油条食品中苯并芘的测定

油条食品中苯并芘的测定

摘要:建立高效液相色谱法测定油条食品中苯并[α]芘的测定方法。本法色谱条件易于掌握,测得数据重复性好,线性关系好,精密度和准确度均能满足分析要求。同时本实验对县城城区某油炸食品供应点的油条食品中苯并[α]芘含量进行了测定。

关键词:苯并[α]芘油条测定

油条是我国主要的早餐食品之一。油条中含有的苯并[α]芘是一种公认的强致癌物质,可诱发皮肤、肺和消化道癌症。其随食物被摄入人体内后,很快被肠道吸收入血液并分布于全身,危害很大。由于苯并[α]芘在人体中具有累积作用,长期食入直接危害到人们的健康,特别有些商贩,为了追求利益,使用多次高温加热的食用油,这对人的健康危害更为严重。而不良的饮食习惯,到目前为止还没有引起人们的高度重视。

苯并[α]芘的测定方法很多,如:有气相色谱法,液相色谱法和薄层法等。本实验建立了液相色谱荧光法测定油炸食品中B[α]P含量的分析方法,并对宝丰县城区油条食品中的苯并[α]的含量进行了测定,评价油炸食品安全性,对提高人们的食品安全意识和保障健康具有重要意义。

1 材料与方法

1.1材料

油炸食品采于宝丰县城区几个油炸食品供应点。样品采集后置于冰箱冷冻保存。

1.2试剂

KOH(分析纯);95%乙醇(分析纯);超纯水;苯(分析纯,重蒸馏);无水硫酸钠(优级纯);苯并[α]芘对照品;高效液相色谱流动相组成为色谱纯乙腈及超纯净水。

1.3仪器与设备

高效液相色谱仪、色谱工作站;荧光检测器,20μl进样阀;药材粉碎机;旋转蒸发仪;Simplicity 185 personal超纯水器;色谱柱:Diamonsil C18(4.6mm×250mm,5μm);T660/H超声波清洗器(功率360W,频率35kHz)。

1.4方法

1.4.1对照品溶液的配制

准确称取苯并[α]芘对照品(HPLC级)10mg,置于100ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,该贮备液浓度为100μg/ml,准确吸取储备液制成浓度分别为1.0、0.5、0.1、0.05、0.005μg/ml的标准工作液。

1.4.2色谱条件

流动相:A相为乙腈,B相为水,梯度洗脱。B相随时间变化:30%(0～15min),30%～5%(15～17min),0%(17～21min),21min;流速1.3ml/min;柱温40℃,进样20μl;荧光检测器激发波长为385nm;检测波长为405nm;以色谱峰面积外标法定量。在此条件下,测得苯并芘保留时间在11.27min左右,样品溶液中主峰和其它杂峰达到完全分离。对照品、样品的色谱图见图3。

1.4.3样品测定

将油条食品低温干燥,置粉碎机中粉碎(过40目筛),精密称定样品约5 g,置于具塞锥形瓶中,精密加入苯20ml,过夜,超声处理15min,重复三次,合并苯溶液滤过蒸干,残渣加5g KOH并依次加水40ml乙醇12ml,回流1h使其充分皂化,将皂化液转移至分液漏斗中,用苯25ml萃取两次,合并苯溶液,再用超纯净水洗涤,取上层苯液,过滤、干燥和蒸干加甲苯定容到1ml,摇匀,0.20μm滤膜过滤,取续滤液上机备用。

2 结果与分析

2.1线性关系考察

在 1.4.2色谱条件下,将不同浓度的标准工作液依次从低浓度到高浓度进样,以对照品溶液浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)绘制标准曲线,并计算标准曲线的回归方程及相关系数。实验测得苯并[α]芘标准溶液浓度在0.005～1.0μg/ml 范围内,其线性回归方程为

Y=2×107X+31012,相关系数R=0.9990,结果表明线性良好。

2.2检测限考察及方法精密度实验

以产生信号(峰高)为基线噪音标准差3倍的样品浓度作为该方法的检出限[9],即0.07μg/kg。以同一加标的油条食品样品重复测定5次,测得其峰面积的RSD为2.67%,表明本法的精密度良好。

2.3回收率实验

为考察方法的准确度,以现场样品中加入低中、高三种含量的标准液,然后测定样品溶液和标准溶液计算加标回收率,设计0.005、0.015、0.050mg三个添加浓度,按项1.4.3和2.1操作,每个浓度作为5平行,测定结果见表1。

表1 回收率测定结果

添加量

(μg)平均本底量(μg)实测浓度(μg)回收率

(% ) RSD

(% )

0.0766 103.51

0.0755 102.03

0.05 0.024 0.0743 100.41 2.78

0.0749 101.22

0.0711 96.08

0.0412 105.64

0.0406 104.10

0.015 0.024 0.0405 103.85 1.11

0.0411 105.38

0.0401 102.82

0.0371 127.93

0.0352 121.38

0.005 0.024 0.0321 110.69 10.19

0.0293 101.03

0.0375 129.31

2.4样品测定结果

取试样溶液20μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,获取峰面积,用外标法进行计算。获得油条食品中的苯并[α]芘含量结果。

3 讨论与结论

3.1提取溶剂的选择

利用苯并[α]芘在苯中易溶的特性,且国内外广泛采用苯来提取多环芳烃类物质,所以实验采用了苯为提取剂,其回收率、线性关系考察都有较理想的效果,实验结果表明效果很好。

3.2提取方式的确定

本方法采用超声萃取并对提取的次数,时间以及溶剂的使用量等参数进行了优化,最终确定了本实验部分条件。且超声振荡提取后再进行皂化,从而根本上解决了直接皂化提取的弊端。

3.3流动相的选择

流动相的比例及流速,色谱柱的柱温对分离效果有直接影响,流动相中乙腈体积的大小直接影响到苯并[α]芘的出峰时间,乙腈比例增大,对物质的洗脱能力增强,苯并[α]芘的保留时间缩短,但与样品中其他杂质分离不好,乙腈比例减小,样品溶液中各个色谱峰分离度改善,但苯并[α]芘的保留时间延后,增加分析操作时间,经反复试验,确定了A相乙腈B相为水,梯度洗脱,即可使保留时间缩短,又可以良好的分离。

3.4安全分析

从分析结果来看,宝丰县城该抽查点的油条食品中苯并[α]芘的含量为5.086μg/kg,超过我国食品的控制标准(5.0μg/kg),说明该抽查点的油条食品安全状况对人的健康存在一定的影响。

总之,利用超声振荡提取后皂化的方法,可以提高样品的回收率,提高方法的准确性。色谱条件易于掌握,测得数据重复性好,线性关系好,精密度和准确度均能满足分析要求。

参考文献:

1.杨业鹏,徐厚恩,芦春林,等.苯并[α]芘对人血淋巴细胞遗传损伤6项指标的敏感性比较[J].中华预防医学杂志,1994,28(5):275-2771.

2.刘治娟,姬艳丽,吴源,等.苯并[α]芘引起鼠胸腺细胞DNA损伤及其机制[J].毒理学杂志,2005,19(4):284-286.