ISO FDIS 4831 2006(E)食品和动物饲料的微生物学 大肠菌群计数水平法 最大可能数技术

ISO/FDIS 4831:2006(E)食品和动物饲料的微生物学大肠菌群

计数水平法--最大可能数技术

序

ISO是国际标准的全球性组织。准备国际标准这项工作通常由ISO技术联盟来完成。每一个团体成员负责各自的学科。与ISO有合作的国际性机构、政府与非政府机构，也有参与这项工作。ISO与国际电子组织（IEC）在电子标准化方面有着密切的合作关系。

国际性标准的起草原则在《ISO/IEC 细则》第三部分中有给出。

起草的国际性标准被技术委员会采用是通过全体成员投票决定的。发布一个国际性标准需要至少75％成员投赞成票。国际性标准ISO 4831 由ISO/IEC 34技术委员会（农产品，小组委员会SC9，微生物）起草的。

这个第三版的ISO 4831取代了ISO 4831:1991和ISO 5541-2:1986。ISO 4831:1991的条款4、9和10已作了技术性的修改。主要的修改内容如下：——在35℃下培养这个可选择的程序已被删除；

——检测和计数大肠菌群被覆盖（条况4和9）；

——MPN和CCT的描述被省略（条况10），可参照ISO 7218。

考虑到本标准的上一个版本已被修改，已确认ISO 4831:1991的选择性方法不受影响。

绪论

由于食品与饲料的种类繁多，这个标准不一定适合某一类产品。在这种情况下，可使用不同的方法，但必须有绝对的技术上的理由。否则，要尽可能地完全遵循本标准。

当这个标准下一次回顾时，将会对这个标准的使用做数据统计，特殊产品偏离本标准使用也会做相关统计。

同一类产品的检测方法也有可能不统一，国际性标准和/或国家标准也不一定完全与本标准相符合。希望相关标准做回顾时，会遵循本标准做出相关的修改，以使只有已被证明的技术上的理由才能与本标准偏离。

本标准在技术上的描述没有ISO 4832那样精确，但大部分的微生物检测能

根据本标准开展，较低数量的每克或每毫升样品中的大肠菌群的数量能给出。此外，由于另外两个标准中对“大肠菌群”的定义也不一致，因此检测出的微生物含量也不一定一致。

针对一些特殊的产品，方法的选择可参照相关的国际性标准。

基于一个可实行的方法的目的，在条况3中给出的“大肠菌群”的定义并作为操作程序的基础，并不需要与其它相关文献保持一致。在其它文献中定义的“大肠菌群”，部分通过发酵管检测并不能产气。因此本标准中的检测方法并不能用于所有其它文献中提及的“大肠菌群”。

1 范围

本标准给出常规的方法检测及计数大肠菌群。它可适用于：

——人类的食物及动物饲料；

——食品生产和食品处理领域的环境样品。

通过液体培养基培养，温度控制在30℃或37℃，可得出最大可能值（MPN）。注意：必须注意使用的温度，牛奶或奶制品的培养温度为30℃。

当估计每克或每毫升样品的数量在1到100之间时，可使用本标准检测。

本标准的测试限度已通过大量的实践得出。在条况11中给出相关的细则。

2 参考文献

本标准的参考文献如下。已过期的文献，后来改善或修订的，部分这种文献已经不适用。未过期的文献，最新版本都是适用的。

ISO 6887（所有部分），食物与动物饲料原料微生物学——样品准备原则，微生物检测样品原液及十倍法稀释——第一部分：样品原液和十倍法稀释的指导准则。

ISO 7218，食物与动物饲料原料微生物学——微生物检验指导准则。

ISO 8261，牛奶和奶制品——样品原液和十倍法稀释的指导准则。

ISO/TS 11133-1，食物与动物饲料原料微生物学——准备和配制培养基的指导方针——第一部分：实验室中培养基的配制及质控。

ISO/TS 11133-2:2003，食物与动物饲料原料微生物学——准备和配制培养基的指导方针——第二部分：培养基配制的指导方针。

3 术语和定义

以下术语和定义适用于本标准。

3.1 大肠菌群

在特殊的温度下（例如30℃或37℃），按照本标准的操作，能发酵乳糖产气的一类细菌。

3.2 检测大肠菌群

按照本标准操作，检测在某一类特别的产品中，大肠菌群是否存在。

3.3 大肠菌群计数

按照本标准操作，得出每克或每毫升样品中大肠菌群的最大可能值。

4 原理

4.1 大肠菌群检测

4.1.1 样品接种至选择性增菌肉汤中，30℃或37℃培养24h或48h。

4.1.2 当选择性增菌肉汤出现混浊或/和产气，转接至确证培养基中，30℃或37℃培养24h或48h。

4.1.3 当确证培养基中出现混浊和产气时，可证实大肠菌群的存在。

4.2 MPN法计数

4.2.1 当样品为液体或其它样品有特定的接种量时，接种三管双倍浓度的选择性培养基。

4.2.2 当样品为液体或其它样品有特定的接种量时，接种三管单倍浓度的选择性培养基。然后，后续的十倍稀释梯度同样接种三管单倍浓度的选择性培养基。

4.2.3 选择性培养基试管在30℃或37℃下培养，双倍管培养24h，单倍管培养24h 或48h。

4.2.4 双倍管和出现混浊或产气的单倍管接种至确证培养基中。

4.2.5 30℃或37℃下培养24h或48h后检查结果。

4.2.6 计数确证管的产气管数，通过查表可得出每克或每毫升样品中大肠菌群的最大可能值。

5 培养基与稀释液

5.1 概述

参照ISO 7218，ISO/TS 11133-1和ISO/TS 11133-2中准备和配制培养基，及培养基性能测试部分。

5.2 稀释液

参照ISO 6887（相关部分），ISO 8261 或相关的国际性标准。

5.3 选择性增菌培养基：月桂醇硫酸盐胰蛋白肉汤

5.3.1 成分

5.3.2 准备

溶解所有成分或培养基干粉于水中，如需要可加热。

如需要，可在25℃调整pH值至6.8±0.2。

分装培养基至试管中，每管10ml。单倍培养基试管规格为16mm×160mm，双倍试管规格为20mm×200mm。

121℃灭菌15min。必须保证灭菌后试管中不产生气泡。

5.3.3 培养基质量控制

参考ISO/TS 11133-1和ISO/TS 11133-2:2003，表B1。

5.4 确证培养基：亮绿乳糖胆汁肉汤

5.4.1 成分

5.4.2 准备

溶解所有成分或培养基干粉于水中，如需要可加热。