮ采用糖基化位点在线预测软件ＹｉｎＯＹａｎｇ１.２Ｓｅｒｖｅｒ和ＮｅｔＮＧｌｙｃ１.０Ｓｅｒｖｅｒ对ＢｊｕＧＡＰＣ基因编码氨基酸的糖基化位点进行预测分析ꎮ利用ＰｒｏｔＳｃａｌｅ在线工具对ＢｊｕＧＡＰＣ基因编码的氨基酸序列进行亲水性和疏水性分析ꎮ利用软件ＰＳＯＲＴＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎ分析Ｂｊｕ￣ＧＡＰＣ的亚细胞定位ꎮ用ＴＭＨＭＭ在线工具预测ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的跨膜结构域ꎮ用ＳｉｇｎａｌＰ在线工具预测分析ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白中的信号肽ꎮ使用ＳＯＰＭＡ和ＳＷＩＳＳ￣ＭＯＤＥＬ在线工具预测蛋白质的二㊁三级结构ꎮＢｊｕＧＡＰＣ基因编码蛋白质的保守结构域分析通过Ｐｆａｍ在线软件进行ꎮ在ＮＣＢＩ的蛋白质序列数据库中进行ＢＬＡＳＴＰꎬ并用ＤＮＡＭＡＮ软件进行氨基酸多重序列比对ꎬ用ＭＥＧＡ７构建系统进化树[２１]ꎮ１.２.５㊀糖酸含量的测定及统计分析㊀选择长势良好且一致的试验材料ꎬ测定不同时期的糖酸含量ꎬ均进行３个生物学重复ꎮ可溶性糖㊁葡萄糖㊁蔗糖㊁果糖含量采用试剂盒测定ꎬ蔗糖试剂盒购自北京索莱宝有限公司ꎬ其他试剂盒购自南京建成生物工程研究所ꎮ试验数据采用Ｅｘｃｅｌ和ＳＰＳＳ２２.０进行统计分析ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀ＢｊｕＧＡＰＣ基因全长ｃＤＮＡ的克隆以茎瘤芥涪杂２号ｃＤＮＡ为模板ꎬ设计特异性引物进行ＰＣＲ扩增ꎬ扩增得到大小正确的条带ꎬ将其命名为ＢｊｕＧＡＰＣ基因(ＧｅｎＢａｎｋ登录号:ＯＭ１０００５６)ꎬ见图１ꎮ通过ＯＲＦＦｉｎｄｅｒ分析发现ꎬ茎瘤芥ＧＡＰＤＨ基因包含１个１０３８ｂｐ的完整开放阅读框ꎬ编码３４５个氨基酸以及包含１个终止密码子ꎮ图１㊀ＢｊｕＧＡＰＣ基因扩增电泳结果Ｆｉｇ.１㊀ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃｒｅｓｕｌｔｓｏｆＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ２.２㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的理化性质预测利用ＰｒｏｔＰａｒａｍ对ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的理化性质进行分析ꎬ结果显示ꎬ组成ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的氨基酸共有２０种ꎬ其中缬氨酸(Ｖａｌ)所占比例最高ꎬ为１１３％ꎬ半胱氨酸(Ｃｙｓ)所占比例最低ꎬ为０６％(图２)ꎮＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的分子式为Ｃ１６８４Ｈ２６７５Ｎ４５３Ｏ５０６Ｓ１０ꎬ氨基酸数为３４５ꎬ脂肪族氨基酸指数为８７５１ꎬ相对分子质量为３.７６８ˑ１０４ꎻ理论等电点为７１０ꎬ属于碱性蛋白质类ꎻ从不稳定系数为１９９７和总平均亲水性为－０１６１来看ꎬＢｊｕＧＡＰＣ蛋白属于稳定㊁亲水性蛋白质ꎮ２.３㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的糖基化位点预测和磷酸化位点预测㊀㊀糖基化位点预测结果表明ꎬＢｊｕＧＡＰＣ蛋白有７个Ｏ￣ＧｌｃＮＡｃ糖基化位点(图３Ａ)和２个Ｎ￣糖基化位点(图３Ｂ)ꎬ７个Ｏ￣ＧｌｃＮＡｃ糖基化位点分别在第１５２位㊁２８７位丝氨酸(Ｓｅｒ)和第１９１位㊁２１５位㊁２８８位㊁３４１位㊁３４４位苏氨酸(Ｔｈｒ)处ꎬ２个Ｎ￣糖基化位点分别在１５３~１５５ａａ(天冬氨酸￣丝氯酸￣丙氨酸ꎬＮ￣Ａ￣Ｓ)和３４２~３４４ａａ(天冬氨酸￣组氨酸￣苏氨酸ꎬＮ￣Ｈ￣Ｔ)处ꎮ６７４１江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第６期磷酸化位点和激酶特异性分析结果(图３Ｃ)表明ꎬＢｊｕＧＡＰＣ蛋白存在３３个潜在的磷酸化位点ꎬ包括１８个丝氨酸(Ｓｅｒ)㊁１１个苏氨酸(Ｔｈｒ)和４个酪氨酸(Ｔｙｒ)磷酸化位点ꎮ根据上述磷酸化位点所对应的磷酸激酶预测结果ꎬ该蛋白质可能有１０个蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)㊁５个酪蛋白激酶Ⅱ(ＣＫⅡ)㊁４个周期蛋白质依赖性蛋白激酶(ｃｄｃ２)㊁２个蛋白激酶Ｇ(ＰＫＧ核糖体Ｓ６激酶(ＲＳＫ)和１个酪蛋白激酶Ⅰ(ＣＫⅠ)等７种保守的特异性蛋白激酶的结合位点ꎮ蛋白质氨基酸序列的亲水性和疏水性分析结果(图３Ｄ)表明ꎬ该蛋白质的第３４０位脯氨酸(Ｐｒｏ)分值最低ꎬ亲水性最强ꎻ第１６４位亮氨酸(Ｌｅｕ)分值最高ꎬ疏水性最强ꎮ从总体上来看ꎬＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的亲水氨基酸数量稍多于疏水氨基酸ꎬ所以ＢｊｕＧＡＰＣ基因编码的蛋白质最终表现为亲水性ꎮＡｌａ:丙氨酸ꎻＡｒｇ:精氨酸ꎻＡｓｎ:天冬酰胺ꎻＡｓｐ:天冬氨酸ꎻＣｙｓ:半胱氨酸ꎻＧｌｎ:谷氨酰胺ꎻＧｌｕ:谷氨酸ꎻＧｌｙ:甘氨酸ꎻＨｉｓ:组氨酸ꎻＩｌｅ:异亮氨酸ꎻＬｅｕ:亮氨酸ꎻＬｙｓ:赖氨酸ꎻＭｅｔ:甲硫氨酸ꎻＰｈｅ:苯丙氨酸ꎻＰｒｏ:脯氨酸ꎻＳｅｒ:丝氨酸ꎻＴｈｒ:苏氨酸ꎻＴｒｐ:色氨酸ꎻＴｙｒ:酪氨酸ꎻＶａｌ:缬氨酸ꎮ图２㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的氨基酸序列组成Ｆｉｇ.２㊀ＡｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆＢｊｕＧＡＰＣｐｒｏｔｅｉｎＡ:Ｏ￣ＧｌｃＮＡｃ糖基化位点预测ꎻＢ:Ｎ￣糖基化位点预测ꎻＣ:激酶特异性预测ꎻＤ:亲疏水性预测ꎮ图３㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的糖基化位点㊁磷酸化位点预测和亲疏水性预测Ｆｉｇ.３㊀ＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｓｉｔｅꎬｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｓｉｔｅꎬｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙａｎｄｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙｏｆＢｊｕＧＡＰＣｐｒｏｔｅｉｎ２.４㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的信号肽㊁跨膜结构域和亚细胞定位预测㊀㊀信号肽分析结果(图４Ａ)表明ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因编码的蛋白质序列中不存在已知的信号肽ꎮ跨膜结构域预测结果(图４Ｂ)表明ꎬ在整个ＢｊｕＧＡＰＣ氨基酸序列中ꎬ没有发现可以与膜结合的区域或者跨膜结构ꎬ因此推测该蛋白质属于非跨膜蛋白质ꎮ结合信号肽预测分析结果可知ꎬ跨膜结构和信号肽的缺失说明ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白不是分泌蛋白质ꎬ而是一种由游离核糖体合成再进入细胞质的蛋白质ꎮ因此推测ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白可能定位于细胞质ꎮ亚细胞定位分析结果表明ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因最有７７４１李晓燕等:茎瘤芥ＢｊｕＧＡＰＣ基因序列特征及其参与茎发育的糖酸含量调控可能在微体和细胞质中发挥功能ꎬ有极小可能定位于叶绿体基质和叶绿体类囊体薄膜中ꎬ这与信号肽预测结果一致ꎮ由此分析ꎬＢｊｕＧＡＰＣ蛋白可能在细胞质中合成ꎬ在糖酸合成过程中有一定的调控作用ꎮＡ:ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的信号肽预测ꎻＢ:ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的跨膜结构预测ꎮ图Ａ中Ｃ代表剪切位置分值ꎬＳ代表信号肽分值ꎬＹ代表综合剪切位置分值ꎮ图４㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的信号肽预测和跨膜结构域预测Ｆｉｇ.４㊀ＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅａｎｄｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｄｏｍａｉｎｏｆＢｊｕＧＡＰＣｐｒｏｔｅｉｎ２.５㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的二、三级结构预测蛋白质二级结构预测结果表明ꎬＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的二级结构有α￣螺旋㊁β￣折叠㊁延伸链和无规则卷曲４种ꎮ其中构成α￣螺旋(Ｈｈ)结构的有１１１个氨基酸ꎬ占比３２１７％ꎻ构成β￣折叠(Ｔｔ)结构的有２２个氨基酸ꎬ占比６３８％ꎻ构成延伸链(Ｅｅ)结构的有８３个氨基酸ꎬ占比２４０６％ꎻ构成无规则卷曲(Ｃｃ)结构的有１２９个氨基酸ꎬ占比３７３９％ꎮＢｊｕＧＡＰＣ蛋白三级结构的预测结果(图５)显示ꎬ用于建立其三级结构模型的氨基酸残基位于第５~３３８位ꎬ覆盖度高达９６％ꎬ表明ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白能够形成同源四聚体ꎬ并且结合４个ＮＡＤ＋配体ꎮ图５㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的三级结构预测Ｆｉｇ.５㊀ＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｔｅｒｔｉａｒｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＢｊｕＧＡＰＣｐｒｏｔｅｉｎ２.６㊀ＢｊｕＧＡＰＣ的蛋白质结构域分析和氨基酸序列的同源性分析㊀㊀由蛋白质结构域分析结果(图６Ａ)可知ꎬＢｊｕ￣ＧＡＰＣ蛋白上有２个高度保守的超家族结构域Ｇｐ＿ｄｈ＿Ｎ(ＮＡＤ＋结合结构域)和Ｇｐ＿ｄｈ＿Ｃ(Ｃ端甘油醛￣３￣磷酸脱氢酶亚家族结构域)ꎬ分别位于第６~１０９位和第１６１~３１８位氨基酸残基ꎬ表明ＢｊｕＧＡＰＣ基因属于ＧＡＰＤＨ基因家族ꎮ利用ＢｊｕＧＡＰＣ的氨基酸序列在ＮＣＢＩ上进行ＢＬＡＳＴＰꎬ结果显示ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的氨基酸序列与芜菁(ＸＰ＿００９１２５００５.２)㊁油菜(ＸＰ＿０１３７４２２５５.１)㊁萝卜(ＸＰ＿０１８４３２８４６.１)㊁番茄(ＮＰ＿００１２６６２５４.２)㊁莴苣(ＸＰ＿０２３７３３７２４.１)㊁马铃薯(ＮＰ＿００１２７５３４４.１)㊁拟南芥(ＮＰ＿１７２８０１.１)的ＧＡＰＤＨ基因编码的氨基酸序列具有高度相似性ꎬ其中与同科的芜菁㊁油菜㊁萝卜的序列相似度高达９８％以上ꎬ与其他物种的序列相似度均为９２％以上ꎮ采用ＤＮＡＭＡＮ软件将上述７个物种的ＧＡＰＤＨ与ＢｊｕＧＡＰＣ的蛋白质氨基酸序列进行多重比对ꎬ结果(图６Ｂ)显示:芥菜ＢｊｕＧＡＰＣ的氨基酸序列与其他物种的ＧＡＰＤＨ基因编码的氨基酸序列相似度极高ꎮ表明ＢｊｕＧＡＰＣ同源蛋白质具有相似性和保守性ꎬ尤其表现在Ｇｐ＿ｄｈ＿Ｎ和Ｇｐ＿ｄｈ＿Ｃ两个保守结构域ꎬ因此猜测它们之间可能有着相同的生物学功能ꎮ２.７㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的系统进化分析为了探究ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白质的系统进化关系ꎬ从ＧｅｎＢａｎｋ数据库中选取了１９个物种的ＧＡＰＤＨ蛋白氨基酸序列ꎮ在ＭＥＧＡ７中用邻接法(Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ)对２０个蛋白质氨基酸序列进行分析ꎬ设置校验ｂｏｏｔｓｔｒａｐ＝１０００ꎬ构建系统进化树(图７)ꎮ８７４１江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第６期Ａ:ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的结构域预测ꎻＢ:ＢｊｕＧＡＰＣ与其他植物ＧＡＰＤＨ氨基酸序列比对ꎮ图中黑色方框中的区域为Ｇｐ＿ｄｈ＿Ｎ结构域ꎬ灰色方框中的区域为Ｇｐ＿ｄｈ＿Ｃ结构域ꎮＣｏｎｓｅｎｓｕｓ:共有序列ꎮ图６㊀ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的结构域预测和同源性分析Ｆｉｇ.６㊀ＤｏｍａｉｎｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎａｎｄｈｏｍｏｌｏｇｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆＢｊｕＧＡＰＣｐｒｏｔｅｉｎ㊀㊀结果表明ꎬＢｊｕＧＡＰＣ蛋白与同为芸薹属的芜菁(Ｂｒａｓｓｉｃａｒａｐａ)的亲缘关系最近ꎬ其次是甘蓝(Ｂｒａｓ￣ｓｉｃａｏｌｅｒａｃｅａ)和油菜(Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ)ꎬ与同为十字花科的高山南芥(Ａｒａｂｉｓａｌｐｉｎａ)㊁白芥(Ｓｉｎａｐｉｓａｌｂａ)㊁萝卜(Ｒａｐｈａｎｕｓｓａｔｉｖｕｓ)的亲缘性也较高ꎬ与罂粟(Ｐａｐａｖｅｒｓｏｍｎｉｆｅｒｕｍ)㊁水青树(Ｔｅｔｒａｃｅｎｔｒｏｎｓｉｎｅｎｓｅ)㊁松蒿(Ｐｈｔｈｅｉｒｏｓｐｅｒｍｕｍｊａｐｏｎｉｃｕｍ)㊁博落回(Ｍａｃｌｅａｙａｃｏｒｄａｔａ)等其他物种的关系较远ꎮ２.８㊀不同时期瘤状茎糖酸含量变化与ＢｊｕＧＡＰＣ基因表达的关系㊀㊀分别以膨大到横径为２ｃｍ㊁４ｃｍ㊁６ｃｍ㊁８ｃｍ(Ｓ１㊁Ｓ２㊁Ｓ３和Ｓ４时期)的茎瘤芥瘤茎为材料ꎬ测定不同时期瘤状茎糖酸含量㊁糖酸比ꎮ结果(表２)表明:糖酸的含量变化随着瘤状茎的发育有所不同ꎬ在发育前期茎中可溶性糖大量积累ꎬ还原糖(葡萄糖和果糖)含量较低ꎻ在发育后期ꎬ蔗糖和还原糖在茎９７４１李晓燕等:茎瘤芥ＢｊｕＧＡＰＣ基因序列特征及其参与茎发育的糖酸含量调控中均有积累现象ꎬ而糖酸比整体出现先降低后升高的趋势ꎮ图７㊀基于２０个物种ＧＡＰＤＨ蛋白的氨基酸序列构建的系统进化树Ｆｉｇ.７㊀ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｂａｓｅｄｏｎａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＧＡＰＤＨｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎ２０ｓｐｅｃｉｅｓ㊀㊀由ＢｊｕＧＡＰＣ基因的转录组数据(图８Ａ)和ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析得出的基因相对表达量(图８Ｂ)看出:转录组数据和ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析结果呈现一致趋势ꎬＢｊｕ￣ＧＡＰＣ基因在瘤茎膨大过程中不同时期的相对表达量不同ꎬ且差异达到显著水平ꎻ随着瘤茎的逐步膨大ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因的相对表达量逐渐减少ꎬ在瘤茎横径膨大到６ｃｍ时基因的相对表达量降至最低值ꎬ之后小幅度上升ꎮ相关性分析结果(表３)显示ꎬ可溶性糖含量与糖酸比呈显著正相关关系ꎬ可滴定酸含量与糖酸比呈显著负相关关系ꎬ基因的相对表达量与可溶性糖含量㊁可滴定酸含量和糖酸比均呈显著正相关关系ꎮ结果表明ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因对不同时期瘤状茎糖酸含量起到一定的正向调控作用ꎬ且在横径为２ｃｍ㊁４ｃｍ时相对表达量较高ꎬ横径为６ｃｍ㊁８ｃｍ时相对表达量较低ꎮ由此可见ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因在瘤茎膨大的不同时期有明显的表达特异性ꎬ推测其在茎瘤芥茎生长发育过程中具有特定的表达模式ꎬ并在一定程度上影响了糖酸比ꎮＢｊｕＧＡＰＣ蛋白在该过程中也发挥一定的功能ꎬ主要在瘤茎膨大前期起作用ꎮ３㊀讨论与结论为进一步了解ＧＡＰＤＨ在茎瘤芥茎膨大过程中的作用ꎬ本试验基于芥菜的基因组数据库ꎬ克隆得到ＢｊｕＧＡＰＣ基因ꎮ预测ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白相对分子质量为３.７６８ˑ１０４ꎬ是一个具有碱性㊁亲水性的稳定蛋白质ꎮＧＡＰＤＨ是高等植物糖酵解反应中的关键酶ꎬ能０８４１江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第６期够维持植物的生命活动ꎬ按照生化特性可分为磷酸化ＧＡＰＤＨ和非磷酸化ＧＡＰＤＨ两大类[２２]ꎮ通过分析ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的磷酸化位点ꎬ发现该蛋白质存在３３个潜在的磷酸化位点ꎬ推测其可能参与糖酵解途径ꎬ对糖酸合成起到一定的调控作用ꎮ表２㊀不同采样时期茎瘤芥瘤状茎的糖酸含量Ｔａｂｌｅ２㊀ＳｕｇａｒａｎｄａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｅｓｔｅｍｏｆＢｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ.ｔｕｍｉｄａｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓａｍｐｌｉｎｇｓｔａｇｅｓ时期可溶性糖含量(ｍｇ/ｇ)可滴定酸含量(ｍｇ/ｇ)糖酸比蔗糖含量(ｍｇ/ｇ)果糖含量(ｍｇ/ｇ)葡萄糖含量(ｍｇ/ｇ)Ｓ１２０.８３ʃ１.１３ａ２５.７０ʃ０.３３ａ０.８１１６.６１ʃ０.５２ａ０.７８ʃ０.０７ｄ２.４２ʃ０.２８ｂｃＳ２１４.９３ʃ１.１０ｃ２４.６６ʃ０.１９ｂ０.６１６.２８ʃ０.０９ｃｄ１.７４ʃ０.３０ｂ１.０６ʃ０.１０ｄＳ３１３.６０ʃ０.３３ｂｃ２１.４９ʃ０.０６ｃ０.６３６.７７ʃ０.０４ｂｃ３.１０ʃ０.０９ａ３.５０ʃ０.６０ａＳ４１８.８２ʃ０.５３ｂ１８.８１ʃ０.０６ｄ１.００７.３３ʃ０.２３ｄ１.３６ʃ０.１６ｃ２.４０ʃ０.４２ｂｃＳ１㊁Ｓ２㊁Ｓ３和Ｓ４时期分别指瘤状茎膨大到２ｃｍ㊁４ｃｍ㊁６ｃｍ㊁８ｃｍ的时期ꎮ同列数据后标不同小写字母表示差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮＳ１㊁Ｓ２㊁Ｓ３和Ｓ４时期分别指瘤状茎膨大到横径为２ｃｍ㊁４ｃｍ㊁６ｃｍ㊁８ｃｍ的时期ꎮ不同时期对应的柱上标有不同小写字母表示差异显著(Ｐ<００５)ꎮ图８㊀ＢｊｕＧＡＰＣ基因不同时期的表达丰度(Ａ)与ｑＲＴ￣ＰＣＲ表达分析(Ｂ)Ｆｉｇ.８㊀Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｂｕｎｄａｎｃｅ(Ａ)ａｎｄｑＲＴ￣ＰＣＲｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ(Ｂ)ｏｆＢｊｕＧＡＰＣｇｅｎｅａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｇｅｓ表３㊀不同时期茎瘤芥瘤状茎糖酸含量与基因表达量间的相关性Ｔａｂｌｅ３㊀ＣｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｓｕｇａｒａｎｄａｃｉｄｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｅｓｔｅｍｏｆＢｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａｖａｒ.ｔｕｍｉｄａａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｅｒｉｏｄｓ类别基因相对表达量可溶性糖含量可滴定酸含量糖酸比基因相对表达量１.０００可溶性糖含量０.３５３∗１.０００可滴定酸含量０.２１４∗０.１４２１.０００糖酸比０.２６９∗０.７５３∗－０.５３８∗１.０００∗表示在０.０５级别(双尾)相关性显著(Ｐ<０.０５)ꎮ㊀㊀蔗糖是植物生长发育过程中各种调控机制的信号ꎬ它还影响编码转运蛋白㊁贮藏蛋白和应激反应的基因的表达[２３￣２７]ꎮ在瘤状茎发育期间ꎬ在发育前期茎中蔗糖大量积累ꎬ还原糖含量较低ꎮ在发育后期ꎬ蔗糖和还原糖在茎中均有积累现象ꎮ这说明ＢｊｕＧＡＰＣ基因在前期相对表达量较多ꎬ同时由于叶片中还原糖能较快地转化为蔗糖ꎬ所以能迅速输送到茎中用于其他物质的合成ꎬ而在发育后期ꎬ由于植株机体机能逐渐衰退ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因相对表达量降低ꎬ瘤状茎中其他物质合成能力减弱ꎬ合成的蔗糖减少ꎬ还原糖含量相对下降ꎮ根据磷酸化的ＧＡＰＤＨ在细胞中的不同定位可将其分为ＧＡＰＣ㊁ＧＡＰＣｐ和ＧＡＰＡ/Ｂ三类[２８￣２９]ꎮ试验中发现ＢｊｕＧＡＰＣ的蛋白质序列中不存在已知的信号肽ꎬ并且没有任何跨膜结构或膜结合区域ꎬ说明该蛋白质不是分泌蛋白ꎬ不经过跨膜转运ꎬ而是在细胞质中直接形成ꎬ亚细胞定位预测结果也证实了这一点ꎮ因此ꎬＢｊｕＧＡＰＣ蛋白属于ＧＡＰＣꎬ定位于细胞质中ꎮ从系统进化树可以看出ꎬ分支点越接近ꎬ物种间的亲缘性越相似ꎬ说明编码这些蛋白质的基因间的功能也具有一定的相似性ꎬ同时说明ＧＡＰＤＨ基因家族蛋白质遗传进化比较保守ꎮＢｊｕＧＡＰＣ蛋白之所以能行使生物学功能是因为其特定的空间结构ꎮ通过三级结构预测发现ꎬＢｊｕ￣ＧＡＰＣ蛋白能够形成同源四聚体ꎬ并且结合４个ＮＡＤ＋配体ꎮ由蛋白质结构域分析结果可知ꎬＢｊｕＧＡＰＣ的２个超家族结构域Ｇｐ＿ｄｈ＿Ｎ和Ｇｐ＿ｄｈ＿Ｃ中ꎬ前者是辅酶ＮＡＤ＋的结合域ꎬ后者是行使糖运输和代谢的功能域ꎬ１８４１李晓燕等:茎瘤芥ＢｊｕＧＡＰＣ基因序列特征及其参与茎发育的糖酸含量调控推测ＢｊｕＧＡＰＣ基因的表达产物在茎瘤芥细胞质中参与糖酵解过程ꎬ符合上述所推测的ＢｊｕＧＡＰＣ的结构和功能特征ꎮ以前的多种研究结果普遍表明ꎬＧＡＰＤＨ基因在同一组织的不同生理状态下或同一生物体的不同组织中均相对稳定且高水平表达ꎬ因此可以作为内参基因来进行其他功能基因的表达差异分析ꎮ但是ꎬ本研究通过ｑＲＴ￣ＰＣＲ技术检测发现ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因在茎瘤芥茎膨大不同时期有明显的表达特异性ꎬ不同时期糖酸比测定结果显示ꎬＢｊｕＧＡＰＣ基因相对表达量随不同时期变化与糖酸比含量呈现出一致趋势ꎬ说明ＢｊｕＧＡＰＣ基因参与了茎瘤芥的生长发育过程ꎬ并且主要在瘤茎膨大前期发挥功能ꎮＧＡＰＤＨ基因可以作为多物种分子生物学研究的内参基因ꎬ但是在本试验的芥菜发育过程中表达差异较大ꎬ这可能是由于物种不同导致的特异性差异所决定的ꎮ在对ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白的磷酸化位点分析中ꎬ发现了植物抗逆相关特异性蛋白质激酶的结合位点ꎬ也可以说明ＧＡＰＤＨ在功能上与植物的生长发育密切相关ꎮ一些研究者的转基因试验结果也表明ꎬＧＡＰＤＨ缺失或过表达均会在一定程度上影响植物的代谢和生长发育[３０]ꎬ并且ＧＡＰＤＨ基因的表达水平会随着内外源诱导因子的变化而变化ꎬ推测ＢｊｕＧＡＰＣ蛋白中参与信号转导和激素调控等的Ｏ￣ＧｌｃＮＡｃ糖基化位点和Ｎ￣糖基化位点与此有关[３１￣３２]ꎮ糖酸含量分析结果表明ꎬＢｊｕ￣ＧＡＰＣ蛋白参与了糖代谢过程ꎮ目前ꎬ有关芥菜ＧＡＰ￣ＤＨ功能和作用机制的相关报道还很少ꎬ本试验对Ｂｊｕ￣ＧＡＰＣ基因的克隆可以为分析逆境胁迫条件下Ｂｊｕ￣ＧＡＰＣ基因的表达模式㊁探讨ＢｊｕＧＡＰＣ在茎瘤芥茎膨大过程中的作用奠定基础ꎬ后续还可以进一步构建植物表达载体ꎬ通过转基因等途径深入探究ＢｊｕＧＡＰＣ基因在逆境胁迫和茎瘤芥茎膨大过程中的功能ꎮ此外ꎬ本研究结合不同时期糖酸比变化趋势ꎬ验证了茎瘤芥ＢｊｕＧＡＰＣ基因确实对糖酸含量起到正向调控作用ꎮ参考文献:[１]㊀ＱＩＸＨꎬＺＨＡＮＧＭＦꎬＹＡＮＧＪＨ.ＭｏｌｅｃｕｌａｒｐｈｙｌｏｇｅｎｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅｖｅｇｅｔａｂｌｅｍｕｓｔａｒｄ(Ｂｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａ)ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒｓ(ＩＴＳ)ｏｆｎｕｃｌｅａｒｒｉｂｏｓｏｍａｌＤＮＡ[Ｊ].ＧｅｎｅｔｉｃＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＣｒｏｐＥｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ２００７ꎬ５４(８):１７０９￣１７１６.[２]㊀ＺＨＡＮＧＬꎬＬＩＺꎬＧＡＲＲＡＷＡＹＪꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｃａｓｅｉｎｋｉｎａｓｅ２βｓｕｂ￣ｕｎｉｔＣＫ２Ｂ１ｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｓｗｏｌｌｅｎｓｔｅｍｆｏｒｍａｔｉｏｎｖｉａｃｅｌｌｃｙｃｌｅｃｏｎｔｒｏｌｉｎｖｅｇｅｔａｂｌｅＢｒａｓｓｉｃａｊｕｎｃｅａ[Ｊ].Ｐｌａｎｔꎬ２０２０ꎬ１０４(３):７０６￣７１７.[３]㊀ＸＵＺꎬＷＡＮＧＱꎬＧＵＯＹꎬｅｔａｌ.Ｓｔｅｍ￣ｓｗｅｌｌｉｎｇａｎｄｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈａｔｅｐａｒ￣ｔｉｔｉｏｎｉｎｇｉｎｓｔｅｍｍｕｓｔａｒｄａｒｅｒｅｇｕｌａｔｅｄｂｙｐｈｏｔｏｐｅｒｉｏｄａｎｄｐｌａｎｔｈｏｒ￣ｍｏｎｅｓ[Ｊ].ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｏｔａｎｙꎬ２００８ꎬ６２(２):１６０￣１６７.[４]㊀ＵＭＥＲＭＪꎬＢＩＮＳＬꎬＺＨＡＯＳＪꎬｅｔａｌ.Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｋｅｙｇｅｎｅｎｅｔ￣ｗｏｒｋｓｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄａｎｄｓｕｇａｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｄｕｒｉｎｇｗａｔｅｒｍｅｌｏｎｆｒｕｉｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｂｙｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇｍｅｔａｂｏｌｉｃｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓａｎｄｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ￣ｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｓ[Ｊ].ＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０２０ꎬ７(１):３￣７. [５]㊀ＤＯＩＤＹＪꎬＧＲＡＣＥＥꎬＷＩＰＦＤꎬｅｔａｌ.Ｓｕｇａｒｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓｉｎｐｌａｎｔｓａｎｄｉｎｔｈｅｉｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｗｉｔｈｆｕｎｇｉ[Ｊ].ＴｒｅｎｄｓＰｌａｎｔＳｃｉꎬ２０１２ꎬ１７(７):１３￣２２.[６]㊀ＳＵＺＵＫＩＹＪꎬＩＳＨＩＹＡＭＡＫＫꎬＳＵＧＡＷＡＲＡＭＫꎬｅｔａｌ.Ｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃ￣ｔｉｏｎｏｆｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｍｐｒｏｖｅｓｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｓｌｉｇｈｔｌｙｕｎｄｅｒｅｌｅｖａｔｅｄ[ＣＯ２]ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｉｎｒｉｃｅ[Ｊ].Ｐｌａｎｔ＆ｃｅｌｌｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ２０２０ꎬ６２(１):１５６￣１６５.[７]㊀ＭＡＲＴＩＮＷꎬＢＲＩＮＫＭＡＮＮＨꎬＳＡＶＯＮＮＡＣꎬｅｔａｌ.Ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｃｈｉｍｅｒｉｃｎａｔｕｒｅｏｆｎｕｃｌｅａｒｇｅｎｏｍｅｓ:ｅｕｂａｃｔｅｒｉａｌｏｒｉｇｉｎｏｆｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｇｅｎｅｓ[Ｊ].ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡꎬ１９９３ꎬ９０(１８):８６９２￣８６９６.[８]㊀ＷＵＹＨꎬＷＵＭꎬＨＥＧＷꎬｅｔａｌ.Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙ￣ｄｒｏｇｅｎａｓｅ:ａｕｎｉｖｅｒｓａｌｉｎｔｅｒｎａｌｃｏｎｔｒｏｌｆｏｒｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｓｉｎｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃａｎｄｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍꎬ２０１２ꎬ４２３(１):１５￣２２. [９]㊀ＰＥＮＡＬＯＺＡＥꎬＧＵＴＩＥＲＲＥＺＡꎬＭＡＲＴＩＮＥＪꎬｅｔａｌ.Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｐｒｏｔｅｏｉｄｒｏｏｔｃｌｕｓｔｅｒｓｏｆｗｈｉｔｅｌｕｐｉｎ(Ｌｕｐｉｎｕｓａｌｂｕｓ)[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ２００２ꎬ１１６(１):２８￣３６.[１０]ＪＥＯＮＧＭＪꎬＰＡＲＫＳＣꎬＢＹＵＮＭＯ.Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｓａｌｔｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓｂｙｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅｓ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌｅｓａｎｄＣｅｌｌｓꎬ２００１ꎬ１２(２):１８５￣１８９. [１１]ＤＡＶＯＵＤＩＭꎬＭＯＲＡＤ￣ＳＡＲＤＡＲＥＨＨꎬＰＡＫＮＥＪＡＤＭꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｉｌｖｅｒｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｏｎｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆａｍｙｌｏｉｄ￣ｌｉｋｅａｇｇｒｅｇａｔｅｓｉｎＭＣＦ￣７ｃｅｌｌｌｉｎｅ[Ｊ].ＩＵＢＭＢＬｉｆｅꎬ２０２０ꎬ７２(１０):２２１４￣２２２４. [１２]ＭＵＮＯＺＢＪꎬＣＡＳＣＡＬＥＳＭＢꎬＩＲＬＥＳＳＡꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｐｌａｓｔｉｄｉａｌｇｌｙｃ￣ｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｓｃｒｉｔｉｃａｌｆｏｒｖｉａｂｌｅｐｏｌｌｅｎｄｅ￣ｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０１０ꎬ１５２(５):１８３０￣１８４１.[１３]ＫＯＰＥＣＫＯＶＡＭꎬＰＡＶＫＯＶＡＩꎬＳＴＵＬＩＫＪ.Ｄｉｖｅｒｓｅｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｂｉｎｄｉｎｇａｂｉｌｉｔｉｅｓｏｆｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａ:ｔｈｅｋｅｙｔｏｉｔｓｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＣｅｌｌＩｎｆｅｃｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌꎬ２０２０ꎬ１０:１９.[１４]ＰＩＡＴＴＯＮＩＣＶꎬＦＥＲＲＥＲＯＤＭＬꎬＶＥＧＥＴＴＩＡꎬｅｔａｌ.Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｓｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄｄｕｒｉｎｇｓｅｅｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＰｌａｎｔＳｃｉꎬ２０１７ꎬ８:５１８￣５２２. [１５]ＳＥＢＡＳＴＩＡＮＰＲꎬＰＡＵＬＡＣꎬＡＬＢＥＲＴＯＡＩꎬｅｔａｌ.ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｌｉｎｅｓｄｅｆｉｃｉｅｎｔｉｎＧＡＰＣ￣１ꎬａｃｙｔｏｓｏｌｉｃＮＡＤ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ２００８ꎬ１４８(３):１６５５￣１６６７.[１６]ＮＡＫＡＳＨＩＭＡＫꎬＳＨＩＮＷＡＲＩＺＫꎬＳＡＫＵＭＡＹꎬｅｔａｌ.ＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｗｏＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＤＲＥＢ２ｇｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇＤＲＥ￣ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎａｎｄｈｉｇｈ￣ｓａｌｉｎｉｔｙ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｇｅｎｅｅｘ￣２８４１江苏农业学报㊀２０２２年第３８卷第６期ｐｒｅｓｓｉｏｎ[Ｊ].ＰｌａｎｔＭｏｌＢｉｏｌꎬ２０００ꎬ４２(４):６５７￣６６５.[１７]ＬＩＣＷꎬＳＵＲＣꎬＣＨＥＮＧＣＰꎬｅｔａｌ.ＴｏｍａｔｏＲＡＶｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃ￣ｔｏｒｉｓａｐｉｖｏｔａｌｍｏｄｕｌａｔｏｒｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅＡＰ２/ＥＲＥＢＰｍｅｄｉａｔｅｄｄｅ￣ｆｅｎｓｅｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０１１ꎬ１５６(１):２１３￣２２７. [１８]ＫＩＴＯＭＩＹꎬＩＴＯＨꎬＨＯＢＯＴꎬｅｔａｌ.ＴｈｅａｕｘｉｎｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅＡＰ２/ＥＲＦｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＣＲＯＷＮＲＯＯＴＬＥＳＳ５ｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃｒｏｗｎｒｏｏｔｉｎｉ￣ｔｉａｔｉｏｎｉｎｒｉｃｅｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆＯｓＲＲ１ꎬａｔｙｐｅ￣Ａｒｅｓｐｏｎｓｅｒｅｇ￣ｕｌａｔｏｒｏｆｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇ[Ｊ].Ｐｌａｎｔꎬ２０１１ꎬ６７(３):４７２￣４８４. [１９]李㊀彤ꎬ邵慧慧ꎬ韩嘉宁ꎬ等.金鱼草ＡｍＰＩＦ４基因克隆及调控花香物质合成释放功能分析[Ｊ].西北植物学报ꎬ２０２１ꎬ４１(１２):１９９４￣２００１.[２０]ＬＩＭＹꎬＸＩＥＦＪꎬＨＥＱꎬｅｔａｌ.ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｏｆＸＴＨｉｎｓｔｅｍｓｗｅｌｌｉｎｇｏｆｓｔｅｍｍｕｓｔａｒｄａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｒｅｆｅｒｅｎｃｅｇｅｎｅｓ[Ｊ].Ｇｅｎｅｓ(Ｂａｓｅｌ)ꎬ２０２０ꎬ１１(１):１１３￣１１６.[２１]ＫＵＭＡＲＳꎬＳＴＥＣＨＥＲＧꎬＫＮＹＡＺＣꎬｅｔａｌ.ＭＥＧＡＸ:ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｖｏ￣ｌｕｔｉｏｎａｒｙｇｅｎｅｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓａｃｒｏｓｓｃｏｍｐｕｔｉｎｇｐｌａｔｆｏｒｍｓ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＥｖｏｌｕｔｉｏｎꎬ２０１８ꎬ３５(６):１５４７￣１５４９.[２２]ＴＡＫＥＤＡＴꎬＦＵＫＵＩＹ.ＰｏｓｓｉｂｌｅｒｏｌｅｏｆＮＡＤ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｇｌｙｃｅｒａｌｄｅ￣ｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｎｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｓｅｅｄｌｉｎｇｓｂｙｌｏｗｌｅｖｅｌｓｏｆｓｅｌｅｎｉｕｍ[Ｊ].ＢｉｏｓｃｉＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｃｈｅｍꎬ２０１５ꎬ７９(１０):１５７９￣１５８６.[２３]ＹＯＯＮＪꎬＣＨＯＬＨꎬＴＵＮＷꎬｅｔａｌ.Ｓｕｃｒｏｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｈｉｇｈｅｒｐｌａｎｔｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＳｃｉꎬ２０２１ꎬ３０２:１１０７０３.[２４]严志祥ꎬ杨海燕ꎬ樊苏帆ꎬ等.黑莓果实发育过程中蔗糖磷酸合成酶基因的表达分析[Ｊ].南京林业大学学报(自然科学版)ꎬ２０２２ꎬ４６(１):１７９￣１８６.[２５]李东霞ꎬ徐中亮ꎬ符海泉ꎬ等.糖对椰枣组织培养物的影响[Ｊ].南方农业学报ꎬ２０２１ꎬ５２(１１):３０５９￣３０６６.[２６]田双燕ꎬ张应龙ꎬ何天久ꎬ等.马铃薯间作玉米对马铃薯生长㊁产量及糖类物质的影响[Ｊ].南方农业学报ꎬ２０２１ꎬ５２(５):１１９８￣１２０５. [２７]姜楠南ꎬ张启翔ꎬ王㊀媛ꎬ等.赤霉素对大富贵芍药休眠解除及内源激素和糖类代谢的影响[Ｊ].南京林业大学学报(自然科学版)ꎬ２０２０ꎬ４４(３):２６￣３２.[２８]ＢＡＣＫＨＡＵＳＥＮＪＥꎬＶＥＴＴＥＲＳꎬＢＡＡＬＭＡＮＮＥꎬｅｔａｌ.ＮＡＤ￣ｄｅ￣ｐｅｎｄｅｎｔｍａｌａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅａｎｄｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈ￣ａｔｅｄｅｈｙ￣ｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｓｏｅｎｚｙｍｅｓｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｄａｒｋｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｖａ￣ｒｉｏｕｓｐｌａｓｔｉｄｔｙｐｅｓ[Ｊ].Ｐｌａｎｔａꎬ１９９８ꎬ２０５:３５９￣３６６.[２９]ＡＶＩＬＡＮＬꎬＭＡＢＥＲＬＹＣＳꎬＭＥＫＨＡＬＦＭꎬｅｔａｌ.Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｌｙｃ￣ｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｎｔｈｅｅｕｓｔｉｇｍａｔｏｐｈｙｔｅＰｓｅｕｄｏ￣ｃｈａｒａｃｉｏｐｓｉｓｏｖａｌｉｓｉｓｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｂｅｔｗｅｅｎａｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｅａｎｄａｄｉａｔｏｍ[Ｊ].ＥｕｒＪＰｈｙｃｏｌꎬ２０１２ꎬ４７(３):２０７￣２１５.[３０]ＳＥＢＡＳＴＩＡＮＰＲꎬＰＡＵＬＡＣꎬＡＬＢＥＲＴＯＡＩꎬｅｔａｌ.ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｌｉｎｅｓｄｅｆｉｃｉｅｎｔｉｎＧＡＰＣ￣１ꎬａｃｙｔｏｓｏｌｉｃＮＡＤ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ￣３￣ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ２００８ꎬ１４８(３):１６５５￣１６６７.[３１]ＨＡＲＴＧＷꎬＨＯＵＳＬＥＹＭＰꎬＳＬＡＷＳＯＮＣ.ＣｙｃｌｉｎｇｏｆＯ￣ｌｉｎｋｅｄｂｅ￣ｔａ￣Ｎ￣ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅｏｎｎｕｃｌｅｏｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ２００７ꎬ４４６(７１３９):１０１７￣１０２２.[３２]ＷｏｏｄｗａｒｄＡＷꎬＢａｒｔｅｌＢ.Ａｕｘｉｎ:ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎꎬａｃｔｉｏｎꎬａｎｄｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＡｎｎＢｏｔꎬ２００５ꎬ９５(５):７０７￣７３５.(责任编辑:张震林)３８４１李晓燕等:茎瘤芥ＢｊｕＧＡＰＣ基因序列特征及其参与茎发育的糖酸含量调控。

10大高校组织结构图

基础版企业信用报告
日照大旗工贸有....................................................................................................................................................5 1.1 工商信息 ......................................................................................................................................................5 1.2 分支机构 ......................................................................................................................................................5 1.3 变更记录 ......................................................................................................................................................5 1.4 主要人员 ....................................................................................................................................................11 1.5 联系方式 ....................................................................................................................................................11

花器官发育的ABC模型研究进展

! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! 形成萼片状、心皮状或花瓣状的器官代替心皮。 ! 类功能缺失则 "#$ 延伸表达，心皮代替萼片，雄蕊代替花瓣。根据在矮牵牛中的研究结果，!%& 模型被扩展
a类功能基因突变后ap2突变体ag就会在第类功能基因的表达不受影响这样在突变体中轮花器官只有c类功能基因作用发育为心皮花器官中的基因表达模式不变仍然发育成雄蕊和pi突变体轮花器官中只有ac类功能基因表达而分别发育成花萼和心皮同时第14轮花器官的发育不受影响分别发育形成花萼和心皮由此形成的花只有花萼和心皮结构
［"］
面一轮是心皮，是雌性生殖器官，常常是几个心皮结合，胚珠和种子在里面形成。尽管发育完全后萼片、花瓣、雄蕊和心皮的结构和功能可能差异很大，每个花器官都是由花分生组织的一些凸起（一小团未分化细胞）开始发育的。在花原基发育过程中每个细胞都必须获悉在花中的位置，相应地分化
［$］成适当的细胞类型。
［L］的工作证实了这一点：在 6J>63 双突变体 +.K/64 中，第 *、< 轮花器官均转化成叶片（绿色，有托
究花发育的模式植物。两者有不同的优点，前者的优点是有优良性状的移动因子短，植株体积小。已经发现了它们已有大量的突
农业生物技术科学中国农学通报
第 *L 卷
第I期
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综合治理委员会
家校管理委员会
科研委员会
基部长础德育部长部
研委员会基础部教学部长国际部长部教学部长部长高副部长中部德育部长教学部长
季雪丽何光锋高树建陈上平曹伟张必博罗松青
素质发展心理模块组长素质发展事业模块组长素质发展精神模块组长素质发展能力模块组长素质发展社会关系模块组长后副校长勤总务处主任
委员委员委员委员委员
人员名单陈上平郭宁何光锋陈松银夏宏宇曹伟张必博原明娜刘洪波熊建军彭杰刘海清杜文学张必博杨帆杜文学彭杰（兼）程福荣谢先高姚建新陈上平陈松银黄祥喜何光锋吴志良袁方堵靖斐孙茜方非洲张兰金多钰顾玉萍谢先高吴志良陈松银陈上平何光锋姚建新郭宁原明娜谢新爱张玲杜文学彭杰熊建军马嫣菲
剑桥光华组织架构
机构主管部门岗位职务人员名单机构主管部门岗位德育副校长科研助理国际部部长基础部部长基础部德育副部长高中部副部长高中部德育副部长三赛执委三赛执委三赛执委年级主任年级主任年级主任素质发展心理模块组长素质发展事业模块组长素质发展精神模块组长素质发展能力模块组长素质发展社会关系模块组长副校长、宣传委主任网络宣传主任高中部部长、公共平台负责人基础部校长、公共平台负责人家校委主任、公共平台负责人国际部部长、公共平台负责人科研委主任、公共平台负责人学部宣传代表学部宣传代表学部宣传代表学部宣传代表学部宣传代表信息教育技术人员信息教育技术人员副校长、科研委主任网络教育研发部副校长基础部部长高中部部长国际部部长网络宣传主任科研助理语文学科组长数学学科组长英语学科组长理化生学科组长政史地文科学科组长体音美学科组长经济学科组长职务主任副主任副主任副主任副主任副主任副主任委员委员委员委员委员委员委员委员委员委员委员主任副主任副主任副主任副主任副主任副主任委员委员委员委员委员委员委员主任副主任副主任副主任副主任副主任副主任委员委员委员委员委员委员委员校长主任副校长、高中部部长副主任副校长、基础部部长副主任副校长、宣传委、科研委主任副主任副校长、科研委副主任副主任副校长、家校委主任副主任副校长、后勤副主任副校长、综合委主任副主任副校长、国际部部长副主任校办主任委员人力资源部主任委员招办主任委员高中部副部长委员高中部教学部长委员高中部德育部长委员国际部教学部长委员基础部德育部长委员基础部教学部长委员宣传委副主任委员教学副校长主任国际部部长副主任高中部部长副主任高中部教学部长副主任基础部教学部长副主任高中部副部长副主任国际部教学部长副主任语文学科组长委员数学学科组长委员英语学科组长委员理化生学科组长委员政史地文科学科组长委员体音美学科组长委员经济学科组长委员副校长主任人力资源部主任副主任校务办公室主任副主任督导办主任委员保卫科主任委员家校委副校长主任家校委副主任招办主任副主任杨晓慧陈上平陈松银谢先高吴志良黄祥喜谢贵友杨立新何光锋谭志远李清涛童睿曹伟罗松青张必博高树建夏宏宇季雪丽姚建新陈松银何光锋陈上平罗松青季雪丽曹伟高树建原明娜谢新爱张玲杜文学彭杰熊建军马嫣菲杨立新李清涛谭志远杨立新李刚黄祥喜谭志远童睿各年级主任委员班主任家长代表陈松银夏宏宇

农林经济管理专业课程体系框架图-青岛农业大学

会计学原理实验
8 （8 ）
第 2 学期
经管学院
统计学原理统计学原理实验
48 8 （8 ）
第 3 学期第 3 学期
经管学院经管学院
市场营销学Ⅰ实验
8 （8 ）
第 4 学期
通过有关产品市场营销方案的策划，进一步掌握产品开发、生产、定价、分销、促销等营销活动理论。了解管理信息系统的基本理论；掌握从管理信息系统规划和开发、系统设
经管学院
企业管理学实验
8 （8 ）
第 4 学期
模拟企业成立以及经营过程各个环节的人、财、物管理方法，加深对有关理论的理解。了解农业不同量级生产单位的农业技术经济问题。为进一步分析生产中各
经管学院
农业技术经济学
48（4）
第 5 学期
个要素的贡献水平和整体优化提供理论基础。先修课程：《农业经济学》、《线性规划》；后续课程：《农学原论》。
经管学院
资源与环境经济学
40（4）
第 5 学期
了解和掌握资源与环境经济学的基本理论以及当前的主要资源与环境问
经管学院
题。提高学生科学分析和合理解决资源与环境问题的能力。先修课程：《微观经济学》、《宏观经济学》。农业政策学 32（4）第 6 学期强化农业政策理论和经济理论，掌握农业政策的制定、执行、运用的相关理论和方法。先修课程：《农业经济学》；后续课程：《农村金融》。拓展学生的知识结构，让学生掌握土地经济学的基本理论、政策，提高学生分析解决土地经济问题的能力。先修课程：《农业经济学》。掌握农村金融基本理论、农村金融的特征，掌握农村金融融投资方法和货币资金在农村经济中的运动规律。先修课程：《金融学Ⅰ》。掌握会计要素的确认和计量，帮助学生学会进行会计判断，是经管类的主干课程。先修课程：《会计学原理》；后续课程：《审计学Ⅰ》。通过有关业务核算，加深掌握会计核算、账务处理、凭证填制、账簿登记、会计报表编制等会计要素的确认和计量。理解会计信息系统处理数据的基本原理，掌握会计软件基本功能模块的操会计信息系统 24 第 4 学期作方法和技巧，强化学生操作会计软件的专业技能。先修课程：《会计学原理》、《财务会计学Ⅰ》。会计信息系统实验 32（32）第 4 学期让学生锻炼提高会计软件的实际应用能力，为会计工作打下良好的基础。系统地理解财务管理的基本理论，了解村级财务管理的制度规定，掌握农农村财务管理 40 第 5 学期村财务活动中的筹资管理、投资管理和利润分配管理等方法，提高村级财务的决策能力。先修课程：《会计学原理》。农村财务管理实验 8 （8 ）第 5 学期通过有关业务核算，加深掌握农村财务活动中的筹资管理、投资管理和利润分配管理等方法，提高村级财务的决策能力。帮助学生在高度的工业化、城市化、市场化和国际化的浪潮中，从哲学和农学原论专业拓展课程（选修）畜牧学概论 32 第 5 学期 32 第 5 学期思想的角度，而不是仅仅从技术和政策的角度来探讨和思索 “农”的问题。先修课程：《农业技术经济学》、《农业经济学》。使学生了解动物饲养原理、动物遗传的基本原理、动物的生长发育规律及育种的基本方法、动物繁殖生理、繁殖技术及常见的繁殖障碍等方面的基本知识。为学生在农牧及食品加工贸易等相关领域指导畜牧生产，搞好经营管理打下基础。农业、农业经济认知拓展动科学院经管学院经管学院经管学院农村经济核算管理经管学院经管学院经管学院

10大高校组织结构图

•••组织机构是组织活动的存在形式，组织活动则是组织机构存在和发展的动力和源泉。

没有组织机构就无从开展组织管理活动，更谈不上实现管理目标。

就组织这一概念有人解释为：为了达到某些特定目标经由分工与合作及不同层次的权力责任制度而构成的人的集合。

•管理学家巴纳德则认为：组织是有意识地协调两个或多个人活动或力量的系统。

任何一所学校要想正常开展教育教学活动，就必须把学校各类人员组合起来，构成一个有机的系统，这个有机的系统就是学校组织机构。

学校组织机构就是为完成学校教育教学工作目标而将学校各个部门按一定形式组合而成的一个整体。

••管理学家孔茨认为：组织机构的设计应当职责分明，使每个人都知道应该做些什么，谁对什么成果负责；应能够排除由于工作分配的混乱和多变所造成的故障；并能提供反映和支持组织目标的决策沟通网络。

由此可见，学校管理者在设计学校组织机构时应考虑六个方面的因素：专门化、部门化、指挥系统、控制幅度、集权与分权、正规化。

因为学校工作千头万绪、纷繁复杂，任何人都无法独自承担学校的所有工作，因此必须对学校工作进行分工并采取专门化、部门化，建立指挥系统，根据部门职能给予一定的权力，进行规范化管理以实现管理目标。

••组织机构一般包括两大类：•（一）行政性组织机构，是为完成教育教学任务、维持学校的正常运转而设立的。

其形式为校长办公室、教导（务）处、政教处、总务处等。

各部门有各部门的职责。

（二）非行政性组织机构，是为配合、监督、保证学校的各项活动而设立的。

一般包括党、群、团组织和各种研究性团体。

十所大学组织结构图•青岛科技大学•清华大学•西南财经大学•中国海洋大学•北京航空航天大学•青岛大学•曲阜师范大学•中央戏剧学院•南开大学•复旦大学高校组织结构的基本类型一、直线职能制组织结构二、事业部制组织结构三、矩阵制组织结构1、西南财经大学管理机构+ 党委办公室+ 校长办公室+ 经济研究中心与中国西部经济研究中心党总支+ 组织人事部+ 发展规划处+期刊中心经济学家财经科学+ 宣传统战部+ 教务处+ 出版社+ 学生工作部（处）+ 科研处+ 光华校区管理办公室+ 纪检监察办公室+ 研究生部+后勤服务总公司+ 审计处+ 外事处+ 教职工心理健康与人力资源开发中心+ 团委+ 财务处+ 教学训练与评估中心+ 武装部+ 国有资产管理处+ 经济管理实验教学中心+ 工会+ 基建处+ 学生职业规划与就业指导中心+ 图书馆+ 保卫处+ 档案馆+ 离退休工作处+ 现代教育技术中心+ 心理健康教育中心+ 信息化办公室+ 校友总会办公室2、中央戏剧学院3、青岛大学o党群系统：纪委党委办公室组织部宣传部统战部离退休工作处工会妇委会团委o行政系统：校长办公室教务处科研处学生处研究生处国际交流合作处人事处财务处实验室与设备管理处审计处保卫处发展规划处后勤管理处基建处o直属单位：党校报社图书馆学报东校区体育教学部校医院校办企业办公室公共外语理论教学部思想政治理论教学部4、曲阜师范大学5、北京航空航天大学党群部门党政办公室、组织部/党校、宣传部/新闻中心、纪委办公室、统战部、保卫部、保密部、学生工作部/武装部、研究生工作部、机关党委、离退休党委、工会、团委、北航科协行政机构党政办公室(校友工作办公室、档案馆、北航教育基金会)、发展规划处、学生处、保卫处、保密处、机关行政办公室、教务处、科技综合处、军工科技处、科技研发处、研究生院、人事处、财务处、审计处、监察处、国际交流合作处、招生就业处、实验室及设备管理处、资产管理处、后勤管理处、校园规划与建设处、离退休工作处、无人机研究所、网络信息与计算中心、图书馆、体育部、继续教育学院、工程训练中心、校医院、北京北航资产经营有限公司、后勤集团、北航出版社、附属中学、附属小学学术组织学术委员会、学位委员会、教学指导委员会领导小组校园规划与建设领导小组、财经工作领导小组、干部工作领导小组、教师外语培训工作领导小组、校学生工作领导小组、校高级专业技术职务评审委员会、学科评议组、学生军训工作领导小组、招生监察领导小组、学生公寓管理委员会、非学历高等教育规范管理领导小组、MPA教育指导委员会协会中国工程图学学会、中国复合材料学会、中国系统仿真学会、中国航空学会动力专业分会、中国航空学会自动控制专业分会、中国航空学会人体工程航医救生专业分会、中国航空学会复合材料专业分会、中国航空学会可靠性专业分会、中国航空学会信号与信息处理分会、中国中文信息学会基础理论专业委员会、中国高等教育学会、高等工程教育研究会、北京航空航天学会、北京工程图学学会、北京电镀学会、北京振动工程学会、北京价值工程学会、中国机械工程学会失效分析分会、中国计算机用户协会图像分会、中国空间科学学会生命专业委员会、中国航空教育学会外语教学专业委员会、人事管理专业委员会、中国系统仿真学会虚拟技术及应用专业委员会6、中国海洋大学7、清华大学1）党委组织机构设置2）清华大学行政组织机构设置表8、复旦大学党务部门党办纪委、监察、审计组织部宣传部统战部机关党委/new_organize/jiguan.htm 学生工作部（处）研究生工作部老干部工作处（老龄工作网）保卫部（处）武装部行政部门校长办公室学科建设办公室、规划和政策研究室江湾校区管委会办公室张江校区管委会办公室江湾校区建设办公室研究生院教务处医院管理处科技处文科科研处医学中心人事处外事处对外联络与发展处外国留学生工作处退管会（老龄工作网）财务处产业化与校产管理办公室资产管理处总务处基建处其它部门团委工会妇委会复旦附中复旦二附中复旦附小复旦幼儿园9、南开大学组织结构专业学院●文学院●历史学院●哲学系●法学院●周恩来政府管理学院●外国语学院●马克思主义教育学院●经济学院●商学院●数学学院●物理学院●化学学院●生命科学学院●信息技术科学学院●环境科学与工程学院●医学院●软件学院●汉语言文化学院●深圳金融工程学院●泰达学院●泰达生物技术学院●泰达应用物理学院●经济与社会发展研究院●药学院●远程教育学院●日本研究院●滨海开发研究院□职能部门●办公室（党委办公室、校长办公室）●组织部（党校）●宣传部●统战部●纪委、监察室●学生工作部（学生工作办公室、武装部）●战略发展研究部●发展委员会办公室●人事处●教务处●研究生院（研究生工作部）●科学技术处●社会科学研究管理处●国际学术交流处●实验室设备处●财务处●审计处●保卫处●离退休人员管理处●后勤管理办公室●基建规划处●房产管理处●校产管理办公室●继续教育学院（开放教育学院）□党群组织●教代会、工会●团委●校友会●机关党委●直属单位党委□直（附）属单位●体育教学部●迎水道校区管理委员会●驻深圳办事处（深圳研究院）●图书馆/●档案馆/●信息化建设与管理办公室●学报编辑部●/noscript/xuebao高等教育研究所/noscript/xuebao/●中国APEC研究院/noscript/gjs/●附中((附小).cn/noscript/apec/●后勤服务集团●资产公司●大学科技园管理委员会●南开大学出版社/index.php?con tent=organization&type=1 - #●接待服务中心/index.php?c ontent=organization&type=1 - #□其它单位●元素有机国家重点实验室●功能高分子材料教育部重点实验室●农药国家工程研究中心（天津）●陈省身数学研究所●中国社会史研究中心●政治经济学研究中心●跨国公司研究中心●APEC研究中心●南开大学组合数学研究中心●东欧拜占廷研究中心●世界近现代史研究中心●南开大学公司治理研究中心●联合国教科文组织环境管理教席●环境与社会发展研究中心●欧洲研究中心●光电信息技术科学教育部重点实验室●虚拟经济与管理中心●南开大学实验室信息平台●WTO研究中心●南开大学语言研究所10、青岛科技大学总结。

大学组织架构图

大学组织架构图介绍大学组织架构图是一种以图表形式展示大学内部各个部门和其之间关系的文档。

通过这个图表，可以清晰地了解到大学组织结构层级以及各个部门之间的沟通和协作方式。

本文将详细介绍大学组织架构图的重要性、制作步骤以及常用的展示方式。

重要性大学组织架构图对于大学的管理和协调非常重要。

它可以帮助人们快速了解大学的层级结构，以及每个部门在整个组织中的位置和职责。

这有助于提高沟通和协作效率，使工作流程更加清晰和高效。

此外，大学组织架构图还能帮助学生和员工更好地了解大学的整体运作方式，有助于他们更好地适应和融入大学生活。

制作步骤制作大学组织架构图可以通过以下步骤完成：1.收集信息：首先，需要收集大学内部各个部门的相关信息，包括部门名称、所在位置、领导层级、职责等。

这些信息将作为绘制组织架构图的基础。