2019年最新-动物实验3.3转基因动物保种传代-精选文档
实验动物学 第八章 转基因动物与克隆动物
（二）反转录病毒感染法
将外源基因DNA插入逆转录病 毒载体；
通过辅助细胞包装成病毒颗粒， 感染胚胎；
再将感染的桑椹期胚胎导入子宫。
（三）胚胎干细胞法 （1）获取胚胎干细胞（ES细胞）； （2）将外源基因导入ES细胞； （3）获取囊胚期胚胎； （4）将含有外源基因的ES细胞注入
危动物。
第三节 转基因动物和克隆动物的 生物安全与社会安全
（1）生物安全——大自然正常的生态 平衡被打破。
（2）社会安全——涉及技术、宗教、 伦理等问题。如有人担心，坏人会克 隆出第二个希特勒，造成世界大乱。
新近克隆的8个人类胚胎的早期阶段
韩国科学家和美国《科学》周刊2004年2月12日 宣布克隆出世界上第一批成熟人类胚胎，称这是 克隆技术的又一重大进 展，有助于进一步加快 用干细胞治疗疾病的研 究。专家则警告说，这 一成果表明人类朝克隆出婴儿迈进了一步。
1987年，Martin Evans，Oliver Smithies 和 Mario Capecch 领导的 几个研究小组对胚胎干细胞中特定目 标基因进行失活，培育出了第一只基 因敲除小鼠。这三位科学家因为这项 工作在2001获得了Lasker奖。接下来， 科学家们用同样的技术又培育出了几 千只基因敲除小鼠。
第八章 转基因动物与克隆动物
第九章 转基因动物与克隆动物 第一节 转基因动物 第二节 克隆动物 第三节 转基因动物和克隆
动物的生物安全与社会安全
第九章 掌握内容
1、转基因动物和克隆动物的概念。 2、基因转移的5种方法。 3、动物克隆技术的基本方法。
第一节 转基因动物
一、转基因动物的概念
将特定的外源基因导入动物 受精卵或胚胎，使之稳定整合于 动物的染色体基因组并能遗传给 后代的一类动物。
【资料】转基因动物第二章实验动物的饲养与培育分析汇编
动物转基因技术
Animal transgenic technique
二、实验动物设施
实验动物设施：指与实验动物和动物实验 有关的实验动物的保种维持、生产、实验、 研究等所需的建筑物和设备的总称。
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1、实验动物设施的一般组成
饲育室、实验室、检疫室、洗刷消毒间、废 物处理设施、办公室、机房、库房等。
1、气候因素
（1）温度 18℃- 29℃ ● 影响生长发育和繁殖 ● 影响代谢 ● 激发应激反应 ● 影响试验结果。
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温度与毒性的关系
温度对3种药物LD50的影响
药物 苯异丙胺
LD50（mg/kg）
15.5℃ 26.7℃
197.0
90.0
盐酸脱氧麻黄碱 111.0
33.2
麻黄碱
477.1
565.0
特点： 1）保持一定的杂合性 2）保持相对稳定的遗传 特征 3）繁殖力、抗病力强、 生产成本低
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二、按微生物学控制原理分类
按照对微生物净化的程度，实验动物在我国分为四类: 普通级动物(CV) 清洁动物(CL级) 无特定病原体动物(SPF) 无菌动物（包括悉生动物、GF/GA)
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1、无菌动物
概念：机体内、外不带有任何现有方法可检测 出微生物和寄生虫的动物。 应用：（1）用于微生物学和寄生虫学研究
实验；（2）各种疫苗生产 。
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3．清洁动物
概念：指来自屏障系统的SPF动物，而饲育在半屏障 环境设施系统中的动物。 应用：一般用于短期、中期对带菌要求不严格的实 验研究。
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4. 普通动物
概念：是未经积极的微生物学控制，普遍地 饲养在开放卫生环境里的动物。 应用：教学、一般性实验、预实验
转基因动物方法简介
转基因动物方法简介动物转基因办法简介转基因动物就是基因组中含有外源基因的动物。
它是根据预先的设计，通过细胞融合、细胞重组、遗传物质转移、染色体工程和基因工程技术将外源基因导入精子、卵细胞或受精卵，再以生殖工程技术，有可能育成转基因动物。
原核显微注射法（原核期细胞：受精卵的两个核未融合时期的细胞）目前最常用的转基因动物生产办法，又称DNA显微注射法，即通过显微操作仪将外源基因直接用注射器注入受精卵，利用外源基因整合到DNA中，发育成转基因动物。
其创始人是Jaenisch和Mintz 等。
Gordon等和Palmiter等先后通过此办法获得转基因动物。
此办法目前应用较普遍，现在的转基因动物讨论大都是在Palmiter等办法的基础上有所改进而举行的。
王敏华(1996)报道用显微注射法转移抗瘟病毒核酸酶基因，获得了转基因兔。
KrimPenfort运用体外培养胚胎再施用显微注射法获得了转基因牛这种办法的特点是外源基因的导入整合效率较高，不需要载体，直接转移目的基因。
它可以直接获得纯系（应当也不一定，如上述鱼的状况），所以试验周期短。
但需要贵重精密仪器，技术操作较难，并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制，易造成宿主动物基因组的插入突变，引起相应的性状转变，重则致死外源基因整合到受体基因组的时机，将打算转基因动物是否发育成嵌合体，如整合发生在第一次卵裂前，即发生在DNA合成的S期，外源基因将随染色体的分别匀称的分布到每一个细胞，得到的转基因动物是纯合体，反之，得到的将是嵌合体。
显微注射转基因的实践证实，受精卵DNA合成的S期是显微注射的相宜时机。
但因为整合需要一段时光，等目的基因整合至染色体后，受精卵早已分裂多次，故很难得到纯合体。
如鱼类在原肠胚早期才开头整合，而此时细胞已多值几千，此时转植基因在每个细胞内的整合状况不行能全都，所以第一代转基因鱼总是嵌合体。
哺乳动物受精卵的单细胞期阶段较长，还有可能得到纯合体的转基因动物。
《实验动物与管理教学课件》转基因动物-PPT精选文档
4、“超级鼠”
1982年，Palmiter和Brinster用此方法把大鼠的生长激素 基因导入小鼠受精卵，获得了成年体重是对照组小鼠2倍的 “超级鼠”，首先证明外源基因可在受体中表达，并且表达 产物具有生物活性。
5、转基因家畜的产生
转基因家兔、绵羊和猪(Hammer等，1985)、牛(Bondioli 等，1988)和山羊(Ebert等，1991)等相继出世。
永恒的多莉
已经成为标本的多莉 将永远被人们记住！
2019年2月22日，英国“Nature”刊登了爱 丁堡罗斯林研究所维尔穆特的研究成果， 即“多莉”羊的克隆成功，从此震惊了世 界。 2019.2.14日苏格兰向外界宣布：多莉因早衰 并患有肺炎，被迫实施了安乐死。由于早 衰问题，人们怀疑“多莉是穿着羔羊服装 的老羊” 。
用显微注射方法制备转基因动物，操作技术性
很强，即使是受过严格训练的专业人员操作，
发育成转基因动物的受精卵也只占注射卵的 5 ％。因此人们往往来用增大微注射受精卵的 数目的办法来弥补这一缺陷。
优点： 外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）；导入过 程直观； 整合率高 缺点： 设备昂贵、环节较多 对操作人员有较高的技术要求 低效率（尤其是大家畜） 对卵子伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性 转基因沉默
转基因动物技术的发展简史回顾
1、第一例嵌合体小鼠
1974年最早把猿猴病毒40(SV40)注入小鼠囊胚腔中（如图），得 到部分组织中含有SV40DNA的嵌合体小鼠。但无任何表型改变。 2、第一个转基因小鼠系 1976年建立了世界上第一个转基因小鼠系，这些小鼠基因组中 插人了莫氏白血病病毒基因。他们是运用反转录病毒与小鼠卵裂 球共培养把外源DNA插入到小鼠的基因组中。 3、第一例显微注射法产生转基因小鼠 1980年，Gordn等把SV40DNA显微注射到小鼠受精卵的原核 中，获得了两只转基因小鼠，创建了显微注射转基因方法。
动物代培养实验报告(3篇)
第1篇实验名称：动物细胞代培养实验实验目的：1. 学习动物细胞培养的基本原理和方法。
2. 掌握动物细胞传代培养的操作步骤。
3. 观察细胞生长、增殖和衰老过程。
实验时间：2021年X月X日实验地点：实验室实验材料：1. 动物细胞系：小鼠成纤维细胞（NIH3T3）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞消化液：0.25%胰蛋白酶4. 抗生素混合液：青霉素（100U/ml）、链霉素（100μg/ml）5. 细胞培养瓶：25cm²6. 移液器：200μl、1000μl7. 吸管：5ml、10ml8. 酶标仪：波长450nm9. 电子显微镜10. 计时器实验方法：1. 细胞复苏：将冷冻保存的细胞从-80℃冰箱中取出，放入37℃水浴中解冻，然后将细胞转移到含有抗生素的DMEM培养基的细胞培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
2. 细胞传代：待细胞生长至70%-80%融合时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，收集细胞，用DMEM培养基清洗细胞，计数，按照1:10的比例传代。
3. 细胞培养：将传代后的细胞接种于细胞培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱中培养。
4. 观察细胞生长：每隔24小时观察细胞生长情况，记录细胞数量、形态和活力。
5. 细胞衰老：培养细胞至第30代，观察细胞衰老特征，如细胞形态、活力等。
实验结果：1. 细胞复苏：复苏后的细胞呈圆形，细胞活力较高。
2. 细胞传代：细胞传代过程中，细胞活力保持稳定，细胞数量逐渐增加。
3. 细胞培养：培养过程中的细胞形态良好，细胞活力较高。
4. 细胞生长：细胞数量在培养过程中呈指数增长，符合细胞增殖规律。
5. 细胞衰老：细胞培养至第30代时，细胞形态发生改变，细胞活力下降，出现衰老特征。
实验讨论：1. 动物细胞培养过程中，细胞的生长、增殖和衰老是细胞生命活动的基本过程。
本实验通过观察细胞生长、增殖和衰老过程，了解了动物细胞代培养的基本原理和方法。
2. 细胞传代过程中，细胞活力保持稳定，细胞数量逐渐增加，说明本实验操作规范，细胞培养条件适宜。
转基因动物实验技术
转基因动物实验技术1980年底Gordon等人首次将克隆的基因注入小鼠受精卵原核，然后移植于假孕的母鼠输卵管,培育出第1个转基因动物。
这种将外源性基因用实验方法插入动物生殖细胞的基因组而获得具有插入基因特性，并能正常繁衍的动物称为转基因动物 ( transgenicanimals)。
转基因技术是生物学领域最新重大进展之一，已能渗透到生物学、医学、畜牧学等学科的广泛领域。
转基因动物已成为探讨基因调控机理、致癌基因作用和免疫系统反应的有力工具。
同时人类遗传病的转基因动物模型的建立，为遗传病的基因治疗打下坚实的理论和实验基础。
转基因技术涉及外源基因的组建、载体、受体、基因导入技术、供转基因胚胎发育的体外培养系统和宿主动物等方面的内容。
一、转移基因(一)转移基因的原理:转基因技术的理论基础在于各种生物的遗传密码都是统一的。
都是以3个碱基决定一个氨基酸这样的密码形式贮存在DNA链上，各物种间形状的不同仅仅是由于DNA上的四种核苷酸排列次序的不同，同时各种生物从DNA 到蛋白质合成都服从“中心法则”,当一个物种的细胞内加入另一物种或人工合成的DNA(即基因)后就可能产生新的性状。
(二)基因的获得:取自现有的生物体如病毒、细菌、体细胞或肿瘤细胞的DNA,用限制内切酶或外切酶把DNA切割成若干小段,然后再把这些小段利用连接酶分别放入载体中,并建成载体克隆。
载体通常是一种独立的，能自我复制的遗传物质，如质粒、某些噬菌体和病毒均可作为载体。
基因的片断可随载体复制，有时亦可表达，用DNA 或抗体探针做分子杂交试验或ELISA试验筛选出带有理想基因的克隆,再把理想基因载体放入大肠杆菌等宿主细胞中扩大、增殖,或采用PCR的方法扩增。
再对扩增的DNA片断进行适当修饰,例如将一个单一的基因与经选择的启动子重组合，然后进行转移，或将特定的控制序列连接到目的基因的结构序列上，从而创造1个新的重组基因,然后再进行转移。
理想基因也可用人工合成的办法获得，要合成一特定的基因，就是要合成具有一定排列顺序的DNA，DNA上四种碱基的配对是非常严格的,腺嘌呤(A)必定和胸腺嘧啶(T) 配对，鸟嘌呤(G)必定和胞嘧啶(C)配对，由于蛋白质合成不是直接以DNA 作为模板,而是以DNA的副本mRNA作为模板，在RNA中，用尿嘧啶(U)代替了胸腺嘧啶(T)。
转基因动物第二章实验动物的饲养与培育ppt文档
实验；（2）各种疫苗生产 。
3．清洁动物
概念：指来自屏障系统的SPF动物，而饲育在半屏障 环境设施系统中的动物。
应用：一般用于短期、中期对带菌要求不严格的实 验研究。
4. 普通动物
概念：是未经积极的微生物学控制，普遍地 饲养在开放卫生环境里的动物。
应用：教学、一般性实验、预实验
（4）隔离系统（Isolator system）
饲养无菌动物及悉生动物所使用的方式，它 能保证动物处于完全无菌的环境下，主要设备是 隔离器，可以放在普通环境中。
3、实验动物设施的基本要求
（1）区域的设置
（2）对部分建筑部位的要求
地面：应防滑、耐磨、耐清洗消毒、无渗漏。 地漏：屏障区内地漏应防堵、防回水回气，采用
二、实验动物设施
实验动物设施：指与实验动物和动物实验 有关的实验动物的保种维持、生产、实验、 研究等所需的建筑物和设备的总称。
1、实验动物设施的一般组成
饲育室、实验室、检疫室、洗刷消毒间、废 物处理设施、办公室、机房、库房等。
2、实验动物设施的等级
开放系统 亚屏障系统 屏障系统 隔离系统
（1）开放系统（Open system）：饲养普通动物的 设施，在某种程度上对卫生有要求。
1、气候因素
（1）温度 18℃- 29℃ ● 影响生长发育和繁殖 ● 影响代谢 ● 激发应激反应 ● 影响试验结果。
温度与毒性的关系
温度对3种药物LD50的影响
药物 苯异丙胺
LD50（mg/kg）
15.5℃ 26.7℃
197.0
90.0
盐酸脱氧麻黄碱 1565.0
（2）湿 度 40%-70% （3）风速 0.1-0.25m/s
实验动物现代新技术(二)转基因动物技术
法律问题
各国对转基因动物技术的法律法 规不尽相同，可能限制该技术的 发展和应用。
伦理问题
应尊重动物的福利，尽量避免对 动物的伤害和痛苦，同时确保转 基因动物的安全性和可控性。
未来发展趋势与展望
发展趋势
随着基因编辑技术的发展，转基因动 物技术将更加精准和高效，有望在生 物医药、农业、生态环境等领域发挥 更大的作用。
生物制药与疫苗生产
总结词
转基因动物技术可用于生产具有治疗和预防作用的生物药物和疫苗。
详细描述
通过转基因技术，可以在动物体内表达具有治疗和预防作用的人类蛋白质或抗原。这些蛋白质或抗原可以用于生 产药物和疫苗，为人类疾病的治疗和预防提供新的手段。
Part
04
转基因动物技术的挑战与前景
技术难题与解决方案
技术难题
解决方案
转基因动物技术的实施过程中，存在基因 定位、基因表达调控等技术难题，影响转 基因动物的准确性和稳定性。
通过基因编辑技术，如CRISPR-Cas9系统 ，可以实现精准的基因定位和调控，提高 转基因动物技术的准确性和稳定性。
技术难题
解决方案
目前转基因动物技术的效率较低，需要大 量的时间和资源进行实验和筛选。
胚胎干细胞法的优点是可以通过对胚胎干细胞的定向诱导 分化，获得具有特定功能或表型的转基因动物。此外，胚 胎干细胞法还可以用于构建转基因动物的遗传模型，为疾 病研究和药物筛选提供有用的工具。
基因打靶技术
基因打靶技术是一种利用同源重组原理，将外源DNA定点整合到受体细胞基因组 特定位点的技术。在转基因动物技术中，基因打靶技术主要用于实现特定基因的 敲除、敲入或修饰。
展望
未来转基因动物技术将与其他生物技 术、信息技术等领域交叉融合，形成 新的技术体系和应用领域，推动生物 技术的创新发展。
转基因技术动植物转基因方法.精选PPT
转基因 技术
【DAWN_ZX】
转基因技术的步骤
所用工具：
分子手术刀——限制性核酸内切酶 来源：从原核生物中分离纯化出来。 功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸 序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之 间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两 种形式：黏性末端和平末端。
转基因 技术
【启动子】是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合 的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 【终止子】也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
【DAWN_ZX】
转基因技术的步骤
STEP3：将目的基因导入受体细胞
（1）导入植物细胞一般用农杆菌转化法， 也可用基因枪法或花粉管通道法。 （2）导入动物细胞一般用显微注射法。 （3）导入微生物细胞一般用感受态细胞吸 收DNA分子的方法。
转基因 技术
【DAWN_ZX】
植物转基因方法
基因枪介导转换法
•方法：利用火药爆炸或高压气体加速将包裹
了带目的基因的DNA溶液的高速微弹直接送入 完整的植物组织和细胞中，然后通过细胞和组 织培养技术，再生出植株，选出其中转基因阳 性植株即为转基因植株。
•优点:不受受体植物范围的限制，而且其载
体质粒的构建也相对简单，是目前转基因研究 中应用较为广泛的一种方法。
转基因 技术
【DAWN_ZX】
转基因技术的步骤
STEP2：基因表达载体的构建
目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥 作用。 组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含 有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出 来。常用抗生素基因。
传代实验报告
实验名称：细胞传代培养实验实验目的：1. 了解动物细胞传代培养的基本原理。
2. 掌握动物细胞传代培养的基本操作，并对Hela细胞进行传代培养。
实验原理：细胞传代培养是指将已经培养的细胞从培养容器中取出，分散后重新接种到新的培养容器中，以扩大培养数量或维持细胞活性。
细胞传代培养分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代。
传代培养是指在原代培养的基础上，将细胞分散后转移到新的培养容器中，扩大培养数量。
实验材料：1. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清（FBS）、青霉素、链霉素。
2. 培养容器：培养皿、培养瓶。
3. 工具：移液枪、移液器、加样器、剪刀、镊子、酒精灯、无菌操作台等。
实验步骤：1. 准备培养基：按照说明书配制DMEM培养基，加入胎牛血清、青霉素和链霉素，混匀后过滤除菌。
2. 准备细胞：取出冻存的Hela细胞，解冻后用培养基洗涤2次，加入适量培养基，制成细胞悬液。
3. 原代培养：将细胞悬液接种到培养皿中，放入培养箱中培养，观察细胞生长情况。
4. 传代培养：a. 当细胞生长到一定密度时，用移液枪将细胞悬液移入新的培养瓶中，加入适量培养基。
b. 将培养瓶放入培养箱中培养，观察细胞生长情况。
c. 当细胞生长到一定密度时，重复步骤a和b，进行传代培养。
5. 观察细胞形态和生长情况，记录实验数据。
实验结果：1. 原代培养：细胞接种后，细胞逐渐贴壁生长，形态呈不规则或多边形，细胞间连接紧密。
2. 传代培养：随着传代次数的增加，细胞形态逐渐趋于一致，细胞间连接逐渐变松，细胞密度逐渐增加。
实验分析：1. 细胞传代培养过程中，细胞形态、生长情况和活性逐渐发生变化，这与细胞分裂、增殖和衰老有关。
2. 传代次数越多，细胞生长速度越快，细胞密度越高，但细胞活性逐渐降低。
3. 在传代培养过程中，要注意细胞污染问题，保持无菌操作，以保证实验结果的准确性。
转基因动植物
形成嵌合体。 ⑤将注射过ES细胞的胚胎，移植到交配后3d的假孕母鼠子
宫内，培育出转基因小鼠。
4、精子载体导入法
将外源基因与精子共培养，再通过精子共育 法、电穿孔导入法、脂质体转染法等方法 将外源基因导入成熟的精子，使精子携带 的外源DNA进入卵细胞中并受精，从而使 外源DNA整合到染色体中。
以小鼠为例，大致过程如下
①分离培养ES细胞。从确认受精后3.5d 母鼠采取胚胎， 胚胎培养4~6d后，分离出内细胞团。然后经胰蛋白酶处 理，从中分离出ES细胞，并克隆ES细胞。
②ES细胞基因操作。首先构建特定的外源目的基因载体， 再通过电穿孔、显微注射、磷酸钙-DNA共沉淀、逆转录 病毒感染等方法，将外源目的基因导入ES细胞。
转基因动植物
一、转基因动物
转基因动物指把人或哺乳动物的某种基因 导入到哺乳动物(如鼠、兔、羊和猪)的受精 卵里，目的基因若与受精卵染色体DNA整 合，细胞分裂时，该基因随染色体的倍增 而倍增，使每个细胞中都带有目的基因， 使性状得以表达，并稳定地遗传给后代， 从而获得基因产品。
转基因动物培育的原理与方法
二、转基因植物
转基因植物是指利用重组DNA技术将克隆 的优良目的基因导入植物细胞或组织，并 在其中进行表达，从而获得新性状的植物
1983年，世界第一例转基因植物——烟草问世
1994年，美国的转基因延熟保鲜番茄――“FlavrSavr”番 茄获得美国FDA的批准进入市场销售，成为第一个获许进 行销售的转基因食品。
目的基因导入的方法
基因显微注射法 逆转录病毒感染法 胚胎干细胞介导法 精子载体导入法 体细胞核移植法
大鼠nr8383传代方法
大鼠nr8383传代方法【原创版3篇】篇1 目录I.传代方法介绍1.传代方法的定义和目的2.传代方法在大鼠繁殖和细胞培养中的应用II.传代方法的具体步骤1.准备试剂和设备2.组织取样和分离细胞3.细胞计数和传代4.细胞培养和观察篇1正文近年来，随着科学技术的不断发展，传代方法已成为大鼠繁殖和细胞培养中常用的技术之一。
大鼠作为一种常用的实验动物，在医学、生物学、心理学等领域中具有重要的应用价值。
而传代方法则是将细胞从原代培养物中分离出来，进行传代培养，以延长细胞的培养寿命和提高细胞生长速度。
传代方法的具体步骤如下：首先，需要准备试剂和设备，包括培养液、胰蛋白酶、PBS缓冲液、倒置显微镜、细胞计数板等。
其次，从大鼠组织中取样并分离细胞，通常采用的组织部位包括肝、肾、脾、肺等。
接着，使用胰蛋白酶将细胞消化成单个细胞，并计数细胞数量。
最后，将细胞进行传代培养，通常采用的培养基为DMEM或F12，并观察细胞的生长情况。
传代方法在大鼠繁殖和细胞培养中具有重要的应用价值。
在大鼠繁殖中，传代方法可以帮助繁殖出更多的后代，提高种群的繁殖能力。
篇2 目录I.大鼠nr8383传代方法介绍1.传代方法的基本原理2.传代方法的操作步骤3.传代方法的注意事项篇2正文大鼠nr8383传代方法是一种常用的细胞培养技术，旨在将细胞从一代繁殖到下一代。
这种方法对于研究细胞生物学、医学和生物工程等领域具有重要意义。
一、传代方法的基本原理传代方法的基本原理是利用细胞生长和分裂的特性，将细胞从一代繁殖到下一代。
具体来说，将细胞从原代培养液中转移到新的培养液中，使其继续生长和分裂，直到达到需要的代数。
二、传代方法的操作步骤1.准备培养液：根据需要准备适合的培养液，包括基础培养液、血清、抗生素等。
2.收集细胞：从组织或细胞库中收集细胞，并清洗干净。
3.消化传代：使用特定的酶或化学试剂消化细胞，使其从组织中分离出来。
4.转移细胞：将消化后的细胞转移到新的培养瓶或培养皿中，加入培养液。
大鼠nr8383传代方法
大鼠nr8383传代方法
大鼠NR8383传代方法是指将已培养的NR8383细胞用于建立连续的细胞传代
系统的过程。
NR8383细胞是一种源自大鼠肺泡巨噬细胞的细胞系，广泛应用于炎症、肺部疾病和免疫学等研究领域。
首先，将NR8383细胞培养在适当的培养基中，通常是含有DMEM
（Dulbecco's Modified Eagle Medium）和FBS（胎牛血清）的培养基。
培养基应保
持恒定的pH值（通常为7.2-7.4），并在37摄氏度和5%二氧化碳的培养箱中孵育。
当NR8383细胞达到80-90%的密度时，可以进行传代。
传代前，首先应通过
离心将细胞从培养瓶中收集起来，并用预先加热的0.25%胰酶-EDTA溶液轻轻洗
刷细胞单层。
接下来，加入足够的完整培养基以中和胰酶的作用，然后将细胞悬浮液转移到新的培养瓶中。
为了确保细胞生长的连续性，建议进行适当的稀释，以保持细胞的适宜密度。
通常，细胞在每2-3天进行一次传代，尽量避免细胞超过90%的密度。
在传代的过程中，要注意避免细胞的过度损伤和受到细菌或霉菌等微生物的污染。
为此，除了对培养器具和培养基进行严格的无菌操作外，还可以添加适量的抗生素（如青霉素/链霉素）到培养基中，以抑制微生物的生长。
总结起来，大鼠NR8383传代方法包括NR8383细胞的培养、细胞的收集、胰
酶消化、转移到新的培养瓶中，并进行定期传代等步骤。
这些步骤的正确执行能够确保NR8383细胞系的连续生长与稳定性，从而为进一步的研究提供坚实的基础。
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对策：
制订动物繁殖计划
针对每个转基因动物的特性和要求，设法营 造满足其特殊要求的条件。
二、环境因素 1、饲养室光照 要求＜20LUX。 对策：拆灯；遮挡。 2、饲养室噪音 要求＜60db。 包括：设施（风噪）、操作（开关门、换垫
料等）、讲话（大声讲话）等
3、饲料营养、垫料和饮用水 饲料营养，要求用繁殖料。 适当添加鸡蛋和瓜子。 饲料每年送检一次，检测所有项目。
基因等构件的拼接重组 3.重组DNA导入生殖细胞或胚胎干细胞 4.胚胎移植技术 5.鉴定及筛选 6.目的基因整合率及表达效率的检测
一、显微注射法 二、逆转录病毒法 三、胚胎干细胞法 四、精子载体法 五、体细胞核移植法 六、受体介导法
转基因动物的应用
转基因是研究特异性基因表达机制 和基因的生物学功能的有效工具。
每月一次，对已经灭活的饲料、垫料、自来水进 行灭菌效果检测。
每年一次，对饲料营养成分、无机盐、重金属等 所有指标检测
TG2576
TG2576，是老年性痴呆（AD）转基因模 型鼠。该模型鼠在APP的表达、淀粉样斑块的形 成、神经元的退变和记忆丢失等方面表现出许多 与AD患者的相似性。
转基因：APPSWE 转基因鼠：4只♂，8只♀。全部是杂合子鼠。 传代方式：杂合子♂×♀杂合子；杂合子
取F1代的（+/-）♂，与♀DBA/1交配。
F2代 ¼ （+/-），3/4（+/+）
F2代的（+/-）DBA/1背景占75%（ 50+50×50%)。
取F2代的（+/-）♂，与♀DBA/1交配。
F3代 ¼ （+/-），3/4（+/+） F3代的（+/-）DBA/1背景占
87.5%(50+75×50%）。 取F3代的（+/-）♂，与♀DBA/1交配。
阳性率低，可能是外源DNA注射到受精卵 的雄性原核，DNA插入和整合部位的不均一性 ，导致雄性和雌性个体其子代携带APPSWE基 因阳性率的差异。
小结：
雄性TG2576与雌性C57BL/6J交配，是 保存传代的最理想繁殖方式。
SNX-10基因敲除小鼠保种方案
SNX-10基因敲除小鼠其背景鼠是FVB小 鼠，此基因敲除小鼠无任何表型。
用于传代的是一对单敲小鼠。因FVB背景小 鼠不能用于造类风湿关节炎模型，因此，需要让 基因敲除鼠跟DBA/1小鼠进行杂交，获得 DBA/1背景为主的SNX-10敲除小鼠。
具体方法：
一、基因单敲除小鼠，先进行交配，获得纯合子 敲除小鼠。
FVB(+/-)×FVB（+/-）
↓
1/4FVB(-/-),1/2FVB(+/-),1/4FVB(+/+)
♂×♀C57BL/6J;C57BL/6♂×♀杂合子
繁殖结果：
1、杂合子♂×♀杂合子
生产27只仔鼠，2天内全部死亡，成活率为 0%。
基因鉴定结果是，APPSWE基因阳性仔鼠 20只，占74.1%。
提示：TG2576只能在杂合状态下存活， 纯合状态下APP基因的连锁是致死的。
2、杂合子♂×♀C57BL/6J
对策：保证每周对动物房的清洁卫生和消
毒，包括地面、天面、四周墙壁、笼架等。
对排风口的过滤网消毒，每个房间单独配制 消毒液，用后拿走。
定期检测动物。隔离处理已检出污染的动
物。
6、开展日常检测，保障饲养环境
每3个月，对动物房的环境检查一次，包括落菌 数、洁净度（尘埃粒子数）、换气次数、压差等 指标，重点检测绿脓杆菌和金色葡萄球菌。
主要通过： （1）将这一基因在受体动物中过表达
。 （2）将这一基因从动物基因组中剔除
，即：基因剔除技术。
用于制作转基因动物的受体动物：FVB,KM等
用于转基因动物保种传代的动物： FVB,C57BL/6J等
影响转基因动物传代的因素
一、操作人员 专人饲养；制订操作规则 。 “三不”原则 第一，不准弄丢动物； 第二，不准搞错动物； 第三，不准自作主张。
垫料，不能用玉米芯。 饮用水，要求灭活无菌。 每3个月自检一次。
Байду номын сангаас
4、温度、相对湿度 温度要求：20~26℃ 相对湿度要求：40~70%
哺乳鼠的温度最好是23`24℃,在20~21℃ 环境，母鼠会觉得比较冷，要给仔鼠保暖。
5、动物被微生物、寄生虫污染
最常见污染：鼠肝炎、鞭毛虫、绿脓杆菌
二、用SNX-10单敲雄鼠跟DBA/1雌鼠杂交， 获得DBA背景单敲小鼠，再让其相互交配，获 得DBA背景SNX-10敲除纯合子小鼠，用于实 验。
F0代 ♂FVB(+/-)×♀DBA/1（+/+）
↓
F1代
¼ （+/-），3/4（+/+）
F1代的（+/-）DBA/1背景占50%。
生产5窝共34只仔鼠，断奶后1周存活30只 ，成活率为88.2%。
基因鉴定结果是，APPSWE基因阳性仔鼠 13只，占存活仔鼠的43.3%。
符合孟德尔定律和转基因动物的遗传规律。
3、C57BL/6J♂×♀杂合子
生产4窝共34只仔鼠，断奶后1周存活32 只，成活率为94.1%。
基因鉴定结果，APPSWE基因阳性仔鼠7只 ，占存活仔鼠的21.9%。
转基因动物的保种传代
邱国光 中山大学实验动物中心
转基因动物
转基因动物
用DNA重组技术将人们所需要的目的基因
导入动物的受精卵或早期胚胎内，使外源目的基
因随细胞的分裂而增殖并在体内表达，且能稳定
地遗传给后代的动物。
转基因动物的关键技术包括： 1.外源目的基因的分离 2.外源目的基因与转性基因表达启动子、增强子、报告
“三要”原则
第一，要熟悉每种基因工程动物特性和繁
殖计划；
第二，要做到及时记录；
第三，要及时报告异常情况。
主管人员每周定期检查，发现问题，及时设 法解决。保持与动物持有者的沟通。
转基因动物本身
1、对光照特别敏感
2、纯合子死亡率高
3、疾病症状的表现早，例如昏睡、肿瘤