还原参考资料糖含量的测定(Somogyi～Nelson法)

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糊化度测定方法

糊化度的测量方法在不同的单元操作中，糊化度依次为：挤压（糊化度80％～95％以上），膨胀（糊化度为80％左右），蒸煮（糊化度为70％～80%）压缩（估计糊化度为60％～70％），加工成本的排列顺序则相反。

所以，在谷物食品的工业生产中，糊化度的测量确定和控制是至关重要的。

淀粉糊化后，其物理、化学特性会发生很大变化，如双折射现象消失、颗粒膨胀、透光率和粘度上升等，所以糊化度的测定方法也有多种，如双折射法、膨胀法、酶水解法和粘度测量法等。

不同的测定方法，得到的糊化度值会有相当大的差异，这是由于测定基础和基准等不同，产生差异是必然的。

当前比较认同的方法是酶法，其次是染料吸收法中的碘电流滴定法。

酶法又分为淀粉糖化酶法、葡萄糖淀粉酶法及β-淀粉酶法等，其基本原理都是利用各种酶对糊化淀粉和原淀粉有选择性的分解，通过对生成物的测量得到准确的糊化度。

1葡萄糖淀粉酶法通常，糊化淀粉容易被淀粉酶消化，因此可用消化相对百分率来准确计算糊化度。

1.1仪器与试剂搅拌器，玻璃均质器，l～2ml移液管，恒温水浴，台式离心机。

99％乙醇，2mol／L醋酸缓冲液（pH4.8），10mol／L氢氧化钠，2mol／L醋酸，2.63μ／ml葡萄糖淀粉酶液，0.025mol／L盐酸。

1.2测定步骤试样的调制：试样20g（或20ml），加入200ml浓度为99％的乙醇，投入高速旋转的家用混合器中连续旋转1min，使之迅速脱水。

生成的沉淀用3号玻璃过滤器抽滤，用约50ml浓度为99％的乙醇，接着用50ml乙醚脱水干燥后，放在氯化钙干燥器中，以水力抽滤泵减压干燥过夜，用研钵将其轻轻粉碎，仍保存在同样的干燥器中备用。

1.3 操作将100mg上述的干燥试料放入磨砂配合的玻璃均质器中，加8ml蒸馏水，用振动式搅拌机搅拌至基本均匀为止。

接着将均质器上下反复几次，使之成为均匀的悬浮液。

再用振动式搅拌机均匀化，随即各取悬浮液2ml注入2只容量为20ml的试管中，分别用作被检液和完全糊化检液。

实验二十五细胞中糖类化合物的提取及成分鉴定

实验二十五细胞中糖类化合物的提取及成分鉴定糖类是一类多羟基的醛或酮及其缩合物或衍生物的总称，可分为单糖、寡糖、多糖、复合糖及糖的衍生物如糖胺、糖酸等。

糖类是生物界分布极广，含量十分丰富的一类有机化合物，几乎所有的动物、植物、微生物体内都含有糖类，其功能也是多样的。

过去认为糖类在生物体内的作用主要是作为能量来源及结构物质，但近20年以来发现糖的复合物在细胞识别、细胞间物质的运输和免疫调节等方面有重要的作用。

糖复合物的信息量非常大，是生物的另一类重要生物大分子化合物。

因此糖的分离、纯化、结构测定、结构与功能的研究也受到科学家广泛的关注。

糖的提取分离方法很多，主要是依据不同糖分子的物理化学性质、溶解度的差异进行分离提取。

近年也发展了许多新的分离、纯化方法，如薄层层析法、各种柱层析法、气相色谱及高效液相色谱法等。

糖的定量分析方法也很多，有化学计量法如次亚碘酸法和非化学计量法如铜试剂法、硝基试剂法等方法可供选择。

本实验主要介绍单糖、蔗糖及淀粉的分离提取、鉴定和测定的一般原理和方法。

实验原理1．单糖及多糖的提取单糖：凡不能水解为更小分子的糖即为单糖。

单糖种类很多，其中以葡萄糖分布最为广泛，存在于各种水果、谷类、蔬菜和动物血液中。

由于单糖分子中有多个羟基，增加了它的水溶性，尤其在热水中溶解度很大；在乙醇中也有很好溶解性，但不溶于乙醚、丙酮等有机溶剂中。

而蔗糖等双糖分子也易溶于水和乙醇中。

因此单糖和双糖一般可用热水或乙醇将之提取出来。

多糖是由多个单糖分子失水缩合而成的大分子化合物。

在自然界中分子结构复杂而多种多样，有不溶性的结构多糖如植物纤维素、半纤维素，动物的几丁质等；另有一些为贮存物质如淀粉、糖原等；还有一些多糖具有更复杂的生理功能，在动植物的生理活动中起重要作用。

多糖中的淀粉不溶于冷水及乙醇，但可溶于热水中形成胶体溶液。

因此可以用乙醇提取单糖及低聚糖，然后提取淀粉等多糖。

样品中的蛋白质、色素等杂质可通过加入醋酸铅、氢氧化钡、铁氰化钾等清洁剂将之除去。

还原糖含量的测定

05
结果分析与解读
数据处理与图表绘制
数据处理
对实验数据进行整理、筛选和计算，确保数据的准确性和可靠性。
图表绘制
根据处理后的数据，绘制图表以直观地展示实验结果，如柱状图、折线图等。
结果解读与误差分析
结果解读
根据实验结果，分析还原糖含量的变化趋势和规律，判断实验是否符合预期。
误差分析
对实验结果进行误差分析，找出误差来源，如操作误差、仪器误差等，以提高实验的准确性和可靠性。
部分多糖
多糖是由多个单糖通过脱水缩合形成的，部分多糖也具有还原性，如淀粉、纤维素等。
还原糖与非还原糖的区别
还原性
还原糖具有还原性，能够还原斐林试剂或班氏试剂；非还原糖则没有还原性，不能还原斐林试剂或班氏试剂。
结构
性质
还原糖通常具有较高的反应活性，而非还原糖则较低。
还原糖通常含有醛基或酮基，而非还原糖则没有这些基团。
02
还原糖基础知识
定义与性质
定义
还原糖是指具有还原性的糖类，能够还原斐林试剂或班氏试剂的糖。
性质
还原糖具有醛基或酮基，因此具有还原性，可与斐林试剂或班氏试剂发生氧化还原反应。
还原糖的种类
01
02
03
单糖
单糖是最简单的糖类，也是最具还原性的糖，如葡萄糖、果糖等。
双糖
双糖是由两个单糖通过脱水缩合形成的，如麦芽糖、乳糖等。
色谱法
总结词
色谱法是一种分离和测定复杂混合物中各组分含量的方法。在测定还原糖含量时，通常使用高效液相色谱法，将样品中的还原糖与其他组分分离，通过检测器检测各组分的含量，从而计算出还原糖的含量。
详细描述

黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较

黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较黄酒作为一种传统的中国酒类饮品，其甜度对于消费者来说是一个重要的指标之一、而酒中的糖分主要可以分为总糖和还原糖两部分。

总糖是指以葡萄糖为单位计算的糖的总含量，包括单糖、双糖和多糖等。

而还原糖则是指可以通过还原反应将还原糖转化为葡萄糖的糖的含量。

目前测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，下面将对其中的几种常用方法进行比较。

一、酶法测定酶法测定是一种常用的测定酒中糖含量的方法。

其基本原理是利用特定的酶将糖分解成可以被检测的物质，进而测定其浓度。

常用的酶法测定总糖和还原糖的方法有苯酚-硫酸法、巴氏显色法和Nelson-Somogyi法等。

苯酚-硫酸法是一种简单、灵敏的测定方法。

该方法将样品中的糖与苯酚发生反应，生成呈紫蓝色的复合物，再用硫酸将复合物水解，生成浓黄色的产物。

样品的吸光度与糖的含量成正比。

巴氏显色法和Nelson-Somogyi法是一种将糖与多酚氧化酶作用后生成还原物质，再与葡萄糖酸生成呈蓝色的化合物的方法。

二、硫酸蒽酮显色法硫酸蒽酮显色法是一种测定还原糖含量的方法。

其基本原理是还原糖经酸水解生成葡萄糖，葡萄糖与蒽酮反应生成紫红色的产物，其吸光度与还原糖的浓度成正比。

该方法操作简单、时间短，但只适用于测定还原糖，不能测定总糖的含量。

三、显色剂法显色剂法是一种常用的测定总糖含量的方法。

其基本原理是糖与特定的显色剂反应生成有色化合物，通过测定化合物的吸光度来测定糖的含量。

显色剂法可以测定总糖的含量，但不能区分不同类型的糖。

四、色谱法色谱法是一种常用于测定糖含量的方法。

其基本原理是将糖分离开来，并通过色谱柱上的吸附剂将糖分解为可以被检测的物质。

常用的色谱法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。

HPLC法可以快速、准确地分析各种糖类的含量，但设备价格较高。

GC法适用于分析低浓度的糖类，但需要进行样品的脂肪酸酯化处理。

综上所述，测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，各种方法有其优劣之处。

somogyi-nelson比色法测定范围

Somogyi-Nelson比色法是一种常用的生化分析方法，用于测定碳水化合物的浓度范围。

该方法基于还原砷酸钠和硫酸铜在强酸性条件下的氧化还原反应，通过光度计测定在试样中生成的砷蓝色复合物的吸光度，从而确定碳水化合物的浓度。

在使用Somogyi-Nelson比色法测定范围时，需要注意以下几点：1.试剂准备在进行Somogyi-Nelson比色法测定时，首先需要准备好一系列试剂。

这些试剂包括还原砷酸钠溶液、硫酸铜溶液、试样处理溶液和砷酸钠处理溶液等。

其中，还原砷酸钠溶液和硫酸铜溶液是构成反应体系的重要试剂，其质量和浓度直接影响着测定结果的准确性和可靠性。

2.反应条件Somogyi-Nelson比色法的反应条件对测定结果也至关重要。

在进行测定时，需要控制好溶液的酸度、温度和反应时间等因素，以确保反应能够有效进行并获得准确的测定结果。

还需要注意避免其他可能造成干扰的因素的存在，以保证测定结果的精确性。

3.光度测定在反应完成后，通过光度计测定生成的砷蓝色复合物的吸光度。

在进行光度测定时，需要选择合适的波长和校正光度计，以确保测定结果的准确性。

还需要控制好试样的浓度范围，避免超过光度计的线性范围，从而影响测定结果的准确性。

4.结果计算与分析根据光度测定得到的吸光度数值，结合所测定的标准曲线，计算出碳水化合物的浓度范围。

在进行结果计算与分析时，需要进行数据处理和统计，并对测定结果进行评价和分析，以确保最终得到的测定结果准确可靠。

Somogyi-Nelson比色法是一种常用的生化分析方法，用于测定碳水化合物的浓度范围。

在进行测定时，需要严格控制试剂的准备和反应条件，以及准确进行光度测定和结果计算与分析，从而获得准确可靠的测定结果。

希望本文对Somogyi-Nelson比色法测定范围的相关内容能够帮助到您。

Somogyi-Nelson比色法是一种常用的生化分析方法，主要用于测定碳水化合物的浓度范围。

这种方法基于还原砷酸钠和硫酸铜在强酸性条件下的氧化还原反应，通过光度计测定在试样中生成的砷蓝色复合物的吸光度，从而确定碳水化合物的浓度。

《生物化学》实验-评分标准

《生物化学》实验评分标准（供参考）一、基本操作（供实验操作考核参考）：1、玻璃仪器的洗涤①用毛刷蘸去污粉、肥皂粉或去污剂将器皿内外两面彻底刷洗干净（30分）②用自来水将仪器冲洗干净。

洗干净的玻璃仪器应该表面光洁，淋洗的水成片的从仪器上流下来，不应该有水珠（水线）附着在内壁。

（40分）③用少量的蒸馏水淋洗内壁三次（20分）④将洗干净的器皿倒置放在干净的滤纸上或相应的器皿架上（10分）2、刻度吸管①左手控制吸耳球，右手控制吸管，用右手食指控制吸管上口，右手拇指和中指夹持管身。

（30分，左手优势者酌情考虑）②操作者眼睛与要观察的刻度线应该处于同一水平，应该观察液面凹陷处的最低点与刻度线平齐。

（30分）③吸管下方如有液滴附着应该处理掉（20分）④操作是否规范和熟练、善后工作是否做好（20分）3、移液器①更换并安装好移液器头，右手控制移液器，调节移液器上方的罗盘到需要的刻度。

（30分）②按移液器上方活塞到遇到明显阻挡的位置时停止，插入试剂中慢慢吸取溶液。

不应该有气泡或断层出现。

（30分）③移液器头如有液滴附着应该处理掉。

（10分）④将移液器上方活塞按到最低点，排尽移液器头内所有液体（20分）⑤善后工作（10分）4、离心机①将调节转数旋钮归零，时间旋钮应该自然归零。

（10分）②将离心管放入离心套管中，置于天平上加水配平后，对称放入离心机内。

（30分）③接通电源，调节时间选钮（应该比规定时间多1-2分钟，20分）④慢慢调节转数选钮到规定转数停止（20分，依照不同的离心机规格要求可略有不同）⑤善后工作（20分）5、分光光度计①接通电源→预热30分钟（教师预先做好，必要时询问下即可）②调节波长→将空白液、测定液倒入比色杯（液面距杯口约1cm）→擦镜纸擦干净比色杯→置于比色槽中（30分，注意放置的方向及拿比色杯的姿势）③空白管对准光路→开盖调节透光度“0”，闭盖调节透光度“100%”→反复校对一次→关闭盖子情况下将模式调节到“吸光度”→空白管吸光度应该为“0”→拉动拉杆→依次读出各测定管吸光度→每打开盖都要重新调节“0”和“100%”。

还原糖和总糖含量的测定(3,5 一二硝基水杨酸比色法)

还原糖和总糖含量的测定（3，5 一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3，5一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3，5一二硝基水杨酸比色法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：2132更新时间：2021-5-1311:29:24一、目的植物体内的还原成糖，主要就是葡萄糖、果糖和麦芽糖。

它们在植物体内的原产，不仅充分反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也就是呼吸作用的基质。

还原成糖还能够构成其他物质例如有机酸等。

此外，水果蔬菜中糖量的多少，也就是始终如一其品质的关键指标。

还原成糖在有机体的新陈代谢中起至着关键的促进作用，其他碳水化合物，例如淀粉蔗糖等，经水解也分解成还原成糖。

通过本实验，掌控还原成糖定量测定的基本原理，练比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的采用方法。

二、原理各种单糖和麦芽糖就是还原成糖，蔗糖和淀粉不为还原成糖。

利用溶解度相同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别抽取出，再用酸水解法并使没还原性的双糖和多糖全盘水解班莱班县还原性的单糖。

在碱性条件下，还原糖与3，5一二硝基水杨酸共热，3，5一二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原成糖则被水解成糖酸及其他产物。

一定范围内，还原成糖的量与棕红色物质颜色厚薄的程度成一定的比例关系，540nm波长下测量棕红色物质的消光值，收信标准曲线并排序，便可以分别谋出来样品中还原成糖和总糖的含量。

三、仪器、试剂和材料1.仪器（1）刻度试管：25mlx11（2）离心管或玻璃圆柱形x2（3）烧杯：1oomlx1（4）三角瓶：100m1x1（5）容量瓶：100mlx3（6）刻度液体：1mlx1，2m1x4,10mlx1（7）恒温水浴（8）沸水浴（9）离心机（过滤法不用此设备）（10）电子顶载天平（11）分光光度计2.试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。

实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定

纸色谱薄层色谱色谱法 GC HPLC β—半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖半乳糖脱氢酶测半乳糖、半乳糖脱氢酶测半乳糖酶法葡萄糖氧化酶测葡萄糖发酵法 ——测不可发酵糖测不可发酵糖重量法——测果胶、纤维素、膳食纤维素测果胶、重量法测果胶纤维素、
直接滴定法（ GB法直接滴定法（是GB法）原理：将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，原理：将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀；成天蓝色的氢氧化铜沉淀；这种沉淀很快与酒石酸钾反应，这种沉淀很快与酒石酸钾反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀；这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点；色变为无色，即为滴定终点；根据样液消耗量可计算出还原糖含量。原糖含量。
3,53,5-二硝基水杨酸比色法
• 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产 3,5-二硝基水杨酸(黄色）物，3,5-二硝基水杨酸(黄色）则被还原为棕红色氨基- 硝基水杨酸。在一定范围内，的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计， 540nm波长下测定光密度值波长下测定光密度值，分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。乘以0.9。 0.9

测定多糖的方法

测定多糖的方法：蒽酮—硫酸法，苯酚—硫酸法，比色定量法，纸色谱法，离子交换色谱法，酶法，原子吸收法，HPLC法，DNS（还原法），磷钼比色法。

一、苯酚—硫酸法1、原理：糖在浓硫酸作用下脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物。

在10～100mg范围内其颜色与糖的含量成正比。

在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖和多糖的测定方法。

简单，灵敏度高，实验室基本不受蛋白住存在的干扰。

2、实验药品浓硫酸苯酚3苯酚溶液的配制（1）先配制80%苯酚溶液，然后称取80.0g苯酚加20.0g水，使之溶解，置于冰箱中，避光长期保存。

取80%苯酚37.5mL定容到500Ml.配制成60%的苯酚溶液，避光保存。

（2）取苯酚100g，加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g，蒸馏收集182℃馏分。

称取7.5g加水150mL溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。

二、蒽酮—硫酸显色法1、实验药品蒽酮硫酸2、溶液的配制称取蒽酮0.2g，加浓硫酸100mL混均即可（现用现配）三、高效液相色谱法多糖溶液进行高效液相色谱，利用TSK—GEL G4000PW柱.RI—10A示差折光检测器，以双蒸馏水为流动相，溶液浓度为0.5mg/Ml,进样量50μL，根据峰形判断样品的纯度。

四、DNS法为排除还原性单糖的干扰，可采用DNS（3,5—二硝基水杨酸）比色法测定还原糖的含量。

1、原理在碱性溶液中3,5—二硝基水杨酸与还原性糖共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈比例关系。

再将通过硫酸—苯酚，或者蒽酮—硫酸法得到的总糖结果减去还原糖，即得较准确的多糖含量。

五、地衣酚—硫酸法溶液的配制称取400mg地衣酚（3，5—二羟基甲苯）溶于155mL浓盐酸中，另加45mL含0.33%三氯化铁的0.01mol·mL_1盐酸，临用前配制。

苯酚—硫酸法和蒽酮—硫酸法的缺陷：首先葡萄糖是单糖而植物多糖的组成是多样的，只是用葡萄糖作为参照不确切，其次，显色试剂的不专属单糖的干扰严重，实际上测得的结果是总糖的结果。

糖含量测定实验方案

糖含量测定实验方案1.还原糖浓度测定简介还原糖是指含有自由醛基和酮基、具有还原性的糖类。

黄色的3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540nm处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。

不具还原性的部分双糖或多糖经酸水解后可彻底分解为具有还原性的单糖。

通过对样品中的总糖进行酸水解，测定水解后还原糖含量，可计算出样品的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。

实验设备及试剂设备：分光光度计、电热恒温水浴锅、试管及试管架、容量瓶、移液器、量筒。

试剂：①1mg/ml 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。

②DNS试剂（3，5-二硝基水杨酸）称取3，5—二硝基水杨酸(10土0.1) g，置于约600 mL水中，逐渐加入氢氧化钠10 g，在50 ℃水浴中(磁力)搅拌溶解，再依次加入酒石酸甲钠200 g、苯酚(重蒸)2 g和无水亚硫酸钠5 g，待全部溶解并澄清后，冷却至室温，用水定容至1000 mL，过滤。

贮存于棕色试剂瓶中，于暗处放置7 d后使用。

操作方法（1）葡萄糖标准曲线制作取9支干净试管编号，按表1加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏水和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。

表1 葡萄糖标准曲线制作将以上溶液，封口置沸水浴煮5min，冷浴冷却，定容至25mL,以0号管为对照，在540nm下测定吸光值，以葡萄糖质量为纵坐标，吸光度为横坐标，拟合曲线。

（2）样品中还原糖测定①样品中还原糖的提取：准确称取1.00g样品，放入100ml烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后补足至50ml蒸馏水，搅匀，煮沸5min,是还原糖浸出。

还原糖的测定

2、高锰酸钾滴定法
（2）试剂
性酒石酸铜甲液：称取35.639g硫酸铜(CuSO4· 5H2O)加适量的水溶解，加入0.5mL浓硫酸加水稀释至今500mL，用精制石棉过滤。碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠和50g氢氧化钠，加适量的水溶解并稀释到500mL，用精制石棉过滤，贮存在橡皮塞玻璃瓶中。制石棉： 0.02mol/L高锰酸钾标准溶液： NaOH溶液：1mol/L 硫酸铁溶液：
三、总糖的测定
许多食品中含有多种糖类，包括具有还原性的葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖等，以及非还原性的蔗糖、棉籽糖等。这些糖有的来自原料；有的是因生产需要而加入的；有的是在生产过程中形成的（如蔗糖水解为葡萄糖和果糖）。许多食品中通常只需测定其总量，即所谓的“总糖”。食品中的总糖通常是指食品中存在的具有还原性的或在测定条件下能水解为还原性单糖的碳水化合物总量。
盐酸：6mol/L。甲基红指示剂：1g/L。称取0.1g甲基红，用体积分数60%的乙醇溶解并定容到100mL。氢氧化钠溶液：200g/L。其他试剂：同“还原糖的测定”。
取一定的样品，按还原糖测定中的方法进行处理。吸取经处理后的样品2份各50mL，分别放入100mL容量瓶中，其中一份加入5mL6mol/LHCl溶液，置于68~70℃水浴中加热15min，取出迅速冷却至室温，加2滴甲基红指示剂，用200g/L的氢氧化钠溶液中和至中性，加水至刻度，摇匀。而另一份直接用水稀释到100mL。按“直接滴定法”测定还原糖。
ⅲ、酒精性饮料：吸取100.0mL样品置于蒸发皿中，用氢氧化钠(40g/L)溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1/4后，移入250mL容量瓶中，加水至刻度。
ⅳ、汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100.0mL样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250mL容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，混匀后备用。

标准曲线与回收试验

讨论

影响回收率的因素有哪些？

按顺序加试剂，立即混匀，试管要干净、干燥！！！
目的要求

1 了解标准曲线及回收实验的作法及意义。 2 3 掌握测定血糖的方法——NelsonSomogyi二氏法。

血液中的糖主要是葡萄糖，即血糖测定血糖含量是判断糖代谢正常与否的一项重要指标，为临床化验常作的分析。本法是基于葡萄糖的还原性。由于血液中存在的大量蛋白质对测定有干扰，必需先去除蛋白质，制备无蛋白血滤液。

正常值：Folin－吴法：80～120mg/dl， Nelson—Somogyi法：65～110mg/dl
二、最后获得的比色物较为稳定
采用砷钼酸代替 Folin－吴法的磷钼酸，使，可放置较长时间（24小时以上）而不影响测定结果。
三、可不用血糖管
Nelson—Somogyi法所用碱性铜溶液中含有大量的NaSO4 产生大量离子对溶入的气体产生盐析效应，以减少溶液中溶解的空气中的氧，从而减少了生成的Cu2O的再氧化。
血糖浓度mmol/L =
血糖含量（ M未） =
mg
真值=测值÷回收率
血糖浓度标准曲线
5.55 11.11 16.67 22.22 mmol/L 标准曲线查得结果
结果要求

1、用座标纸绘制血糖的标准曲线 2、计算血糖测定方法的回收率 3、根据公式求出血糖浓度(mmol/L)，并根据回收率求出血糖浓度的真值。（公式） 4、利用标准曲线求出血糖浓度(mmol/L)。
全血+Ba(OH)2+ZnSO4 蛋白质 G Cu(OH)2 砷钼酸 Cu2O 钼兰 + 非糖还原物 +上清液（G）

还原糖含量测定原理

还原糖含量测定原理
糖含量测定是饮食和食品行业中非常重要的一个分析指标。

在实际应用中，常常需要对食品中的糖含量进行测定，以确保其符合相关标准。

本文将介绍糖含量测定的原理及相关操作步骤。

糖含量测定原理主要涉及化学反应和光学测量两个方面。

在化学反应方面，糖类化合物可与一系列试剂发生反应，产生化学变化。

其中最常用的是菲林试剂法和安培法。

在光学测量方面，一些糖类化合物具有旋光性质，在光场中可旋转光线的振动方向。

因此，通过测量旋光度可以推算出糖含量。

具体测定操作步骤如下：首先取一定量的样品，加入试剂，使其发生化学反应。

然后通过滤液、稀释等步骤，得到可以测量的溶液。

接着，将溶液放入旋光仪中，测量旋光度并记录。

最后，利用标准曲线或计算公式，推算出糖含量。

需要注意的是，不同的糖类化合物对应不同的试剂和测量方法，因此在实际应用中需要针对不同的样品进行选择和调整。

同时，对于糖含量测定结果的正确性和精度也需要进行合理的控制和验证。

总之，糖含量测定原理的掌握和实际应用对于饮食和食品行业具有重要意义，可以有效保证产品质量和安全。

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还原糖含量的测定(Somogyi～Nelson法)

还原糖含量的测定（ Somogyi-Nelson 比色法）一.目的在植物营养及代谢研究中，常需测定还原糖的含量，本实验要求掌握Somogyi-Nelson 比色法的测定原理。

二、原理还原糖是具有羰基（＞ C ＝ O ）的糖，能将其他物质还原而其本身被氧化。

(1) 还原糖在碱性条件下加热，在酒石酸钾钠存在的情况下，可以定量地将二价铜离子还原为一价铜离子，即产生砖红色的氧化亚铜沉淀，其本身被氧化。

具体反应如下：生成的 Cu 复合物与糖反应， Cu 生成氧化亚铜（ Cu 2 O ）。

(2) 氧化亚铜在酸性条件下，可将钼酸铵还原，还原型的钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用，生成一种蓝色复合物即砷钼蓝，其颜色深浅在一定范围内与还原糖含量（即被还原的 Cu 2 O 量）成正比，用标准葡萄糖与砷钼酸作用，比色后用做标准，就可测得样品中还原糖含量。

三、仪器、试剂和材料1 .仪器（ 1) 分光光度计（ 2 ）水浴锅（ 3 ）具塞刻度试管： 15ml X 10（ 4 ）吸管： 1ml X 1 ， 2m1X4 ， 5ml X 3（ 5 ）容量瓶： 100m1 X 2（ 6 ）漏斗（ 7 ）研钵（ 8 ）电子顶载天平2 .试剂（ 1) 铜试剂A. 4 ％ CuS04 · 5H20B. 称取 24g 无水碳酸钠，用 850m1 水溶于大烧杯中，加120g含 4 分子结晶水的酒石酸钾钠，待全溶（可适当加热）后加入碳酸氢钠16g, 再加入120g 无水硫酸钠，全溶及冷却后加水至 900m1 ，沉淀 1~2 天，取上清液（要求严格时过滤）即可备用。

使用前将 A 与 B 按 1 ： 9 混匀即可。

(2 ）砷钼酸试剂:25g钼酸铵溶于 450ml 蒸馏水中（加热溶解，但温度接近 150 ℃时易分解），待冷却后再加入21 ml 浓 H2SO4 混匀。

另将3g砷酸氢二钠（ Na2HAs04 . 7H20) 溶解于 25ml 蒸馏水中，然后加到钼酸铵溶液中，室温下放置于棕色瓶中可长期备用。

还原糖的含量测定

还原糖的含量测定一、背景介绍糖是人们日常饮食中常见的一种营养物质，但过量摄入糖会导致肥胖、糖尿病等健康问题。

因此，了解食品中糖的含量对于人们合理膳食非常重要。

还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖，如葡萄糖、果糖等，其测定方法较为简便。

二、实验原理还原糖含量测定采用间接法，即先将样品中的多余物质去除，然后将还原糖转化为葡萄糖，并利用酶法或化学法测定葡萄糖含量。

其中，去除多余物质的方法有酸水解法、酶解法和乙醇沉淀法等；将还原糖转化为葡萄糖的方法有硫酸水解法和硝酸钠氧化法等；测定葡萄糖含量的方法有显色滴定法和比色法等。

三、实验步骤1. 样品制备：取适量待测样品，如果汁、奶制品等。

2. 样品预处理：根据样品的特点选择合适的去除多余物质的方法，如果汁可用酸水解法，奶制品可用乙醇沉淀法。

3. 还原糖转化：将经过预处理的样品加入硫酸或硝酸钠溶液中，在加热条件下将还原糖转化为葡萄糖。

4. 葡萄糖含量测定：根据实验需要选择合适的测定方法，如显色滴定法或比色法等。

四、实验注意事项1. 实验过程中要注意安全，避免接触有毒有害物质。

2. 样品预处理和还原糖转化过程要严格控制温度和时间，避免对样品产生影响。

3. 测定葡萄糖含量时要准确称量试剂和标准物质，并按照操作规程进行操作。

4. 实验前应对仪器进行检查和校准，保证实验结果的准确性。

五、实验结果分析通过测定样品中葡萄糖含量可以得到还原糖的含量。

不同食品中还原糖含量不同，其中果汁、甜点等含糖量较高的食品中还原糖含量也相对较高，而蔬菜、豆类等含糖量较低的食品中还原糖含量也相对较低。

通过对不同食品中还原糖含量的测定可以为人们制定合理膳食提供科学依据。

六、实验应用1. 食品生产：测定不同食品中还原糖含量，可以为生产厂家提供产品质量控制和改进方案。

2. 膳食指导：了解不同食品中的还原糖含量，可以帮助人们制定合理的膳食计划，避免过度摄入糖分。

3. 学术研究：测定不同食品中的还原糖含量，可以为相关学科领域提供数据支持。

还原糖的测定方法

还原糖的测定方法糖是我们日常饮食中的重要成分之一，它不仅能提供能量，还能给食物增加甜味。

在食品加工、食品质量检验以及科研领域中，糖的测定方法显得尤为重要。

本文将介绍糖的测定方法，并探讨其原理和应用。

一、重量法测定糖含量重量法是一种常用的测定糖含量的方法。

其原理是通过测量待测样品和在特定条件下经过反应生成的产物的重量来计算糖的含量。

1. 总糖测定法总糖测定法是测定待测样品中所有可溶于水的单糖、双糖和多糖的总含量。

其步骤如下：（1）取一定量的样品并加入适量的稀酸使其溶解；（2）将溶液加热使糖分解成单糖；（3）将溶液加入定量的还原剂，产生还原物质，然后用碘量定法测定其浓度。

2. 还原糖测定法还原糖测定法是测定待测样品中的还原糖含量。

其步骤如下：（1）取一定量的样品并加入适量的稀酸使其溶解；（2）将溶液加热使糖分解成单糖；（3）将溶液与还原剂反应，生成还原物质，然后用氧化剂滴定还原物质的浓度。

3. 非还原糖测定法非还原糖测定法是测定待测样品中的非还原糖含量。

其步骤如下：（1）取一定量的样品并加入适量的酸进行水解；（2）将水解后的样品经过甲醇提取，得到提取液；（3）将提取液与酚酞试剂反应，生成红色化合物，并根据颜色的强度来推测非还原糖的含量。

二、光度法测定糖含量光度法是一种常用的测定糖含量的方法。

其原理是通过测量液体中糖溶液与特定试剂反应生成的产物的吸光度，来推测糖的含量。

1. 酚硫酸法酚硫酸法是一种测定还原糖含量的常用光度法。

其步骤如下：（1）取一定量的待测样品与酚硫酸试剂混合，在沸水中加热使其反应，生成有色产物；（2）然后用分光光度计测定产物的吸光度，根据标准曲线来推断糖含量。

2. 葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法是测定葡萄糖含量的常用光度法。

其步骤如下：（1）取一定量的待测样品与葡萄糖氧化酶试剂混合，在适当的温度下反应，使葡萄糖发生氧化；（2）然后用分光光度计测定产生的还原物质的吸光度，根据标准曲线计算出葡萄糖的含量。

植物组织中碳水化合物含量的测定(Somogyi法)

测定植物碳水化合物的含量，通常用80梍85%的酒精抽提，在此浓度的酒精溶液中，还原糖和蔗糖溶解而淀粉沉淀。

过滤后在溶液中测定可溶性糖（包括还原糖和蔗糖），在残渣中测定淀粉。

还原糖可根据其还原能力大小直接测定其含量。

蔗糖和淀粉经水解后生成还原糖，测得其含量，然后换算成蔗糖和淀粉。

纤维素用称重法，测得经酸、碱和有机溶剂处理过的样品。

Ⅰ．还原糖含量的测定原理重要反应如下；1．还原糖（如葡萄糖）在碱性溶液中能将Cu2+还原为Cu+，产生Cu2O 沉淀。

2．加酸使KI与KIO3作用，放出I2来。

5KI+KIO2+3H2SO4→3I2+3K2SO4+3H2O3．放出的I2立即与Cu2O作用。

Cu2O+H2SO4→Cu2SO4+H2OCu2SO4+I2+K2SO4→2CuSO4+2KI4．多余的I2用Na2S2O3滴定。

2Na2S2O3+I2→2NI+N2S4O6将结果与空白滴定相比较，即知消耗I2量，可间接推算出测定液中还原糖含量。

仪器药品分析天平台天平烘箱水浴锅电动粉碎机容量瓶移液管烧杯三角烧瓶漏斗酒精5%硫酸锌1%酚酞溶液：1g酚酞溶解在100ml95%酒精溶液中。

饱和氢氧化钡溶液：将蒸馏水煮沸，除去水中二氧化碳，冷却后加入固体Ba(OH)2盖好，过液，次日过滤。

铜碘试剂：溶液A：取硫酸铜6.5g溶于100ml水中。

溶液B：取酒石酸钾钠12g，无水碳酸钠20g，碳酸氢钠25g溶于500ml 水中。

溶液C：取碘酸钾0.8g，碘化钾10g，草酸钾18g溶于200梍300ml 水中。

用时将溶液B倒入溶液A中，再倒入溶液C中，混合后稀释至1000ml，混匀。

2.5mol/L H2SO4：浓硫酸143ml加入水中，稀释成1000ml。

淀粉指示剂：1g淀粉溶解在100ml水中，加热使之溶解即可。

0.005mol/L硫代硫酸钠标准溶液：参照实验39。

操作步骤1．抽提将采回的植物样品，分开部位，迅速放在60℃烘箱中烘干至恒重。

还原糖含量的测定

同时一起在沸水浴中加热5min*
待水解液冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，用6mol/L NaOH中和至微红色，在 4000rpm、5分钟条件下离心，得到的上清液转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，上下颠倒几次混匀溶液，作为总糖待测液。
（3）显色和比色，按下表操作
管号样品量（ml）蒸馏水（ml） DNS试剂(ml) 加热
1、绘制葡萄糖标准曲线立即用流动冷水冷却至室温
立即用流动冷水冷却至室温
准确称取1g食用面粉放置于100ml三角瓶中，加少量蒸馏水调成糊状，再加入50ml蒸馏水，摇匀，置于50℃水浴条件下20分钟，使还原糖浸出；
2、测定样品中还原糖和总糖含量。 2、测定样品中还原糖和总糖含量。同时一起在沸水浴中加热5min*
还原糖
总糖
2.0
1.0
0
1.0
1.5
1.5
同时一起在沸水浴中加热5min*
冷却
立即用流动冷水冷却至室温
蒸馏水(ml)
21.5
21.5
吸光值(A540)
结果处理
以1、2号管的吸光值，分别在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数。按下列公式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
（2）提取样品中的总糖： 1g食用面粉放置于100ml三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCl及15ml蒸馏水，沸水浴30分钟（注意不能把水烧干）。
1g食用面粉放置于100ml三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCl及15ml蒸馏水，沸水浴30分钟（注意不能把水烧干）。准确称取1g食用面粉放置于100ml三角瓶中，加少量蒸馏水调成糊状，再加入50ml蒸馏水，摇匀，置于50℃水浴条件下20分钟，使还原糖浸出；
用滴管吸取1~2滴水解液于白瓷板上，加1 （3）显色和比色，按下表操作

标准曲线及回收实验 Nelson—Somogyi法测定血糖

用不同浓度的标准糖溶液，按测糖方法进行光度法测定，读出不同浓度糖溶液的相应吸光度；以吸光度为纵座标，以糖浓度为横座标，绘出一曲线，此曲线即称为标准曲线。
1、找出该方法的可测范围
2、标准曲线又叫工作曲线，当用同一方法，同一光度计及波长时可用标准曲线直接求出末知样品的含量
回收实验
在对一未知样品测定时，设两个管未知管：未知样品回收管：未知样品＋已知标准样品
讨论
影响回收率的因素有哪些？
回收率＝M回-M未/已知标准样品量×100% 理论值为100％，由于实验方法，操作等因素100±10％
回收实验的目的
1、验证方法的可靠性，在操作过程中样品是否有丢失，破坏，其他成分是否有干扰。
2、校正测得值：若采用此方法，可用回收率校正测得值，使之接近真值。校正值（真值）＝测得值 ÷ 回收率
三、可不用血糖管
Nelson—Somogyi法所用碱性铜溶液中含有大量的NaSO4 产生大量离子对溶入的气体产生盐析效应，以减少溶液中溶解的空气中的氧，从而减少了生成的Cu2O的再氧化。血糖管的目的：缩小与空气接触的面积，防止了空气中的氧对生成的Cu2O 的再氧化，以免影响结果。
标准曲线
制备血滤液
未知管回收管
H2O 1.5
1.0
全血 0.1
0.1
标准糖 ---
0.5
1、混匀！加入4.5%Ba(OH)2 0.2ml，充分混匀！静置至变褐色（至少15分钟）。
2、加入5%ZnSO4 0.2ml，混匀！静止5分钟。
3、离心，3000ｒｐｍ，10分钟。
按顺序加试剂，立即混匀，试管要干净、干燥！！！
其余步骤
见讲义。
各管中分别加入砷钼酸试剂1ml，轻轻混匀至无气泡(CO2)产生，将各管分别加蒸馏水 7.0ml，小心的吹打混匀。